CN109180827A - 一种莲雾多糖及其制备方法和在制备肝脏细胞氧化损伤抑制剂中的应用 - Google Patents

一种莲雾多糖及其制备方法和在制备肝脏细胞氧化损伤抑制剂中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN109180827A
CN109180827A CN201810890583.8A CN201810890583A CN109180827A CN 109180827 A CN109180827 A CN 109180827A CN 201810890583 A CN201810890583 A CN 201810890583A CN 109180827 A CN109180827 A CN 109180827A
Authority
CN
China
Prior art keywords
wax
apple
apple polysaccharide
polysaccharide
urethanes
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201810890583.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109180827B (zh
Inventor
陈卫
鲍涛
柯慧慧
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang University ZJU
Original Assignee
Zhejiang University ZJU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang University ZJU filed Critical Zhejiang University ZJU
Priority to CN201810890583.8A priority Critical patent/CN109180827B/zh
Publication of CN109180827A publication Critical patent/CN109180827A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109180827B publication Critical patent/CN109180827B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了一种莲雾多糖及其制备工艺与应用，该莲雾多糖通过超声辅助水提与醇沉工艺制备得到，以摩尔百分比计，该莲雾多糖包括以下单糖：阿拉伯糖35.73～41.78％；半乳糖27.64～33.82％；半乳糖醛酸6.85～9.56％；葡萄糖7.28～9.37％；甘露糖1.89～2.63％；鼠李糖2.97～3.94％；葡糖醛酸3.68～4.45％；岩藻糖1.12～1.48％。该莲雾多糖可显著提升氨基甲酸乙酯诱导损伤的肝脏细胞的存活率、显著降低氨基甲酸乙酯诱导产生的细胞ROS水平、有效降低氨基甲酸乙酯诱导产生的细胞超氧化物阴离子水平等等，因此，可用于制备肝脏细胞氧化损伤抑制剂。

Description

一种莲雾多糖及其制备方法和在制备肝脏细胞氧化损伤抑制 剂中的应用
技术领域
本发明涉及植物多糖的技术领域，具体涉及一种莲雾多糖及其制备方法和在制备肝脏细胞氧化损伤抑制剂中的应用。
背景技术
莲雾(拉丁名：Syzygium samarangense)，又名洋蒲桃，桃金娘科蒲桃属植物，原产于马来半岛，安达曼和尼科巴群岛等地区，在热带、南亚热带地区广泛种植。目前，在中国广东、广西、福建、台湾、海南等地均有栽培。莲雾的种类很多，果色鲜艳，有的呈青绿色，有的呈粉红色，还有的呈大红色。莲雾果实水分含量为92.87％，蛋白质0.35％，碳水化合物5.97％，灰分或矿物质0.21％，粗纤维0.46％，还富含维生素C等多种维生素，还含有钙、磷、钾等矿物质，营养丰富(许彬.莲雾果实采后贮藏生理研究[D].厦门:集美大学,2011)。莲雾性平味甘，具有一定的保健治疗功能，能润肺、止咳、除痰、凉血、收敛，可治肺燥咳嗽等。
公开号为CN 103349850 A的中国专利文献中报道了一种用于提取莲雾中有效成分的方法，其采用石油醚、乙醇为提取剂，提取莲雾中的脂溶性活性成分。公开号为CN106617042 A的中国专利文献中提出了一种莲雾提取物的制备方法，其通过大孔树脂吸附，乙醇洗脱的方式制备得到莲雾提取物；然而，所得提取物的成分复杂，且没有经过检测，组分比例亦不确定。公开号为CN 102228207 A的中国专利文献中公开了采用生物酶解技术，获得莲雾提取物，提取物所截留的是50～100kD的组成，然而此种方法并不能除去莲雾中的脂溶性杂质和蛋白类物质，所获得的是一个组分复杂的混合物。李粉玲等(李粉玲,蔡汉权,洪仰纯.微波辅助提取莲雾多糖[J].食品研究与开发,2013(1):39-43.)利用微波辅助提取莲雾多糖，然而其仅仅使用水提取莲雾粗多糖，没有粗多糖进行除杂和纯化。马善波(马善波,孙阳,孟志强,等.苹果多糖的制备及对脂多糖诱导RAW264.7细胞凋亡的影响[J].中国药师,2016(12):2225-2229.)等采用乙醇除去多酚等醇溶性物质，进一步采用水提，Sevag法除蛋白，过氧化氢脱色，乙醇沉淀、透析等步骤提取苹果多糖；然而，过氧化氢脱色会导致多糖损失及结构变化。目前，尚未发现高纯度莲雾多糖的提取方法。
多糖(polysaccharide)是由多个单糖分子缩合、失水而形成的由糖苷键结合的糖链，是一类分子结构复杂且庞大的高分子碳水化合物。由相同单糖组成的多糖称为同多糖，如淀粉、纤维素和糖原；以不同的单糖组成的多糖称为杂多糖。多糖组成与结构十分复杂，不是一种纯粹的化学物质，而是聚合程度不同的物质的混合物，不溶于乙醇和石油醚等有机溶剂。多糖是一类具有广泛生物活性的生物大分子，具有多种药理活性，如抗氧化、抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗病毒以及增强免疫力等，具有较高的开发价值。
氨基甲酸乙酯(Ethyl Carbamate，EC)是发酵食物(面包、酸牛奶、酱油、发酵豆制品等)和酒精饮品(葡萄酒、苹果酒、中国黄酒、日本清酒等)在发酵或贮存过程中天然产生的污染物，具有遗传毒性和致癌性。2007年，国际癌症研究机构(IARC)正式将EC归类为2A类致癌物(人类可能致癌物)。啮齿动物的代谢研究表明，EC可通过肝微粒体酯酶水解成乙醇，氨和二氧化碳；EC也可以被细胞色素P450氧化为N-羟基-氨基甲酸乙酯,该物质能够诱导Cu2+调控的DNA氧化损伤，促进细胞内自由基的生成，从而对细胞造成氧化损伤(Weber J V,Sharypov V I.Ethyl carbamate in foods and beverages:a review[J].EnvironmentalChemistry Letters,2009,7(3):233-247.)。肝脏是人体生物转化和解毒的重要器官，是EC进入人体后最初的代谢场所。因此，抑制氨基甲酸乙酯对肝脏损伤的物质具有很大的研究意义。
发明内容
基于上述技术问题，本发明通过超声辅助水提与醇沉工艺制备得到一种组成特殊、高纯度的莲雾多糖，该莲雾多糖可显著提升氨基甲酸乙酯诱导损伤的肝脏细胞的存活率、显著降低氨基甲酸乙酯诱导产生的细胞ROS水平、有效降低氨基甲酸乙酯诱导产生的细胞超氧化物阴离子水平、有效缓解氨基甲酸乙酯诱导产生的细胞线粒体膜电位水平降低、有效减少氨基甲酸乙酯诱导产生的细胞GSH消耗并有效恢复氨基甲酸乙酯诱导产生的细胞核损伤，因此，可用于制备肝脏细胞氧化损伤抑制剂。
具体技术方案如下：
一种莲雾多糖，其特征在于，以摩尔百分比计，所述莲雾多糖包括以下单糖：
多糖是由单糖以一定的连接方式组成的重复结构单元，单糖以一定的糖苷键连接，不同糖苷键的连接的单糖称为多糖的结构单位。以摩尔比计，所述莲雾多糖包括以下结构单位：
优选地，所述莲雾多糖的重均分子量为35.78～40.94kDa。
本发明还公开了所述的莲雾多糖的制备方法，包括如下提取步骤：
(1)莲雾鲜果，去皮后经超声辅助水提、醇沉后收集沉淀物，记为粗提物；
(2)将所述粗提物溶于水中，除去蛋白类杂质，收集的水相经透析袋过滤截留，滤出液再经真空冷冻干燥，得到所述的莲雾多糖。
本发明采用超声辅助水提与醇沉工艺，通过对工艺参数的精确调控实现对莲雾多糖中各单糖以及各结构单位的含量的有效调控。
步骤(1)中，所述超声辅助水提，超声功率为100～200W，提取温度为70～95℃，时间为1～3h，重复次数为3～5次。
所述醇沉，加入体积浓度为70～95％的乙醇。如无特殊说明，本发明中一定浓度的乙醇均为乙醇-水溶液。通过醇沉，可以使莲雾多糖沉淀，同时除去其中的脂溶性杂质。
步骤(2)中：
采用Sevag法除去蛋白类杂质，重复次数为6～8次，可有效除去莲雾多糖中的蛋白类杂质。
透析袋截留可以将莲雾多糖中的小分子杂质除去，获得高纯度莲雾多糖，优选地，所述透析袋过滤截留分子量大于3.5kDa的成分。
进一步优选：
所述超声辅助水提，超声功率为150～200W，提取温度为80～95℃；
所述醇沉采用体积浓度为80～90％的乙醇。
经试验发现，采用上述进一步优选的工艺条件提取得到的莲雾多糖，以摩尔百分比计，包括以下单糖：
以摩尔比计，所述莲雾多糖包括以下结构单位：
针对上述特殊工艺提取得到的莲雾多糖进行了一系列的活性测试发现：
提取得到的莲雾多糖对氨基甲酸乙酯诱导的肝脏细胞氧化损伤具有保护作用，体现在：
1、可显著提升氨基甲酸乙酯诱导损伤的肝脏细胞的存活率；
2、显著降低氨基甲酸乙酯诱导产生的细胞ROS水平；
3、有效降低氨基甲酸乙酯诱导产生的细胞超氧化物阴离子水平；
4、有效缓解氨基甲酸乙酯诱导产生的细胞线粒体膜电位水平降低；
5、有效减少氨基甲酸乙酯诱导产生的细胞GSH消耗；
6、有效恢复氨基甲酸乙酯诱导产生的细胞核损伤。
因此，本发明还公开了该莲雾多糖在制备肝脏细胞氧化损伤抑制剂中的应用。具体地，经氨基甲酸乙酯诱导的肝脏细胞氧化损伤。
优选地，所述抑制剂中，莲雾多糖的有效剂量为200μg/mL。
进一步优选，以摩尔百分比计，所述莲雾多糖包括以下单糖：
以摩尔比计，所述莲雾多糖包括以下结构单位：
经活性试验发现，上述组成的莲雾多糖在针对由氨基甲酸乙酯诱导的肝脏细胞氧化损伤中具有更显著的抑制作用。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
1、本发明采用超声辅助水提与醇沉工艺，通过对工艺参数的精确调控获得具有特定成分组成，分子量及糖苷键的莲雾多糖。
2、本发明首次发现了莲雾多糖能够有效抑制氨基甲酸乙酯诱导的肝脏细胞氧化损伤，为莲雾多糖提供了新的医疗用途，拓展了一个新的应用领域。
附图说明
图1为实施例1～4分别制备的莲雾多糖对氨基甲酸乙酯诱导的肝脏细胞LO2氧化损伤的保护作用；
图2为实施例1～4分别制备的莲雾多糖对氨基甲酸乙酯诱导的肝脏细胞LO2活性氧自由基ROS爆发的抑制作用；
图3为实施例1～4分别制备的莲雾多糖对氨基甲酸乙酯诱导的肝脏细胞LO2超氧化物阴离子的抑制作用；
图4为实施例1～4分别制备的莲雾多糖对氨基甲酸乙酯诱导的肝脏细胞LO2线粒体膜电位水平降低的缓解作用；
图5为实施例1～4分别制备的莲雾多糖对氨基甲酸乙酯诱导的肝脏细胞LO2 GSH消耗的缓解作用；
图6为实施例1制备的莲雾多糖对氨基甲酸乙酯诱导的肝脏细胞LO2核损伤的抑制作用。
具体实施方式
下面结合附图及实施例对本发明作进一步详细描述，需要指出的是，以下实施例旨在便于对本发明的理解，而对其不起任何限定作用。
实施例1
莲雾鲜果，去皮后，经200W超声，95℃水提，提取时间为1h，重复次数为4次；提取液中加入乙醇，使体系中乙醇体积浓度为90％，收集沉淀。将沉淀溶于水中，采用Sevag法除蛋白类杂质，重复8次，收集水相溶液。溶液经透析袋过滤截留分子量大于3.5kDa的组分，滤出液再经真空冷冻干燥，得到莲雾多糖。
本实施例制备的莲雾多糖，重量平均分子量为36.98kDa。经液相色谱测试可知，该莲雾多糖的主要成分如下表1所示：
表1
成分 摩尔百分比
阿拉伯糖 38.58％
半乳糖 32.82％
半乳糖醛酸 8.83％
葡萄糖 9.13％
甘露糖 2.16％
鼠李糖 3.35％
葡糖醛酸 3.75％
岩藻糖 1.38％
经甲基化实验测定，以摩尔比计，本实施例制备的莲雾多糖由表2中的特定结构单位组成：
表2
成分 摩尔比
1,6-半乳糖 2.60
1,3-阿拉伯糖 1.42
T-阿拉伯糖 0.79
1,2-阿拉伯糖 0.92
1,4,6-半乳糖醛酸 0.78
1,6-葡萄糖 0.35
T-葡萄糖醛酸 0.38
1,2,3-鼠李糖 0.24
T-岩藻糖 0.27
1,3-葡萄糖醛酸 0.21
1,4-甘露糖 0.18
实施例2
莲雾鲜果，去皮后，经150W超声，90℃水提，提取时间为2h，重复次数为5次；提取液中加入乙醇，使体系中乙醇体积浓度为80％，收集沉淀。将沉淀溶于水中，采用Sevag法除蛋白类杂质，重复68次，收集水相溶液。溶液经透析袋过滤截留分子量大于3.5kDa的组分，滤出液再经真空冷冻干燥，得到莲雾多糖。
本实施例制备的莲雾多糖，重量平均分子量为40.94kDa。经液相色谱测试可知，该莲雾多糖的主要成分如下表3所示：
表3
成分 摩尔百分比
阿拉伯糖 41.78％
半乳糖 28.54％
半乳糖醛酸 9.56％
葡萄糖 9.33％
甘露糖 2.52％
鼠李糖 2.99％
葡糖醛酸 4.14％
岩藻糖 1.14％
经甲基化实验测定，以摩尔比计，本实施例的莲雾多糖由以下特定结构单位组成：
表4
成分 摩尔比
1,6-半乳糖 2.54
1,3-阿拉伯糖 1.55
T-阿拉伯糖 1.02
1,2-阿拉伯糖 0.89
1,4,6-半乳糖醛酸 0.75
1,6-葡萄糖 0.47
T-葡萄糖醛酸 0.45
1,2,3-鼠李糖 0.31
T-岩藻糖 0.19
1,3-葡萄糖醛酸 0.19
1,4-甘露糖 0.26
实施例3
莲雾鲜果，去皮后，经180W超声，80℃水提，提取时间为2h，重复次数为5次；提取液中加入乙醇，使体系中乙醇体积浓度为85％，收集沉淀。将沉淀溶于水中，采用Sevag法除蛋白类杂质，重复7次，收集水相溶液。溶液经透析袋过滤截留分子量大于3.5kDa的组分，滤出液再经真空冷冻干燥，得到莲雾多糖。
本实施例制备的莲雾多糖，重量平均分子量为35.78kDa。经液相色谱测试可知，该莲雾多糖的主要成分如下表5所示：
表5
成分 摩尔百分比
阿拉伯糖 40.23％
半乳糖 30.65％
半乳糖醛酸 8.11％
葡萄糖 8.93％
甘露糖 2.51％
鼠李糖 3.65％
葡糖醛酸 4.45％
岩藻糖 1.47％
经甲基化实验测定，以摩尔比计，本实施例的莲雾多糖由以下特定结构单位组成：
表6
实施例4
莲雾鲜果，去皮后，经100W超声，70℃水提，提取时间为3h，重复次数为5次；提取液中加入乙醇，使体系中乙醇体积浓度为70％，收集沉淀。将沉淀溶于水中，采用Sevag法除蛋白类杂质，重复8次，收集水相溶液。溶液经透析袋过滤截留分子量大于3.5kDa的组分，滤出液再经真空冷冻干燥，得到莲雾多糖。
本实施例制备的莲雾多糖，重量平均分子量为38.63kDa。经液相色谱测试可知，该莲雾多糖的主要成分如下表7所示：
表7
成分 摩尔百分比
阿拉伯糖 35.73％
半乳糖 33.82％
半乳糖醛酸 9.56％
葡萄糖 9.37％
甘露糖 2.62％
鼠李糖 3.69％
葡糖醛酸 4.02％
岩藻糖 1.19％
经甲基化实验测定，以摩尔比计，本实施例的莲雾多糖由以下特定结构单位组成：
表8
性能测试：研究莲雾多糖对氨基甲酸乙酯诱导的肝脏细胞氧化损伤的保护作用，以实施例1～4分别制备的莲雾多糖进行测试
(1)细胞存活率测定(MTT法)
按照参考文献的方法，采用MTT法检测细胞的存活率。将对数期的LO2细胞接种到96孔细胞培养板中(浓度为6.0×103个细胞/孔)，孵育24h后；在含有莲雾多糖的条件下，用氨基甲酸乙酯(EC 60mM)处理LO2细胞24h，然后用MTT(0.5mg/mL)孵育3.5h。生成的沉淀物溶解于200μL的DMSO中，用酶标仪检测费490nm处的吸光度。
细胞存活率(％)＝[A样品/A空白]×100％
如图1显示，LO2细胞经60mM EC损伤24h后，细胞密度明显降低，与正常组相比，细胞存活率为57.53％，具有统计学意义(p<0.05)。莲雾多糖在60mM EC浓度作用下时，对LO2细胞有较好的保护作用，与对照组相比，具有显著性差异，200μg/mL莲雾多糖(实施例1)作用下，细胞存活率达82.02％(p<0.05)，且实施例1～3的作用效果明显优于实施例4。
上述结果证实了莲雾多糖具有干预氨基甲酸乙酯诱导的细胞损伤的保护作用。
(2)细胞内ROS水平检测
收集对数期的LO2细胞，将细胞接种到24孔细胞培养板中(浓度为3.5×104个细胞/孔)，孵育24h后；在含有莲雾多糖的条件下，用氨基甲酸乙酯(EC 60mM)处理LO2细胞24h，然后用DCFH-DA染色，37℃孵育30min，将染料洗净后用荧光显微镜观察并拍照，然后分析其荧光强度。
如图2显示，与未处理的对照组(control)相比，经60mM EC作用肝细胞LO2 24h，荧光强度明显增强(荧光强度124.00％)。莲雾多糖能显著降低氨基甲酸乙酯诱导产生的ROS荧光强度，且具有统计学意义，200μg/mL莲雾多糖(实施例2)效果最佳(荧光强度99.03％)，且实施例1～3的作用效果明显优于实施例4。
上述结果表明莲雾多糖能有效降低EC诱导产生的细胞ROS水平。
(3)细胞内超氧化物阴离子水平检测
收集对数期的LO2细胞，将细胞接种到24孔细胞培养板中(浓度为3.5×104个细胞/孔)，孵育24h后；在含有莲雾多糖的条件下，用氨基甲酸乙酯(EC 60mM)处理LO2细胞24h，然后用DHE染色，37℃孵育30min，将染料洗净后用荧光显微镜观察并拍照，然后分析其荧光强度。
如图3显示，与未处理的对照组(control)相比，经60mM EC作用肝细胞LO2 24h，荧光强度明显增强(荧光强度123.00％)。莲雾多糖能显著降低氨基甲酸乙酯诱导产生的超氧化物阴离子荧光强度，且具有统计学意义，200μg/mL莲雾多糖(实施例1)效果最佳(荧光强度97.94％)，且实施例1～3的作用效果明显优于实施例4。
上述结果表明莲雾多糖能有效降低EC诱导产生的细胞超氧化物阴离子水平。
(4)细胞内线粒体膜电位水平检测
收集对数期的LO2细胞，将细胞接种到24孔细胞培养板中(浓度为3.5×104个细胞/孔)，孵育24h后；在含有莲雾多糖的条件下，用氨基甲酸乙酯(EC 60mM)处理LO2细胞24h，然后用Rh123染色，37℃孵育30min，将染料洗净后用荧光显微镜观察并拍照，然后分析其荧光强度。
如图4显示，与未处理的对照组(control)相比，经60mM EC作用肝细胞LO2 24h，荧光强度明显降低(荧光强度71.71％)。莲雾多糖能显著缓解氨基甲酸乙酯诱导产生的线粒体膜电位荧光强度降低，且具有统计学意义，200μg/mL莲雾多糖(实施例2)效果最佳(荧光强度100.61％)。
上述结果表明莲雾多糖能有效缓解EC诱导产生的细胞线粒体膜电位水平降低。
(5)细胞内GSH水平检测
收集对数期的LO2细胞，将细胞接种到24孔细胞培养板中(浓度为3.5×104个细胞/孔)，孵育24h后；在含有莲雾多糖的条件下，用氨基甲酸乙酯(EC 60mM)处理LO2细胞24h，然后用NDA染色，37℃孵育30min，将染料洗净后用荧光显微镜观察并拍照，然后分析其荧光强度。
如图5显示，与未处理的对照组(control)相比，经60mM EC作用肝细胞LO2 24h，荧光强度明显降低(荧光强度50.76％)。莲雾多糖能显著缓解氨基甲酸乙酯诱导产生的GSH荧光强度降低，且具有统计学意义，200μg/mL莲雾多糖(实施例2)效果最佳(荧光强度84.29％)，且实施例1～3的作用效果明显优于实施例4。
上述结果表明莲雾多糖能有效减少EC诱导产生的细胞GSH消耗。
(6)细胞核损伤Hochest水平检测
收集对数期的LO2细胞，将细胞接种到24孔细胞培养板中(浓度为4.0×104个细胞/孔)，孵育24h后；在含有莲雾多糖的条件下，用氨基甲酸乙酯(EC 60mM)处理LO2细胞24h，PBS洗净后用荧光探针染色，37℃孵育10-15min，将染料洗净后用荧光显微镜观察并拍照，然后分析图片。
如图6显示，正常LO2细胞(control)细胞核体积较大，染色质是均一的，经氨基甲酸乙酯(EC 60mM)作用LO2细胞，部分细胞的染色质明显发生了浓缩，并出现凋亡小体，而加入200μg/mL莲雾多糖(实施例1)预处理24h后，染色质稍有舒展，细胞核形态有所恢复。
上述结果表明莲雾多糖能有效恢复EC诱导产生的细胞核损伤。
最后，本发明可用其他的不违背本发明的精神和主要特征的具体形式来概述。因此，无论从那一点来看，本发明的上述实施方案都只能认为是对本发明的说明而不能限制本发明，权利要求书指出了本发明的范围，而上述的说明并未指出本发明的范围，因此，在与本发明的权利要求书相当的含义和范围内的任何改变，都应认为是包括在权利要求书的范围内。

Claims (10)

1.一种莲雾多糖，其特征在于，以摩尔百分比计，所述莲雾多糖包括以下单糖：
2.根据权利要求1所述的莲雾多糖，其特征在于，以摩尔比计，所述莲雾多糖包括以下结构单位：
3.根据权利要求1或2所述的莲雾多糖，其特征在于，重均分子量为35.78～40.94kDa。
4.一种根据权利要求1～3任一所述的莲雾多糖的制备方法，其特征在于，包括如下提取步骤：
(1)莲雾鲜果，去皮后经超声辅助水提、醇沉后收集沉淀物，记为粗提物；
(2)将所述粗提物溶于水中，除去蛋白类杂质，收集的水相经透析袋过滤截留，滤出液再经真空冷冻干燥，得到所述的莲雾多糖。
5.根据权利要求4所述的莲雾多糖的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述超声辅助水提，超声功率为100～200W，提取温度为70～95℃。
6.根据权利要求4所述的莲雾多糖的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述醇沉，加入体积浓度为70～95％的乙醇。
7.根据权利要求4所述的莲雾多糖的制备方法，其特征在于，步骤(2)中：
采用Sevag法除去蛋白类杂质，重复次数为6～8次；
所述透析袋过滤截留分子量大于3.5kDa的成分。
8.根据权利要求4～7任一所述的莲雾多糖的制备方法，其特征在于，所述超声辅助水提，超声功率为150～200W，提取温度为80～95℃；
所述醇沉采用体积浓度为80～90％的乙醇。
9.一种根据权利要求1～3任一所述的莲雾多糖在制备肝脏细胞氧化损伤抑制剂中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，以摩尔百分比计，所述莲雾多糖包括以下单糖：
以摩尔比计，所述莲雾多糖包括以下结构单位：
CN201810890583.8A 2018-08-07 2018-08-07 一种莲雾多糖及其制备方法和在制备肝脏细胞氧化损伤抑制剂中的应用 Active CN109180827B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810890583.8A CN109180827B (zh) 2018-08-07 2018-08-07 一种莲雾多糖及其制备方法和在制备肝脏细胞氧化损伤抑制剂中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810890583.8A CN109180827B (zh) 2018-08-07 2018-08-07 一种莲雾多糖及其制备方法和在制备肝脏细胞氧化损伤抑制剂中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109180827A true CN109180827A (zh) 2019-01-11
CN109180827B CN109180827B (zh) 2019-11-19

Family

ID=64920855

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810890583.8A Active CN109180827B (zh) 2018-08-07 2018-08-07 一种莲雾多糖及其制备方法和在制备肝脏细胞氧化损伤抑制剂中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109180827B (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110046086A1 (en) * 2008-04-07 2011-02-24 Korea Institute Of Radiological & Medical Sciences Composition Comprising Polysaccharide Extracted from Panax Ginseng Preventing and Treating Liver Diseases
CN102228207A (zh) * 2011-06-23 2011-11-02 韩金光 莲雾的加工方法及莲雾提取物
CN106617042A (zh) * 2016-09-13 2017-05-10 防城港市天红农业科技有限责任公司 莲雾提取物的制备方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110046086A1 (en) * 2008-04-07 2011-02-24 Korea Institute Of Radiological & Medical Sciences Composition Comprising Polysaccharide Extracted from Panax Ginseng Preventing and Treating Liver Diseases
CN102228207A (zh) * 2011-06-23 2011-11-02 韩金光 莲雾的加工方法及莲雾提取物
CN106617042A (zh) * 2016-09-13 2017-05-10 防城港市天红农业科技有限责任公司 莲雾提取物的制备方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
WEI CHEN等: "mulberry fruit extract affords protection against ethyl carbamate-induced cytotoxicity and oxidative stress", 《OXIDATIVE MEDICINE AND CELLULAR LONGEVITY》 *
李粉玲等: "微波辅助提取莲雾多糖", 《食品研究与开发》 *
汪彬慧等: "莲雾多糖的基本结构、理化性质及抗氧化活性研究", 《2017中国食品科学技术学会第十四届年会暨第九届中美食品业高层论坛论文摘要集》 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN109180827B (zh) 2019-11-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Cao et al. Comparative study on the monosaccharide compositions, antioxidant and hypoglycemic activities in vitro of intracellular and extracellular polysaccharides of liquid fermented Coprinus comatus
Gao et al. Antioxidant and immunological activity in vitro of polysaccharides from Gomphidius rutilus mycelium
CN108823261B (zh) 一种超低分子量铁皮石斛多糖及其制备与应用
CN102241786B (zh) 一种富硒葛根多糖的制备方法及其应用
CN103468019B (zh) 一种利用果渣制备的天然色素及其用途
CN111704678B (zh) 一种平菇半乳甘露葡聚糖及其制备方法和用途
CN117925731B (zh) 一种半乳糖酵母样菌积雪草发酵产物及其制备方法和用途
CN104987427B (zh) 利用响应曲面法优化黑果枸杞多糖的复合酶微波提取方法
CN101914075A (zh) 一种从褐藻中提取褐藻黄素的方法
CN109251253B (zh) 一种掌叶覆盆子多糖及其制备方法和在制备肝脏细胞脂毒性损伤抑制剂中的应用
CN114515008A (zh) 一种管花肉苁蓉提取物及其制备方法
Jia et al. The structural characterization of polysaccharides from three cultivars of Moringa oleifera Lam. root and their effects on human intestinal microflora
CN103193895A (zh) 一种具有α-1,3-葡聚糖主链的毛蚶多糖及其制备方法和用途
CN113925081A (zh) 一种天然植物防腐组合物、制备方法及其应用
CN110269130A (zh) 富硒牡蛎小分子蛋白肽的制备方法
CN113499295A (zh) 一种菟丝子发酵活性提取液的制备方法和应用
CN103275237B (zh) 一种茄枝多糖的制备方法及其应用
CN109180827B (zh) 一种莲雾多糖及其制备方法和在制备肝脏细胞氧化损伤抑制剂中的应用
CN105766377B (zh) 一种提高黑木耳黄酮含量和种类的培养方法
Zhao et al. In vitro antioxidant and antitumor activities of polysaccharides extracted from the mycelia of liquid-cultured Flammulina velutipes
CN114712416B (zh) 一种水媒法高效同步提取荷叶中黄酮、生物碱和多酚的方法
CN115926013B (zh) 一种葛仙米多糖及其制备方法
CN116333187A (zh) 一种香蕉果肉中百分百甲酯化果胶的制备与应用
CN113735802B (zh) 一种采用低共熔溶剂制备岩藻黄质提取物的制备方法
CN116120482A (zh) 一种介质阻挡放电等离子体降解的褐藻多糖及其制备方法与应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant