CN109207636A - 鳜鱼虹彩病毒与嗜水气单胞菌同步检测试剂盒及检测方法 - Google Patents

鳜鱼虹彩病毒与嗜水气单胞菌同步检测试剂盒及检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109207636A
CN109207636A CN201811152897.4A CN201811152897A CN109207636A CN 109207636 A CN109207636 A CN 109207636A CN 201811152897 A CN201811152897 A CN 201811152897A CN 109207636 A CN109207636 A CN 109207636A
Authority
CN
China
Prior art keywords
mandarin fish
aeromonas hydrophila
follows
centrifuged
reaction
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201811152897.4A
Other languages
English (en)
Inventor
张晓君
刘晓丹
高晓建
陈楠
杨辉
李席席
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yangzhou University
Original Assignee
Yangzhou University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yangzhou University filed Critical Yangzhou University
Priority to CN201811152897.4A priority Critical patent/CN109207636A/zh
Publication of CN109207636A publication Critical patent/CN109207636A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C12Q1/701—Specific hybridization probes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/16—Primer sets for multiplex assays

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明是一种鳜鱼虹彩病毒与嗜水气单胞菌同步检测试剂盒其组成为：反应液A，其组成包含：反应缓冲液20%；dNTPs4%；氯化镁水溶液16%；Taq DNA聚合酶2%；去离子水58%；反应液B，其组成为：ISKNV‑mcp‑F和ISKNV‑mcp‑R各占50%；反应液C，Ah‑alt‑F和Ah‑alt‑R各占50%。本发明还公开了该试剂盒进行检测的方法。本发明试剂盒具有特异性强、灵敏度高、快速且成本低、操作方法更简单，能够一次性同步检测2种病原。解决了现有技术时间长、工作量大、交叉污染、操作复杂等缺陷，能较好满足目前对鳜鱼虹彩病毒病及嗜水气单胞菌引起的败血症共感染一次性检测的迫切需要。

Description

鳜鱼虹彩病毒与嗜水气单胞菌同步检测试剂盒及检测方法
技术领域
本发明涉及一种鱼类病毒和细菌同步检测的试剂盒，特别是一种用于鳜鱼虹彩病毒与嗜水气单胞菌的同步PCR快速检测试剂盒；本发明还涉及一种应用前述试剂盒进行检测的方法。
背景技术
鳜鱼是我国传统的名贵鱼类，随着养殖集约化程度的增高，养殖密度的增大以及养殖水环境的恶化，鳜鱼的病害问题日益突出，目前已成为威胁我国鳜鱼养殖业健康发展的主要因素。这些病害中，“传染性脾肾坏死病”（又称虹彩病毒病）及细菌引起的败血症等病害危害最为严重，已经造成重大经济损失。
鳜鱼的“虹彩病毒病”在农业部1125号公告里被列为二类动物疫病，其病原为虹彩病毒（red seabream iridovirus），患病鱼典型症状眼球突出，头部充血，尤其是口腔周围、眼、鳍基充血明显，鳃贫血而呈白色、粉红色或呈花斑状，解剖可见肝脏肿大发黄甚至发白或有许多出血点，肾脏、脾脏是病毒感染的主要器官；鳜鱼细菌性败血症病原主要为嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila），患病鱼典型症状下颌、鳃盖、眼、肛门周围和鳍条基部出现点状和块状的轻度出血，胃和肠壁有出血点、无食物，胆囊肿大，腹腔内结缔组织或脂肪充血，腹腔内有较多腹水，肠道内容物稀薄并充有气体。目前养殖生产中常常是“虹彩病毒”和“嗜水气单胞菌”共感染，对鳜鱼养殖造成了巨大的经济损失。严重制约了鳜鱼养殖业的发展。“虹彩病毒”和“嗜水气单胞菌”共感染情况传统的检验方法包括电子显微镜、光学显微镜、形态学检测、生理生化特征检测等，这些检测手段不仅工作量大，而且耗时长，已远远不能满足水产养殖生产上的诊断要求，基于虹彩病毒的mcp基因和嗜水气单胞菌的alt基因同步PCR检测，具有特异性强、灵敏度高和检测耗时短的优点，是同步快速检测鳜鱼虹彩病毒病和嗜水气单胞菌引起的败血症的有效方法，为鳜鱼疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供了一种新的用于鳜鱼虹彩病毒与嗜水气单胞菌快速检测试剂盒，其灵敏度高、特异性强、操作简便，在鳜鱼处于带毒带菌状态或大规模爆发疾病之前能进行准确的检测。
本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种应用前述试剂盒进行检测的方法。
本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本发明是一种用于鳜鱼虹彩病毒与嗜水气单胞菌快速检测试剂盒, 其特点是，其组成为：
水 14.4 μL；
10×PCR缓冲液 2 μL；
25mmol/L MgCl2 1.6 μL；
200mmol/L 4×dNTP混合物 0.4μL；
引物 各0.2 μL；
5U/μl的Taq DNA聚合酶 0.2 μL；
模板DNA 1μL；
反应液A，1支，其体积百分比组成为：
①反应缓冲液，20%；
②dNTPs，4%，浓度为200mM/L；
③氯化镁水溶液，16%，浓度为25mM；
④Taq DNA聚合酶，2%，浓度为5U/μL；
⑤去离子水，58%；
反应液B：反应引物1，1支；其体积百分比组成为：ISKNV-mcp-F， 50%，浓度为10uM；ISKNV-mcp-R，50%，浓度为10 uM；
ISKNV-mcp-F为：TGACCAGCGAGTTCCTTGAC
ISKNV-mcp-R为：ATGCTGGGCGCAAAGTAGTA
反应液C：反应引物2，1支；其体积百分比组成为：Ah-alt-F，50%，浓度为10uM；Ah-alt-R，50%，浓度为10 uM；
Ah-alt-F为：TTCGCTGCGACAGCAGACTT
Ah-alt-R为：TGTACCTTGACGCCAGCCACG
鳜鱼虹彩病毒和嗜水气单胞菌混合基因组DNA的阳性对照试样，1支；
健康鳜鱼组织总DNA的阴性对照试样，1支；
超纯水，1支。
本发明还提供了一种鳜鱼虹彩病毒与嗜水气单胞菌同步快速检测方法，其特点是，该方法使用了以上技术方案所述的试剂盒；其步骤如下：
（1）DNA抽提：
①取发病鳜鱼肝组织样品增菌液1mL，12000 r/min离心1min，弃上清，将菌体悬浮于100μL的灭菌蒸馏水中，100℃煮沸10min，冰浴中冷却后12000 r/min离心10min，取上清作为PCR模板DNA1；
②取发病鳜鱼肝组织，置于无菌的1.5ml的离心管中，加入100µl LB2和20µlProteinase K 55℃孵育3h，使组织完全裂解。12000×g 离心5min，取上清，加500µl BB2混匀孵育10min，然后将全部溶液加入离心柱中，12000×g 离心30s，弃流出液；加入500µlCB2，12000×g 离心30s，弃流出液，重复一次；加入500µl WB2，12000×g 离心30s，弃流出液，重复一次，离心2min，彻底去除WB2；将离心柱置于干净的离心管中，加80µl 预热的EB（60℃-70℃），室温静置1min，12000×g 离心1min，流出液即为所提的模版DNA2；
③将模板DNA1和DNA2按1:1混合作为实验总DNA。
（2）PCR扩增：
向反应管中加入反应液A 10μL，反应液B 1 μL，反应液C 1 μL，超纯水6 μL，模板DNA 2μL；PCR扩增条件：94℃预变性5min；94℃变性30s，62℃退火1min，72℃延伸30s，34次循环；72℃延伸7min；4℃保温；同时进行阴性对照和阳性对照的扩增，其中阴性对照采用健康鱼组织总DNA的阴性对照试样，阳性对照采用鳜鱼虹彩病毒和嗜水气单胞菌混合基因组DNA的阳性对照试样；
（3）琼脂糖凝胶电泳检测：琼脂糖凝胶电泳观察扩增结果，扩增出730bp和370bp两条扩增条带的为鳜鱼虹彩病毒与嗜水气单胞菌阳性，无扩增条带的为阴性。
本发明所述的鳜鱼虹彩病毒RSIV-YZ已经在公开文献《The infection of redseabream iridovirus in mandarin fish (Siniperca chuatsi) and the host immunerelated gene expression profiles》中所公开（虹彩病毒RSIV-YZ），上述公开文献发表于《Fish and Shellfish Immunology》，2018，74：474-484。
本发明所述的鳜鱼病原嗜水气单胞菌G3菌株已经在公开文献《翘嘴鳜病原嗜水气单胞菌分子特征及LAMP检测方法的建立》中所公开（菌株G3），上述公开文献发表于《水生生物学报》，2017，41（6）：1225-1231。菌株G3在Genebank 中16S rRNA基因登录号为KX822740，gyrB基因登录号为KX822741。
该毒株RSIV-YZ和菌株G3为公知公用材料，扬州大学动物科学与技术学院水产动物病害实验室，在本专利申请日起二十年内，公众如果需要，扬州大学动物科学与技术学院水产动物病害实验室可对外发放。
本发明以编码虹彩病毒的mcp基因和嗜水气单胞菌的alt基因为靶基因设计并合成ISKNV-mcp-F和ISKNV-mcp-R、Ah-alt-F和Ah-alt-R 2对引物，研制了快速检测试剂盒。
使用本发明试剂盒进行虹彩病毒和嗜水气单胞菌的同步检测，能显著提高其准确性和特异性，且操作简单，耗时短，费用低廉，为虹彩病毒和嗜水气单胞菌共感染引起的疾病的快速诊断、分子流行病学调查及水产品安全检测等提供了有效方法。
本发明检测方法通过对样品中DNA提取、PCR扩增、扩增产物的电泳检测，从而在一个反应体系检测出虹彩病毒和嗜水气单胞菌。
本发明方法解决了现有技术时间长、工作量大、交叉污染、操作复杂等缺陷，为水产动物疾病检测提供了新的技术方法，能较好满足目前对鳜鱼虹彩病毒病及嗜水气单胞菌引起的败血症共感染一次性检测的迫切需要。
具体实施方式
以下进一步描述本试剂盒的具体技术方案，以便于本领域的技术人员进一步地理解本发明，而不构成对其权利的限制。
实施例1，一种用于鳜鱼虹彩病毒与嗜水气单胞菌快速检测试剂盒, 其组成为：
水 14.4 μL；
10×PCR缓冲液 2 μL；
25mmol/L MgCl2 1.6 μL；
200mmol/L 4×dNTP混合物 0.4μL；
引物 各0.2 μL；
5U/μl的Taq DNA聚合酶 0.2 μL；
模板DNA 1μL；
反应液A，1支，其体积百分比组成为：
①反应缓冲液，20%；
②dNTPs，4%，浓度为200mM/L；
③氯化镁水溶液，16%，浓度为25mM；
④Taq DNA聚合酶，2%，浓度为5U/μL；
⑤去离子水，58%；
反应液B：反应引物1，1支；其体积百分比组成为：ISKNV-mcp-F， 50%，浓度为10uM；ISKNV-mcp-R，50%，浓度为10 uM；
ISKNV-mcp-F为：TGACCAGCGAGTTCCTTGAC
ISKNV-mcp-R为：ATGCTGGGCGCAAAGTAGTA
反应液C：反应引物2，1支；其体积百分比组成为：Ah-alt-F，50%，浓度为10uM；Ah-alt-R，50%，浓度为10 uM；
Ah-alt-F为：TTCGCTGCGACAGCAGACTT
Ah-alt-R为：TGTACCTTGACGCCAGCCACG
鳜鱼虹彩病毒和嗜水气单胞菌混合基因组DNA的阳性对照试样，1支；
健康鳜鱼组织总DNA的阴性对照试样，1支；
超纯水，1支。
实施例2，一种鳜鱼虹彩病毒与嗜水气单胞菌同步快速检测方法，该方法应用了实施例1所述的试剂盒；其步骤如下：
（1）DNA抽提：
①取发病鳜鱼肝组织样品增菌液1mL，12000 r/min离心1min，弃上清，将菌体悬浮于100μL的灭菌蒸馏水中，100℃煮沸10min，冰浴中冷却后12000 r/min离心10min，取上清作为PCR模板DNA1；
②取发病鳜鱼肝组织，置于无菌的1.5ml的离心管中，加入100µl LB2和20µlProteinase K 55℃孵育3h，使组织完全裂解。12000×g 离心5min，取上清，加500µl BB2混匀孵育10min，然后将全部溶液加入离心柱中，12000×g 离心30s，弃流出液；加入500µlCB2，12000×g 离心30s，弃流出液，重复一次；加入500µl WB2，12000×g 离心30s，弃流出液，重复一次，离心2min，彻底去除WB2；将离心柱置于干净的离心管中，加80µl 预热的EB（60℃-70℃），室温静置1min，12000×g 离心1min，流出液即为所提的模版DNA2；
③将模板DNA1和DNA2按1:1混合作为实验总DNA。
（2）PCR扩增：
向反应管中加入反应液A 10μL，反应液B 1 μL，反应液C 1 μL，超纯水6 μL，模板DNA 2μL；PCR扩增条件：94℃预变性5min；94℃变性30s，62℃退火1min，72℃延伸30s，34次循环；72℃延伸7min；4℃保温；同时进行阴性对照和阳性对照的扩增，其中阴性对照采用健康鱼组织总DNA的阴性对照试样，阳性对照采用鳜鱼虹彩病毒和嗜水气单胞菌混合基因组DNA的阳性对照试样；
（3）琼脂糖凝胶电泳检测：琼脂糖凝胶电泳观察扩增结果，扩增出730bp和370bp两条扩增条带的为鳜鱼虹彩病毒与嗜水气单胞菌阳性，无扩增条带的为阴性。
实施例3，采用实施例1所述的试剂盒进行人工染毒染菌水产品检测实验。其步骤如下：
（1）取被检鳜鱼、异育银鲫及赤眼鳟肌肉组织并匀浆，人工染菌（组织液滴加100μL嗜水气单胞菌G3肉汤培养物）后用营养肉汤增菌培养4 h，分别取1mL匀浆增菌液用水煮法提取模板DNA。人工染毒：含毒株RSIV-YZ的组织液人工注射被检鳜鱼、异育银鲫及赤眼鳟200μL，感染5天后取脾肾组织，按实施例1所述的DNA抽提方法提取模板DNA。人工染菌和人工染毒提取的模板DNA按1:1混合，作为检测用总DNA。
（2）取步骤（1）中得到的DNA样本作为模板，按如下反应体系扩增。20 μL PCR的反应体系为：反应液A 10μL，反应液B 1 μL，反应液C 1 μL，超纯水6 μL，模板DNA 2 μL；PCR的反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性30s，62℃退火1min，72℃延伸30s，34次循环；72℃延伸7min；4℃保温；并同时进行阴性对照和阳性对照的扩增，阳性对照采用鳜鱼虹彩病毒和嗜水气单胞菌混合基因组DNA；阴性对照采用健康鳜鱼组织总DNA。
（3）反应结束后，进行琼脂糖凝胶电泳检测，鳜鱼、异育银鲫及赤眼鳟均扩增出730bp和370bp两条扩增条带，表明为鳜鱼虹彩病毒与嗜水气单胞菌阳性，阳性对照扩增出730bp和370bp两条扩增条带，阴性对照无扩增条带。

Claims (2)

1.一种鳜鱼虹彩病毒与嗜水气单胞菌同步检测试剂盒，其特征在于，其组成包括：
水 14.4 μL；
10×PCR缓冲液 2 μL；
25mmol/L MgCl2 1.6 μL；
200mmol/L 4×dNTP混合物 0.4μL；
引物 各0.2 μL；
5U/μl的Taq DNA聚合酶 0.2 μL；
模板DNA 1μL；
反应液A，1支，其体积百分比组成为：
①反应缓冲液，20%；
②dNTPs，4%，浓度为200mM/L；
③氯化镁水溶液，16%，浓度为25mM；
④Taq DNA聚合酶，2%，浓度为5U/μL；
⑤去离子水，58%；
反应液B：反应引物1，1支；其体积百分比组成为：ISKNV-mcp-F， 50%，浓度为10uM；ISKNV-mcp-R，50%，浓度为10 uM；
ISKNV-mcp-F为：TGACCAGCGAGTTCCTTGAC
ISKNV-mcp-R为：ATGCTGGGCGCAAAGTAGTA
反应液C：反应引物2，1支；其体积百分比组成为：Ah-alt-F，50%，浓度为10uM；Ah-alt-R，50%，浓度为10 uM；
Ah-alt-F为：TTCGCTGCGACAGCAGACTT
Ah-alt-R为：TGTACCTTGACGCCAGCCACG
鳜鱼虹彩病毒和嗜水气单胞菌混合基因组DNA的阳性对照试样，1支；
健康鳜鱼组织总DNA的阴性对照试样，1支；
超纯水，1支。
2.一种鳜鱼虹彩病毒与嗜水气单胞菌同步检测方法，其特征在于，该方法使用权利要求1所述的试剂盒；其步骤如下：
（1）DNA抽提：
①取发病鳜鱼肝组织样品增菌液1mL，12000 r/min离心1min，弃上清，将菌体悬浮于100μL的灭菌蒸馏水中，100℃煮沸10min，冰浴中冷却后12000 r/min离心10min，取上清作为PCR模板DNA1；
②取发病鳜鱼肝组织，置于无菌的1.5ml的离心管中，加入100µl LB2和20µlProteinase K 55℃孵育3h，使组织完全裂解；12000×g 离心5min，取上清，加500µl BB2混匀孵育10min，然后将全部溶液加入离心柱中，12000×g 离心30s，弃流出液；加入500µlCB2，12000×g 离心30s，弃流出液，重复一次；加入500µl WB2，12000×g 离心30s，弃流出液，重复一次，离心2min，彻底去除WB2；将离心柱置于干净的离心管中，加80µl 预热60℃-70℃的EB，室温静置1min，12000×g 离心1min，流出液即为所提的模版DNA2；
③将模板DNA1和DNA2按1:1混合作为实验总DNA；
（2）PCR扩增：向反应管中加入反应液A 10 μL，反应液B 1 μL，反应液C 1 μL，超纯水6μL，模板DNA 2 μL；PCR扩增条件：94℃预变性5min；94℃变性30s，62℃退火1min，72℃延伸30s，34次循环；72℃延伸7min；4℃保温；同时进行阴性对照和阳性对照的扩增，其中阴性对照采用健康鱼组织总DNA的阴性对照试样，阳性对照采用鳜鱼虹彩病毒和嗜水气单胞菌混合基因组DNA的阳性对照试样；
（3）琼脂糖凝胶电泳检测：琼脂糖凝胶电泳观察扩增结果，扩增出730bp和370bp两条扩增条带的为鳜鱼虹彩病毒病与细菌性败血症阳性，无扩增条带的为阴性。
CN201811152897.4A 2018-09-30 2018-09-30 鳜鱼虹彩病毒与嗜水气单胞菌同步检测试剂盒及检测方法 Pending CN109207636A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811152897.4A CN109207636A (zh) 2018-09-30 2018-09-30 鳜鱼虹彩病毒与嗜水气单胞菌同步检测试剂盒及检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811152897.4A CN109207636A (zh) 2018-09-30 2018-09-30 鳜鱼虹彩病毒与嗜水气单胞菌同步检测试剂盒及检测方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN109207636A true CN109207636A (zh) 2019-01-15

Family

ID=64982491

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811152897.4A Pending CN109207636A (zh) 2018-09-30 2018-09-30 鳜鱼虹彩病毒与嗜水气单胞菌同步检测试剂盒及检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109207636A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109762940A (zh) * 2019-02-02 2019-05-17 中国水产科学研究院珠江水产研究所 用于检测传染性脾肾坏死病毒与鳜鱼弹状病毒的引物组及试剂盒

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102816868A (zh) * 2012-08-30 2012-12-12 中国水产科学研究院珠江水产研究所 一种检测大口黑鲈虹彩病毒的双重pcr方法
CN103952495A (zh) * 2014-03-21 2014-07-30 华中农业大学 一种鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的lamp检测方法
CN106962240A (zh) * 2017-05-09 2017-07-21 中国水产科学研究院珠江水产研究所 一种采用草药决明对鳜鱼养殖池塘进行肥水降低病害的方法
CN107988433A (zh) * 2017-12-20 2018-05-04 中国水产科学研究院南海水产研究所 一种石斑鱼虹彩病毒的双重pcr引物、检测方法及试剂盒

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102816868A (zh) * 2012-08-30 2012-12-12 中国水产科学研究院珠江水产研究所 一种检测大口黑鲈虹彩病毒的双重pcr方法
CN103952495A (zh) * 2014-03-21 2014-07-30 华中农业大学 一种鳜鱼传染性脾肾坏死病毒的lamp检测方法
CN106962240A (zh) * 2017-05-09 2017-07-21 中国水产科学研究院珠江水产研究所 一种采用草药决明对鳜鱼养殖池塘进行肥水降低病害的方法
CN107988433A (zh) * 2017-12-20 2018-05-04 中国水产科学研究院南海水产研究所 一种石斑鱼虹彩病毒的双重pcr引物、检测方法及试剂盒

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KUTTICHANTRAN SUBRAMANIAM等: "Use of Acridine Orange to Visually improve the loop-mediated isothermal amplification for detection of infection spleen and kidney necrosis virus", 《FISH PATHOLOGY》 *
余波等: "一例人工养殖大鲵感染虹彩病毒和嗜水气单胞菌的诊治", 《广东农业科学》 *
劳海华等: "巢式PCR检测鳜传染性脾肾坏死病毒（ISKNV）", 《南方水产》 *
张悦等: "翘嘴鳜病原嗜水气单胞菌分子特征及LAMP检测方法的建立", 《水生生物学报》 *
徐在宽等: "《鳜鱼 鲈鱼无公害养殖重点、难点与实例》", 31 May 2005, 科学技术文献出版社 *
王璐等: "嗜水气单胞菌双重PCR检测方法的建立及应用", 《水产科学》 *
邓敏等: "鳜鱼传染性脾肾坏死病毒( ISKNV) PCR 检测方法的建立及虹彩病毒新证据", 《病毒学报》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109762940A (zh) * 2019-02-02 2019-05-17 中国水产科学研究院珠江水产研究所 用于检测传染性脾肾坏死病毒与鳜鱼弹状病毒的引物组及试剂盒

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Zhou et al. Development and evaluation of a real-time fluorogenic loop-mediated isothermal amplification assay integrated on a microfluidic disc chip (on-chip LAMP) for rapid and simultaneous detection of ten pathogenic bacteria in aquatic animals
CN107022632A (zh) 一种沙门氏菌检测用引物组、试剂盒及应用
CN106282375A (zh) 一种鼠伤寒沙门氏菌的lamp引物组及试剂盒与使用方法
Jiang et al. Visual detection of Vibrio parahaemolyticus using combined CRISPR/Cas12a and recombinase polymerase amplification
CN103952472B (zh) 用于海豚链球菌lamp-lfd可视化检测的引物和探针及引物和探针的应用
JP2007274934A (ja) プライマーセット及び食中毒細菌の検出方法
CN109207636A (zh) 鳜鱼虹彩病毒与嗜水气单胞菌同步检测试剂盒及检测方法
Zhou et al. Rapid visual detection of Aeromonas salmonicida by loop‐mediated isothermal amplification with hydroxynaphthol blue dye
CN107236812B (zh) 用于蜡样芽孢杆菌的检测试剂盒、检测方法及应用
CN106434935A (zh) 鉴定猪多杀性巴氏杆菌和/或副猪嗜血杆菌组合物和方法
Sunar et al. Molecular techniques to characterize the invA genes of Salmonella spp. for pathogen inactivation study in composting
CN108103152B (zh) 一种鳗利斯顿氏菌快速检测方法
CN106939347B (zh) 三疣梭子蟹病原需钠弧菌双重pcr快速检测试剂盒与方法
CN106434916A (zh) 一种阪崎肠杆菌的lamp引物组及试剂盒与使用方法
JP6880692B2 (ja) 改良された腸内細菌のスクリーニング方法
CN105969907B (zh) 一种检测st251型致病性嗜水气单胞菌的试剂盒及应用
CN116121408A (zh) 一种基于CRISPR/Cas12a检测单增李斯特菌的现场可视化试剂盒及应用
CN108796099A (zh) 一种大肠杆菌o157:h7的psr检测引物、试剂盒及其检测方法
Manfreda et al. Comparison of the BAX® System with a multiplex PCR method for simultaneous detection and identification of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli in environmental samples
CN110735005A (zh) Siv和prrsv多重rt-pcr快速检测试剂盒及引物
RU2596401C1 (ru) Способ дифференциации токсигенных и атоксигенных штаммов холерных вибрионов 01 серогруппы по ингибирующей активности
CN103614455B (zh) 河口弧菌的环介导恒温扩增快速检测试剂盒及检测方法
CN110923341B (zh) 养殖鱼类病原海藻希瓦氏菌lamp检测方法及应用
CN115011711B (zh) 闭管可视化检测斑马鱼源鮰爱德华氏菌的试剂盒及方法
Zavyalova et al. Differential diagnosis of salmon fish yersiniosis by polymerase chain reaction

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20190115

RJ01 Rejection of invention patent application after publication