CN109154111B - 细胞培养支架用纱线、包含其的细胞培养支架用织物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供细胞培养支架用纱线。本发明一实施例的纱线包括捻丝的多条单纱,为了防止培养细胞的密度依赖性抑制(density‑dependent inhibition)以及提高细胞接触比表面积,在捻丝的多条单纱中至少一部分被解捻并在单纱之间形成隔开的空间。由此,通过纱线实现适合培养的细胞的迁移、增殖、分化的微环境,因而可提高细胞增殖率及存活率。并且,在有限的支架空间中最大限度的实现细胞的增殖空间,从而可同时培养大量细胞,防止因细胞之间的接触而引起的细胞增殖抑制现象,由此可持续细胞增殖。进一步地,可将由此培养的细胞培养成更适合于作为移植用适用于体外(in vitro)实验模型或动物体内移植用的形状或结构,可广泛应用于诸如生物反应器、细胞培养容器、体内移植用试剂盒等细胞培养领域或组织工程领域中所使用的各种产品。

Description

细胞培养支架用纱线、包含其的细胞培养支架用织物
技术领域
本发明涉及细胞培养支架用纱线,更详细地,涉及细胞培养支架用纱线、包含其的合股纱及包含其的织物,即,实现适合所培养的细胞的附着、迁移、增殖、分化的微环境,从而提高细胞的存活率,细胞可以立体增殖,防止因细胞的增殖而在有限的空间增殖的细胞之间的接触时发生的密度依赖性抑制,并提高多个细胞能够接触的比表面积。
背景技术
最近,随着用于疾病治疗的培养细胞的利用扩大,对细胞培养的关注及研究正在增加。细胞培养是一项从生物体中取出细胞并将其在体外培养的技术,将培养的细胞分化成诸如皮肤、脏器、神经等多种身体组织,并将其以移植或分化之前的状态移植到人体,同时进行生着及分化,从而可用于多种疾病治疗。
有关这种细胞培养的领域为组织工程(tissue engineering),是一门应用诸如细胞学、生命科学、工程学、医学等现有的科学领域的多学科科学,正在研究用于了解活体组织的结构和功能之间的相关性,用正常的组织代替、再生已损伤的组织或脏器的新融合技术。
在常规的细胞培养领域或利用其的组织工程领域中持续备受关注,研究或开发的课题之一是培养和分化细胞,可在具有细胞的状态下移植到人体组织的支架的有关材料、结构等的研究。
然而,迄今为止所开发的细胞培养用支架为类似于体内的结构,无法将细胞培养成立体,细胞的存活率也不高,因此,存在通过这样培养的细胞作为体外实验模型或移植用细胞不合适的问题。
并且,在细胞增殖的过程中,由于在有限的空间以二维或三维培养的多个细胞在相邻的细胞之间发生细胞生长密度依赖性抑制(density-dependent inhibition ofgrowth)现象,因此存在不能将细胞培养至目的水平的问题。
由此急需开发一种增加能够培养细胞的比表面积,同时防止可在细胞的增殖过程中发生的细胞生长密度依赖性抑制现象,从而可将细胞三维立体培养至目的水平的支架。
发明内容
技术问题
本发明是考虑到如上所述的问题而提出的,其目的在于,提供通过实现适合培养的细胞的迁移、增殖、分化的微环境来提高细胞增殖率及存活率的细胞培养支架用纱线。
并且,本发明的另一目的在于,提供可显著提高在有限的支架领域培养的细胞增殖空间的细胞培养支架用纱线。
进一步地,本发明的另一目的在于,防止基于细胞之间的接触发生的细胞生长密度依赖性抑制现象,以实现细胞能够持续增殖的环境的细胞培养支架用纱线。
同时,本发明的再一目的在于,提供可通过根据本发明的纱线广泛应用于在生物反应器、细胞培养容器、体内移植用试剂盒等细胞培养领域或组织工程领域中使用的各种产品的细胞培养支架用织物。
并且,本发明的另一目的在于,提供通过根据本发明的织物以适合活体移植的方式立体培养细胞群集并将其用作组织工程用移植体。
解决问题的方案
为了解决所述的技术问题,本发明提供如下的细胞培养支架用纱线,即,包括捻丝的多条单纱,为了防止培养细胞的密度依赖性抑制(density-dependent inhibition)以及提高细胞接触比表面积,在捻丝的多条单纱中至少一部分被解捻并在单纱之间形成隔开的空间。
根据本发明的实施例,上述单纱可以为纺纱、长丝纱后纵切纱(slitting yarn)。
并且,上述纱线的纤维形成成分可包含选自由聚苯乙烯(PS)、聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)、聚醚砜(PES)、聚偏二氟乙烯(PVDF)、聚丙烯腈(PAN)、聚二甲基硅氧烷(PDMS)、聚酰胺、聚亚烷、聚环氧烷(poly(alkylene oxide))、聚氨基酸(poly(amino acids))、聚烯丙胺(poly(allylamines)、聚磷腈(polyphosphazene)及聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物组成的组中的一种以上的非生物降解性成分,或者选自由聚己内酯(polycaprolactone)、聚二恶烷酮(polydioxanone)、聚乙醇酸(polyglycolic acid)、左旋聚丙交酯(PLLA,poly(L-lactide))、聚(外消旋-乳酸-羟基乙酸)共聚物(PLGA,poly(DL-lactide-co-glycolide))、聚乳酸(Polylactic acid)及聚乙烯醇(polyvinyl alcohol)组成的组中的一种以上的生物降解性成分。
并且,上述纱线的细度可以为20~300旦,上述单纱的细度可以为0.1~30旦。
并且,上述纵切纱可以为以具有规定的宽度的方式切割的三维网状结构的纤维网。此时,上述纤维网的基重可以为0.1~100g/m2,宽度可以为0.1~30mm。
并且,上述单纱在外部面还可具有诱导细胞的附着、迁移、生长、增殖(proliferation)及分化(differentiation)中的一种以上的生理活性成分。此时,上述生理活性成分可包含选自由单胺、氨基酸、肽、糖类(saccharide)、脂质(lipid)、蛋白质、糖蛋白(glucoprotein)、糖脂(glucolipid)、蛋白多糖、黏多醣(mucopolysaccharide)及核酸(nucleic acid)组成的组中的一种以上的化合物及细胞中的一种以上。
并且,上述细胞培养支架用纱线可用于培养选自由全能干细胞、万能干细胞、多能干细胞、寡能(oligopotent)干细胞及单干细胞组成的组中的一种以上的干细胞以及选自由造血干细胞、肝细胞、纤维细胞、上皮细胞、间皮细胞、内皮细胞、肌细胞、神经细胞、免疫细胞、脂肪细胞、软骨细胞、骨细胞、血细胞及皮肤细胞组成的组中的分化细胞中的一种以上的细胞。
并且,提供包含根据本发明的纱线的细胞培养支架用织物。
并且,本发明提供一种组织工程用移植体,其特征在于,包含:根据本发明的织物;以及通过与包含在上述织物的细胞培养支架用纱线相接触来培养的多个细胞。
根据本发明一实施例,多个细胞以与从上述细胞培养支架用纱线隔开的多个单纱相接触的方式存在,在上述多个细胞中,单纱置于相邻的细胞之间以可防止细胞之间的接触。
并且,上述细胞包含选自由全能干细胞、万能干细胞、多能干细胞、寡能干细胞及单干细胞组成的组中的一种以上的干细胞以及选自由造血干细胞、肝细胞、纤维细胞、上皮细胞、间皮细胞、内皮细胞、肌细胞、神经细胞、免疫细胞、脂肪细胞、软骨细胞、骨细胞、血细胞及皮肤细胞组成的组中的分化细胞中的一种以上。
以下,对本发明中使用的术语进行说明。
本发明的“细胞外基质(extracellular matrix,ECM)”是指作为包围细胞的外部的基质,占据细胞与细胞之间,主要具有由蛋白质和多糖组成的网状结构。
本发明的“模体”是包含氨基酸序列的肽,上述肽包含在对细胞的附着、迁移、分化等起到关键作用的细胞外基质内蛋白质、糖蛋白等,并与以贯通细胞膜的表面或膜的方式具有的受体可在结构上或功能上相互作用,包括所有从细胞中分离或者采用基因克隆(Gene cloning)技术人工生产的。
本发明的“三维细胞群集”(3dimension cell cluster)是指细胞以三维立体形式聚集的形状。
发明的效果
根据本发明,通过纱线实现适合培养的细胞的迁移、增殖、分化的微环境纱线,从而可提高细胞增殖率及存活率。
并且,在有限的支架空间中最大限度的实现细胞的增殖空间,从而可培养大量的细胞,防止基于细胞之间的接触的细胞增殖抑制现象,由此可持续细胞增殖。
进一步地,随着能够培养细胞的比表面积的增加,细胞的增殖速度增加,所增殖的细胞群集之间距离变宽,不妨碍细胞群集之间的增殖,因此可实现更加改进的培养性。
同时,所增加的细胞群集之间距离对细胞的迁移性增加选择迁移途径的自由度,从而可进一步增加附着、迁移及增殖速度。可将由此培养的细胞立体培养成更适合作为移植用适用于在体外实验模型或动物体内的形状或结构,可广泛应用于在诸如生物反应器、细胞培养容器、体内移植用试剂盒等细胞培养领域或组织工程领域中使用的各种产品。
附图说明
图1为根据本发明一实施例的纱线的立体图及部分放大图。
图2为根据本发明一实施例的纱线的立体图。
图3a及图3b为包括在本发明一实施例的纵切纱的一例,图3a为制备成纵切纱之前的纤维网状态的放大照片,图3b为制备成纵切纱之后的放大照片。
图4为根据本发明一实施例的纱线的分解立体图,是有关用纵切纱作为单纱捻丝的纱线的图。
图5为细胞被根据本发明一实施例的纱线中多个单纱包围培养的扫描电子显微镜(SEM)照片。
图6为在根据本发明一实施例的纱线中单纱表面培养细胞群集的扫描电子显微镜照片。
图7为用于制备包括在本发明一实施例的纵切纱的1.7M 宽幅纳米纤维网的照片(图7的(a)部分)及上述纳米纤维网的扫描电子显微镜照片(图7的(b)部分)。
图8为示出用于制备包括在本发明一实施例的纵切纱的中间步骤的照片,图8的(a)部分为以50mm的宽度第一次切割的纵切纱照片,图8的(b)部分为示出以1.5mm的宽度精确切割上述第一次切割的纱的过程的照片,图8的(c)部分为示出卷绕通过图8的(b)部分制备的宽度为1.5mm的纵切纱的过程的照片。
图9a为关于根据本发明一实施例的细胞支架用纱线放入制备工序中解捻之前的纱线的扫描电子显微镜照片。
图9b为部分解捻根据图9a的纱线来制备的根据本发明一实施例的细胞支架用纱线的扫描电子显微镜照片。
图10为合股根据本发明一实施例的纵切纱后的通过捻丝卷绕在圆柱体的照片(图10的(a)部分)和捻丝的纵切纱的电子显微镜照片(图10的(b)部分)。
具体实施方式
最佳实施方式
以下,参照附图,对本发明的实施例进行详细说明,以使本发明所属技术领域的普通技术人员能够容易实施。本发明可由多种不同形态实现,并不限定于在此说明的实施例。为了明确说明本发明,在附图中省略了与说明无关的部分,在整个说明书中,对于相同或类似的结构要素标记相同附图标记。
如图1所示,根据本发明一实施例的细胞培养支架用纱线10包含捻丝的多条单纱1、单纱2、一部分或所有捻丝的多条单纱解捻形成的单纱之间隔开的空间。
在通过捻丝多条单纱来以没有单纱之间隔开的空间的方式实现纱线的情况下,附着在纱线的细胞无法进入纱线的颞部,沿着外部面二维或三维增殖的倾向性高。但是,在此情况下,假设二维增殖的,能够培养细胞的面积局限于细胞培养用支架的外部面,存在利用有限的体积的支架可能难以增殖到目的水平的量的细胞的问题。这些细胞对增殖成狭长形的肌细胞、神经细胞、成纤维细胞等细胞或干细胞具有更大的影响,为了解决此问题而增加支架的体积可能不是理想的方法,因为需要变更细胞培养容器、培养装置。
另一方面,在细胞增殖时细胞之间的接触增加的情况下,细胞分裂速度变慢,在某一瞬间可能处于停止增殖的状态,将其称为细胞生长的密度依赖性抑制现象。在除了异常细胞如癌细胞之外的正常细胞的情况下,均具有这种特性,在有限的空间培养的细胞的情况下,若继续增殖且增殖的细胞的密度大于规定水平,则由于细胞之间过度接触,细胞增殖速度会变慢最终进入静止状态。在这种现象发生在用于有意培养细胞的体外环境的情况下,存在不能以目的水平的量、形状等培养细胞的问题。为了解决此问题,持续研究结果发现,通过调节有限长度的细胞支架用纱线的体积来显著提高细胞能够接触的纱线的表面积,同时间接防止提高的细胞之间的接触,单纱位于相邻的细胞之间,从而可直接防止细胞之间接触,从而完成了本发明。
参照图1进行说明,多条单纱1、单纱2以任意单方向捻丝,但是通过解捻在单纱1、单纱2之间隔开形成空间。在此情况下,纱线10的体积按照所形成的隔开空间的体积增加,因此具有纱线10的外部面的表面积增加的效果。并且,随着纱线10的内部具有空间,细胞可通过迁移位于纱线10的外部面和内部空间的单纱来增殖,具有能够培养细胞的支架的表面积进一步增加的优点。并且,在此情况下,在纱线10的外部面增殖的多个细胞和在纱线的内部增殖的多个细胞通过位于其之间的单纱来直接防止细胞之间接触,从而可防止细胞生长密度依赖性抑制现象。同时,多个细胞在纱线10的外部及内部培养,而不是沿着纱线10的外部面二维培养,最终更加有利于获得立体生长的细胞群集。但是,若过度解捻,由于隔开的空间太大,细胞的大小小的多个细胞可能脱离支架,因此应以确保适当的隔开空间的方式解捻,优选地以增加单纱的数量的方式来隔开,以便确保有利于细胞生长的表面积。
另一方面,如图1所示,单纱之间隔开形成的空间可形成于细胞支架用纱线的全部区域,或者如图2所示,还有可能只有捻丝的纱线10'的一部分A被解捻,以形成单纱之间隔开的空间。
解捻上述捻丝的纱线10、纱线10'的程度可通过考虑所要培养的细胞的种类、大小、细胞聚集体的形状及大小来确定。但是,在过度解捻的情况下,可增加纱线的膨松性,但是纱线的机械强度变弱,在细胞培养环境具有外部的物理力量的情况下,作为一例,在以持续循环培养液方式培养细胞而不是静置的状态培养细胞的情况下,可存在细胞培养液的流体力膨松性过度增加的纱线不能稳定地支撑细胞,培养的细胞从指甲脱离的问题。由此,作为一例,作为捻丝的纱线的合股纱的捻数可以为100~5000T/m,对于解捻这种纱线的程度的根据下述数学式1的解捻率可以为10~60%。
数学式1
解捻率(%)= (解捻后的纱线长度(m)-合股纱的长度(m))×100/合股纱的长度(m)
上述纱线的细度可通过考虑成为培养对象的细胞的种类、大小来确定,优选地,可以为20~300旦。若细度小于20旦,则由于附着细胞的比表面积减少,可能难以制备目的水平的细胞群集,通过纱线制备织物时存在造织性下降的隐患。并且,在细度大于300旦的情况下,支架的直径过大,载入的细胞可通过增殖来断断续续地生长,而不是形成立体群集,可能难以获得具有均匀的大小、形状的细胞群集。
并且,纱线中可具有多条单纱,但是,可适当的改变纱线中具有的单纱的数量,以适合待培养的细胞的种类、大小、细胞聚集体的形状及大小,因此本发明对此并没有特别的限制。
上述纱线中具有的单纱1、单纱1'、单纱2、单纱2'可以为纺纱、长丝纱或纵切纱(slitting yarn)。
在上述单纱为纺纱或长丝纱的情况下,细度可以为0.1~30旦。但是,并不限定于此,可改成适合待培养的细胞的种类、大小、细胞聚集体的形状及大小。
并且,上述纺纱可采用公知的方法通过原棉制备。并且,上述长丝纱可采用公知的方法通过纺丝制备的,上述纺丝可以为公知的纺丝方法,如化学纺丝或电纺丝。
并且,上述纵切纱可以通过将片状的纤维聚集体、织物等切割成规定宽度的方式制备。优选地,上述纵切纱可以为将具有三维网状结构的片状纤维网切割成规定的宽度的单纱。此时,以规定压力压缩上述纤维网来提高纵切工序容易性,并可增加纵切纱的强度。作为一例,图3a示出通过压缩具有三维网状结构的片状纳米纤维网并将其切割成规定的宽度的情况下,可制备如图3b所示的纵切纱。由于诸如构成纤维网的纳米纤维之类的微纤维,细胞可更牢固地附着在通过三维网状结构的纤维网实现的纵切纱上。并且,在培养细胞的大小小的情况下,纤维网内部的微空间还可提供培养细胞的另一培养空间。同时,由于细胞培养溶液可通过纤维网,由这些捻丝及部分或全部解捻的纱线本身也具有通过细胞培养液的能力,从而具有更稳定且高效率培养细胞的优点。
上述纵切纱可以为将基重为0.1~100g/m2,优选地为0.1~50g/m2,更加优选地为0.1~20g/m2的纤维网切割成宽度为0.1~30mm 的单纱。在纵切成宽度小于0.1mm的情况下,存在易于切割,且因捻丝、部分或全部解捻时施加的张力和旋转力而容易被折断的问题。并且,在纵切成宽度大于30mm的情况下,存在捻丝时发生不均匀的扭结的问题。并且,正在纵切纱的基重小于0.1g/m2的情况下,由于纵切纱的机械强度变弱,不能稳定培养细胞,在通过纵切纱制备织物的情况下, 具有纺织性下降的问题。并且,在纵切纱的基重大于100g/m2的情况下,由于纳米纤维网的压力变大,作为细胞培养用支架的纳米纤维网的特性下降,细胞无法向纳米纤维网的内部迁移,因此存在只能沿着外部表面二维生长的倾向性可能进一步增加的问题。
如图4所示,所述的纵切纱可通过合股第一纵切纱21及第二纵切纱22并捻丝后全部被解捻,来实现在纵切纱21、纵切纱22之间包括隔开空间的细胞培养支架用纱线20。
所述的单纱1、单纱1'、单纱2、单纱2'、单纱21、单纱22可以为可用纤维状制备的公知的纤维形成成分实现的,可根据单纱种类选择适当的材质来实现,可根据特定目的选择材质,如要求分解性,因而,本发明对此并没有特别的限制。上述纤维形成成分可包含诸如面、麻之类的纤维素成分、诸如羊毛、丝绸之类的蛋白质成分或诸如矿物质之类的天然纤维成分。或者,上述纤维形成成分可以为公知的人造纤维成分。
另一方面,上述纤维形成成分根据目的可包含选自由聚苯乙烯(PS)、聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)、聚醚砜(PES)、聚偏二氟乙烯(PVDF)、聚丙烯腈(PAN)、聚二甲基硅氧烷(PDMS)、聚酰胺、聚亚烷、聚环氧烷(poly(alkylene oxide))、聚氨基酸(poly(aminoacids))、聚烯丙胺(poly(allylamines)、聚磷腈(polyphosphazene)及聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物组成的组中的一种以上的非生物降解性成分,或选自由聚己内酯(polycaprolactone)、聚二恶烷酮(polydioxanone)、聚乙醇酸(polyglycolic acid)、左旋聚丙交酯(PLLA,poly(L-lactide))、聚(外消旋-乳酸-羟基乙酸)共聚物(PLGA,poly(DL-lactide-co-glycolide))、聚乳酸(Polylactic acid)及聚乙烯醇(polyvinyl alcohol)组成的组中的一种以上的生物降解性成分。
并且,所述的多个单纱还可具有除了纤维形成成分之外的功能性物质。作为上述功能性物质的一例,上述单纱还可具有诱导细胞的附着、迁移、生长、增殖(proliferation)及分化(differentiation)中的一种以上的生理活性成分。上述生理活性物质可包含选自由单胺、氨基酸、肽、糖类(saccharide)、脂质(lipid)、蛋白质、糖蛋白(glucoprotein)、糖脂(glucolipid)、蛋白多糖、黏多醣(mucopolysaccharide)及核酸(nucleic acid)组成的组中的一种以上的化合物及细胞中的一种以上。具体地,上述多个物质可以为存在于细胞外基质的上述材质的物质。
另一方面,上述生理活性成分还可包含模体。上述模体可以为包含规定的氨基酸序列的天然肽或重组肽,上述氨基酸序列包含在选自包含生长因子(growth factor)或细胞外基质(extracellular matrix)的蛋白质、糖蛋白及蛋白多糖中的一种以上。具体地,上述模体可包含选自由肾上腺髓质素(Adrenomedullin)、促血管新生蛋白因子(Angiopoietin)、骨成型蛋白质(BMP)、脑源性神经营养因子(BDNF)、表皮生长因子(EGF)、红细胞生成素(Erythropoietin)、成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factor)、神经胶质源神经营养因子(GDNF)、粒细胞集落刺激因子(Granulocytecolony-stimulatingfactor,G-CSF)、粒巨噬细胞集落刺激因子(Granulocytemacrophage colony-stimulatingfactor,GM-CSF)、生长分化因子-9(Growthdifferentiation factor-9,GDF9)、肝细胞生长因子(HGF)、肝癌衍生生长因子(Hepatoma-derived growth factor,HDGF)、胰岛素样生长因子(Insulin-like growth factor,IGF)、角质化细胞生长因子(Keratinocyte growthfactor,KGF)、促移行因子(Migration-stimulatingfactor,MSF)、肌骨素(Myostatin,GDF-8)、神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)、血小板源生长因子(Platelet-derivedgrowth factor,PDGF)、促血小板生成素(Thrombopoietin,TPO)、T-细胞生长因子(T-cellgrowth factor,TCGF)、神经菌毛素,转化生长因子-α(TGF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6及IL-7组成的组中的一种以上的生长因子(GF)中包含的规定氨基酸序列。或者,可包含透明质酸、硫酸肝素、硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸角质素、藻酸盐、纤维蛋白、纤维蛋白原、胶原蛋白,弹性蛋白、纤维连接蛋白、比特连蛋白、钙黏着蛋白及层粘连蛋白组成的组中的一种以上的细胞外基质(extracellular matrix)中包含的规定的氨基酸的序列。并且,上述模体还可包含所有生长因子中包含的的规定的氨基酸系列及上述细胞外基质中包含的规定的氨基酸序列。更优选地,上述模体可包含选自包含系列8至序列28的氨基酸序列而成的蛋白质及由至少两个这些蛋白质融合而成的蛋白质组成的组中的一种以上,但并不限定于此。
另一方面,还可将上述模体共价结合到所述的粘结成分来实现一体。作为一例,在上述粘结成分为蛋白质的情况下,可将上述模体直接共价结合在多肽的N-末端和/或C-末端,或者可介于异类的肽或多肽来共价结合,在此情况下,生理活性成分能够更牢固地附着在支架纤维,并可最小化生理活性成分的细胞培养中的脱离。
并且,上述生理活性成分可包含公知的红蛤蛋白质或红蛤蛋白质中特定结构域或模体,用于增加细胞的附着性。
上述生理活性物质可固定于单纱表面,作为一例,上述成分可通过涂覆工序形成在单纱表面。或者,可在用于制备单纱的纺丝助液上一同混合上述生理活性物质与纤维形成成分,来在纤维制备步骤中已包含上述生理活性物质。在此情况下,具有不用通过额外的涂覆工序或粘结成分也可在制备的单纱外部面容易提供生理活性物质的优点。
另一方面,在本发明中,通过所述的根据本发明的纱线或合股这些的纱线来实现细胞培养用织物。
上述织物可以为织物、编织物、无纺布之一,可根据目的改变其形态来制备。上述织物、编织物及无纺布可通过公知的各个实现方法来实现。作为一例,上述织物可以为通过使用经丝和纬丝中的一种以上来斜纹制备所述的纱线或合股这些的纱线的斜纹布。并且,作为一例,上述编织物可以为将所述的纱线或合股这些的纱线投入横机来维编的平板。并且,作为一例,上述无纺布可以为在以规定纤维长度切割纱线或合股这些的纱线的单纱(short-cut yarn)添加粘结成分并施加热量或压力来制备的。
并且,本发明可实现包含在根据本发明的所述的织物中移植培养细胞培养的多个细胞的组织工程用移植体。此时,上述培养细胞在包括纱线的外部面及解捻的单纱之间隔开的空间的部分,随着细胞向上述空间移动并培养,培养的细胞可位于纱线的内部。此时,在培养的多个细胞中,隔开的多个单纱可位于相邻的多个细胞之间,在此情况下,可直接防止相邻的细胞之间的接触,因此更加有利于细胞培养。参照图5说明,多条单纱3、单纱4、单纱5、单纱6、单纱7包括隔开的空间,可确认上述空间内第一细胞100与多条单纱3、单纱4、单纱5、单纱6、单纱7接触培养。此时,为了使与上述单纱3、单纱4、单纱5、单纱6、单纱7中的一种以上接触,在培养另一第二细胞(未图示)的情况下,第一细胞100及第二细胞(未图示)也因相邻的多条单纱而被分离,因而可通过防止接触来防止密度依赖性抑制现象。
并且,与图5不同,如图6所示,培养细胞可附着在第一单纱8的外部面以培养第一细胞群集A,或可以附着在隔开的第二单纱9的外部面以培养第二细胞群集B。此时,随着第一细胞群集A及第二细胞群集B之间距离变远,包括在各群集的多个细胞移动时,选择移动途径的自由度增加,移动速度、增殖速度进一步增加,因此,具有有利于细胞培养的优点。
另一方面,上述细胞可包含选自由全能干细胞、万能干细胞、多能干细胞、寡能干细胞及单干细胞组成的组中的一种以上的干细胞以及选自由造血干细胞、肝细胞、纤维细胞、上皮细胞、间皮细胞、内皮细胞、肌细胞、神经细胞、免疫细胞、脂肪细胞、软骨细胞、骨细胞、血细胞及皮肤细胞组成的组中的分化细胞中的一种以上。作为一例,上述细胞可以为具有在单方向具有狭长的形状的细胞或移动性强的细胞。并且,例如,作为上述细胞,更适合使用具有培养成集落形态的倾向的干细胞种类。
并且,在用对人体无害的纤维形成成分实现上述织物的材质的情况下,具有可向人体内直接移植附着有培养的细胞的支架,由此更加容易且稳定地向组织内生着培养的细胞。
具体实施方式
以下,通过实施例进一步详细说明本发明。对于本技术领域的技术人员而言,这些实施例仅用于例示本发明,本发明的范围不应被解释为限定于这些实施例是显而易见的。
实施例1
在作为混合溶液的DMAc/丙酮(Acetone)中以15重量百分比溶解作为纤维形成成分的PVDF来制备了纺丝溶液。利用电纺丝装置电纺丝上述所制备的纺丝溶液,作为电纺丝条件,施加电压为25KV、集电体与纺丝口的距离为25cm、排出量为0.05ml/hole,在RH 65%30℃的环境下,实施电纺丝,获得了宽度为1.5m、重量为5g/㎡、长度为500m的纳米纤维网辊(Roll)。图7的(a)部分为卷绕所制备的纳米纤维网的照片,图7的(b)部分为示出为纳米纤维网的扫描电子显微镜照片。如图7的(b)部分所示,形成纳米纤维网的纳米纤维的平均直径约为230nm。
如图8的(a)部分所示,以5mm的宽度纵切所制备的纳米纤维网的辊后,如图8的(b)部分所示,通过以使各个宽度为1.5mm的方式进行第二次纵切来获得纵切纱,图8的(c)部分示出在第二次精确纵切过程中所制备的纵切纱的卷绕照片。如图3(b)所示,所制备的纵切纱的宽度为1.5mm。使用2合1捻丝机,以700T/M(T/M,捻度/米)Z捻两条所制备的纵切纱,如图9a所示捻丝后,制备了以在相反方向上的根据下述数学式1的解捻率为25%的方式解捻的如图9b所示的细胞支架用纱线。
数学式1
解捻率(%)= (解捻后的纱线长度(m)- 合股纱的长度(m))×100 /合股纱的长度(m)
比较例1
除了利用2 合1捻丝机,以700T/M(T/M,捻度/米)Z捻两条纵切纱来捻丝之外,其余以与实施例1相同的方式制备了如图10的(a)部分及图10的(b)部分所示的细胞支架用纱线。
比较例2
除了未捻丝所制备的两条纵切纱之外,其余以与实施例1相同的方式制备了细胞支架用图10的(a)部分及图10的(b)部分所示的纱线。
实验例
在细胞培养用孔板(well plate)并排排列固定多条在实施例及比较例中制备的细胞支架用纱线。向具有细胞支架用纱线的孔板加载5×104、2.75×105或2×104的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)后,在DMEM+FBS或KBS-3基础培养基(Basalmedium)中在37℃的温度下增殖4天。
随后,对于培养的间充质干细胞(MSC)染色AP或中性红色溶液(Neutral redsolution)后,在培养箱中放置10分钟左右后,通过倒置显微镜观察染色的细胞,或者加入胰蛋白酶-EDTA在培养箱中放置5分钟左右后,通过血液计数室(bloodcounting chamber)求细胞数。另一种方法为利用细胞计数试剂盒8(CCK -8)染色后,利用紫外可见光谱仪(UV-vis spectrometer)测定吸光度。此时,对照(control)使用了在细胞培养皿(cell culturedish)中以相同的培养条件2D培养的。
在通过实施例和比较例测定的吸光度中,以实施例1的吸光度为100%基准,在下述表1中相对示出比较例1及比较例2的吸光度。
可评价为吸光度越高,将细胞置于细胞支架用纱线后培养越好。
表1
实施例1 比较例1 比较例2
相对吸光度(%) 100 82 87
可通过表1 确认,与比较例相比,在根据实施例1的细胞支架用纱线中,间充质干细胞的安置及培养更佳。
实验例2。
细胞培养用孔板并排排列固定多条在实施例1中制备的细胞培养支架用纱线。向具有纱线的空板加载成纤维细胞(HS27)后,在10%的完全培养基中37℃下增殖2天。此时,10%的完全培养基中,以1:1.5的体积比混合达尔伯克改良伊格尔培养基与Ham's F12培养基后,加入7体积百分比的胎牛曲血清(fetal bovineserum)、65 U/mL的青霉素及65µm/mL的链霉素来制备。随后,对增殖的成纤维细胞拍摄扫描电子显微镜照片,如图5所示,DAPI染色后,通过共聚焦显微镜(Confocal microscope)拍摄照片,如图6所示。
通过图5及图6,可确认在部分被解捻形成的多条单纱的隔开空间中成纤维细胞接触并被培养,可以预期,在成纤维细胞安置于在图5中确认的另一隔开空间上的情况下,可三维培养成纤维细胞。
下述表2示出在本发明中说明的对于序列的氨基酸序列。
表2
序列编号 氨基酸序列
1 Met Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys ProSer Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro ProThr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys AlaLys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser TyrPro Pro Thr Tyr Lys Ser Ser Glu Glu Tyr Lys Gly GlyTyr Tyr Pro Gly Asn Thr Tyr His Tyr His Ser Gly GlySer Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr Lys GlyLys Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys TyrLys Asn Ser Gly Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala ArgLys Tyr His Arg Lys Gly Tyr Lys Lys Tyr Tyr Gly GlySer Ser Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala LysPro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr ProPro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr LysAla Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro SerTyr Pro Pro Thr Tyr Lys
2 Met Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys ProSer TyrPro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro ProThr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys AlaLys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser TyrPro Pro Thr Tyr Lys Ser Ser Glu Glu Tyr Lys Gly GlyTyr Tyr Pro Gly Asn Thr Tyr His Tyr His Ser Gly GlySer Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr Lys GlyLys Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys TyrLys Asn Ser Gly Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala ArgLys Tyr His Arg Lys Gly Tyr Lys Lys Tyr Tyr Gly GlySer Ser Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala LysPro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr ProPro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr LysAla Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro SerTyr Pro Pro Thr Tyr Lys Gly Arg Gly Asp Ser Pro
3 Met Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys ProSer TyrPro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro ProThr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys AlaLys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser TyrPro Pro Thr Tyr Lys Pro Trp Ala Asp Tyr Tyr Gly Pro LysTyr Gly Pro Pro Arg Arg Tyr Gly Gly Gly Asn Tyr AsnArg Tyr Gly Arg Arg Tyr Gly Gly Tyr Lys Gly Trp AsnAsn Gly Trp Lys Arg Gly Arg Trp Gly Arg Lys Tyr TyrGly Ser Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys AlaLys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser TyrPro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr TyrLys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys ProSer Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Leu
4 Ala Asp Tyr Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Pro Pro Arg ArgTyr Gly GlyGly Asn Tyr Asn Arg Tyr Gly Arg Arg Tyr GlyGly Tyr Lys Gly Trp Asn Asn Gly Trp Lys Arg Gly ArgTrp Gly Arg Lys Tyr Tyr
5 Ser Ser Glu Glu Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly AsnThr Tyr HisTyr His Ser Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser GlyTyr His Gly Gly Tyr Lys Gly Lys Tyr Tyr Gly Lys Ala LysLys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys Asn Ser Gly Lys Tyr LysTyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg Lys Gly TyrLys Lys Tyr Tyr Gly Gly Gly Ser Ser
6 Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys
7 Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro SerTyr ProPro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro ThrTyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala LysPro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr ProPro Thr Tyr Lys
8 Arg Gly Asp
9 Arg Gly Asp Ser
10 Arg Gly Asp Cys
11 Arg Gly Asp Val
12 Arg Gly Asp Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
13 Gly Arg Gly Asp Ser
14 Gly Arg Gly Asp Thr Pro
15 Gly Arg Gly Asp Ser Pro
16 Gly Arg Gly Asp Ser Pro Cys
17 Tyr Arg Gly Asp Ser
18 Ser Pro Pro Arg Arg Ala Arg Val Thr
19 Trp Gln Pro Pro Arg Ala Arg Ile
20 Asn Arg Trp His Ser Ile Tyr Ile Thr Arg Phe Gly
21 Arg Lys Arg Leu Gln Val Gln Leu Ser Ile Arg Thr
22 Lys Ala Phe Asp Ile Thr Tyr Val Arg Leu Lys Phe
23 Ile Lys Val Ala Asn
24 Lys Lys Gln Arg Phe Arg His Arg Asn Arg Lys Gly TyrArg Ser Gln
25 Val Ala Glu Ile Asp Gly Ile Gly Leu
26 Pro His Ser Arg Asn Arg Gly Asp Ser Pro
27 Asn Arg Trp His Ser Ile Tyr Ile Thr Arg Phe Gly
28 Thr Trp Tyr Lys Ile Ala Phe Gln Arg Asn Arg Lys
以上,对本发明的一实施例进行了说明,但本发明的思想并不限定于在本说明书中提出的实施例,理解本发明的思想的本技术领域的技术人员在相同的思想范围内,可根据结构要素的附加、变更、删除、添加等来易于提出其他实施例,但这也应属于本发明的思想范围内。
序列表
<110> 阿莫生命科学有限公司
<120> 细胞培养支架用纱线、包含其的细胞培养支架用织物
<130> KRS18468F
<150> KR 10-2016-0063692
<151> 2016-05-24
<160> 28
<170> PatentIn version 3.2
<210> 1
<211> 196
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 细胞培养支架的基序
<400> 1
Met Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr
1 5 10 15
Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala
20 25 30
Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro
35 40 45
Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ser Ser Glu
50 55 60
Glu Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Thr Tyr His Tyr His Ser
65 70 75 80
Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr Lys Gly Lys
85 90 95
Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys Asn Ser Gly
100 105 110
Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg Lys Gly Tyr
115 120 125
Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Ser Ser Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr
130 135 140
Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser
145 150 155 160
Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys
165 170 175
Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro
180 185 190
Pro Thr Tyr Lys
195
<210> 2
<211> 202
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 细胞培养支架的基序
<400> 2
Met Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr
1 5 10 15
Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala
20 25 30
Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro
35 40 45
Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ser Ser Glu
50 55 60
Glu Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Thr Tyr His Tyr His Ser
65 70 75 80
Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr Lys Gly Lys
85 90 95
Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys Asn Ser Gly
100 105 110
Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg Lys Gly Tyr
115 120 125
Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Ser Ser Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr
130 135 140
Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser
145 150 155 160
Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys
165 170 175
Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro
180 185 190
Pro Thr Tyr Lys Gly Arg Gly Asp Ser Pro
195 200
<210> 3
<211> 172
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 细胞培养支架的基序
<400> 3
Met Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr
1 5 10 15
Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala
20 25 30
Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro
35 40 45
Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Pro Trp Ala
50 55 60
Asp Tyr Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Pro Pro Arg Arg Tyr Gly Gly Gly
65 70 75 80
Asn Tyr Asn Arg Tyr Gly Arg Arg Tyr Gly Gly Tyr Lys Gly Trp Asn
85 90 95
Asn Gly Trp Lys Arg Gly Arg Trp Gly Arg Lys Tyr Tyr Gly Ser Ala
100 105 110
Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro
115 120 125
Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro
130 135 140
Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr
145 150 155 160
Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Leu
165 170
<210> 4
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 细胞培养支架的基序
<400> 4
Ala Asp Tyr Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Pro Pro Arg Arg Tyr Gly Gly
1 5 10 15
Gly Asn Tyr Asn Arg Tyr Gly Arg Arg Tyr Gly Gly Tyr Lys Gly Trp
20 25 30
Asn Asn Gly Trp Lys Arg Gly Arg Trp Gly Arg Lys Tyr Tyr
35 40 45
<210> 5
<211> 76
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 细胞培养支架的基序
<400> 5
Ser Ser Glu Glu Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Thr Tyr His
1 5 10 15
Tyr His Ser Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr
20 25 30
Lys Gly Lys Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys
35 40 45
Asn Ser Gly Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg
50 55 60
Lys Gly Tyr Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Gly Ser Ser
65 70 75
<210> 6
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 细胞培养支架的基序
<400> 6
Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys
1 5 10
<210> 7
<211> 60
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 细胞培养支架的基序
<400> 7
Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro
1 5 10 15
Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys
20 25 30
Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr
35 40 45
Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys
50 55 60
<210> 8
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 细胞培养支架的基序
<400> 8
Arg Gly Asp
1
<210> 9
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 细胞培养支架的基序
<400> 9
Arg Gly Asp Ser
1
<210> 10
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 细胞培养支架的基序
<400> 10
Arg Gly Asp Cys
1
<210> 11
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 细胞培养支架的基序
<400> 11
Arg Gly Asp Val
1
<210> 12
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 细胞培养支架的基序
<400> 12
Arg Gly Asp Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
1 5 10
<210> 13
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 细胞培养支架的基序
<400> 13
Gly Arg Gly Asp Ser
1 5
<210> 14
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 细胞培养支架的基序
<400> 14
Gly Arg Gly Asp Thr Pro
1 5
<210> 15
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 细胞培养支架的基序
<400> 15
Gly Arg Gly Asp Ser Pro
1 5
<210> 16
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 细胞培养支架的基序
<400> 16
Gly Arg Gly Asp Ser Pro Cys
1 5
<210> 17
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 细胞培养支架的基序
<400> 17
Tyr Arg Gly Asp Ser
1 5
<210> 18
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 细胞培养支架的基序
<400> 18
Ser Pro Pro Arg Arg Ala Arg Val Thr
1 5
<210> 19
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 细胞培养支架的基序
<400> 19
Trp Gln Pro Pro Arg Ala Arg Ile
1 5
<210> 20
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 细胞培养支架的基序
<400> 20
Asn Arg Trp His Ser Ile Tyr Ile Thr Arg Phe Gly
1 5 10
<210> 21
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 细胞培养支架的基序
<400> 21
Arg Lys Arg Leu Gln Val Gln Leu Ser Ile Arg Thr
1 5 10
<210> 22
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 细胞培养支架的基序
<400> 22
Lys Ala Phe Asp Ile Thr Tyr Val Arg Leu Lys Phe
1 5 10
<210> 23
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 细胞培养支架的基序
<400> 23
Ile Lys Val Ala Asn
1 5
<210> 24
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 细胞培养支架的基序
<400> 24
Lys Lys Gln Arg Phe Arg His Arg Asn Arg Lys Gly Tyr Arg Ser Gln
1 5 10 15
<210> 25
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 细胞培养支架的基序
<400> 25
Val Ala Glu Ile Asp Gly Ile Gly Leu
1 5
<210> 26
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 细胞培养支架的基序
<400> 26
Pro His Ser Arg Asn Arg Gly Asp Ser Pro
1 5 10
<210> 27
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 细胞培养支架的基序
<400> 27
Asn Arg Trp His Ser Ile Tyr Ile Thr Arg Phe Gly
1 5 10
<210> 28
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 细胞培养支架的基序
<400> 28
Thr Trp Tyr Lys Ile Ala Phe Gln Arg Asn Arg Lys
1 5 10

Claims (12)

1.一种细胞培养支架用纱线,其特征在于,
包括捻丝的多条纵切纱,
为了防止培养细胞的密度依赖性抑制以及提高细胞接触比表面积,在捻丝的多条纵切纱中至少一部分被解捻并在纵切纱之间形成隔开的空间,
其中上述纵切纱为以具有规定的宽度的方式切割的三维网状结构的纳米纤维网,并且
解捻率表示解捻所述包括捻丝的纵切纱的程度,由下述数学式1表示,所述解捻率为10~60%,
数学式1:
解捻率(%)= (解捻后的纱线长度(m)-合股纱的长度(m))×100/合股纱的长度(m)。
2.根据权利要求1所述的细胞培养支架用纱线,其特征在于,上述纵切纱的纤维形成成分包含选自由聚苯乙烯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚醚砜、聚偏二氟乙烯、聚丙烯腈、聚二甲基硅氧烷、聚酰胺、聚亚烷、聚环氧烷、聚氨基酸、聚烯丙胺、聚磷腈及聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物组成的组中的一种以上的非生物降解性成分或者选自由聚己内酯、聚二恶烷酮、聚乙醇酸、左旋聚丙交酯、聚(外消旋-乳酸-羟基乙酸)共聚物、聚乳酸及聚乙烯醇组成的组中的一种以上的生物降解性成分。
3.根据权利要求1所述的细胞培养支架用纱线,其特征在于,上述细胞培养支架用纱线的细度为20~300旦。
4.根据权利要求1所述的细胞培养支架用纱线,其特征在于,上述纵切纱的细度为0.1~30旦。
5.根据权利要求1所述的细胞培养支架用纱线,其特征在于,上述纳米纤维网的基重为0.1~100g/m2,宽度为0.1~30mm。
6.根据权利要求1所述的细胞培养支架用纱线,其特征在于,上述纵切纱在外部面还具有用于诱导细胞的附着、迁移、生长、增殖及分化中的一种以上的生理活性成分。
7.根据权利要求6所述的细胞培养支架用纱线,其特征在于,上述生理活性成分包含选自由单胺、氨基酸、肽、糖类、脂质、蛋白质、糖蛋白、糖脂、蛋白多糖、黏多醣及核酸组成的组中的一种以上的化合物以及细胞中的一种以上。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的细胞培养支架用纱线,其特征在于,上述细胞培养支架用纱线用于培养选自由全能干细胞、万能干细胞、多能干细胞、寡能干细胞及单干细胞组成的组中的一种以上的干细胞以及选自由造血干细胞、肝细胞、纤维细胞、上皮细胞、间皮细胞、内皮细胞、肌细胞、神经细胞、免疫细胞、脂肪细胞、软骨细胞、骨细胞、血细胞及皮肤细胞组成的组中的分化细胞中的一种以上的细胞。
9.一种细胞培养支架用织物,其特征在于,包含根据权利要求1至7中任一项所述的纱线。
10.一种组织工程用移植体,其特征在于,包含:
根据权利要求9所述的织物;以及
通过与包含在上述织物的细胞培养支架用纱线相接触来培养的多个细胞。
11.根据权利要求10所述的组织工程用移植体,其特征在于,
多个细胞以与从上述细胞培养支架用纱线隔开的多个纵切纱相接触的方式存在,
在上述多个细胞中,纵切纱置于相邻的细胞之间以防止细胞之间的接触。
12.根据权利要求10所述的组织工程用移植体,其特征在于,上述细胞包含选自由全能干细胞、万能干细胞、多能干细胞、寡能干细胞及单干细胞组成的组中的一种以上的干细胞以及选自由造血干细胞、肝细胞、纤维细胞、上皮细胞、间皮细胞、内皮细胞、肌细胞、神经细胞、免疫细胞、脂肪细胞、软骨细胞、骨细胞、血细胞及皮肤细胞组成的组中的分化细胞中的一种以上。
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