多种维生素制剂的杂质分析方法
技术领域
本发明涉及药物分析技术领域,特别是涉及一种多种维生素制剂的杂质分析方法。
背景技术
维生素是人体必需的营养素之一,根据在水溶液中的溶解性可分为水溶性维生素和脂溶性维生素。水溶性维生素主要有:硫胺素(维生素B1)、核黄素(维生素B2)、尼克酸(维生素PP、烟酸、烟酰胺)、吡哆醇(维生素B6)、氰钴素(维生素B12)、叶酸、泛酸、生物素、抗坏血酸(维生素C)等,易溶于水,在体内几乎不能储备。脂溶性维生素主要有维生素A、D、E与K。作为人体必须的营养素之一,所有的维生素在体内含量都很少,但在机体的代谢、生长、发育等过程中起着重要的作用。脂溶性维生素和水溶性维生素的共同特点有:(1)一般不能在体内合成,或即使在体内合成(如维生素D),其合成的量也很少,需由食物提供或外界补充;(2)不是人体的构成成分,也不提供能量,但是有特殊功能;(3)人体需要量很小,但不可或缺,如果某种维生素的缺乏达到一定程度,就会引起相应的维生素缺乏症。根据我国营养学会及美国医学会营养指导小组推荐,静脉营养时需补充13种维生素,包括4种脂溶性维生素(A、D、E、K)和9种水溶性维生素(B1、B2、B6、B12、C、烟酸、叶酸、泛酸和生物素)。
维生素不稳定,受光、热容易降解产生杂质,直接影响药品临床使用的安全性,尤其是静脉营养补充多种维生素的时候,因此,有关杂质的控制是其产品开发和质量控制的关键项目。13种多种维生素制剂中不仅包括单个维生素所含有的杂质,而且包括各原辅料相互作用产生的杂质,杂质谱研究技术难度较大,因此通过对主要降解途径重点已知杂质的监控可有效评估多种维生素制剂的质量。
右泛醇(D-泛醇)又称原维生素B5,化学式C9H19NO4,分子量205.25,其主要合成途径是通过D-泛内酯和β-氨基丙醇缩合而成,该反应具有可逆性,在一定破坏条件下,右泛醇酰胺键逆向降解产生泛解酸和3-氨基丙醇,由于泛解酸稳定性较差,因此通过3-氨基丙醇的检测可有效评估右泛醇的稳定性。叶酸由于其结构中含有苯酰胺基、酯键等活跃基团,易发生降解反应,叶酸中的叶酸杂质A、叶酸杂质D和对氨基苯甲酸均为降解杂质,且具有潜在遗传毒性警示结构,因此对这三种杂质的检测是多种维生素制剂质量的关键控制指标。国内外药典及文献大多是对单个原料药进行控制的方法,或者对三种或四种多种维生素制剂中个别杂质进行控制的方法,对13种多种维生素制剂中杂质进行有效控制的方法尚未报道。
现有技术中采用EP8.0的方法对叶酸有关杂质A、D以及对氨基苯甲酸进行质量控制,色谱条件为:色谱柱:Agilent Pursuit XDS-5,C8,流动相:甲醇-(11.16g/L磷酸二氢钾溶液和5.50g/L磷酸氢二钾溶液)混合溶液=12:88,柱温:30℃,流速0.6ml/min,检测波长:280nm。结果如图1所示,由于对氨基苯甲酸及叶酸杂质A极性大,基本在前10min出峰,而制剂在10min以内其他主成分对其干扰较大,而3-氨基丙醇在此色谱条件下由于无紫外吸收而不出峰,无法检出,因此该方法无法对叶酸杂质A(RT=3.5min)、对氨基苯甲酸(RT=4.2min)和3-氨基丙醇进行定量检测,无法满足方法专属性要求。
另有现有技术公开了采用高效液相色谱法测定叶酸片的含量及有关物质的方法,色谱条件为:色谱柱:Thermo BDS HYPERSILC18,5μm,250×4.6mm,S/N:10576646;流动相:取磷酸二氢钾6.8g与0.1mol/L氢氧化钾溶液70mL,加水稀释至800mL溶解,调节pH至6.3,加甲醇80mL,用水稀释成1000mL;柱温:25℃;流速:1.0ml/min;检测波长:254nm、280nm;进样量:20μl。结果如图2所示,由于多种维生素制剂中维生素C、烟酰胺、微生素B1和维生素B6等含量大、极性大,易在前10min出峰,而叶酸杂质A和对氨基苯甲酸出峰时间过早,受干扰明显,无法定量检测。
还有现有技术公开了采用高效液相色谱法测定富马酸亚铁叶酸片中叶酸的水解产物的方法,色谱条件为:色谱柱:YMC-Pack ODS-AQ,3μm,150×4.6mm,S/N:0415228827;流动相:0.05M磷酸二氢钾溶液(以5M氢氧化钠调节pH值为5.5±0.03);柱温:25℃;流速:1.0ml/min;检测波长:210nm、280nm;进样量:20μl;注:混合杂质溶液、180101供试液稀释5倍后进样。结果如图3所示,该方法对叶酸杂质A和对氨基苯甲酸的检出均有干扰,且50min内叶酸与叶酸杂质D均未洗脱出来,无法检出。
关于右泛醇杂质3-氨基丙醇的检测方法,右泛醇原料药各药典收载3-氨基丙醇的检测方法为滴定或者TLC法,均不适用于13种维生素制剂中3-氨基丙醇杂质的检测。另有现有技术公开采用气相色谱法进行检测,结果表明气化温度使右泛醇发生降解,生成泛解酸和3-氨基丙醇,影响检测的准确性。3-氨基丙醇极性强,在反相色谱中基本没有保留,且紫外吸收度较低。
综上所述,13种维生素制剂中成分含量复杂,各维生素含量差异大,其中含量大且极性大的成分如维生素C、烟酰胺、右泛醇、维生素B1、核黄素磷酸钠等对微量的、极性大难分离的杂质(如叶酸杂质)检测影响较大,且部分杂质如3-氨基丙醇紫外吸收度低,响应值低。因此,寻找一种能有效检出多种维生素制剂中叶酸杂质A、叶酸杂质D、对氨基苯甲酸和3-氨基丙醇等杂质的检测方法成为本技术领域研究的热点及该产品开发的技术难点。
发明内容
基于此,有必要提供一种多种维生素制剂的杂质分析方法,该方法可有效检出13种多种维生素制剂中含量低、极性大不易分离、紫外吸收度差的叶酸杂质A、叶酸杂质D、对氨基苯甲酸和3-氨基丙醇杂质,灵敏度高,专属性良好。
一种多种维生素制剂的杂质分析方法,包括以下步骤:
配制所述多种维生素制剂的供试品溶液;
将质量比为1:(2~5)的邻苯二甲醛和2-巯基乙醇溶于甲醇或乙醇中,加入硼酸缓冲溶液,调pH值为3~5,得到衍生化试剂;
取所述供试品溶液,加入所述衍生化试剂进行在线衍生化反应,将衍生化后的供试品溶液注入高效液相色谱仪,以对所述供试品溶液中的杂质进行检测,所述杂质选自叶酸杂质A、叶酸杂质D、对氨基苯甲酸及3-氨基丙醇中的至少一种。
上述多种维生素制剂的杂质分析方法,通过优化衍生化试剂中邻苯二甲醛和2-巯基乙醇的质量比,以及衍生化试剂的pH值,使衍生化反应可控,避免样品遭到破坏,且可改变杂质的结构和极性,相较于多种维生素制剂中的杂质,杂质的衍生化产物的色谱柱保留时间增加,紫外吸收能力增强,可避免受多种维生素制剂中含量大且极性较大的水溶性维生素如维生素C、烟酰胺、核黄素磷酸钠等的干扰,大大提高了分离度和灵敏度,检出率高,专属性良好。
在其中一个实施例中,所述在线衍生化反应的时间为20~30分钟,所述在线衍生化反应的温度为15℃~20℃。。
在其中一个实施例中,所述衍生化试剂的pH值调节剂为磷酸。
在其中一个实施例中,所述多种维生素制剂的供试品溶液的配制方法如下:
取所述多种维生素制剂加水溶解并稀释,得到供试品溶液,每1mL供试品溶液中含叶酸120μg~150μg。
在其中一个实施例中,所述供试品溶液与所述衍生化试剂的体积比为1:(3~5)。
在其中一个实施例中,所述高效液相色谱仪的色谱条件与系统适用性条件为:采用柱切换法,以十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(Merck,Lichrospher,125mm×4mm,5μm)为预处理柱,以十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(250mm×4mm,5μm)为分析柱;以缓冲盐溶液和有机溶剂为流动相,流速为1.0ml/min~1.5ml/min,进行梯度洗脱;检测波长为380nm;柱温40℃。
在其中一个实施例中,所述缓冲盐溶液由以下方法制备:
提供0.2mol/L~0.5mol/L的弱酸盐水溶液,调pH值为5~8,加入四氢呋喃,得到缓冲盐溶液,每1000mL缓冲盐溶液中含0.5~1.0mL四氢呋喃,所述弱酸盐为醋酸盐或磷酸盐。
在其中一个实施例中,所述有机溶剂为甲醇或乙腈。
在其中一个实施例中,所述多种维生素制剂的杂质分析方法,还包括以下步骤:
配制所述多种维生素制剂中杂质的对照品溶液;
取所述对照品溶液,加入所述衍生化试剂进行在线衍生化反应,将衍生化后的对照品溶液注入所述高效液相色谱仪进行检测,根据得到的色谱图,计算得到所述供试品溶液中杂质的含量。
在其中一个实施例中,所述对照品溶液的配制方法如下:
取叶酸杂质A对照品、叶酸杂质D对照品、对氨基苯甲酸对照品和3-氨基丙醇对照品,加碳酸钠溶液溶解,用甲醇溶液稀释,得到对照品溶液,每1mL对照品溶液中含2.4μg~3μg叶酸杂质A、2.4μg~3μg叶酸杂质D、1.2μg~1.8μg对氨基苯甲酸和3μg~4μg 3-氨基丙醇。
上述多种维生素制剂的杂质分析方法具有如下优点:
(1)通过衍生化反应,3-氨基丙醇与衍生化试剂反应的产物在色谱柱中保留时间增加,紫外吸收能力显著增强,大大提高了分离度和灵敏度,定量限可达0.33ng。
(2)叶酸杂质A、叶酸杂质D及对氨基苯甲酸通过与衍生化试剂反应,改变了杂质的结构和极性,使杂质的衍生化产物在色谱柱中的保留时间延长,大大提高了分离度和灵敏度,叶酸杂质A的定量限可达10ng,叶酸杂质D的定量限可达1.58ng,对氨基苯甲酸的定量限可达3.11ng。
(3)通过对上述方法进行全面的方法学验证,方法学验证结果如表1所示:
由表1可以看出,上述多种维生素制剂的杂质分析方法,准确度、精密度、重现性、灵敏度以及线性范围均满足产品的检测需求。
附图说明
图1为现有技术中采用EP8.0的方法对叶酸有关杂质进行检测的色谱图;
图2为现有技术中采用高效液相色谱法测定叶酸片的含量及有关物质的色谱图;
图3为现有技术中采用高效液相色谱法测定富马酸亚铁叶酸片中叶酸的水解产物的色谱图;
图4为实施例1中衍生化后的对照品溶液的高效液相色谱图;
图5为实施例1中阴性对照的高效液相色谱图;
图6为实施例1中衍生化后的供试品溶液的高效液相色谱图;
图7为实施例1的系统适用性高效液相色谱图。
具体实施方式
为了便于理解本发明,下面将对本发明进行更全面的描述,并给出了本发明的较佳实施例。但是,本发明可以以许多不同的形式来实现,并不限于本文所描述的实施例。相反地,提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
除非另有定义,本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的,不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
一实施方式的多种维生素制剂的杂质分析方法,包括以下步骤S110~S140:
S110、配制多种维生素制剂的供试品溶液。
具体的,取多种维生素制剂加水溶解并稀释,得到供试品溶液,每1ml供试品溶液中约含叶酸120μg~150μg。
在本实施方式中,多种维生素制剂来源于广州汉光药业股份有限公司,剂型为冻干粉针剂。
多种维生素制剂中杂质的名称和结构如下表所示:
S120、配制上述多种维生素制剂中杂质的对照品溶液。
具体的,取叶酸杂质A对照品、叶酸杂质D对照品、对氨基苯甲酸对照品和3-氨基丙醇对照品,加碳酸钠溶液溶解,用甲醇溶液稀释,得到对照品溶液,每1mL对照品溶液中含2.4μg~3μg叶酸杂质A、2.4μg~3μg叶酸杂质D、1.2μg~1.8μg对氨基苯甲酸和3μg~4μg 3-氨基丙醇。
其中,碳酸钠溶液为28mg/L的碳酸钠溶液。甲醇溶液为10%的甲醇溶液。
需要说明的是,若仅需判断多种维生素制剂中是否含有叶酸杂质A、叶酸杂质D、对氨基苯甲酸和3-氨基丙醇,则步骤S120可省略。
S130、将质量比为1:(2~5)的邻苯二甲醛与2-巯基乙醇溶于甲醇或乙醇中,加入硼酸缓冲液,调pH值为3~5,得到衍生化试剂。
进一步的,邻苯二甲醛与2-巯基乙醇的质量比为1:3。
进一步的,衍生化试剂的pH值为4.5。
进一步的,衍生化试剂的pH值调节剂为磷酸。
S140、取上述供试品溶液和对照品溶液,分别加入衍生化试剂进行在线衍生化反应,将衍生化后的供试品溶液和对照品溶液分别注入高效液相色谱仪进行检测,根据得到的色谱图,计算得到供试品溶液中杂质的含量。
进一步的,在线衍生化反应的时间为20~30分钟。在线衍生化反应的温度为15℃~20℃。
进一步的,供试品溶液与衍生化试剂的体积比为1:(3~5)。对照品溶液与衍生化试剂的体积比为1:(3~5)。
进一步的,高效液相色谱仪的色谱条件与系统适用性条件为:以十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(Merck,Lichrospher,125mm×4mm,5μm)为预处理柱,以十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(250mm×4mm,5μm)为分析柱;;以缓冲盐溶液和有机溶剂为流动相,流速为1.0ml/min~1.5ml/min,进行梯度洗脱;检测波长为380nm;柱温40℃。
其中,缓冲盐溶液由以下方法制备:
提供0.2mol/L~0.5mol/L的弱酸盐水溶液,调pH值为5~8,加入四氢呋喃,得到缓冲盐溶液,每1000mL缓冲盐溶液中含0.5mL~1.0mL四氢呋喃,上述弱酸盐为醋酸盐或磷酸盐。
需要说明的是,缓冲盐溶液的pH调节剂与所用的弱酸盐对应,例如弱酸盐为醋酸盐,则pH调节剂为醋酸;例如弱酸盐为磷酸盐,则pH调节剂为磷酸。
可以理解,若缓冲盐溶液的pH值调过了,可用氢氧化钠调回。
进一步的,有机溶剂为甲醇或乙腈。
具体的,在本实施方式中,高效液相色谱仪的色谱条件与系统适用性条件为:采用柱切换法,以十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(Merck,Lichrospher,125mm×4mm,5μm)为预处理柱,以十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(250mm×4mm,5μm)为分析柱;以缓冲盐溶液为流动相A,有机溶剂为流动相B,流速为1.0ml/min~1.5ml/min,进行梯度洗脱;检测波长为380nm;柱温40℃。
进一步的,梯度洗脱的条件见下表:
上述多种维生素制剂的杂质分析方法,通过叶酸杂质A、叶酸杂质D、对氨基苯甲酸、3-氨基丙醇均具有伯胺键的特性,采用邻苯二甲醛对其进行衍生化后改变其极性,通过适合的色谱条件的开发,达到准确、灵敏、专属性强的分析。并且通过优化衍生化试剂中邻苯二甲醛和2-巯基乙醇的质量比,以及衍生化试剂的pH值,使衍生化反应可控,避免使用高温或强酸强碱等剧烈条件,使样品遭到破坏,提高检测结果的准确性,为多种维生素产品提供严格的质量控制手段,保证产品的安全性。
此外,上述多种维生素制剂的杂质分析方法,3-氨基丙醇的定量限可达0.33ng,叶酸杂质A的定量限可达10ng,叶酸杂质D的定量限可达1.58ng,对氨基苯甲酸的定量限可达3.11ng,灵敏度高。
可以理解,本申请多种维生素制剂的杂质分析方法,可以同时对多种维生素中的四种杂质进行检测,也可以根据需要对这四种杂质中的其中一种、两种或三种进行检测。
以下为具体实施例。
实施例1
取多种维生素制剂加水溶解并稀释至每1ml溶液中约含120μg叶酸,作为供试品溶液;
取叶酸杂质A对照品、叶酸杂质D对照品、对氨基苯甲酸对照品和3-氨基丙醇对照品,加入1ml 28mg/L的碳酸钠溶液溶解,用10%的甲醇溶液稀释至每1ml溶液中含叶酸杂质A2.4μg、叶酸杂质D2.4μg、对氨基苯甲酸1.2μg、3-氨基丙醇3μg,作为对照品溶液;
取邻苯二甲醛25mg,2-巯基乙醇55mg,加入0.5ml甲醇溶解,再加入5ml0.4mol/L硼酸缓冲液(磷酸调pH值至4.5),得到衍生化试剂;
取上述供试品溶液和对照品溶液各10μL,分别加入衍生化试剂30μL进行在线衍生化反应25分钟,在线衍生化反应的温度为15℃,注入高效液相色谱仪,记录色谱图,如图4~7所示。
色谱条件:采用柱切换,以十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(Merck,Lichrospher,125mm×4mm,5μm)为预处理柱,以十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(250mm×4mm,5μm)为分析柱,以醋酸盐溶液[称取无水醋酸钠60g,加水溶解并稀释至1000ml,加冰醋酸调节pH至6.0,加入四氢呋喃1.5ml,混匀,用0.22μm滤膜过滤,即得]为流动相A,以甲醇为流动相B,按下列程序进行梯度洗脱,流速为1.5ml/min,检测波长为380nm,柱温为40℃。
时间(分钟) |
流动相A(%) |
流动相B(%) |
处理柱 |
0 |
90 |
10 |
预处理柱 |
2 |
90 |
10 |
预处理柱 |
2.1 |
70 |
30 |
预处理柱+分析柱 |
8 |
65 |
35 |
预处理柱+分析柱 |
20 |
40 |
60 |
预处理柱+分析柱 |
30 |
65 |
35 |
预处理柱+分析柱 |
从图4~7可以看出,在该色谱条件下,3-氨基丙酮通过衍生化反应紫外吸收增强,在该波长下响应值明显增大,叶酸杂质A、叶酸杂质D和对氨基苯甲酸衍生化后的峰保留时间明显后移,阴性对照在相应的出峰位置无干扰通过紫外全波长扫描表明杂质的峰纯度很好,该方法下四种杂质均能得到有效检出,专属性良好。
对比例1
对比例1与实施例1基本相同,不同的是,对比例1中的衍生化试剂由以下方法制得:
取邻苯二甲醛25mg,加入0.5ml甲醇溶解,再加入5ml 0.4mol/L硼酸缓冲液(磷酸调pH值至4.5),得到衍生化试剂。
结果显示,不加2-巯基乙醇,相同的色谱条件下,对照品中无法检出杂质峰。这是因为,一定比例的2-巯基乙醇对衍生化产物具有保护作用,不加2-巯基乙醇或2-巯基乙醇的加入量过少,会使衍生化产物降解太快,无法检出。
对比例2
对比例2与实施例1基本相同,不同的是,对比例2中的衍生化试剂由以下方法制得:
取邻苯二甲醛25mg,2-巯基乙醇55mg,加入0.5ml甲醇溶解,再加入5ml0.4mol/L硼酸缓冲液,调pH至7,得到衍生化试剂。
结果表明,只能检出叶酸杂质A、对氨基苯甲酸和3-氨基丙醇,叶酸杂质D无法检出,且通过检测限和定量限发现,叶酸杂质A定量限为54ng,对氨基苯甲酸定量限为17ng,3-氨基丙醇的定量限为32ng,灵敏度大大降低。
实施例2
取多种维生素制剂加水溶解并稀释至每1ml溶液中约含120μg叶酸,作为供试品溶液;
取叶酸杂质A对照品、叶酸杂质D对照品、对氨基苯甲酸对照品和3-氨基丙醇对照品,加入1ml 28mg/L的碳酸钠溶液溶解,用10%的甲醇溶液稀释至每1ml溶液中含叶酸杂质A2.4μg、叶酸杂质D2.4μg、对氨基苯甲酸1.2μg、3-氨基丙醇3μg,作为对照品溶液;
取邻苯二甲醛25mg,2-巯基乙醇55mg,加入0.5ml甲醇溶解,再加入5ml0.4mol/L硼酸缓冲液(磷酸调pH值至4.5),得到衍生化试剂;
取上述供试品溶液和对照品溶液各10μL,分别加入衍生化试剂50μL进行衍生化反应20分钟,注入高效液相色谱仪。
色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(Merck,Lichrospher,125mm×4mm,5μm)为预处理柱,以十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(250mm×4mm,5μm)为分析柱;,以磷酸盐溶液[称取磷酸氢二钠40g,加水溶解并稀释至1000ml,加磷酸调节pH至7.0,加入四氢呋喃1.5ml,混匀,用0.22μm滤膜过滤]为流动相A,以甲醇为流动相B,按下列程序进行梯度洗脱,流速为1.5ml/min,检测波长为380nm,柱温为40℃。
时间(分钟) |
流动相A(%) |
流动相B(%) |
处理柱 |
0 |
90 |
10 |
预处理柱 |
2 |
90 |
10 |
预处理柱 |
2.1 |
70 |
30 |
预处理柱+分析柱 |
8 |
65 |
35 |
预处理柱+分析柱 |
20 |
40 |
60 |
预处理柱+分析柱 |
30 |
65 |
35 |
预处理柱+分析柱 |
实施例3
取多种维生素制剂加水溶解并稀释至每1ml溶液中约含120μg叶酸,作为供试品溶液;
取叶酸杂质A对照品、叶酸杂质D对照品、对氨基苯甲酸对照品和3-氨基丙醇对照品,加入1ml 28mg/L的碳酸钠溶液溶解,用10%的甲醇溶液稀释至每1ml溶液中含叶酸杂质A2.4μg、叶酸杂质D2.4μg、对氨基苯甲酸1.2μg、3-氨基丙醇3μg,作为对照品溶液;
取邻苯二甲醛25mg,2-巯基乙醇55mg,加入0.5ml甲醇溶解,再加入5ml0.4mol/L硼酸缓冲液(磷酸调pH值至4.5),得到衍生化试剂;
取上述供试品溶液和对照品溶液各10μL,分别加入30μL衍生化试剂进行衍生化反应20分钟,注入高效液相色谱仪。
色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(Merck,Lichrospher,125mm×4mm,5μm)为预柱,以十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(250mm×4mm,5μm)为分析柱;,以磷酸盐溶液[称取磷酸氢二钠40g,加水溶解并稀释至1000ml,加磷酸调节pH至7.0,加入四氢呋喃1.5ml,混匀,用0.22μm滤膜过滤]为流动相A,以甲醇为流动相B,按下列程序进行梯度洗脱,流速为1.5ml/min,检测波长为380nm,柱温为40℃。
时间(分钟) |
流动相A(%) |
流动相B(%) |
处理柱 |
0 |
90 |
10 |
预处理柱 |
2 |
90 |
10 |
预处理柱 |
2.1 |
70 |
30 |
预处理柱+分析柱 |
8 |
65 |
35 |
预处理柱+分析柱 |
20 |
40 |
60 |
预处理柱+分析柱 |
30 |
65 |
35 |
预处理柱+分析柱 |
对比例3
对比例3与实施例3基本相同,不同的是,对比例3中的梯度洗脱条件为:
时间(分钟) |
流动相A(%) |
流动相B(%) |
处理柱 |
0 |
90 |
10 |
分析柱 |
2 |
90 |
10 |
分析柱 |
2.1 |
70 |
30 |
分析柱 |
8 |
65 |
35 |
分析柱 |
20 |
40 |
60 |
分析柱 |
30 |
65 |
35 |
分析柱 |
结果表明,供试品溶液中色谱峰均出现拖尾现象,影响杂质的分离度,3-氨基丙醇峰与前面的干扰峰无法完全分离。按照序列连续分析30针后分析柱柱效严重降低(分离度和理论塔板数降低),原因为在线衍生化过程中,保持衍生化试剂与供试品或对照品的比例可保证衍生化反应完全进行,产物稳定,保证方法的灵敏度和准确度。但未反应的领苯二甲醛以及未参与反应的二巯基乙醇对色谱柱的柱效产生影响,降低杂质的分离度,影响方法的灵敏度,通过柱切换,在预处理阶段出去领苯二甲醛及二巯基乙醇,保证了方法的专属性、灵敏度和重复性。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合,为使描述简洁,未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述,然而,只要这些技术特征的组合不存在矛盾,都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。