CN109234344B - 一种藜麦肽及其制备方法和应用 - Google Patents

一种藜麦肽及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN109234344B
CN109234344B CN201811273826.XA CN201811273826A CN109234344B CN 109234344 B CN109234344 B CN 109234344B CN 201811273826 A CN201811273826 A CN 201811273826A CN 109234344 B CN109234344 B CN 109234344B
Authority
CN
China
Prior art keywords
quinoa
peptide
enzyme
protein
preparation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201811273826.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN109234344A (zh
Inventor
于潇潇
陈�光
孙旸
王刚
陈欢
苏瑛杰
韩冲
唐珊珊
吴卓夫
苏玉春
李艳丽
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jilin Agricultural University
Original Assignee
Jilin Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jilin Agricultural University filed Critical Jilin Agricultural University
Priority to CN201811273826.XA priority Critical patent/CN109234344B/zh
Publication of CN109234344A publication Critical patent/CN109234344A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109234344B publication Critical patent/CN109234344B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J1/00—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
    • A23J1/12—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from cereals, wheat, bran, or molasses
    • A23J1/125—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from cereals, wheat, bran, or molasses by treatment involving enzymes or microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J3/00—Working-up of proteins for foodstuffs
    • A23J3/14—Vegetable proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J3/00—Working-up of proteins for foodstuffs
    • A23J3/30—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis
    • A23J3/32—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents
    • A23J3/34—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents using enzymes
    • A23J3/346—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents using enzymes of vegetable proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
    • A23L33/18—Peptides; Protein hydrolysates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/34—Extraction; Separation; Purification by filtration, ultrafiltration or reverse osmosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Water Supply & Treatment (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)

Abstract

本发明涉及一种藜麦肽。它是依次通过以下制备步骤而制得的：（1）藜麦蛋白的提取：取藜麦籽粒水洗，烘干，加石油醚并研磨均匀，静置浸泡后，挥干石油醚，研磨成细粉，再用α‑淀粉酶水解，即制得藜麦蛋白；（2）藜麦蛋白的水解：以经步骤（1）后所得的藜麦蛋白为对象，加入由风味蛋白酶和碱性蛋白酶组成的双酶制剂，进行双酶水解。该藜麦肽除了具有易消化、易吸收和低抗原等特性之外，还具有独特的生物活性，如抗氧化、降血压和降血糖等活性，为藜麦高附加值转化开辟了新途径，也为其在多功能性营养食品的深层次开发及利用提供了理论依据。

Description

一种藜麦肽及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及植物加工技术领域，尤其涉及一种藜麦肽及其制备方法和应用。
背景技术
藜麦，属藜科，一年生双子叶植物，因其具有丰富的营养被联合国粮农组织认定为唯一单体植物，即可满足人体基本营养需求的完美全营养食品。藜麦籽粒中蛋白含量约为13％～17％，淀粉含量为53％～58％，脂肪含量为6％～8％，并含有几乎全部天然氨基酸，比例平衡，易于吸收。
然而目前，对藜麦的应用主要是采用市售的藜麦粉，这样藜麦营养成分的吸收率较低，不能充分利用藜麦资源。
目前，现有的藜麦蛋白的提取方法主要是碱提酸沉法，然而该方法提取率很低、只有10％左右。
专利CN106819356 A公开了一种高原藜麦肽及其制备方法和药食两用制品，并具体公开了采用中性蛋白酶对藜麦粉进行酶解处理，进而提取出藜麦原料中的藜麦肽，同时使得藜麦肽的粒径小，以更加利于吸收。但该制备方法存在以下问题：直接以粉碎后的藜麦籽粒为底物进行蛋白酶的水解，影响了酶解效率和藜麦肽的收率，而且其未能体现蛋白水解度或肽得率等相关指标。
发明内容
本发明的目的在于提供一种藜麦肽及其制备方法和应用，以实现更充分有效地对藜麦的综合利用。
本发明的目的通过以下技术方案来实现：
一种藜麦肽，其特征在于，它是依次通过以下制备步骤而制得的：
(1)藜麦蛋白的提取
取藜麦籽粒水洗，烘干，加石油醚并研磨均匀，静置浸泡后，挥干石油醚，研磨成细粉，再用α-淀粉酶水解，即制得藜麦蛋白；
(2)藜麦蛋白的水解
以经步骤(1)后所得的藜麦蛋白为对象，加入由风味蛋白酶和碱性蛋白酶组成的双酶制剂，进行双酶水解，即制得所述藜麦肽。
上述制备步骤(3)中，藜麦蛋白的水解度(DH)为36％，所制得的藜麦肽的氮溶指数(NSI)为45％，且所述藜麦肽的分子量分布在4.6kDa～25KDa之间。
为进一步提高藜麦蛋白的提取率，上述步骤(1)还包括对所制得的藜麦蛋白的纯化步骤，其具体操作为：采用20KD膜孔径的超滤装置对藜麦蛋白进行浓缩纯化。经该纯化步骤后，所得的藜麦蛋白提取率为80～85％。
上述藜麦肽的制备方法，其特征在于，它依次包括以下制备步骤：
(1)藜麦蛋白的提取
取藜麦籽粒，水洗3～4次，烘干，加入60～90℃的石油醚并研磨均匀，静置浸泡3小时，挥干石油醚，研磨成60～80目的细粉，即得脱脂藜麦粉；再用α-淀粉酶水解以去除藜麦粉中的淀粉，其中，α-淀粉酶水解时的料液比为1:6(w/v)、pH为8、加酶量为200u/g、酶解温度为60℃、酶解时间为150min，即制得藜麦蛋白；
(2)藜麦蛋白的水解
以经步骤(1)后所得的藜麦蛋白为对象，加入由风味蛋白酶和碱性蛋白酶组成的双酶制剂，进行双酶水解；其中，双酶制剂中双酶的最佳酶活用量比例为1：1、双酶制剂的总加酶量为0.3万U/g，水解温度为55℃、pH值为8、底物浓度为8％(w/v)，双酶同时酶解120min。
为进一步制得上述藜麦肽的干粉，上述藜麦肽的制备方法，还包括有步骤(3)，其具体操作为：将经步骤(2)后所得的藜麦肽于-60℃下冷冻干燥12h，之后粉碎，即得到藜麦肽干粉。
为进一步提高藜麦蛋白的提取率，上述藜麦肽的制备方法中的步骤(1)还包括对提取后所得到的藜麦蛋白的纯化步骤，其具体操作为：采用20KD膜孔径的超滤装置对蛋白进行浓缩和纯化。经该纯化步骤后，所得的藜麦蛋白提取率可高达80～85％。
本发明还提供上述藜麦肽在制备抑制α-淀粉酶活性的制剂中的应用，以及上述藜麦肽在制备减肥药物或减肥食物中的应用。
本发明还进一步提供本发明藜麦肽在制备抑制血管紧张素转化酶的制剂中的应用，以及本发明藜麦肽在制备降血压的药物中的应用。
本发明具有以下有益效果：
(1)本发明提供了一种藜麦肽，该藜麦肽除了具有易消化、易吸收和低抗原等特性之外，还具有独特的生物活性，如抗氧化、降血压和降血糖等活性，为藜麦高附加值转化开辟了新途径，也为其在多功能性营养食品的深层次开发及利用提供了理论依据。
通过对藜麦肽理化性质的分析，测定藜麦肽中水分的重量含量为4.37％，灰分的重量含量为5.45％；在不同pH值的条件下，测定藜麦肽的溶解度均在95％以上；藜麦蛋白水解后所得的产物中，肽含量为62.37％，肽得率为65.66％；分子量分布在4.6kDa～25KDa之间；藜麦肽中含有人体必须的六种氨基酸且谷氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、精氨酸含量较高。在对藜麦生物活性分析过程中，抗氧化实验分别考察了藜麦活性肽的还原力、羟基自由基的清除率可达到37.63％、超氧阴离子的清除率可达到80.03％，实验结果表明藜麦肽的抗氧化作用较好，藜麦肽的促发酵能力大于同质量的蛋白胨的促发酵能力，且是蛋白胨的2.3倍左右，对α-淀粉酶活性抑制可达53.80％，可用于制备减肥药物或减肥食物，对血管紧张素转化酶抑制率为54.55％，可用于制备降血压药物。
(2)本发明所述的制备方法中通过将藜麦籽粒先除掉脂肪、再除掉淀粉，除去了藜麦蛋白以外的主要高热值物质，其藜麦蛋白提取率高达80～85％，再经过采用特定的双酶水解方法，使得藜麦蛋白的水解度适宜，进而获得了具有独特的生物活性的藜麦肽。
附图说明
图1是实施例1中采用DNS法测定藜麦肽对α-淀粉酶抑制作用时建立的麦芽糖标准曲线。
图2是实施例1中测定的藜麦肽浓度对α-淀粉酶抑制率的影响效果示意图。
图3是实施例1中测定的可溶性淀粉浓度对α-淀粉酶抑制率的影响效果示意图。
图4是实施例1中测定的时间对α-淀粉酶抑制率的影响效果示意图。
图5是实施例1中测定的藜麦肽浓度对血管紧张素转化酶抑制率的影响效果示意图。
图6是实施例1中测定的底物浓度对血管紧张素转化酶抑制率的影响效果示意图。
图7是实施例1中测定的卡托普利浓度对血管紧张素转化酶抑制率的影响效果示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明的实施例，对本发明技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。
实施例1
一种藜麦肽的制备方法，包括以下制备步骤：
(1)藜麦蛋白的提取
取藜麦籽粒15g，加纯化水水洗3次，烘干，加90℃石油醚50ml并研磨均匀，静置浸泡3小时，挥干石油醚，研磨成80目细粉，即得脱脂藜麦粉；再用α-淀粉酶水解以去除藜麦粉中的淀粉，其中，α-淀粉酶水解时的料液比为1:6(w/v)、pH为8、加酶量为200u/g、酶解温度为60℃、酶解时间为150min，获得的藜麦蛋白的提取率为73.9％；
(2)藜麦蛋白的纯化
采用20KD膜孔径的超滤装置对藜麦蛋白进行浓缩和纯化，获得的藜麦蛋白提取率为80.2％；
(3)藜麦蛋白的水解
以经步骤(1)后所得的藜麦蛋白为对象，加入由风味蛋白酶和碱性蛋白酶组成的双酶制剂，进行双酶水解；其中，双酶制剂中双酶的最佳酶活用量比例为1：1、双酶制剂的总加酶量为0.3万U/g，双酶水解的温度为55℃、pH值为8、底物浓度为8％(w/v)，双酶同时酶解120min；在双酶制剂中，风味蛋白酶购自北京索莱宝科技有限公司，产品货号为F8250；
(4)再于-60℃下冷冻干燥12h，之后粉碎，即得到藜麦肽干粉。
本实施例1中还进行了以下对藜麦肽的氮溶指数和藜麦蛋白的水解度等评价指标的测定实验：
一、测定实验
(1)藜麦肽的氮溶指数(NSI)测定
取上述步骤(3)中经双酶水解后所得的上清液1ml，蛋白质总氮和上清液中可溶性氮由半微量凯氏定氮法测得。(X＝清液中可溶性氮/藜麦蛋白质中总氮*100％)。
(2)藜麦蛋白水解度(DH)测定
取上述步骤(3)中经双酶水解后所得的上清液1ml，加入1ml 10％三氯乙酸(TCA)溶液，混合振荡30分钟，再将其离心(4000r/min)30分钟，取上清液，蛋白质总氮和上清液中可溶性氮由半微量凯氏定氮法测得。
DH＝(P2-Pl)/(P0-Pl)*100％，
其中：P0：为藜麦蛋白质中总氮、P1：为酶解前藜麦蛋白质中溶于10％TCA的氮、P2：为酶解后酶解液中溶于10％TCA的氮。)
本例通过测定，藜麦蛋白的水解度(DH)为36％，所制得的藜麦肽的氮溶指数(NSI)为45％。
(3)藜麦肽理化性质的测定：
1、藜麦肽的感官性质
经上述步骤(3)中双酶水解后所得的液体藜麦肽为澄清透明暗黄色液体，略有咸味，有芳香气味；经上述步骤(4)后所得的藜麦肽干粉为乳白色粉末，略有咸味，易潮湿，吸潮后形成小板块。
2、藜麦肽含量测定
采用TCA沉淀法来测定藜麦肽的含量，精确称取经上述步骤(3)中经双酶水解后所得的产物1.000g，加入去离子水定容至10m L，精确吸取1m L，加入一定体积的乙醇、TCA沉淀剂后，混合均匀进行反应，3000r/min离心10min。取上清液按标准曲线(方程Y＝0.01293X+0.00306)操作方法测定样品od值并按照以下公式计算其中藜麦肽的含量。
肽含量％＝(A-0.00306)n×V×1000/0.01293×m
式中：A为样品测定吸光度；n为样品稀释倍数；V为取样体积/m L；m为样品质量/g；经测定并计算，其藜麦肽的含量为62.37％。
3、藜麦肽的得率
藜麦肽得率＝藜麦籽粒肽含量/藜麦籽粒蛋白含量*100％，
经凯氏定氮法测定，并经计算后得知，本例中藜麦肽的得率为65.66％；
4、藜麦肽的灰分测定
采用GB 5009.4-2016食品安全国家标准，食品中灰分的测定第一法(适用于食品中水含磷较高的灰分的测定)测定藜麦肽粉的灰分含量。
取大小适宜的石英坩埚或瓷坩埚置高温炉中，在550℃±25℃下灼烧30min，冷却至200℃左右，取出，放入干燥器中冷却30min，准确称量。重复灼烧至前后两次称量相差不超过0.5mg为恒重。
称取经上述步骤(4)后所得的藜麦肽粉3～10g，加入1.00ml乙酸镁溶液(240g/L)或3.00mL乙酸镁溶液(80g/L)，使试样完全湿润。放置10min后，水浴蒸干，在电热板上以小火加热使试样充分炭化至无烟，然后置于高温炉中，在550℃±25℃灼烧4h。冷却200℃左右，取出，放入干燥器中冷却30min，称量前如发现灼烧残渣有炭粒时，应向试管中滴入少许水湿润，使结块松散，蒸干水分在次灼烧至无炭粒即表示灰化完全，方可称量。重复灼烧至前后两次称量相差不超过0.5mg为恒重。计算公式为：
X1＝(m1-m2-mn)/(m3-m2)*100，
其中，X1试样灰分的含量；m1坩埚和灰分的质量；m2坩埚的质量；mn乙酸镁灼烧后的质量；m3坩埚和试样的质量；100单位换算系数。经测定与计算，该藜麦肽的灰分为5.45％；
5、藜麦肽的水分测定
采用GB5009.3-2016食品安全国家标准，食品中水分的测定的第一法直接干燥法来测定藜麦中的水分。取藜麦肽粉适量，按照GB5009.3-2016食品安全国家标准第一法直接干燥法测定(常压干燥法)，水分含量为4.37％。
清洗称量皿，烘干至恒重，称取藜麦肽干粉适量，将样品放入150℃下干燥1.5h，取出置于干燥器中冷却，称定重量，再放入150℃下干燥0.5h，取出置于干燥器中冷却，称定重量，两次称重的质量差差不超过0.002g。
6、藜麦蛋白和藜麦肽的溶解度测定
分别称取2g藜麦蛋白粉和藜麦肽冻干粉，置于50ml烧杯中，加人49ml水。在磁力搅拌器上搅拌，并用0.lmol/L盐酸和氢氧化钠，把pH值分别调节到2、3、4、5、6、7、8、9、10。待溶液pH值稳定后，再搅拌30分钟，将混合溶液离心(4000r/min)20分钟，测定上清液NSI值。经测定，在不同pH值的条件下，测定藜麦肽的溶解度均在95％以上，藜麦蛋白的溶解度均在35％以上。
7、藜麦蛋白和藜麦肽分子量的测定
取双酶水解后的藜麦上清液10μL，加入Loading Buffer10μL。混匀静止5分钟，PCR仪99℃，10min处理后。用于SDS-PAGE。经测定，藜麦蛋白分子量在22kDa～66.2kDa之间有明显条带，藜麦肽的分子量在4.6kDa～25kDa之间有明显条带；
8、藜麦蛋白和藜麦肽氨基酸含量及组成的测定
采用GB-500.124-2016食品安全国家标准，精确称取藜麦肽粉5.000g，采用氨基酸自动分析仪，实验环境条件为温度20℃，相对湿度50％。其测定结果如下表所示，藜麦蛋白和藜麦肽中谷氨酸和缬氨酸含量较高，藜麦中含有大多数谷物缺少的赖氨酸且含量高于大豆和玉米等谷物。
藜麦蛋白和藜麦肽氨基酸组成
样品名称及编号 藜麦肽 藜麦蛋白
天冬门氨酸(133.1) 0.1445 0.9772
苏氨酸(119.1) 0.0691 0.5323
丝氨酸(105.1) 0.0776 0.6535
谷氨酸(147.1) 0.2911 1.9765
甘氨酸(75.1) 0.0934 0.6000
丙氨酸(89.1) 0.0699 0.4695
缬氨酸(117.2) 0.1821 1.9941
蛋氨酸(149.2) 0.0699 0.9611
异亮氨酸(131.2) 0.0647 0.3893
亮氨酸(131.2) 0.1055 0.6327
酪氨酸(181.2) 0.0500 0.5026
苯丙氨酸(165.2) 0.1098 1.0000
赖氨酸(146.2) 0.0940 0.6047
组氨酸(155.2) 0.0551 0.3087
精氨酸(174.2) 0.1402 0.7449
脯氨酸(115.1) 0.0744 0.4156
合计(％) 1.6900 12.8000
二、藜麦肽对α-淀粉酶、血管紧张素转化酶抑制作用的论证实验。
测定方法：
藜麦肽抑制α-淀粉酶活性
α-淀粉酶抑制作用的测定，采用DNS法测定。精确称取0.1g麦芽糖，加入100ml水定容分别取麦芽糖标准溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml，各管加水至1.0ml,再各管迅速加入1mlDNS试剂，混匀，沸水浴反应5min，向各管分别加入8ml水混匀，测定各管在540nm波长下吸光值，根据麦芽糖含和吸光值，可得标准曲线。
以可溶性淀粉为底物，DNS法测定反应产生的还原糖含量为指标，测定藜麦肽水解液对α-淀粉酶抑制作用。实验分为四组，空白对照组加入0.1mol/LpH6.8磷酸钾缓冲液；非抑制剂组加入可溶性淀粉和α-淀粉酶；背景对照组加入藜麦肽水解液和α-淀粉酶；抑制剂组加入可溶性淀粉、α-淀粉酶和藜麦肽室温反应一段时间，加入NaOH溶液终止反应，稀释至10mL，取1mL稀释后溶液加入1.0mLDNS试剂，540nm测吸光值，按公式计算抑制率。
A0(％)＝1-A00/A01 (公式10)
A00＝A3-A4，A01＝A1-A2 (公式11)
其中式中A1,A2,A3,A4分别为非抑制剂组、空白组对照组、抑制剂组、背景对照组吸光度值。选取底物浓度、肽浓度、时间三个因素，进行α-淀粉酶抑制作用单因素实验。
藜麦肽抑制血管紧张素转化酶活性
藜麦肽体外ACE抑制活性检测参照宫霞的方法(宫霞，凌庆芝乳酪蛋白源抗高血压活性肽的制备及其生理活性[J]上海交通大学学报1671-9964(2009)01-0053-04.)，在样品试管中分别加入不同浓度(10mg/mL-20mg/mL)的HHL溶液和不同浓度(10mg/mL-60mg/mL)的藜麦肽溶液，于37℃下保温5min，加入20μL血管紧张素转化酶(ACE0.1u/mL)混匀后在37℃下保温30min，再加250μL浓度为1mol/L的盐酸溶液静止5min终止反应。再加入750μL硼酸钠缓冲液。在上述溶液中加入1.7mL的乙酸乙酯，经15s振荡混匀后，静置5min，精确吸取1.0mL的乙酸乙酯层，待乙酸乙酯挥发干后加入1.5mL去离子水。在228nm处测吸光度OD值。
ACE抑制活性＝(B-A)/(B-C)×100％
其中A表示在由ACE及ACE活性抑制物存在条件下的OD值；B表示无ACE抑制物存在条件下的OD值；C表示为无ACE存在的条件下的OD值。
实验结果：
(1)藜麦肽对α-淀粉酶抑制活性研究：
采用DNS法测定藜麦肽对α-淀粉酶抑制作用，建立麦芽糖标准曲线y＝0.8128x-0.048,R2＝0.9996，如图1所示。线性较好可用于后续实验使用。
a.藜麦肽浓度对α-淀粉酶抑制率的影响
在时间为10min，底物浓度为50mg/mL，分别测得藜麦肽浓度在10、20、30、40、50、60、70、80mg/mL时对α-淀粉酶抑制率。如图2所示，随藜麦肽浓度增加而增加，当浓度达到60mg/mL时藜麦肽对α-淀粉酶达到最高51.77％，肽浓度增加到80mg/mL时抑制率无明显增加，肽浓度过大时，可能在底物周围形成粘度大的保护层，阻碍酶与底物接触，减缓酶促反应进行。故选择最适肽浓度为60mg/mL。
b.可溶性淀粉浓度对α-淀粉酶抑制率的影响
在时间为10min，藜麦肽浓度为60mg/mL，分别测得可溶性淀粉在20,、40、60、80、100、120mg/mL时对α-淀粉酶抑制率。如图3所示，底物浓度在20-60mg/mL时藜麦肽对α-淀粉酶抑制率随底物浓度增加而提高，当底物浓度达到60mg/mL时对α-淀粉酶抑制率达到最高，底物浓度继续增加到120mg/mL抑制率降低，可能由于底物浓度过大，反应体系粘度增加，有效水分活度降低，抑制剂与底物接触不充分，抑制率降低。故选择可溶性淀粉浓度为60mg/mL。
c.时间对α-淀粉酶抑制率的影响
在肽浓度为60mg/mL，底物浓度为60mg/mL，分别测得时间为5、10、15、20、25、30min时α-淀粉酶抑制率。如图4所示，抑制时间在0-15min时，藜麦肽对α-淀粉酶抑制率增加，当抑制时间达到15min时抑制率达到最高，当抑制时间增加到30min时抑制率无明显变化，故选择抑制时间为15min。
藜麦肽对α淀粉酶抑制率单因素条件为肽浓度为60mg/mL，底物浓度为60mg/mL，抑制时间为15min。此条件下抑制率达到最高为53.80％。
(2)藜麦肽对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制活性研究：
a.藜麦肽浓度对血管紧张素转化酶抑制率的影响
在HHL浓度为50mg/mL，分别测得藜麦肽浓度在10、20、30、40、50、60mg/mL时对血管紧张素转化酶抑制率。如图5所示，随藜麦肽浓度增加而增加，当浓度达到40mg/mL时藜麦肽对血管紧张素转化酶达到最高52.72％，肽浓度增加到60mg/mL时抑制率无明显增加，故选择最适肽浓度为40mg/mL。
b.HHL浓度对血管紧张素转化酶抑制率的影响
在藜麦肽浓度为40mg/mL，分别测得HHL在10-60mg/mL时对血管紧张素转化酶抑制率。如图6所示，底物浓度在10-50mg/mL时藜麦肽对血管紧张素转化酶抑制率随底物浓度增加而提高，当底物浓度达到50mg/mL时对血管紧张素转化酶抑制率达到最高，底物浓度继续增加到60mg/mL抑制率降低，故选择HHL浓度为50mg/mL。
藜麦肽对血管紧张素转化酶抑制率单因素条件为肽浓度为40mg/mL，底物浓度为50mg/mL，此条件下抑制率达到最高为54.55％。
c.卡托普利浓度对血管紧张素转化酶抑制率的影响
在底物HHL浓度为50mg/mL条件下，分别测得卡托普利浓度为5-25mg时，对血管紧张素转化酶抑制率，如图6所示，卡托普利浓度达到25mg/mL时对血管紧张素转化酶抑制率可达95.82％，当卡托普利浓度达到30mg/mL时抑制率无明显增加。
实施例2
一种藜麦肽的制备方法，包括以下制备步骤：
(1)藜麦蛋白的提取
取藜麦籽粒15g，加纯化水水洗4次，烘干，加65℃石油醚50ml并研磨均匀，静置浸泡3.5小时，挥干石油醚，研磨成60目细粉，即得脱脂藜麦粉；再用α-淀粉酶水解以去除藜麦粉中的淀粉，其中，α-淀粉酶水解时的料液比为1:6(w/v)、pH为8、加酶量为200u/g、酶解温度为60℃、酶解时间为150min，获得的藜麦蛋白的提取率为74.0％；
(2)藜麦蛋白的纯化
采用20KD膜孔径的超滤装置对藜麦蛋白进行浓缩和纯化，获得的藜麦蛋白提取率为81.2％；
(3)藜麦蛋白的水解
以经步骤(1)后所得的藜麦蛋白为对象，加入由风味蛋白酶和碱性蛋白酶组成的双酶制剂，进行双酶水解；其中，双酶制剂中双酶的最佳酶活用量比例为1：1、双酶制剂的总加酶量为0.3万U/g，双酶水解的温度为55℃、pH值为8、底物浓度为8％(w/v)，双酶同时酶解120min；在双酶制剂中，风味蛋白酶购自北京索莱宝科技有限公司，产品货号为F8250；
(4)再于-60℃下冷冻干燥12h，之后粉碎，即得到藜麦肽干粉。

Claims (4)

1.一种藜麦肽，其特征在于，它是依次通过以下制备步骤而制得的：
（1）藜麦蛋白的提取
取藜麦籽粒15g，加纯化水水洗3次，烘干，加90℃石油醚50ml并研磨均匀，静置浸泡3小时，挥干石油醚，研磨成80目细粉，即得脱脂藜麦粉；再用α-淀粉酶水解以去除藜麦粉中的淀粉，其中，α-淀粉酶水解时的料液比为1:6 w/v、pH为8、加酶量为200u/g、酶解温度为60℃、酶解时间为150min，获得的藜麦蛋白的提取率为73.9%；
（2）藜麦蛋白的纯化
采用20KD膜孔径的超滤装置对藜麦蛋白进行浓缩和纯化，获得的藜麦蛋白提取率为80.2%；
（3）藜麦蛋白的水解
以所得的藜麦蛋白为对象，加入由风味蛋白酶和碱性蛋白酶组成的双酶制剂，进行双酶水解；其中，双酶制剂中双酶的酶活用量比例为1：1、双酶制剂的总加酶量为0.3万U/g，双酶水解的温度为55℃、pH值为8、底物浓度为8%（w/v），双酶同时酶解120min；
（4）再于-60℃下冷冻干燥12h，之后粉碎。
2.如权利要求1所述藜麦肽，其特征在于：所述藜麦蛋白的水解步骤中，藜麦蛋白的水解度为36%，所制得的藜麦肽的氮溶指数为45%，且所述藜麦肽的分子量分布在4.6kDa～25KDa之间。
3.如权利要求1或2所述的藜麦肽在制备抑制α-淀粉酶活性的制剂中的应用，以及所述藜麦肽在制备减肥药物或减肥食物中的应用。
4.如权利要求1或2所述的藜麦肽在制备抑制血管紧张素转化酶的制剂中的应用，以及所述藜麦肽在制备降血压的药物中的应用。
CN201811273826.XA 2018-10-30 2018-10-30 一种藜麦肽及其制备方法和应用 Active CN109234344B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811273826.XA CN109234344B (zh) 2018-10-30 2018-10-30 一种藜麦肽及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811273826.XA CN109234344B (zh) 2018-10-30 2018-10-30 一种藜麦肽及其制备方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109234344A CN109234344A (zh) 2019-01-18
CN109234344B true CN109234344B (zh) 2020-11-10

Family

ID=65079220

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811273826.XA Active CN109234344B (zh) 2018-10-30 2018-10-30 一种藜麦肽及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109234344B (zh)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109770366A (zh) * 2019-02-25 2019-05-21 湖北瑞邦生物科技有限公司 一种藜麦肽的制备方法
CN110241163B (zh) * 2019-06-25 2021-07-27 江南大学 一种碱提-膜法提取藜麦多肽的方法
CN110951809A (zh) * 2019-09-04 2020-04-03 内蒙古立泰锐晟智能科技有限公司 一种红藜麦多肽粉的制作工艺
CN110786519A (zh) * 2019-10-15 2020-02-14 广东羲准生物科技有限公司 藜麦肽和大豆肽的混合物
CN111000249A (zh) * 2019-11-29 2020-04-14 南京迪维奥医药科技有限公司 一种减肥降糖复方植物多肽口服液及其制备方法
CN111197066B (zh) * 2020-01-10 2023-05-16 成都大学 具有胆酸盐吸附作用的藜麦活性肽的酶解方法
CN111893157A (zh) * 2020-08-17 2020-11-06 西北农林科技大学 一种降血糖藜麦肽及其制备方法和应用
CN113337563B (zh) * 2021-06-01 2022-09-30 科丽思化妆品（上海）有限公司 一种具有美白、抗氧化活性的藜麦肽及其制备方法和应用
CN115286696B (zh) * 2022-06-27 2024-02-27 上海理工大学 一种藜麦肽纳米载体及其制备方法和应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105076665A (zh) * 2015-07-20 2015-11-25 聊城大学 一种藜麦蛋白粉的制备工艺
WO2016105215A1 (es) * 2014-12-22 2016-06-30 Alicorp S.A.A. Procedimiento para obtener un instantáneo de quinua
CN107319302A (zh) * 2017-08-02 2017-11-07 李志军 一种以糙米和藜麦为主料的幼儿冲调粉及其制备方法
CN108041442A (zh) * 2010-12-08 2018-05-18 雀巢产品技术援助有限公司 含水解的全谷粒的填充组合物

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108041442A (zh) * 2010-12-08 2018-05-18 雀巢产品技术援助有限公司 含水解的全谷粒的填充组合物
WO2016105215A1 (es) * 2014-12-22 2016-06-30 Alicorp S.A.A. Procedimiento para obtener un instantáneo de quinua
CN105076665A (zh) * 2015-07-20 2015-11-25 聊城大学 一种藜麦蛋白粉的制备工艺
CN107319302A (zh) * 2017-08-02 2017-11-07 李志军 一种以糙米和藜麦为主料的幼儿冲调粉及其制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Impact of protease and amylase treatment on proteins and the product quality of a quinoa-based milk substitute";Stephanie Jeske et al.;《The Royal Society of Chemistry》;20180612(第9期);参见摘要，第3501页左栏第2段-第3505页左栏第1段 *
"Release of dipeptidyl peptidase IV, a-amylase and a-glucosidase inhibitory peptides from quinoa (Chenopodium quinoa Willd.) during in vitro simulated gastrointestinal digestion";Rubén Vilcacundo et al.;《 Journal of Functional Foods》;20170621;第35卷;参见摘要，第532页左栏第3段-第538页左栏第3段 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN109234344A (zh) 2019-01-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109234344B (zh) 一种藜麦肽及其制备方法和应用
Li et al. Optimization of ACE inhibitory peptides from black soybean by microwave-assisted enzymatic method and study on its stability
CN107141336B (zh) 具有dpp-iv抑制活性的牦牛骨蛋白肽及制备方法
Rui et al. Angiotensin I-converting enzyme inhibitory properties of Phaseolus vulgaris bean hydrolysates: Effects of different thermal and enzymatic digestion treatments
Arise et al. In vitro antioxidant and α-amylase inhibitory properties of watermelon seed protein hydrolysates.
CN101824455B (zh) 一种大豆蛋白低聚肽及其制备方法和用途
AU666531B2 (en) Processes for the preparation of amylase inhibitor
AO et al. Moringa oleifera seed protein hydrolysates: kinetics of α-amylase inhibition and antioxidant potentials
CN108893515B (zh) 高f值寡肽及其制备方法
CN111019989A (zh) 一种豌豆低聚肽粉及其制备方法
CN112961893A (zh) 罗非鱼皮胶原蛋白抗氧化肽及制备方法和在制备化妆品或细胞氧化损伤保护的药物中的应用
CN110819674A (zh) 一种复合蛋白酶酶解核桃粕制备降血压肽的方法
CN112680491A (zh) 一种制备玉米黄粉高f值寡肽的方法
CN112795611B (zh) 一种不可溶性蛋白制备核桃蛋白多肽的方法
CN107723328B (zh) 一种瓜尔豆活性肽及其制备方法
KR101647558B1 (ko) 참치심장으로부터 분리한 항산화 펩타이드의 제조방법
CN104945471B (zh) 贻贝蛋白降压肽
CN101366442A (zh) 一种羊血红蛋白降血压肽及制备方法
Sun et al. Optimization of enzymatic hydrolysis conditions for preparation of gingko peptides from ginkgo nuts
CN114213512B (zh) 增强藻胆蛋白光热稳定性的组合物及其制备方法与应用
CN113943346B (zh) 螺旋藻降压肽及应用
CN113087773B (zh) 一种具有降血糖和抗氧化功能的牦牛骨肽及其制备方法
WO2022032803A1 (zh) 燕窝提取方法、提取物及其产品
AU2021106749A4 (en) Whey protein peptide with muscle-building effect and preparation method thereof, and compound protein powder
James et al. Invitro α-amylase Inhibitory Activity and Antioxidant Profile of Carica Papaya Seed Protein Hydrolysate

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB03 Change of inventor or designer information

Inventor after: Yu Xiaoxiao

Inventor after: Su Yuchun

Inventor after: Li Yanli

Inventor after: Chen Guang

Inventor after: Sun Yang

Inventor after: Wang Gang

Inventor after: Chen Huan

Inventor after: Su Yingjie

Inventor after: Han Chong

Inventor after: Tang Shanshan

Inventor after: Wu Zhuofu

Inventor before: Chen Guang

Inventor before: Su Yuchun

Inventor before: Li Yanli

Inventor before: Yu Xiaoxiao

Inventor before: Han Chong

Inventor before: Sun Yang

Inventor before: Wang Gang

Inventor before: Chen Huan

Inventor before: Su Yingjie

Inventor before: Tang Shanshan

Inventor before: Wu Zhuofu

CB03 Change of inventor or designer information
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant