CN109212092A

CN109212092A - 食用油脂中聚合甘油三酯的超高效空间排阻色谱测定方法

Info

Publication number: CN109212092A
Application number: CN201811265354.3A
Authority: CN
Inventors: 刘亚雄; 赖宇红; 罗卓雅; 方继辉; 温家欣
Original assignee: Guangdong Provincial Institute For Drug Control (guangdong Provincial Institute For Drug Quality Control And Guangdong Port Drug Control Institute)
Current assignee: Guangdong Provincial Institute For Drug Control (guangdong Provincial Institute For Drug Quality Control And Guangdong Port Drug Control Institute)
Priority date: 2018-10-29
Filing date: 2018-10-29
Publication date: 2019-01-15

Abstract

本发明公开了食用油脂中聚合甘油三酯的超高效空间排阻色谱测定方法。这种测定方法，是将食用油脂试样溶解后，在超高效空间排阻色谱系统上分离，利用示差折光检测器检测聚合甘油三酯，所得的色谱峰面积归一化法定量结果为聚合甘油三酯的含量。本发明提供了一种用超高效空间排阻色谱法测定食用植物油脂中聚合甘油三酯的方法，适用于未经使用的食用植物油是否存在异常的检测及识别。

Description

食用油脂中聚合甘油三酯的超高效空间排阻色谱测定方法

技术领域

本发明涉及食用油脂中聚合甘油三酯的超高效空间排阻色谱测定方法。

背景技术

食用油在我国膳食结构中占据重要地位，是人体脂肪酸主要来源，也是构成食物色香味的重要物质。“地沟油”的卫生条件极差，可能受到多种有毒有害物质的污染，如金属离子、黄曲霉毒素、苯并芘及丙烯酰胺等，引起了人们对食用油安全的普遍担忧，甚至到了“谈油色变”的地步。

油脂中的聚合甘油三酯(PTAGs)主要在高温过程产生。油脂产品在生产中大多经历高温精炼过程。为提高油品质量等级，过度精炼趋势明显，但过度精炼使营养素流失的同时PTAGs含量增加。PTAGs可作为油脂生产加工过程中控制精炼程度的指标，对PTAGs含量较低的动植物油脂产品进行监测有重要的现实意义。

现有标准对聚合甘油三酯的检测方法有：AOS Cd 22-91官方方法、国际标准化组织ISO16931-2009标准方法、国际理论与应用化学会的IUPAC 2.508标准方法和我国国标GB/T26636-2011标准方法等。上述标准均用HPSEC法进行检测，其原理是：样品溶解于四氢呋喃后，在装填有凝胶的色谱柱上，根据分子量的大小将聚合甘油三酯分离，利用示差折光检测器检测其组分。聚合甘油三酯的含量以提取的所有酰基甘油酯(甘油三酯TAGs，聚合甘油三酯PTAGs、甘油二酯DAGs和甘油一酯MAGs)的峰面积的百分率表示。但均存在检测灵敏度低的问题，只适用于PTAGs含量高于3％的油脂，而动植物油脂产品中PTAGs含量通常低于3％。此外，上述标准采用的HPSEC法存在目标峰与主峰分离度差的问题，对于较高PTAGs含量的油脂定量准确度较差。

发明内容

本发明的目的在于提供一种食用油脂中聚合甘油三酯的超高效空间排阻色谱测定方法，适用于未经使用的食用植物油(大豆油、菜籽油、棕榈油、花生油、橄榄油、芝麻油、葵花籽油、玉米油、油茶籽油、葡萄籽油、亚麻籽油、米糠油，以及上述油品配制成的调和油)是否存在异常的检测及识别。

本发明所采取的技术方案是：

一种食用油脂中聚合甘油三酯的超高效空间排阻色谱测定方法，是将食用油脂试样溶解后，在超高效空间排阻色谱系统上分离，利用示差折光检测器检测聚合甘油三酯，所得的色谱峰面积归一化法定量结果为聚合甘油三酯的含量。

这种测定方法，是根据聚合甘油三酯的含量判定食用油脂是否异常：

当食用油脂为米糠油或葡萄籽油，测定聚合甘油三酯的含量≥3.0％时，判定为异常油脂；

当食用油脂为非米糠油或葡萄籽油，测定聚合甘油三酯的含量≥2.0％时，判定为异常油脂。

这种食用油脂中聚合甘油三酯的超高效空间排阻色谱测定方法，包括以下步骤：

一、试样制备

用四氢呋喃溶解食用油脂试样，然后加入无水硫酸钠，静置，取上层液，过滤，得到待测试样；

二、标准溶液配制

1)配制十八碳酸甘油三酯标准储备液：取十八碳酸甘油三酯标准品，用四氢呋喃稀释定容，得到浓度为10mg/mL的十八碳酸甘油三酯标准储备液，备用；

2)配制十八碳酸甘油三酯标准检出限溶液：取十八碳酸甘油三酯标准储备液，用四氢呋喃稀释成浓度为75μg/mL的十八碳酸甘油三酯标准检出限溶液，现配现用；

三、试样测定

用十八碳酸甘油三酯标准检出限溶液对配示差折光检测器的超高效液相色谱仪进行系统适应性试验，然后将待测试样注入超高效液相色谱仪中进行检测，在超高效空间排阻色谱柱上根据分子量的大小分离，利用示差折光检测器检测聚合甘油三酯，所得的聚合甘油三酯色谱峰面积归一化法定量结果为聚合甘油三酯的含量。

试样制备的具体步骤为：称取食用油脂试样50mg置于试管中，用2mL四氢呋喃溶解，加入0.5g无水硫酸钠，静置，取上层液，用0.22μm微孔滤膜过滤，待测。

试样测定步骤中，系统适应性试验要求为：十八碳酸甘油三酯色谱峰计算理论塔板数n≥50000/m；以十八碳酸甘油三酯计的仪器检出限不低于0.75μg/mL。

试样测定步骤中，色谱测定条件如下：

a)色谱柱：GPC KF-G凝胶色谱保护柱，GPC KF-402HQ高效尺寸排阻色谱柱×3；

b)流动相：四氢呋喃；

c)流速：0.2～0.4mL/min。

d)柱温：38℃～42℃；

e)进样量：4μL～6μL；

f)示差折光检测器温度：38℃～42℃。

试样测定步骤中，聚合甘油三酯的含量按下式计算：

式中：

P_PTAG——试样中聚合甘油三酯的质量分数之和，％；

∑A_PTAG——聚合甘油三酯峰的峰面积之和；

∑A_tot——所有峰的峰面积之和。

本发明的有益效果是：

本发明提供了一种用超高效空间排阻色谱法(UPSEC)测定食用植物油脂中聚合甘油三酯的方法，适用于未经使用的食用植物油(大豆油、菜籽油、棕榈油、花生油、橄榄油、芝麻油、葵花籽油、玉米油、油茶籽油、葡萄籽油、亚麻籽油、米糠油，以及上述油品配制成的调和油)是否存在异常的检测及识别。

附图说明

图1是超高效空间排阻色谱法测定正常食用植物油(米糠油、葡萄籽油除外)典型图谱；

图2是超高效空间排阻色谱法测定异常食用植物油(米糠油、葡萄籽油除外)典型图谱；

图3是超高效空间排阻色谱法测定正常米糠油典型图谱；

图4是超高效空间排阻色谱法测定异常米糠油典型图谱；

图5是超高效空间排阻色谱法测定正常葡萄籽油典型图谱；

图6是超高效空间排阻色谱法测定异常葡萄籽油典型图谱。

具体实施方式

食用油脂是指食用植物油脂，具体为大豆油、菜籽油、棕榈油、花生油、橄榄油、芝麻油、葵花籽油、玉米油、油茶籽油、葡萄籽油、亚麻籽油、米糠油中的一种或者多种配制成的调和油。

当食用油脂为米糠油或葡萄籽油，测定聚合甘油三酯的含量≥3.0％时，判定为异常油脂；聚合甘油三酯的含量<3.0％时，判定为正常油脂；

当食用油脂为非米糠油或葡萄籽油，测定聚合甘油三酯的含量≥2.0％时，判定为异常油脂；聚合甘油三酯的含量<2.0％时，判定为正常油脂。

一、试样制备

二、标准溶液配制

三、试样测定

优选的，试样制备的具体步骤为：称取食用油脂试样50mg置于试管中，用2mL四氢呋喃溶解，加入0.5g无水硫酸钠，静置，取上层液，用0.22μm微孔滤膜过滤，待测。

优选的，试样测定步骤中，系统适应性试验要求为：十八碳酸甘油三酯色谱峰计算理论塔板数n≥50000/m；以十八碳酸甘油三酯计的仪器检出限不低于0.75μg/mL。

优选的，试样测定步骤中，色谱测定条件如下：

b)流动相：四氢呋喃；

c)流速：0.2～0.4mL/min。

d)柱温：38℃～42℃；

e)进样量：4μL～6μL；

f)示差折光检测器温度：38℃～42℃。

其中，GPC KF-402HQ高效尺寸排阻色谱柱的规格为4.6mm×250mm，填料的粒径为3μm。本方法在超高效液相色谱仪上采用3μm填料高效尺寸排阻色谱柱串联(×3)，与GB/T26636- 2011相比，可以显著提高分离度。

进一步优选的，色谱测定条件中，流速为0.3mL/min，柱温为40℃，进样量为5μL，示差折光检测器温度为40℃。

试样测定步骤中，聚合甘油三酯的含量按下式计算：

式中：

P_PTAG——试样中聚合甘油三酯的质量分数之和，％；

∑A_PTAG——聚合甘油三酯峰的峰面积之和；

∑A_to_t——所有峰的峰面积之和。

以下通过具体的实施例对本发明的内容作进一步详细的说明。实施例中所用的原料或仪器如无特殊说明，均可从常规商业途径得到。

一、聚合甘油三酯的测定

1.1聚合甘油三酯的测定原理

食用油脂试样经四氢呋喃溶解后，在超高效空间排阻色谱柱上根据分子量的大小分离，利用示差折光检测器检测聚合甘油三酯，面积归一化法定量。

1.2试剂和材料

1.2.1试剂

1.2.1.1四氢呋喃(C₄H₈O)：色谱纯。

1.2.1.2无水硫酸钠(Na2SO₄)：优级纯，使用前于650℃灼烧4h，贮于干燥器中备用。

1.2.1.3大豆油(GB/T 1535-2003)或花生油(GB/T 1534-2003)。

1.2.2标准品

标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1，纯度≥98％。

表1 标准品信息

中文名称	英文名称	CAS登录号	分子式	相对分子量
					十八碳酸甘油三酯	Glycerinetrioleate	122-32-7	C<sub>57</sub>H<sub>104</sub>O<sub>6</sub>	885.43

1.2.3标准溶液配制

1.2.3.1十八碳酸甘油三酯标准储备液(10mg/mL)

取十八碳酸甘油三酯标准品全部100mg，用10mL四氢呋喃(1.2.1.1)稀释定容，得十八碳酸甘油三酯储备液(10mg/mL)。贮存于-10℃以下冰箱，有效期3个月。

1.2.3.2十八碳酸甘油三酯标准检出限溶液(75μg/mL)

准确吸取十八碳酸甘油三酯标准储备液(1.2.3.1)适量，用四氢呋喃(1.2.1.1)稀释成75μg/mL的十八碳酸甘油三酯标准检出限溶液。现配现用。

1.3仪器和设备

1.3.1超高效液相色谱仪：配示差折光检测器。

1.3.2分析天平：感量为0.0001g。

1.4分析步骤

1.4.1试样制备

称取试样约50mg，置具塞试管中，用2mL四氢呋喃(1.2.1.1)溶解，加入约0.5g无水硫酸钠(1.2.1.2)，放置5min，吸取上层液，用0.22μm微孔滤膜过滤，待测。

1.4.2测定

1.4.2.1仪器参考条件(UPSEC)

a)色谱柱：GPC KF-G凝胶色谱保护柱+GPC KF-402HQ高效尺寸排阻色谱柱(3μm，4.6mm×250mm)×3，或性能相当者。

b)流动相：四氢呋喃(1.2.1.1)。

c)流速：0.3mL/min。

d)柱温：40℃。

e)进样量：5μL。

f)示差折光检测器温度：40℃。

h)系统适应性试验：

①理论板数(n)：十八碳酸甘油三酯色谱峰计算理论塔板数(n)：≥50000/m；

②仪器检出限：以十八碳酸甘油三酯计应不低于0.75μg/mL。

1.4.2.2试样测定

在上述色谱条件下将待测液(1.4.1)注入超高效液相色谱仪(1.3.1)，记录各组分的峰面积。

1.5结果表述

假设所有响应组分具有相同的响应系数，聚合甘油三酯的含量以面积归一化法定量。聚合甘油三酯的含量按下式计算：

式中：

P_PTAG——试样中聚合甘油三酯的质量分数(基于峰面积)之和，％；

∑A_PTAG——聚合甘油三酯峰的峰面积之和；

∑A_tot——所有峰的峰面积之和。

计算的结果保留至小数点后1位。

1.6结果判定

根据聚合甘油三酯含量的大小，P_PTAG≥2.0％时(米糠油、葡萄籽油除外)，判定为异常油脂；P_PTAG≥3.0％时(限米糠油、葡萄籽油)，判定为异常油脂。

1.7精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10％。

1.8质量控制

为保证结果的准确度、精密度和重现性，本方法质量控制对空白试验、阴性对照试验、检出限进行考察，质量控制要求如下：

1.8.1空白试验

除不加试样外，均按上述测定步骤进行。

1.8.2阴性对照

经验证的大豆油或花生油(1.2.1.3)作为随行阴性对照。

1.8.3检出限

检出限为0.3％。

超高效空间排阻色谱法测定正常食用植物油(米糠油、葡萄籽油除外)典型图谱见附图1；超高效空间排阻色谱法测定异常食用植物油(米糠油、葡萄籽油除外)典型图谱见附图2。图2中的P_PTAG＝19.0％。

超高效空间排阻色谱法测定正常米糠油典型图谱见附图3；超高效空间排阻色谱法测定异常米糠油典型图谱见附图4；超高效空间排阻色谱法测定正常葡萄籽油典型图谱见附图5；超高效空间排阻色谱法测定异常葡萄籽油典型图谱见附图6。

二、试验结果

2.1精密度试验

聚合甘油三酯的UPSEC检测方法的精密度试验及不确定度评定

以煎炸过程用油的样品进行精密度试验，结果见表2。

表2 UPSEC检测方法的精密度试验结果

结果表明，超高效空间排阻色谱法测定食用植物油中聚合甘油三酯的方法精密度良好。

依据JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》国家计量技术规范，测定，计算，取包含因子k＝2，扩展不确定度为：

U＝0.41(％)

2.2应用试验

2.2.1适用范围

食用植物油的消费主要包括以下几个方面：直接食用、集体和个体商业用油、食品加工用油、工业及医药等其他用油。资料显示，我国食用油消费结构以大豆油、菜籽油、棕榈油、花生油占据统治地位；橄榄油、芝麻油、葵花籽油、玉米油、油茶籽油、葡萄籽油、亚麻籽油、米糠油等为小品种食用油。

应用试验收集约170家生产企业的大豆油、菜籽油、棕榈油、花生油、调和油、橄榄油、芝麻油、葵花籽油、玉米油、油茶籽油、葡萄籽油、亚麻籽油、米糠油等13个品种的食用植物油300余批，进行测定，统计。

2.2.2聚合甘油三酯的UPSEC检测方法结果

2.2.2.1限量值

2.2.2.2测评结果

在聚合甘油三酯的检测方法研究阶段，采用普通高效液相色谱仪双柱串联的方式对样品进行检测，应用于未精炼的餐厨回收油脂14批、精炼后的餐厨回收油脂14批、煎炸过程用油9批，及正常油脂284批，结果统计见表3。

表3 聚合甘油三酯的HPSEC检测方法研究结果

表3中，注a：样品来源同表2；注b：样品来源于大型超市，其中极性组分不合格1批；注c：样品来源于大型超市、批发市场、餐饮环节。

在聚合甘油三酯的检测方法优化阶段，采用超高效液相色谱仪三柱串联的方式对样品进行检测，以提高目标物分离度，检测统计结果见表4和表5。

表4 聚合甘油三酯的UPSEC检测方法风险评判的应用结果

表5 聚合甘油三酯的UPSEC法风险评判异常结果

样品名称	P<sub>PTAG</sub>(％)	来源	品种	批号
					一级大豆油	3.8	餐饮环节	大豆油	2012.10.07
特香花生调和油	7.7	批发	调和油	20121210
					食用调和油(煎饼用)<sup>a</sup>	6.9	超市自用	调和油	/
稻米油	9.03	网购	米糠油	20170420
					稻米油	9.69	网购	米糠油	20170525

表5中的注a：该样品未经使用，极性组分20.4％，偏高。

Claims

1.一种食用油脂中聚合甘油三酯的超高效空间排阻色谱测定方法，其特征在于：将食用油脂试样溶解后，在超高效空间排阻色谱系统上分离，利用示差折光检测器检测聚合甘油三酯，所得的色谱峰面积归一化法定量结果为聚合甘油三酯的含量。

2.根据权利要求1所述的一种食用油脂中聚合甘油三酯的超高效空间排阻色谱测定方法，其特征在于：根据聚合甘油三酯的含量判定食用油脂是否异常：

3.根据权利要求1或2所述的一种食用油脂中聚合甘油三酯的超高效空间排阻色谱测定方法，其特征在于：包括以下步骤：

一、试样制备

二、标准溶液配制

三、试样测定

4.根据权利要求3所述的一种食用油脂中聚合甘油三酯的超高效空间排阻色谱测定方法，其特征在于：试样制备的具体步骤为：称取食用油脂试样50mg置于试管中，用2mL四氢呋喃溶解，加入0.5g无水硫酸钠，静置，取上层液，用0.22μm微孔滤膜过滤，待测。

5.根据权利要求3所述的一种食用油脂中聚合甘油三酯的超高效空间排阻色谱测定方法，其特征在于：试样测定步骤中，系统适应性试验要求为：十八碳酸甘油三酯色谱峰计算理论塔板数n≥50000/m；以十八碳酸甘油三酯计的仪器检出限不低于0.75μg/mL。

6.根据权利要求3或5所述的一种食用油脂中聚合甘油三酯的超高效空间排阻色谱测定方法，其特征在于：试样测定步骤中，色谱测定条件如下：

b)流动相：四氢呋喃；

c)流速：0.2～0.4mL/min。

d)柱温：38℃～42℃；

e)进样量：4μL～6μL；

f)示差折光检测器温度：38℃～42℃。

7.根据权利要求6所述的一种食用油脂中聚合甘油三酯的超高效空间排阻色谱测定方法，其特征在于：试样测定步骤中，聚合甘油三酯的含量按下式计算：

式中：

P_PTAG——试样中聚合甘油三酯的质量分数之和，％；

∑A_PTAG——聚合甘油三酯峰的峰面积之和；

∑A_tot——所有峰的峰面积之和。