CN109207513B - Dcm1蛋白及其编码基因在调控植物雄性育性中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了DCM1蛋白及其编码基因在调控植物雄性育性中的应用。本发明提供了一种培育雄性不育植物的方法，包括如下步骤：抑制目的植物中DCM1基因的表达，得到雄性不育植物；所述DCM1基因编码DCM1蛋白；所述DCM1蛋白是由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质。本发明的发明人，通过CRISPR‑Cas9基因编辑技术在野生型水稻中敲除该基因可以造成花粉败育，产生雄性不育系。DCM1蛋白调控水稻花粉母细胞中胼胝质的代谢，从而影响花粉外壁的形成及花粉育性。本发明为人工控制水稻花粉育性提供了途径。在水稻杂交育种领域具有重要应用价值。

Description

DCM1蛋白及其编码基因在调控植物雄性育性中的应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及DCM1蛋白及其编码基因在调控植物雄性育性中的应用。

背景技术

水稻是世界范围内最重要的粮食作物之一。世界上近一半的人口，包括东亚和东南亚的绝大部分人口，都以大米为食。随着世界人口增加、耕地面积减少和气候条件恶化等因素的影响，人类对水稻产量增加的要求日益凸显。矮化育种在二十世纪六十年代掀起近代谷物生产的一次“绿色革命”。随着半矮品种的推广，水稻的产量得到了突破性的增长。随后，拥有杂种优势的杂交水稻的推广极大地提高了水稻单产，创造了巨大的社会效益和经济效益。

在我国，二十世纪七十年代由袁隆平研究出的三系法杂交水稻获得巨大成功。所谓三系是：(1)雄性不育系：雌蕊发育正常，而雄蕊败育。不能自花授粉结实，但可以接受恢复系花粉产生可育后代；(2)保持系：雌雄蕊均发育正常，将其花粉授予雄性不育系的雌蕊，产生的后代仍为雄性不育系植株；(3)恢复系：雌雄蕊均可育，将其花粉授予雄性不育系雌蕊，制备杂交种。雄性不育系是杂交水稻制种的关键。但是自然界里的自然雄性不育植株极少，且鉴定困难，需耗费大量人力物力。随着植物基因工程技术的发展，人工创制雄性不育系成为可能。

植物的雄配子体花粉的发育包括小孢子发生和雄配子发生两大过程。小孢子发生是指在花药内，孢原细胞分化成花粉母细胞，而后经过减数分裂过程产生单倍体小孢子的过程。雄配子发生是小孢子经过两次有丝分裂形成花粉粒的过程。在过去的十几年中，对于模式植物拟南芥及水稻中花粉发育过程的了解有了长足的进展，鉴定到了多个在该过程中起关键作用的基因。

花粉壁对于花粉的育性具有重要作用。这主要体现在影响雄配子体在花药内的发育、保护花粉不受环境压力的影响及在授粉过程中介导细胞间的识别。花粉壁由花粉外壁及花粉内壁组成。花粉外壁主要含孢粉素，而花粉内壁的主要成分是纤维素。孢粉素对于物理的、化学的及生物的降解作用具有很高的抗性。在被子植物中，花粉外壁又可以分为外壁外层和外壁内层。花粉壁的发育起始于初生外壁的形成。该结构于减数分裂四分体时期在胼胝质壁与小孢子质膜之间形成。有研究表明，胼胝质壁对于初生外壁的形成具有重要作用。

发明内容

本发明的目的是提供DCM1蛋白及其编码基因在调控植物雄性育性中的应用。

本发明提供了一种培育雄性不育植物的方法，包括如下步骤：抑制目的植物中DCM1基因的表达，得到雄性不育植物；所述DCM1基因编码DCM1蛋白；

所述DCM1蛋白是如下(a)或(b)或(c)：

(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)来源于水稻且与(a)具有98％以上同一性且与植物雄性育性相关的蛋白质；

(c)将序列表中序列1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物雄性育性相关的蛋白质。

所述DCM1基因为如下1)或2)或3)或4)或5)的DNA分子：

1)编码区如序列表中序列2第279-6485位核苷酸所示的DNA分子；

2)序列表中序列2所示的DNA分子；

3)来源于水稻的与1)或2)限定的DNA序列具有98％以上同源性且编码植物雄性育性相关蛋白的DNA分子；

4)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且编码植物雄性育性相关蛋白的DNA分子；

5)与1)或2)限定的DNA序列具有90％以上同源性且编码植物雄性育性相关蛋白的DNA分子。

“抑制目的植物中DCM1基因的表达”的实现方式为CRISPR-Cas9定点突变；CRISPR-Cas9定点突变中，sgRNA的靶序列如序列表的序列4所示。

“抑制目的植物中DCM1基因的表达”的实现方式为在目的植物中导入重组质粒；所述重组质粒中具有表达Cas9蛋白的基因和表达sgRNA的基因，sgRNA的靶序列如序列表的序列4所示。

“抑制目的植物中DCM1基因的表达”的实现方式为在目的植物中导入重组质粒pCAMBIA1300-cas9-gRNA。重组质粒pCAMBIA1300-cas9-gRNA为：在pCAMBIA1300-cas9载体的多克隆位点(例如BamHI和KpnI酶切位点之间)插入序列表的序列3所示的DNA分子得到的重组质粒。

本发明还保护一种培育雄性不育植物的方法，包括如下步骤：降低目的植物中DCM1蛋白的活性和/或水平，得到雄性不育植物；

所述DCM1蛋白是如下(a)或(b)或(c)：

(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)来源于水稻且与(a)具有98％以上同一性且与植物雄性育性相关的蛋白质；

(c)将序列表中序列1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物雄性育性相关的蛋白质。

本发明还保护一种sgRNA，其靶序列如序列表的序列4所示。

本发明还保护一种重组质粒，所述重组质粒中具有表达Cas9蛋白的基因和表达sgRNA的基因，sgRNA的靶序列如序列表的序列4所示。所述重组质粒具体可为重组质粒pCAMBIA1300-cas9-gRNA。重组质粒pCAMBIA1300-cas9-gRNA为：在pCAMBIA1300-cas9载体的多克隆位点(例如BamHI和KpnI酶切位点之间)插入序列表的序列3所示的DNA分子得到的重组质粒。

本发明还保护一种蛋白质(DCM1蛋白)，是如下(a)或(b)或(c)：

(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)来源于水稻且与(a)具有98％以上同一性且与植物雄性育性相关的蛋白质；

(c)将序列表中序列1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物雄性育性相关的蛋白质。

编码DCM1蛋白的核酸分子也属于本发明的保护范围。

编码DCM1蛋白的核酸分子为如下1)或2)或3)或4)或5)的DNA分子：

1)编码区如序列表中序列2第279-6485位核苷酸所示的DNA分子；

2)序列表中序列2所示的DNA分子；

3)来源于水稻的与1)或2)限定的DNA序列具有98％以上同源性且编码植物雄性育性相关蛋白的DNA分子；

4)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且编码植物雄性育性相关蛋白的DNA分子；

5)与1)或2)限定的DNA序列具有90％以上同源性且编码植物雄性育性相关蛋白的DNA分子。

本发明还保护用于抑制编码DCM1蛋白的核酸分子表达的物质在培育雄性不育植物中的应用。抑制编码DCM1蛋白的核酸分子表达的物质具体可为以上任一所述重组质粒。

本发明还保护用于抑制DCM1蛋白的活性和/或水平的物质在培育雄性不育植物中的应用。

本发明还保护以上任一所述方法、所述蛋白质、所述核酸分子、所述sgRNA或所述重组质粒在植物育种中的应用。

以上任一所述雄性不育体现为所有花粉完全败育。

以上任一所述植物为单子叶植物或双子叶植物。所述单子叶植物为禾本科植物。所述禾本科植物为稻属植物。所述稻属植物为水稻。所述水稻具体可为盐稻8号。

本发明的发明人在⁶⁰Co～γ辐射诱变广陆矮4号获得的突变体中发现了一个雄性不育突变体。基于该雄性不育突变体，发现了DCM1蛋白及其编码基因。本发明的发明人发现，通过CRISPR-Cas9基因编辑技术在野生型水稻中敲除该基因可以造成花粉败育，产生雄性不育系。DCM1蛋白调控水稻花粉母细胞中胼胝质的代谢，从而影响花粉外壁的形成及花粉育性。本发明为人工控制水稻花粉育性提供了途径。在水稻杂交育种领域具有重要应用价值。

附图说明

图1为dcm1突变体与广陆矮4号的表型比较；A为植株照片(左为广陆矮4号，右为dcm1突变体)，B为穗子照片(上为广陆矮4号，下为dcm1突变体)，C为广陆矮4号的花粉(标尺，20μm)，D为dcm1突变体的花粉(标尺，20μm)。

图2为DCM1基因的表达模式分析的结果。

图3为半薄切片观察的结果。

图4为透射电镜观察的结果。

图5为外周胼胝质的沉积状况的结果。

图6为实施例4的结果。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

籼稻品种广陆矮4号，简称广陆矮4号。水稻品种盐稻8号，简称盐稻8号。提及SK-gRNA载体和pC1300-Cas9载体的文献：Wang,C.,Shen,L.,Fu,Y.,Yan,C.,Wang,K.(2015)ASimple CRISPR/Cas9System for Multiplex Genome Editing in Rice.Journal ofGenetics and Genomics 42(2015)703-706。

实施例1、DCM1基因的获得

1、突变体的获得以及表型分析

将广陆矮4号进行⁶⁰Co～γ辐射诱变，得到一系列突变体。

dcm1突变体在营养生长阶段与广陆矮4号无显著差异，但表现为不结实(图1A)。大部分dcm1突变体的穗子完全不结种子，少部分穗子会有几粒种子的结实(图1B)。花粉I2-KI染色发现，相比于广陆矮4号饱满可染的花粉(图1C)，大部分dcm1突变体的花粉着色浅或不着色并伴有花粉的皱缩(图1D)。

对dcm1突变体的雌配子授以广陆矮4号的花粉，可以正常的结实，表明dcm1突变体的雌配子可育。

2、图位克隆

选取存在育性分离的一个家系，统计可育株与不育株的比例，发现其符合3:1的分离比(154:48,χ2＝0.165,P>0.05)。这表明，dcm1突变体的表型是由单个核基因的隐性突变引起的。

采用图位克隆的方法将基因连锁在水稻六号染色体长臂上。通过扩大定位群体并开发一系列Indel分子标记，将基因定位在138.5Kb的物理区间内。从该区间内发现23个基因。测序发现，与广陆矮4号相比，dcm1突变体中某个基因的第一个外显子存在一个单碱基缺失。

3、基因全长cDNA的获得

通过RACE技术获得cDNA,如序列表的序列2所示(序列2中，第279-6485位核苷酸为开放阅读框)，编码序列表的序列1所示的蛋白质。

将序列表的序列1所示的蛋白质命名为DCM1蛋白。将编码DCM1蛋白的基因命名为DCM1基因。

对盐稻8号提取RNA并测序，其中也具有序列表的序列2所示的DCM1基因。

实施例2、DCM1基因的表达模式分析

1、实时定量PCR

通过实时定量PCR的方法，检测DCM1基因在广陆矮4号的根(R)、节间(IN)、叶(L)和幼穗(YP)中的表达量，检测DCM1基因在dcm1突变体幼穗(dcm1)中的表达量。Ubiquitin基因作为内参。

结果见图2A。结果表明，DCM1基因在这些组织中均有表达。

2、GUS染色

构建携带DCM1基因的启动子的重组质粒，命名为pDCM1::GUS载体。将pDCM1::GUS载体导入盐稻8号，得到转基因植株。对小花进行GUS染色。

结果见图2B(标尺，1mm)。结果表明，DCM1基因的启动子启动GUS基因在花药中特异性表达。

3、原位杂交

取广陆矮4号的花粉，进行RNA原位杂交，以分析DCM1基因精确的时空表达模式。

结果见图2C。图2C中：ISPC代表内层次级壁细胞，Ms代表小孢子，P代表花粉，PMC代表花粉母细胞，SC代表造孢细胞，T代表绒毡层；标尺，20μm。在造孢细胞时期，没有观察到DCM1基因的表达。当花药进入花粉母细胞时期，信号特异地在花粉母细胞中检测到。从减数分裂时期到花粉粒时期，信号在绒毡层中也能检测到。

实施例3、dcm1突变体细胞学表型分析

一、半薄切片观察

为了确定突变体败育的原因，对广陆矮4号与dcm1突变体不同发育时期的花药进行半薄切片观察。

结果见图3。图3中：A-E对应广陆矮4号，F-J对应dcm1突变体；A和F对应粗线期，B和G对应四分体时期，C和H对应小孢子时期，D和I对应花粉有丝分裂期，E和J对应成熟花粉期；标尺，20μm；AP代表败育花粉，ML代表中间层，MP代表成熟花粉，Msp代表小孢子，PMC代表花粉母细胞，T代表绒毡层，Tds代表四分体，MMC代表小孢子母细胞。

在减数分裂较早时期，花药的药室被四层体细胞围绕。由外向内分别为表皮层、内层、中间层和绒毡层。花粉母细胞在药室内进行减数分裂，产生小孢子。到此发育阶段，广陆矮4号与dcm1突变体无显著差异(图3：A-C，F-H)。花粉有丝分裂时期，广陆矮4号花粉开始液泡化并膨大，此时绒毡层被甲苯胺蓝染成深色(图3D)，dcm1突变体花粉中绒毡层着色较浅并开始降解(图3I)。在成熟花粉时期，所有的广陆矮4号花粉成圆形，花药壁的里面三层细胞均降解(图3E)，dcm1突变体除了圆形花粉，也观察到没有内溶物的瘪花粉，花药壁的中间层没有降解，呈现膨大状态(图3J)。

二、透射电镜观察

对广陆矮4号与dcm1突变体的成熟花粉进行透射电镜观察。

结果见图4。图4中：A和B对应广陆矮4号，C和D对应dcm1突变体；B和D分别为A和C中白色框内部的放大显示；标尺，A和C为2μm，B和D为200nm；AP代表败育花粉，Ba代表柱状体，Ex代表花粉外壁，MP代表成熟花粉，Ne代表外壁内层，Se代表外壁外层，Ub代表乌氏体。

绒毡层细胞分泌的乌氏体在广陆矮4号与dcm1突变体中均存在(图4，A和C)。广陆矮4号的花粉外壁成典型的层状结构，包括外壁内层和外壁外层(图4B)。dcm1突变体的花粉外壁只有一层结构(图4D)，表明dcm1突变体的花粉外壁形成存在缺陷。

三、外周胼胝质的沉积状况

花粉母细胞的胼胝质壁对于初生外壁及花粉壁的形成具有重要作用。对广陆矮4号与dcm1突变体的花药进行半薄切片，苯胺蓝染色后观察并比较外周胼胝质的沉积状况。

结果见图5。图5中，标尺为10μm，外周胼胝质用箭指示，胼胝质板用箭头指示。

在减数分裂最开始的早细线期，外周胼胝质在广陆矮4号与dcm1突变体的花粉母细胞中均观察不到(图5A，图5E)。当进入细线期，广陆矮4号与dcm1突变体均在药室中央部位开始沉积胼胝质(图5B，图5F)。当减数分裂进入到粗线期，花粉母细胞彼此分离并紧靠绒毡层，这时广陆矮4号的花粉母细胞周围已被胼胝质包裹(图5C)，大部分dcm1突变体的花粉母细胞周围观察不到胼胝质信号(图5G)，这表明dcm1突变体中外周胼胝质的代谢存在异常。因为在dcm1突变体中细线期的胼胝质能够正常沉积，推测dcm1突变体的花粉母细胞的外周胼胝质存在提前降解。当减数分裂进入二分体时期，广陆矮4号花粉母细胞的中央形成一个线状胼胝质信号(胼胝质板，图5D)，该信号的强度显著高于外周胼胝质，在dcm1突变体中，只能在花粉母细胞边缘观察到对称的点状胼胝质信号(图5H)。说明，与广陆矮4号相比，dcm1突变体的花粉母细胞中胼胝质板也存在缺陷。

实施例4、DCM1基因的定点突变

一、构建重组质粒

1、分别合成单链DNA分子DCM1-CAS9-F和单链DNA分子DCM1-CAS9-R，然后将它们一起退火，得到两端具有粘末端的双链DNA分子。

DCM1-CAS9-F：5’-ggcaTTGGATTTGACTTTGCTCTT-3’；

DCM1-CAS9-R：5’-aaacAAGAGCAAAGTCAAATCCAA-3’。

2、用限制性内切酶AarI酶切SK-gRNA载体，回收线性化载体骨架。

3、将步骤1得到的双链DNA分子与步骤2得到的线性化载体骨架连接，得到重组质粒。

4、取步骤3得到的重组质粒，用限制性内切酶BamHI和KpnI双酶切，回收小片段。

5、取pCAMBIA1300-cas9载体，用制性内切酶BamHI和KpnI双酶切，回收大片段。

6、将步骤4得到的小片段和步骤5得到的大片段连接，得到重组质粒pCAMBIA1300-cas9-gRNA。根据测序结果，对重组质粒pCAMBIA1300-cas9-gRNA进行结构描述如下：在pCAMBIA1300-cas9载体的BamHI和KpnI酶切位点之间插入了序列表的序列3所示的DNA分子。

二、突变株的获得

取重组质粒pCAMBIA1300-cas9-gRNA，导入农杆菌EHA105，得到重组农杆菌，然后侵染盐稻8号的胚性愈伤组织，然后将其培育，获得植株，即为T0代植株。

对作为遗传转化受体的盐稻8号植株以及获得的所有T0代植株进行全基因组测序。通过全基因组测序，从25株T0代植株中获得3株在DCM1基因中发生突变且为纯合型突变的植株。与对作为遗传转化受体的盐稻8号植株相比，该3株植株的基因组均仅存在一个核苷酸的差异，该核苷酸的差异引起移码，从而不能有效表达DCM1蛋白。与对作为遗传转化受体的盐稻8号植株相比，某一株T0代植株仅存在一个核苷酸差异(即发生了一个插入突变且为纯合型，该插入位于开放阅读框的5520位和5521位之间)(开放阅读框的5520位也就是序列2的第5798位)，将该植株命名为dcm1-cas9突变株。

对作为遗传转化受体的盐稻8号植株以及dcm1-cas9突变株的部分测序结果见图6A。

将dcm1-cas9突变株进行组培，获得基因组一致的多株扩繁株。

三、表型比较

将dcm1-cas9突变株的多株扩繁株培养至发育成熟，植株均表现为雄性不育且雌性可育的表型。将盐稻8号植株培养至发育成熟，植株表现为雄性可育且雌性可育的表型。

对dcm1-cas9突变株的多株扩繁株和盐稻8号植株的花粉分别进行I2-KI染色。结果见图6B(标尺，100μm)。所有dcm1-cas9突变株的扩繁株均花粉不可染，所有花粉均为败育花粉，雄性不育性为100％。盐稻8号植株的花粉正常。

将步骤二获得的另外2株纯合型突变株培养至发育成熟，植株表现为雄性不育且雌性可育的表型。对2株纯合型突变株的花粉分别进行I2-KI染色。花粉不可染，所有花粉均为败育花粉，雄性不育性为100％。

结果表明，敲除DCM1基因的表达(具体实现方式为CRISPR-Cas9基因敲除技术)确是雄性不育表型的原因，而且花粉不育程度能达到100％(即花粉完全败育)。

SEQUENCE LISTING

<110> 中国科学院遗传与发育生物学研究所

<120> DCM1蛋白及其编码基因在调控植物雄性育性中的应用

<130> GNCYX182210

<160> 4

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 2068

<212> PRT

<213> Oryza sativa

<400> 1

Met Asp Pro Pro Pro Pro Phe Asp His Pro Leu His Arg Arg His Tyr

1 5 10 15

Ser Asp His His His Phe Pro Pro Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly

20 25 30

Ala Ala Ser Ala Ala Ala Arg Ser Arg Tyr Glu Tyr Gly Gly Gly Gly

35 40 45

Tyr Glu Ser His Ser His His Gln Tyr His Leu Pro Asp His His His

50 55 60

His His His His His His Pro Pro Pro Arg Val Gln His His His His

65 70 75 80

His His His Gln Gln Leu Pro Ala Pro Thr Pro Pro Pro Pro Pro Pro

85 90 95

Pro Pro Leu Pro Gln His Arg Leu Glu Pro Pro Pro Pro His Tyr Gly

100 105 110

Phe Pro Pro Arg Gly His Pro Asp Ala Tyr Ser Pro Pro Pro Tyr His

115 120 125

Asp Pro Ser Pro His His His Tyr His Arg His Gly Gly Asp Asp Phe

130 135 140

Leu Pro Ala Asp Glu Ile Arg Arg Val Gly Gly Gly His His His His

145 150 155 160

His His His Pro Gln Leu Gln Gln Leu Leu Pro Trp Glu Glu Ala Glu

165 170 175

Glu Glu Arg Arg Arg Tyr Gly Gly Ala Thr Gln Gln Leu Arg Leu Ser

180 185 190

Pro Ser Gly Pro Arg Lys Arg Gln Arg Cys Ala Val His Asp Ala Asp

195 200 205

Val Glu Ser Thr Ser Ser Ser Gly Pro Pro Pro Arg Arg Gln Arg Gln

210 215 220

Gln Pro His Pro Asp Tyr Ala Leu Asp Asp Ser Phe Val Asp Arg Asn

225 230 235 240

Asn Ala His Pro Gly Tyr Met Val His Glu Gly Phe Ser Ile His Ser

245 250 255

Asp Ser Lys Val Ser Arg Lys Ile Gln Met Pro Thr Gln Met Ala Leu

260 265 270

Pro Gly Ser Pro His Gly Thr Ser Ala Gly Tyr Ala Arg Arg Ala Pro

275 280 285

Gln Lys Val Ala Pro Ser Arg Val Ser Val Trp His Arg Ile Glu Glu

290 295 300

Asn Pro Ala Met Tyr Glu Pro Ser Ser Pro Pro Pro His Met Pro Lys

305 310 315 320

Glu Val His Val Ser Pro Cys Lys Ser Asn Asn Val Ala Pro Ala Ser

325 330 335

Lys Glu Leu Ala Ser Val Ile Ser Val Asp Cys Arg Gly Lys Ser Ala

340 345 350

Asp Gly Asn Asp Gly Asp Ser Asn Thr Gly Thr Lys Lys Asn Pro Val

355 360 365

Lys Lys Asn Glu Lys Val Leu Ala Ser Val Leu Val Lys Pro Pro Met

370 375 380

Glu Pro Lys Glu Lys Glu Val Ala Ala Lys Lys Met Leu Lys Lys Pro

385 390 395 400

Asp Lys Val Gln Lys Asn Ala Val His Ser Asn Ile Arg Ser Leu Val

405 410 415

Ser Thr Pro Cys Pro Gly Ala Gly Ala Lys Lys Val Lys Lys Ile Val

420 425 430

Ile Lys Lys Ile Val Arg Lys Ile Asn Gly Lys Gly Asn Gln Asn Ser

435 440 445

Thr Pro Val Val Ser Glu Lys Arg Asp Gly Ile Asp Ala Asn Ala Cys

450 455 460

Glu Lys Glu Glu Gly Glu Ile Thr Thr Ser Ser Phe Glu Lys Asp Val

465 470 475 480

Ile Ser Ala His Asp Pro Ile Ala Val Ser Asp Thr Ala Gly Phe Gly

485 490 495

Asn Ala Val Asn Asp Gln Lys Gln Lys Asn Thr Asp Phe Thr Asn Pro

500 505 510

Ser Gly Arg Asn Ala Ala Ser Ala Asn Gly Ser Met Glu Ile Pro Asp

515 520 525

Pro Pro Asn Gly Ser Gly Ser Ala His Pro Gly Lys Glu Glu Val Leu

530 535 540

Ser Pro Lys Asn Pro Val Asp Asn Ser Asn Ala Ser Leu Val Val Glu

545 550 555 560

Pro Ile Glu Val Leu Glu Lys Ser Gly Thr Glu His Pro Arg Lys Glu

565 570 575

His Asp Met Ser Ser Ile Gly Ser Gly Val Asn Asp Ala Phe Ala Asp

580 585 590

Ala Asn Asn His Thr Gln Lys Glu Val Gly Glu Met Asn Val Ala Val

595 600 605

Ala Ile Asn Ser Val Arg Val Ser Asp Ala Arg Glu Val Pro Arg Cys

610 615 620

Asp Asp Ser Ser Met Glu Glu Ser Lys Val Pro Lys Asp Val Asp Ala

625 630 635 640

Asn Ile Ala Val Cys Met Asp Gly Val Ala Ser Asn Cys Asp Thr Thr

645 650 655

Glu Val Cys Gly Asn Glu Asp Ala Arg Arg Glu Cys Gly Lys Lys Leu

660 665 670

Ile Gly Ile Asn Asp Glu Lys Ala Phe Leu Leu Asn Asn Ser Ala Arg

675 680 685

Ser Ser Ser Thr Ser Asp Thr Cys Met Thr Ala Val Glu Gly Ala Gln

690 695 700

Lys Lys Glu Gly Ile Ile Leu Thr Gly Ser Ser Glu Lys Ser Ile Gly

705 710 715 720

Phe Leu Gly Asp Ser Val Gly Thr His Arg Thr Thr Glu Phe Gly Ala

725 730 735

Ser Lys Asp Ala Pro Asn Glu Gly Asp Asp Met Pro Ser His Pro Ser

740 745 750

Glu Lys Asp Phe Met Ser Leu Asn Ser Cys Gly Gly Leu Asn Tyr Thr

755 760 765

Glu Val Ser Glu Lys Glu Asp Ile Gln Glu Lys Glu Asp Arg Val Pro

770 775 780

Met Glu Ser Ile Val Ala Cys Thr Ser Ser Gly Asn Glu Asp Ile Gln

785 790 795 800

Val Asn Glu Gly Arg Lys Pro Met Glu Leu Ser Glu Ala Asn Ala Phe

805 810 815

Ser Gly Ser Gly Asp Ser Gln Gly Lys Glu Cys Arg Ile Pro Met Gly

820 825 830

Ser Ser Glu Thr Asn Thr Ser Ser Val Asn His Val Asn Ala Ser Asn

835 840 845

Glu Lys Asp Phe Ser Leu Ser Glu Asp Thr Gln Lys Lys Glu Ser His

850 855 860

Arg Pro Ile Glu Ser Cys Glu Asn Thr Thr Phe Glu Ile Met His His

865 870 875 880

Glu Glu Ala Pro Ser Thr Glu Glu Val Ile Thr Gly Val Ser Leu Gly

885 890 895

Arg Lys Val Ala Glu Gly Pro Thr Arg Ser Asn Glu Arg Cys Ser Gly

900 905 910

Ala Arg Gly Asn Ser Ala Thr Thr Leu Lys Phe Gly Leu Ala Cys Ala

915 920 925

Thr Glu Asp Asn Gln Met Glu Asp Leu Leu Asn Asn Arg Thr Ala Leu

930 935 940

Asn Glu Thr Asp Asp Pro Leu Asp Ala Glu Asp Ser Pro Val Phe Val

945 950 955 960

Pro Pro Ser Ser Arg Asn Val Glu Ser Thr Tyr Ala Ser Pro Leu Tyr

965 970 975

Asp Pro Met Glu Asp Ser Thr Ser Asp Gly Ile Leu Asn Ile Gly Leu

980 985 990

Gly Arg Asn Thr Thr Ser Lys Ala Ala Glu Leu Leu Asp Leu His Arg

995 1000 1005

Asp His Ile Ser Ser Glu Asn Asp Ser Leu Ile His Ser Arg Gly

1010 1015 1020

Thr Ser Ser Val Ser Gly Asn Arg Glu Gln Ser Val Pro Thr Ala

1025 1030 1035

Leu Thr Leu Gly Ser Asn Ile Tyr Phe Ser Ser Ala Glu Thr Asp

1040 1045 1050

Asp Arg Pro Glu Glu Arg His Glu Leu Val Val Glu Gly Gln Gln

1055 1060 1065

Gly Leu Thr Val Glu Thr Thr Ser Lys Leu Asp Ser Pro Gly Lys

1070 1075 1080

Ile Glu Val Leu Asn Gly Ala Gly Phe Ile Ser Thr Gly Ile Gln

1085 1090 1095

Asn Trp Leu Ser Leu Pro Pro Ser Ile Asn Ser Met Glu Met Ser

1100 1105 1110

Gly Gln Phe Leu Asn Asn Gly Phe Thr Val Ser Lys Gly Arg Leu

1115 1120 1125

Gly Leu Asp Gln Ser Met Asp Asp Ala Thr Ser Val Ser Gln Asp

1130 1135 1140

His Asp Ile Ala Gln Asp Met Asp Gln Arg Gly Ser Glu Asp Ala

1145 1150 1155

Phe Phe Ser Gln Asp His Ser Ile Arg Leu Cys Gly Ser Asn Leu

1160 1165 1170

Pro His Ser His Leu Leu Ala Pro Lys Glu Ser Ser Met Asn Gly

1175 1180 1185

Glu Asp Gln Ser Gly Ile Val Leu Thr Gly Leu His Pro Ser Ser

1190 1195 1200

Ser Val Asn Val Leu Gly His Tyr Gly Tyr Gln Thr Asp Asp Ile

1205 1210 1215

Pro Val Asp Asn Leu Asn Lys Leu Pro Ser Ala Leu Glu Ser Ser

1220 1225 1230

Asp Ala Met Asp Ala Asp Gln Val Ser Ser Gln Val Cys Val Asn

1235 1240 1245

Pro Asp His Thr Asn Asp Ser Asn Thr Glu Asn Ala Gly Val Glu

1250 1255 1260

Ser Asn Ala Lys Gln Asp Leu Leu Ser Ser Trp Ile Glu Ala Ile

1265 1270 1275

Val Ser Glu Ala Lys Lys Glu His Pro Pro Cys Lys Ser Thr Pro

1280 1285 1290

Leu Thr Val Gly Leu Pro Asp Lys Leu Leu Glu Pro Lys Asp Ser

1295 1300 1305

Asp Arg Lys Thr Leu Leu Glu Thr Val Val Pro Ser Ala Val Lys

1310 1315 1320

Ser Pro Gln Ile Asn Phe Ala Ser Ser Thr Leu Gln Lys Val Ala

1325 1330 1335

Pro Lys Gln Val Thr Leu Pro Ser Ser Ser Arg Glu Pro Thr Arg

1340 1345 1350

Ala Asn Gln Asn Ala Arg His Arg Thr Trp His Arg Gly Asn Ile

1355 1360 1365

Ala Ser Ser Ser Ser Ser Leu His Ala Ser Gln Pro Leu Gly Leu

1370 1375 1380

Pro Pro Lys Leu Pro Pro Lys Lys Asn Asp Lys Ala Gln Asn Ser

1385 1390 1395

Tyr Ile Arg Lys Gly Asn Ala Leu Ile Arg Asn Pro Ser Asn Gly

1400 1405 1410

Asn His Pro His Ser Ser Thr Gly His Asp Thr Gln Asn Lys Leu

1415 1420 1425

Asn Lys Pro Val Val Arg Arg Ser Met Asn Phe Val Arg Lys Ala

1430 1435 1440

Asp Thr Lys Asp Leu Ala Asn Ser Asn Ile Ser Val Glu Arg Pro

1445 1450 1455

Lys Thr Pro Pro Leu Pro Leu His Thr Lys Ser Ser Cys Pro Thr

1460 1465 1470

Thr Leu Leu Glu Pro Leu Ser Gln Thr Leu Gln Lys Gln His Gly

1475 1480 1485

His Glu Ala Glu Lys Glu Asp Leu Thr Gly Gln Pro Lys Ser Gly

1490 1495 1500

Val Asp Asn Ser Ser Ile Lys Ser Ala Gln Lys Ser Glu Pro Ser

1505 1510 1515

Asp Pro Ser Lys Val Val Tyr Val Arg Pro Lys Ser Asn Gln Leu

1520 1525 1530

Val Ala Ala Gln Arg Gln His Pro Ile Asp Leu Val Asn Ser Pro

1535 1540 1545

Thr Asp Lys Ile Leu Ser Leu Gln Ala Pro Ile Ala Tyr Asp Leu

1550 1555 1560

Tyr Leu Lys Lys Arg Lys Asn Gln Ile Val Leu Ser Ser Cys Ser

1565 1570 1575

Pro Ser Asp Gly Leu Ser Thr Lys Glu Thr Leu Pro Ala Glu Asn

1580 1585 1590

Ser Asn Ser Glu Glu Lys Lys Asp Leu Met Ile Ala Cys Ser Ile

1595 1600 1605

Ser Gly Ile Pro Gly Val Lys Asp Arg Pro Gln Lys Ala Leu Gln

1610 1615 1620

Thr Thr Asn Asn Val Gly Arg Phe Ser His Val Trp Thr Leu Asn

1625 1630 1635

Gly Gln Gln Pro Gln Arg Lys Gly Phe Met Gly Ser Ser His Met

1640 1645 1650

Asn Ala Phe Pro Arg Ile Leu Pro Trp Lys Arg Lys Ile Phe Cys

1655 1660 1665

Lys Asn Phe Arg Ser Ser His Met Ser Asn Val Ser Ser Ile Arg

1670 1675 1680

Ile Val Arg Lys Leu Leu Gln Thr Arg Lys Arg Asp Met Ile Tyr

1685 1690 1695

Thr Val Ser Thr Asp Gly Phe Ser Leu Arg Lys Ser Gly Val Leu

1700 1705 1710

Ser Val Gly Gly Ser Ser Leu Lys Trp Ser Arg Ser Leu Glu Lys

1715 1720 1725

Arg Ser Gln Lys Val Asn Lys Glu Ala Thr Leu Ala Leu Ala Glu

1730 1735 1740

Val Glu Arg Arg Lys Arg Glu Lys Arg Lys Arg Gln Ser Leu His

1745 1750 1755

Asp Lys Gly Asp His Gln Phe Glu Ser Val Thr Gly Asn Gln Leu

1760 1765 1770

Arg Asn Ser Arg Gln Ser Ser Ser Asp Leu Arg Lys Pro Ser Thr

1775 1780 1785

Cys Asn Glu Tyr Val Arg Val Ser Lys Gly Asn Gln Leu Val Arg

1790 1795 1800

Asn Pro Lys Asn Val Ile Arg Met Leu Ala Ser Asp Lys Val Arg

1805 1810 1815

Trp Ser Leu His Thr Val Arg Ser Arg Leu Ala Lys Lys Gln Gln

1820 1825 1830

Tyr Cys Gln Phe Phe Thr Arg Phe Gly Glu Cys Lys Lys Pro Arg

1835 1840 1845

Gly Lys Cys Pro Tyr Ile His Asp Arg Ala Lys Val Thr Ile Cys

1850 1855 1860

Thr Lys Phe Leu Lys Gly Leu Cys Ser Asn Thr Ser Cys Lys Leu

1865 1870 1875

Thr His Lys Val Leu Pro Glu Arg Met Pro Asp Cys Ser Tyr Phe

1880 1885 1890

Leu Arg Gly Leu Cys Thr Asn Ile Ala Cys Pro Tyr Arg His Val

1895 1900 1905

Lys Val Asn Leu Asn Ala Pro Val Cys Glu Asp Phe Leu Lys Gly

1910 1915 1920

Tyr Cys Ala Tyr Gly Asp Glu Cys His Lys Lys His Ser Tyr Val

1925 1930 1935

Cys Pro Val Phe Glu Ala Thr Gly Glu Cys Pro Gln Gly Ser Arg

1940 1945 1950

Cys Lys Leu His His Pro Lys Ser Lys Val Lys Ser Lys Ser Arg

1955 1960 1965

Arg Pro Asp Phe Leu Gln Asn Ser Ser Trp Gly Arg Tyr Phe Asp

1970 1975 1980

Ala Ser Ile Asp His Gln Asp Glu Thr Arg Lys Val Ser Leu Asp

1985 1990 1995

Glu Asp Glu Arg Glu Lys Pro Gln Arg Val Phe Thr Asp Gly Asp

2000 2005 2010

Leu Gly Phe Ile Ser Leu Asp Asp Asp Ala Asp Glu Asp Val Thr

2015 2020 2025

Ala Leu Asp Ala Ser Asp Asp Ile Pro Leu Met Glu Leu Asp Ser

2030 2035 2040

Gly Asp Leu Ser Val Gln Thr Asp Asn Leu Asp Ala Leu Ile Lys

2045 2050 2055

Pro Leu Arg Ile Met Arg Thr Ala Arg Val

2060 2065

<210> 2

<211> 6807

<212> DNA

<213> Oryza sativa

<400> 2

gtacgcgatc gtcacgactc cacgaggcac ccgcgacgac gcagccaccg ccgccggccg 60

cgatccacac agatccgacc ccacccaaac gcgtccagat tccagcagcg cagccacccc 120

cacccagccc agccgatcca gccgtcgttg ccggcctcgg taagcaaagg atctcatcaa 180

tcctcacgat tcccgcaacc ctagagcatc cccttcccct tccctcgcct ccaaattcgc 240

gattccttcc cccacgaggc cgaatcccta gggccgccat ggatccgcct cccccgttcg 300

accacccgct ccaccgccgc cactactccg accaccacca cttccccccc ggcggaagcg 360

gaggcagcgg cggcgctgct tctgcggctg cgcgctccag gtacgagtac ggcggcggcg 420

gctacgagtc ccactctcac caccagtacc acctccctga ccaccaccac caccaccacc 480

accaccaccc cccaccgcgc gtccagcacc atcaccacca ccaccaccag cagctgcccg 540

cgccaacgcc gcccccgccg ccgccgcctc ccctgccgca gcaccgcctc gagccccctc 600

ctcctcacta cggcttccct ccccgcggcc atcccgacgc ctactcgccg ccgccgtacc 660

acgacccgtc cccgcaccac cactaccatc gccacggggg cgacgacttc ctccccgccg 720

acgagatccg ccgcgtcggt ggtggtcacc accaccacca tcaccatccg cagctgcaac 780

agcttctccc gtgggaggag gctgaggaag agaggcgccg ctacggcggc gccacccagc 840

agctccgact atcgccgtct ggtcctcgga aaaggcagcg ctgcgctgtg cacgacgccg 900

acgttgagag cacctccagt tctggcccgc ctccccgccg ccagaggcag caaccccacc 960

cggactatgc tctggatgat agttttgtag ataggaacaa tgcccatcct ggttacatgg 1020

tccatgaggg cttctcaatc cacagtgata gcaaggttag caggaagatc cagatgccta 1080

cgcagatggc actgcctggc tctccccatg gcacgagtgc tgggtatgcg aggcgagccc 1140

cacagaaggt tgccccttct agagtgtctg tgtggcaccg aatcgaggag aaccctgcaa 1200

tgtatgaacc gtcttctccg ccgccgcata tgcctaagga ggtgcacgtc tcgccgtgca 1260

agtcgaacaa tgttgctcct gcttcgaagg agttggccag tgtgatttct gtggattgta 1320

gagggaagag tgctgatggt aatgatggtg atagtaatac aggaacaaag aagaatcctg 1380

tcaagaagaa tgaaaaggtg ttggcttcag tgcttgtgaa gcctccaatg gagcccaagg 1440

aaaaggaagt ggctgctaag aagatgctca agaaacctga taaggttcag aagaatgcag 1500

tgcattccaa tattagaagt ttggtctcaa ctccctgccc tggtgctggt gcgaagaaag 1560

tgaagaagat agttataaaa aagattgtta ggaagatcaa tgggaaaggt aatcaaaaca 1620

gtaccccggt tgtctcagaa aagagagatg gtattgatgc taatgcttgt gagaaagaag 1680

agggtgagat cactacatca tcttttgaga aggatgttat ttctgcacat gatccgatcg 1740

ccgttagtga cacagctggt tttggtaatg ctgtaaatga tcagaagcaa aaaaacaccg 1800

acttcacaaa tccaagtgga aggaatgctg cttcagccaa tggatctatg gaaattcccg 1860

atccaccaaa tggtagtggg agtgcacatc ctggaaagga agaggttcta agcccaaaga 1920

atccagttga taatagcaat gcttctttag tcgttgaacc tatagaagtg cttgagaaaa 1980

gtgggactga gcatcctagg aaggagcatg atatgagctc tattggttca ggtgtaaatg 2040

atgcttttgc agatgcgaac aatcatactc agaaggaggt tggtgaaatg aatgtcgcag 2100

ttgcaatcaa ttctgtgaga gtttctgatg cacgggaagt tcctaggtgt gatgattcca 2160

gcatggaaga gagcaaagta cctaaggatg tggatgcaaa cattgctgtt tgcatggatg 2220

gagttgcttc taattgtgat acaacagaag tctgtggaaa tgaagatgca aggagggaat 2280

gtggaaaaaa attgattggc ataaatgacg agaaagcttt ccttttaaac aattctgcca 2340

gaagttctag tacatctgat acttgcatga ctgctgtaga gggtgctcag aaaaaagagg 2400

gtataattct cactggttca agtgaaaaga gcatcggctt tttaggtgat tctgtgggaa 2460

ctcataggac aacagaattt ggtgccagta aggatgcccc caacgaagga gatgacatgc 2520

caagccatcc tagtgaaaag gattttatgt cattgaactc ttgtggaggt cttaattaca 2580

cagaagttag tgaaaaggag gatatccagg agaaagagga cagagtaccc atggaatcaa 2640

ttgtagcttg tacttctagt ggaaatgagg acatacaagt gaatgagggc agaaaaccca 2700

tggagttaag tgaagctaat gcttttagtg gaagcgggga tagccaaggt aaagagtgta 2760

gaatacccat gggttcaagt gaaacaaata catcttccgt gaatcatgtg aatgcttcta 2820

atgaaaagga tttcagcttg agtgaggaca cccagaagaa agagagccac aggcccatag 2880

aatcatgtga aaatactact tttgaaatta tgcaccatga agaagctcct agtacagaag 2940

aggttattac aggtgtgtca cttgggagaa aggtggccga aggcccaacg aggtcaaatg 3000

aaagatgttc aggtgctaga ggtaattctg caactacttt aaagtttggt ttagcttgtg 3060

caactgagga taatcagatg gaagatttgc tcaacaatag aactgcttta aatgaaacag 3120

atgatcctct tgatgctgag gattcccctg tgtttgttcc tccatcttcc agaaatgtag 3180

aaagtacata tgcatcgcca ttatatgatc ctatggagga ttctaccagt gatggtattt 3240

tgaatattgg tttgggaagg aacactacat ctaaggcagc agaacttttg gatcttcata 3300

gagaccatat ttcttctgag aatgattctt tgatacattc ccggggcact tcatctgtat 3360

ctggtaaccg tgagcagtct gtccctacag ctttgacact tggtagcaat atctatttta 3420

gtagtgcgga aactgatgat cggcctgagg aaagacatga gctagtagtg gaaggtcagc 3480

aaggattaac tgttgagaca acaagcaaac ttgatagccc tggcaaaata gaagtcctga 3540

atggtgcggg cttcatcagt acaggtattc aaaattggct gagtttacct ccatcaatca 3600

acagcatgga gatgtctggg caatttctga ataatggttt tactgttagt aagggtaggc 3660

taggtttaga ccagagtatg gatgatgcta cttcagtgag tcaggatcat gatattgcac 3720

aagatatgga ccagcgtgga agtgaggatg ctttctttag tcaggatcac agcattaggt 3780

tatgtggtag caatttgcct cattcacatt tgttggcacc caaagagagc agcatgaatg 3840

gtgaggatca gagtggcatt gttctcacag gtttgcaccc tagtagttca gtaaatgttt 3900

taggtcacta tggttaccaa acagatgata ttcctgtgga taacctgaat aagcttccct 3960

cagctttaga atcttctgat gctatggatg cagatcaagt ttcttctcag gtatgcgtta 4020

atccagatca caccaatgac agtaatactg agaatgctgg ggttgagtca aatgcaaagc 4080

aggatctgtt gtcttcttgg attgaagcca ttgtatcaga ggctaaaaag gaacacccac 4140

catgcaagtc cactccgctc actgttggct tgccagataa gttattagaa ccaaaggaca 4200

gcgacaggaa aacattactg gaaacagtgg tgccttctgc agtaaaatct cctcagataa 4260

attttgcaag ctcaacactc caaaaggtag ctcctaaaca agtaacattg cctagttcat 4320

cccgagaacc cactcgagca aatcaaaatg caaggcacag gacttggcat cgtggcaaca 4380

tagcatcttc tagttcatct ttgcatgctt cacagccttt aggattaccc ccaaaattac 4440

cacccaagaa gaatgacaaa gctcaaaact cttatatacg gaaaggtaat gctcttatta 4500

gaaatccatc aaatggtaat catcctcatt cttctacagg tcacgatact caaaataagt 4560

tgaataaacc tgtggtaagg agaagcatga actttgtaag gaaagctgat acgaaagact 4620

tagcaaattc taacatctca gttgaaagac ccaagacccc tcctttacca cttcacacaa 4680

aatccagctg ccctacaacc cttttggagc cattgtctca aactttgcag aaacagcatg 4740

gtcatgaagc tgaaaaggag gatctcactg ggcagccaaa gtcaggcgtt gataactcaa 4800

gcatcaaaag tgcacaaaaa tctgaaccct cggatcctag taaagtggtt tatgttaggc 4860

ccaaatcaaa ccaactggtt gctgcacaga ggcaacaccc tattgattta gtcaacagtc 4920

ccacagataa gattctgtct ctgcaggcac ccatagcata tgatctctat ttaaagaaaa 4980

ggaaaaatca aattgttttg agttcctgct ccccttctga tggtctgagt accaaagaaa 5040

cgttacctgc tgagaattca aattcagaag agaagaaaga tctaatgatt gcatgctcta 5100

tcagtggtat ccctggggta aaggacagac cacaaaaagc tcttcagaca acaaataatg 5160

tggggcgttt ctctcatgtg tggacactca atgggcaaca gccacagagg aaaggtttta 5220

tgggcagtag tcatatgaat gccttcccac gtatacttcc atggaaaaga aaaatattct 5280

gcaagaattt tagaagcagt cacatgtcga atgtgagctc catacgaatt gtcagaaaat 5340

tgctgcaaac aaggaagaga gatatgattt atactgtctc aactgatggg ttctctctac 5400

ggaaatctgg tgtgttaagt gttggtggat caagtttgaa atggtcaaga tcccttgaga 5460

agcgttctca aaaggtcaac aaggaagcta cattggcact cgctgaagtt gaaagaagga 5520

aaagggagaa acggaagcgg cagtctctcc atgataaggg agatcatcaa tttgaatctg 5580

tcactggcaa tcaattaaga aacagccgcc aatcgtcttc cgatttgaga aagccatcga 5640

cttgcaatga atatgtgcgc gttagcaaag gtaaccaact ggttagaaat ccgaagaatg 5700

taatccgcat gctagcaagt gacaaagttc gatggagttt gcacactgtg agatcacgcc 5760

tagcaaagaa acaacagtac tgccaattct tcactcggtt tggcgagtgc aaaaaaccca 5820

ggggcaaatg cccttatatt catgaccgag ctaaagtgac tatatgtact aaatttctta 5880

aaggattgtg ttctaatact agttgcaaac tgactcacaa ggtccttcca gaaagaatgc 5940

cagattgttc ttattttctg agaggactct gtaccaacat agcctgcccc tataggcatg 6000

tgaaagtgaa cttgaatgct cctgtttgtg aagacttctt aaaaggatat tgtgcatatg 6060

gtgacgagtg tcataaaaag cacagctatg tatgtcctgt cttcgaggca actggagagt 6120

gcccacaagg atctagatgc aaacttcatc accctaagag caaagtcaaa tccaagagca 6180

gaagaccaga tttcttgcaa aacagtagtt ggggccggta ttttgatgcc agcattgacc 6240

atcaagatga gacaaggaaa gtttctttag acgaagacga gagagagaaa cctcaacgtg 6300

ttttcactga tggggatttg ggctttatca gcttggatga tgatgcggat gaagatgtta 6360

cagctttaga tgcgtcagat gatataccgc tgatggaatt ggactcgggg gatttaagtg 6420

tgcagactga taatcttgat gcactaatca agccacttcg gatcatgaga acagcaagag 6480

tttgatagct atgcagttag aggggataac agcaggagtt tgacaggttc tttgattgac 6540

cgagacagac caaacttgat acaacaggat aggtgcagtg ttcgagacaa ccgtatatat 6600

atagggaagg aaaacaagtt tcgttttctt cattgttttt ctaccttctt cggaagttca 6660

tttttgtttg tcatgtacat atagttattt ttcttatgtt ttaggttacc tatattacat 6720

gccaaaatca cacagagtta agtgtaacga acaatcattt acattgcaga agaaagaaat 6780

ggcaatttat ttagaattgc attgtgc 6807

<210> 3

<211> 524

<212> DNA

<213> Artificial sequence

<400> 3

gtcgacgatt aaggaatctt taaacatacg aacagatcac ttaaagttct tctgaagcaa 60

cttaaagtta tcaggcatgc atggatcttg gaggaatcag atgtgcagtc agggaccata 120

gcacaagaca ggcgtcttct actggtgcta ccagcaaatg ctggaagccg ggaacactgg 180

gtacgtcgga aaccacgtga tgtgaagaag taagataaac tgtaggagaa aagcatttcg 240

tagtgggcca tgaagccttt caggacatgt attgcagtat gggccggccc attacgcaat 300

tggacgacaa caaagactag tattagtacc acctcggcta tccacataga tcaaagctga 360

tttaaaagag ttgtgcagat gatccgtggc attggatttg actttgctct tgttttagag 420

ctagaaatag caagttaaaa taaggctagt ccgttatcaa cttgaaaaag tggcaccgag 480

tcggtgcttt ttttccacat aatctctaga agatcttcgg tacc 524

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> Oryza sativa

<400> 4

aagagcaaag tcaaatccaa 20

Claims (6)

1.一种培育雄性不育植物的方法，包括如下步骤：抑制目的植物中DCM1基因的表达，得到雄性不育植物；所述DCM1基因编码DCM1蛋白；

所述DCM1蛋白是由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

所述植物为水稻。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述DCM1基因为如下1)或2)的DNA分子：

1)编码区如序列表中序列2第279-6485位核苷酸所示的DNA分子；

2)序列表中序列2所示的DNA分子。

3.一种培育雄性不育植物的方法，包括如下步骤：降低目的植物中DCM1蛋白的活性和/或水平，得到雄性不育植物；

所述DCM1蛋白是由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

所述植物为水稻。

4.用于抑制编码DCM1蛋白的核酸分子表达的物质在培育雄性不育植物中的应用；

所述DCM1蛋白是由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

所述植物为水稻。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于：所述DCM1基因为如下1)或2)的DNA分子：

1)编码区如序列表中序列2第279-6485位核苷酸所示的DNA分子；

2)序列表中序列2所示的DNA分子。

6.用于抑制DCM1蛋白的活性和/或水平的物质在培育雄性不育植物中的应用。

所述DCM1蛋白是由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

所述植物为水稻。

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