CN109220808A - 一种椴树生根组织培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种椴树生根组织培养方法,按如下步骤进行:第一步,外植体选取:采取当年生的半木质化的嫩茎为材料外植体;第二步,外植体处理:采来的外植体用0.1%浓度的升汞浸泡,待用;第三步,转接:把外植体切成1.5厘米左右长,插入椴树专用基础培养基中;第四步,生根培育:选择芽体健康,放入生根培养基中培养至生根;第五步,出瓶洗苗:将幼苗轻轻夹出,用流动的水下进行清洗。本发明实现了椴树的组织培养大批量育苗,提高了育苗效率。
Description
技术领域
本发明属于植物组织培养领域,具体涉及一种椴树生根组织培养方法。
背景技术
椴树为乔木,高20米,树皮灰色,直裂;小枝近秃净,顶芽无毛或有微毛;叶卵圆形,长7-14厘米,宽5.5-9厘米,先端短尖或渐尖,基部单侧心形或斜截形,上面无毛,下面初时有星状茸毛,以后变秃净,在脉腋有毛丛,干后灰色或褐绿色,侧脉6-7对,边缘上半部有疏而小的齿突;叶柄长3-5厘米,近秃净;聚伞花序长8-13厘米,无毛;花柄长7-9毫米;苞片狭窄倒披针形,长10-16厘米,宽1.5-2.5厘米,无柄,先端钝,基部圆形或楔形,上面通常无毛,下面有星状柔毛,下半部5-7厘米与花序柄合生;萼片长圆状披针形,长5毫米,被茸毛,内面有长茸毛;花瓣长7-8毫米;退化雄蕊长6-7毫米;雄蕊长5毫米;子房有毛,花柱长4-5毫米;果实球形,宽8-10毫米,无棱,有小突起,被星状茸毛。椴树现有的育苗一般采用种子种植,此种方式效率低;组织培养为一种常见的提高产量的方式;而椴树由于结构特征,现有的组织培养方式使得其在组织培养过程中组织不易愈合,容易出现黑化;且不易生根,出苗成功率低。
发明内容
本发明的目的是解决上述不足,提供一种椴树生根组织培养方法。
为实现上述目的,本发明的技术解决方案是:一种椴树生根组织培养方法,其特征在于按如下步骤进行:
第一步,外植体选取:在3-5月期间,采取当年生的半木质化的嫩茎为材料外植体,采取外植体时在晴天的9-15点时间段进行;
第二步,外植体处理:采来的外植体材料除去不需要的叶片,用洗涤剂清洗2-3分钟后用纱布轻轻擦去茎段上的白毛,再用自来水冲洗3-4小时;洗净后拿到超净工作台上,用无菌水清洗2遍,用75%的酒精清洗30秒,用无菌水清洗2-3遍,用0.1%浓度的升汞浸泡20-25分钟,再用无菌水清洗4-5遍,待用;
第三步,转接:把外植体切成1.5厘米左右长,带侧枝的茎段,在无菌环境下插入椴树专用基础培养基中,插入深度0.5厘米,一瓶3棵;将接种的培养瓶置于温度为23-27℃的洁净环境中,在光照时长为14小时/天、光照强度为2000lux-2500lux条件下培养至其萌发出侧芽;
第四步,生根培育:选择芽体健康,无污染的侧芽或者顶芽,长度为3-4cm长短,放入生根培养基中,在光照强度为2000lux-2500lux,光照时长为14小时/天,培养30天-45天,培养至生根;
第五步,出瓶洗苗:打开瓶口,用镊子将幼苗轻轻夹出,用流动的水下进行清洗,洗净根部附着的培养基后进行移栽。
所述的椴树专用基础培养基成分按重量组分为:MS培养基为1000份、碳为0.2份、赤霉素为0.5-0.6份混合、萘乙酸为1-1.1份、细胞分裂素为0.5份、琼脂2-3份、蔗糖20-25份、肌醇0.02-0.03份,再加入NaOH调节PH值为5.8。
所述的生根培养基成分按重量组分为:MS培养基为500份、吲哚丁酸为0.8-1份、琼脂2-2.2份、蔗糖12-15份、萘乙酸为0.4-0.5份、EM益生菌原液0.3-0.4份,再加入NaOH调节PH值为5.8。
本发明的提供的一种椴树生根组织培养方法,经过长期实验及实际工作组培经验,通过培养基各组分和各步骤的配合作用,实现了椴树的组织培养大批量育苗,提高了育苗效率,在培养基中添加了适量的碳,能够防止愈伤组织褐化甚至黑化,克服了愈伤组织不能直接形成幼芽缺陷;提高了椴树茎段组织培养幼苗生长态势,提高了生根率,生根率现已达到60%以上,在培养基中添加了益生菌,促进了根系发育,提高出苗成功率。
具体实施方式
本发明的提供的一种椴树生根组织培养方法,具体按如下实施例进行。
实施例1:
第一步,外植体选取:在3-5月期间,采取当年生的半木质化的嫩茎为材料外植体,采取外植体时在晴天的9-15点时间段进行;
第二步,外植体处理:采来的外植体材料除去不需要的叶片,用洗涤剂清洗2-3分钟后用纱布轻轻擦去茎段上的白毛,再用自来水冲洗3-4小时;洗净后拿到超净工作台上,用无菌水清洗2遍,用75%的酒精清洗30秒,用无菌水清洗2-3遍,用0.1%浓度的升汞浸泡20-25分钟,再用无菌水清洗4-5遍,待用;
第三步,转接:把外植体切成1.5厘米左右长,带侧枝的茎段,在无菌环境下插入椴树专用基础培养基中,插入深度0.5厘米,一瓶3棵;将接种的培养瓶置于温度为23-27℃的洁净环境中,在光照时长为14小时/天、光照强度为2000lux-2500lux条件下培养至其萌发出侧芽;所述的椴树专用基础培养基成分按重量组分为:MS培养基为1000份、碳为0.2份、赤霉素为0.6份混合、萘乙酸为1.1份、细胞分裂素为0.5份、琼脂3份、蔗糖25份、肌醇0.03份,再加入NaOH调节PH值为5.8;
第四步,生根培育:选择芽体健康,无污染的侧芽或者顶芽,长度为3-4cm长短,放入生根培养基中,在光照强度为2000lux-2500lux,光照时长为14小时/天,培养30天-45天,培养至生根;所述的生根培养基成分按重量组分为:MS培养基为500份、吲哚丁酸为0.8份、琼脂2份、蔗糖12份、萘乙酸为0.4份、EM益生菌原液0.3份,再加入NaOH调节PH值为5.8;
第五步,出瓶洗苗:打开瓶口,用镊子将幼苗轻轻夹出,用流动的水下进行清洗,洗净根部附着的培养基后进行移栽。
实施例2:
第一步,外植体选取:在3-5月期间,采取当年生的半木质化的嫩茎为材料外植体,采取外植体时在晴天的9-15点时间段进行;
第二步,外植体处理:采来的外植体材料除去不需要的叶片,用洗涤剂清洗2-3分钟后用纱布轻轻擦去茎段上的白毛,再用自来水冲洗3-4小时;洗净后拿到超净工作台上,用无菌水清洗2遍,用75%的酒精清洗30秒,用无菌水清洗2-3遍,用0.1%浓度的升汞浸泡20-25分钟,再用无菌水清洗4-5遍,待用;
第三步,转接:把外植体切成1.5厘米左右长,带侧枝的茎段,在无菌环境下插入椴树专用基础培养基中,插入深度0.5厘米,一瓶3棵;将接种的培养瓶置于温度为23-27℃的洁净环境中,在光照时长为14小时/天、光照强度为2000lux-2500lux条件下培养至其萌发出侧芽;所述的椴树专用基础培养基成分按重量组分为:MS培养基为1000份、碳为0.2份、赤霉素为0.5份混合、萘乙酸为1份、细胞分裂素为0.5份、琼脂2份、蔗糖20份、肌醇0.02份,再加入NaOH调节PH值为5.8;
第四步,生根培育:选择芽体健康,无污染的侧芽或者顶芽,长度为3-4cm长短,放入生根培养基中,在光照强度为2000lux-2500lux,光照时长为14小时/天,培养30天-45天,培养至生根;所述的生根培养基成分按重量组分为:MS培养基为500份、吲哚丁酸为1份、琼脂2.2份、蔗糖15份、萘乙酸为0.5份、EM益生菌原液0.4份,再加入NaOH调节PH值为5.8;
第五步,出瓶洗苗:打开瓶口,用镊子将幼苗轻轻夹出,用流动的水下进行清洗,洗净根部附着的培养基后进行移栽。
Claims (3)
1.一种椴树生根组织培养方法,其特征在于:按如下步骤进行:
第一步,外植体选取:在3-5月期间,采取当年生的半木质化的嫩茎为材料外植体,采取外植体时在晴天的9-15点时间段进行;
第二步,外植体处理:采来的外植体材料除去不需要的叶片,用洗涤剂清洗2-3分钟后用纱布轻轻擦去茎段上的白毛,再用自来水冲洗3-4小时;洗净后拿到超净工作台上,用无菌水清洗2遍,用75%的酒精清洗30秒,用无菌水清洗2-3遍,用0.1%浓度的升汞浸泡20-25分钟,再用无菌水清洗4-5遍,待用;
第三步,转接:把外植体切成1.5厘米左右长,带侧枝的茎段,在无菌环境下插入椴树专用基础培养基中,插入深度0.5厘米,一瓶3棵;将接种的培养瓶置于温度为23-27℃的洁净环境中,在光照时长为14小时/天、光照强度为2000lux-2500lux条件下培养至其萌发出侧芽;
第四步,生根培育:选择芽体健康,无污染的侧芽或者顶芽,长度为3-4cm长短,放入生根培养基中,在光照强度为2000lux-2500lux,光照时长为14小时/天,培养30天-45天,培养至生根;
第五步,出瓶洗苗:打开瓶口,用镊子将幼苗轻轻夹出,用流动的水下进行清洗,洗净根部附着的培养基后进行移栽。
2.如权利要求1所述的一种椴树生根组织培养方法,其特征在于:所述的椴树专用基础培养基成分按重量组分为:MS培养基为1000份、碳为0.2份、赤霉素为0.5-0.6份混合、萘乙酸为1-1.1份、细胞分裂素为0.5份、琼脂2-3份、蔗糖20-25份、肌醇0.02-0.03份,再加入NaOH调节PH值为5.8。
3.如权利要求1所述的一种椴树生根组织培养方法,其特征在于:所述的生根培养基成分按重量组分为:MS培养基为500份、吲哚丁酸为0.8-1份、琼脂2-2.2份、蔗糖12-15份、萘乙酸为0.4-0.5份、EM益生菌原液0.3-0.4份,再加入NaOH调节PH值为5.8。
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