CN109152938A - 用于皮肤化妆或治疗用途的虎耳草提取物 - Google Patents

Abstract

提供了从虎耳草物种、大星芹、或其组合获得的提取物，和治疗或缓解受试者中炎症皮肤相关状况的方法。该方法包括施用或应用组合物，该组合物包含有效量的从虎耳草物种、大星芹、或其组合获得的提取物以及载体，其中有效量的提取物抑制肿瘤坏死因子alpha和白细胞介素‑1beta的活性。炎症可以是皮肤的炎症，并且组合物可以是外用的皮肤制剂。

Description

用于皮肤化妆或治疗用途的虎耳草提取物

技术领域

本发明涉及从虎耳草(Saxifraga)获得的提取物及其用途。

背景技术

虎耳草(Saxifraga)是多年生草本植物。该物种生长在欧洲中部和南部的伊比利亚半岛、阿尔卑斯山和巴尔干半岛。

Bastian等人2009年(Revue Suisse Vitic.Arboric.Hortic.(2009),41(6),363-367)评估了圆叶虎耳草植物地上部分中的活性化合物浓度的变化取决于它们的来源，以及根据苯丙烯酸、黄酮醇和黄酮苷含量确定最佳收获物候期。Bastian等人确定在盛开时，绿原酸(0.1％干物质，DM)、槲皮苷(0.4％DM)和鼠李糖苷(0.02％DM)的浓度最高，而杨梅素的含量(1.3％DM)在种子形成时达到最大值，与盛花期相比变化较小。

US 2015/0050316教导了来自对叶虎耳草(Saxifraga oppositifolia)、高山雪铃花(Soldanella alpina)和任选的衣藻物种(Chlamydomonas sp)的油溶性和水—乙醇提取物，以及它们在化妆品或皮肤病学制剂中的用途。

炎症涉及对有害刺激(例如病原体、感染、刺激物或对细胞的损害)应答的免疫系统的激活。当受损细胞分泌将免疫系统细胞募集到该区域的信号(例如巨噬细胞)时，局部免疫系统激活开始。巨噬细胞释放促炎细胞因子，例如白细胞介素-1β(“IL-1β”)和肿瘤坏死因子α(“TNFα”或“TNF-alpha”)。

急性炎症是身体的初始保护性反应，通过维持组织完整性和促进组织修复来去除有害刺激。严重或长期的伤害性刺激可能引起慢性炎症反应，导致组织损伤部位存在的细胞类型的进行性转变。慢性炎症可以表征为炎症过程中组织的同时破坏和愈合，其最终结果是导致损伤而不是介导修复。

需要植物和来源于植物的化合物和提取物用于皮肤应用，其是无刺激性的并且可用于缓解炎症相关的皮肤状况，例如抗老化、抗发红，或其组合。

发明内容

本发明涉及从虎耳草属(Saxifraga sp.)，大星芹(Astrantia major)或其组合获得的提取物及其用途。此外，本发明提供了从圆叶虎耳草(Saxifraga rotundifolia)，互叶金腰(Chrysosplenium alternifolium)，Saxifraga androsacea，Saxifraga asjera，Saxifraga biflora，Saxifraga bryoides，Saxifraga caesia，麝香虎耳草(Saxifragaexarata)，Saxifraga muscoides，对叶虎耳草(Saxifraga oppositifolia)，星虎耳草(Saxifraga stellaris)，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草(Saxifraga paniculata)，楔叶虎耳草(Saxifraga cuneifolia)，番杏虎耳草(Saxifraga aizoides)，Saxifragastolonifera中的一种或多种，从大星芹，及其组合中获得的提取物及其用途。

本文描述的是一种提供炎症相关的皮肤状况缓解的方法，通过给皮肤或相关组织施用包含从圆叶虎耳草(Saxifraga rotundifolia)，互叶金腰(Chrysospleniumalternifolium)，Saxifraga androsacea，Saxifraga asjera，Saxifraga biflora，Saxifraga bryoides，Saxifraga caesia，麝香虎耳草(Saxifraga exarata)，Saxifragamuscoides，对叶虎耳草(Saxifraga oppositifolia)，星虎耳草(Saxifraga stellaris)，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草(Saxifraga paniculata)，楔叶虎耳草(Saxifragacuneifolia)，番杏虎耳草(Saxifraga aizoides)，Saxifraga stolonifera中的一种或多种，从大星芹(Astrantia major)，及其组合中获得的提取物的组合物，其中所述提取物抑制或调节肿瘤坏死因子(TNF)alpha活性。所述提取物的特征在于提取物不抑制TNF-alpha产生或TNF-alpha合成的性质。与炎症相关的皮肤状况可以包括咬伤或蛰伤，皮疹，皮肤瘙痒，皮肤起泡，晒伤，皮肤灼伤，UV暴露或辐射，皮肤老化，雀斑，皮肤过敏，脱发和暴露于化学刺激物中的一种或多种。

此外，在如上文所定义的提供炎症相关的皮肤状况缓解的方法中，所述组合物可以包含来自圆叶虎耳草(Saxifraga rotundifolia)，互叶金腰(Chrysospleniumalternifolium,)，Saxifraga androsacea，Saxifraga asjera，Saxifraga biflora，Saxifraga bryoides，Saxifraga caesia，麝香虎耳草(Saxifraga exarata)，Saxifragamuscoides，对叶虎耳草(Saxifraga oppositifolia)，星虎耳草(Saxifraga stellaris)，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草(Saxifraga paniculata)，楔叶虎耳草(Saxifragacuneifolia)，番杏虎耳草(Saxifraga aizoides)，Saxifraga stolonifera中的一种或多种，来自大星芹(Astrantia major)，及其组合的提取物。

炎症相关的皮肤状况可以选自或引起自咬伤，蛰伤，皮疹，皮肤瘙痒，皮肤起泡，晒伤，雀斑，皮肤灼伤，UV暴露或辐射，皮肤老化，减少皮肤发红，减轻皮肤紧致度下降，皮肤过敏，年龄相关斑点，过敏性皮肤，牛皮癣，特应性皮炎，脱发，皮肤接触化学刺激物，皮肤接触污染物，皮肤接触污垢，皮肤接触杂质，以及它们的组合。

可以使用体外测定法监测TNF-alpha活性，其测定TNF-alpha诱导的人上皮细胞释放IL-6的浓度依赖性抑制。

可以使用体外测定法来监测TNF-alpha活性，其测定在放线菌素D(ActD)存在下，TNF-alpha对TNF-alpha敏感细胞系的剂量依赖性细胞毒性，其中所述提取物抑制外源TNF-alpha对细胞系的细胞毒性。

在TNF-alpha浓度大于1000ng/ml TNF-alpha时，所述提取物可以抑制TNF-alpha的细胞毒性。在TNF-alpha浓度为约0.01ng/ml至约1000ng/ml TNF-alpha时，所述提取物可以抑制TNF-alpha的细胞毒性。

另一方面，本发明涉及抑制IL-1β诱导的细胞应答的方法，通过施用包含来自下述虎耳草物种(Saxifraga sp.)的提取物的组合物，例如，圆叶虎耳草(Saxifragarotundifolia)，互叶金腰(Chrysosplenium alternifolium)，Saxifraga androsacea，Saxifraga asjera，Saxifraga biflora，Saxifraga bryoides，Saxifraga caesia，麝香虎耳草(Saxifraga exarata)，Saxifraga muscoides，对叶虎耳草(Saxifragaoppositifolia)，星虎耳草(Saxifraga stellaris)，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草(Saxifraga paniculata)，楔叶虎耳草(Saxifraga cuneifolia)，番杏虎耳草(Saxifragaaizoides)，Saxifraga stolonifera中的一种或多种，大星芹(Astrantia major)，及其组合。所述提取物可以是水提取物或醇/水提取物。

IL-1β诱导的细胞应答可以由下述原因引起：咬伤，蛰伤，皮疹，皮肤瘙痒，皮肤起泡，晒伤，雀斑，皮肤灼伤，UV暴露或辐射，皮肤老化，减少皮肤发红，减轻皮肤紧致度下降，皮肤过敏，年龄相关斑点，过敏性皮肤，牛皮癣，特应性皮炎，脱发，皮肤接触化学刺激物，皮肤接触污染物，皮肤接触污垢，皮肤接触杂质，以及它们的组合。

还提供了治疗或缓解皮肤状况的方法。该方法包括施用包含有效量的从圆叶虎耳草(Saxifraga rotundifolia)，互叶金腰(Chrysosplenium alternifolium)，Saxifragaandrosacea，Saxifraga asjera，Saxifraga biflora，Saxifraga bryoides，Saxifragacaesia，麝香虎耳草(Saxifraga exarata)，Saxifraga muscoides，对叶虎耳草(Saxifragaoppositifolia)，星虎耳草(Saxifraga stellaris)，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草(Saxifraga paniculata)，楔叶虎耳草(Saxifraga cuneifolia)，番杏虎耳草(Saxifragaaizoides)，Saxifraga stolonifera中的一种或多种，大星芹(Astrantia major)，及其组合中获得的提取物的组合物和载体，其中有效量的提取物抑制肿瘤坏死因子(TNF)-alpha活性，所述皮肤状况由下述原因引起：咬伤，蛰伤，皮疹，皮肤瘙痒，皮肤起泡，晒伤，雀斑，皮肤灼伤，UV暴露或辐射，皮肤老化，减少皮肤发红，减轻皮肤紧致度下降，皮肤过敏，年龄相关斑点，过敏性皮肤，牛皮癣，特应性皮炎，脱发，皮肤接触化学刺激物，皮肤接触污染物，皮肤接触污垢，皮肤接触杂质，以及它们的组合。所述组合物可以在乳膏制剂、喷雾剂、液体擦剂、洗发剂、贴剂中施用于皮肤。

本文描述的提取物显示出抑制细胞内TNF和IL1的作用的能力。此外，该提取物具有显著的抗自由基活性，并且可以用于各种应用，例如，提供下列一种或多种：缓解咬伤或蛰伤，皮疹，皮肤瘙痒，皮肤起泡，晒伤，雀斑，皮肤灼伤，皮肤发红，皮肤老化，皮肤过敏，脱发等，减少与年龄相关的斑点，保持皮肤紧致，减轻皮肤皱纹，并在应用于皮肤时表现出抗老化作用。

本发明的概述不一定描述本发明的所有特征。

附图说明

从以下参考附图的描述中，本发明的这些和其他特征将变得更加明显，其中：

图1A显示了圆叶虎耳草对TNF alpha诱导的人上皮细胞释放IL-6和IL-1β诱导的其释放IL-6的浓度效应。图1B显示了圆叶虎耳草对TNF alpha诱导的人角质形成细胞释放IL-6和IL-1β诱导的其释放IL-6的浓度影响。用从互叶金腰，Saxifraga androsacea，Saxifraga asjera，Saxifraga biflora，Saxifraga bryoides，Saxifraga caesia，麝香虎耳草，Saxifraga muscoides，对叶虎耳草，星虎耳草，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草，楔叶虎耳草，番杏虎耳草，Saxifraga stolonifera和大星芹获得的提取物得到了类似的结果(参见表2、实施例3)。

图2显示了在放线菌素D(ActD)存在下，在不存在或存在肿瘤坏死因子受体1-Fc(TNFR1-Fc)或来自圆叶虎耳草(SRX01)的水提取物的情况下，外源TNF-alpha对细胞活力的浓度效应。

图3A显示了UV光照射0、2、4、6、24和48小时后，使用比色法测定的SRX01和对照处理对皮肤颜色的影响。图3B显示了UV光照射0、2、4、6、24和48小时后，视觉测定的SRX01和对照处理对皮肤发红的影响。

具体实施方式

本发明涉及从虎耳草物种、大星芹，以及虎耳草物种和大星芹的组合获得的提取物及其用途。此外，本发明提供了圆叶虎耳草，互叶金腰，Saxifraga androsacea，Saxifraga asjera，Saxifraga biflora，Saxifraga bryoides，Saxifraga caesia，麝香虎耳草，Saxifraga muscoides，对叶虎耳草，星虎耳草，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草，楔叶虎耳草，番杏虎耳草，Saxifraga stolonifera中的一种或多种，从大星芹，及其组合中获得的提取物及其用途。

如本文所述，提供了从虎耳草物种，例如，圆叶虎耳草，互叶金腰，Saxifragaandrosacea，Saxifraga asjera，Saxifraga biflora，Saxifraga bryoides，Saxifragacaesia，麝香虎耳草，Saxifraga muscoides，对叶虎耳草，星虎耳草，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草，楔叶虎耳草，番杏虎耳草，Saxifraga stolonifera中的一种或多种，从大星芹，及其组合获得的提取物。可以使用植物材料的水提取方法获得所述提取物。所述提取物可以配制用于化妆品应用和应用于皮肤和相关组织，以缓解炎症相关的皮肤状况。所述提取物还可用于减少皮肤和相关组织中的老化(抗老化)、减少发红(抗发红)，或其组合。所述提取物也可用于减少脱发。

本公开内容还提供了一种缓解炎症相关皮肤状况的方法，通过给皮肤和相关组织施用包含来自虎耳草物种，例如圆叶虎耳草，互叶金腰，Saxifraga androsacea，Saxifragaasjera，Saxifraga biflora，Saxifraga bryoides，Saxifraga caesia，麝香虎耳草，Saxifraga muscoides，对叶虎耳草，星虎耳草，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草，楔叶虎耳草，番杏虎耳草，Saxifraga stolonifera中的一种或多种，来自大星芹，及其组合的提取物的组合物。还提供了缓解炎症相关皮肤状况，延缓皮肤和相关组织老化，减少皮肤和相关组织发红，减少雀斑，减少脱发或其组合的方法，通过给皮肤和相关组织施用包含来自圆叶虎耳草，互叶金腰，Saxifraga androsacea，Saxifraga asjera，Saxifraga biflora，Saxifraga bryoides，Saxifraga caesia，麝香虎耳草，Saxifraga muscoides，对叶虎耳草，星虎耳草，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草，楔叶虎耳草，番杏虎耳草，Saxifragastolonifera中的一种或多种，来自大星芹，及其组合的提取物的组合物。所述提取物的特征在于提取物在体外抑制TNF-alpha活性的性质。

不希望受理论束缚，来自圆叶虎耳草，互叶金腰，Saxifraga androsacea，Saxifraga asjera，Saxifraga biflora，Saxifraga bryoides，Saxifraga caesia，麝香虎耳草，Saxifraga muscoides，对叶虎耳草，星虎耳草，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草，楔叶虎耳草，番杏虎耳草，Saxifraga stolonifera中的一种或多种，来自大星芹，及其组合的提取物相关的性质，可用于减少皮肤发红，减少雀斑，减少皮肤老化，与年龄相关斑点，过敏性皮肤，牛皮癣，特应性皮炎或其组合，减少脱发，或用于缓解炎症相关的皮肤状况，可能是所述提取物抑制或调节肿瘤坏死因子(TNF)alpha活性的能力，抑制或调节抗IL1诱导的细胞反应的能力，抑制COX1、COX2活性的能力，抑制脂氧合酶活性的能力，或其组合的结果。

所述组合物可以用作化妆品，例如美容霜，并施用于皮肤或相关组织以延迟皮肤(抗老化特性)和相关组织老化，以减少皮肤(抗发红特性)和相关组织发红，或抗老化和抗发红特性的组合，或减轻或缓解一种或多种炎症相关的皮肤状况。所述组合物可以配制成施用于皮肤的制剂，供外用。所述组合物还可以例如作为洗发剂、喷雾剂或乳膏剂施用，以减少脱发。

如本文所使用的，术语“包含”、“具有”、“包括”和“含有”及其语法变型是包含性的或开放式的，并且不排除另外的、未列举的成分和/或方法步骤。当术语“基本上由……组成”在本文中与组合物、用途或方法结合使用时，表示可以存在另外的成分、方法步骤或成分和方法步骤都存在，但是这些添加物不会实质上影响所述组合物、方法或用途作用的模式。当术语“由……组成”在本文中与组合物、用途或方法结合使用时，排除了另外的成分和/或方法步骤的存在。

当“一个(种)”在本文中与术语“包含”或“包括”结合使用时可以表示“一个(种)”，但是它也与“一个(种)或多个(种)”、“至少一个(种)”和“一个(种)或一个(种)以上”的含义一致。以单数形式表达的任何元素也包括其复数形式。以复数形式表示的任何元素也包括其单数形式。这里使用的术语“多个(种)”意指一个(种)以上，例如，两个(种)或更多个(种)，三个(种)或更多个(种)，四个(种)或更多个(种)等。如本文所用，术语“约”是指与给定值的约+/-10％的变化。应当理解，无论是否具体提及，这种变化总是包括在本文提供的任何给定值中。

如本文所用，术语“提取物”或“植物提取物”是指通过用一种或多种提取技术分离或纯化所需活性成分而获得的植物材料的浓缩制剂。提取技术的实例包括但不限于溶剂提取，例如但不限于使用水、乙醇、甲醇、水/乙醇混合物、水/甲醇混合物、乙酸乙酯、色谱法等提取。

本文描述的植物提取物来自虎耳草物种，例如，圆叶虎耳草，互叶金腰，Saxifragaandrosacea，Saxifraga asjera，Saxifraga biflora，Saxifraga bryoides，Saxifragacaesia，麝香虎耳草，Saxifraga muscoides，对叶虎耳草，星虎耳草，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草，楔叶虎耳草，番杏虎耳草，Saxifraga stolonifera中的一种或多种，大星芹，及其组合。如本文所用，术语“来自”或“来源于”是指从给定的确定来源获得或可以追溯到给定的确定来源的产品，化合物或组合物。来自虎耳草物种，例如，圆叶虎耳草，互叶金腰，Saxifraga androsacea，Saxifraga asjera，Saxifraga biflora，Saxifraga bryoides，Saxifraga caesia，麝香虎耳草，Saxifraga muscoides，对叶虎耳草，Saxifragastellaris，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草，楔叶虎耳草，番杏虎耳草，Saxifragastolonifera中的一种或多种，来自大星芹，及其组合的提取物，可包含一种或多种TNF-alpha抑制剂或一种或多种TNF-alpha拮抗剂，即所述提取物可包含显示出如本文所述的抑制TNF-alpha活性的特性的化合物或化合物的组合。

“圆叶虎耳草”(或“S.rotundifolia”)，互叶金腰，Saxifraga androsacea，Saxifraga asjera，Saxifraga biflora，Saxifraga bryoides，Saxifraga caesia，麝香虎耳草，Saxifraga muscoides，对叶虎耳草，星虎耳草，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草，楔叶虎耳草，番杏虎耳草，Saxifraga stolonifera和大星芹是指通常生长在伊比利亚半岛、阿尔卑斯山和巴尔干地区中欧和南欧的植物。优选地，使用其叶、茎和/或根获得根据本发明的植物提取物，但也可以使用其他植物组织，例如花、果实、块茎、球茎等。如技术人员所理解的，虎耳草科(Saxifragacae)家族包括三个属别：岩白菜属(Bergenia)、虎耳草属(Saxifraga)和金腰属(Chrysosplenium)。如本文所述，术语“虎耳草物种”包括圆叶虎耳草，Saxifraga androsacea，Saxifraga asjera，Saxifraga biflora，Saxifragabryoides，Saxifraga caesia，麝香虎耳草，Saxifraga muscoides，对叶虎耳草，星虎耳草，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草，楔叶虎耳草，番杏虎耳草，Saxifraga stolonifera和互叶金腰。

“抑制TNF-alpha活性”是指TNF-alpha诱导过程的选择性、完全或部分抑制，包括但不限于TNF诱导的因子释放、TNF-alpha诱导的细胞凋亡或TNF-alpha诱导的细胞毒性。直接TNF-alpha诱导的过程的实例包括但不限于TNF-alpha诱导的细胞凋亡，或抑制外源TNF-alpha诱导的细胞因子释放，或TNF-alpha凋亡，或抑制TNF-alpha诱导的细胞毒性。如本领域技术人员显而易见的，也可以使用替代的测定法测定直接TNF-alpha诱导的过程。

TNF-alpha活性可以例如通过体外测定法测定，其测定TNF-alpha诱导的人上皮细胞释放IL-6的浓度依赖性抑制。

由于人上皮细胞在其膜表面具有TNF和IL1受体，外源添加TNF或IL1在这些细胞中引起可测定到的生物反应，其与这些添加的化合物的量成比例。本文描述的提取物的有效性可以通过确定对该生物反应的抑制并量化其效果来评估。

TNF-alpha活性可以例如通过体外测定法测定，其测定在放线菌素D(ActD)存在下，TNF-alpha对TNF-alpha敏感细胞系的剂量依赖性细胞毒性，其中所述提取物抑制外源TNF-alpha对细胞系的细胞毒性(例如使用Vercammen D et al.,1998，J.Exp Med.187：1477-1485中描述的方法)。然而，可以使用其他体外或体内测定法确定TNF-alpha诱导的过程，这是本领域技术人员显而易见的。

TNF-alpha抑制剂(或激动剂)，也称为肿瘤坏死因子alpha抑制剂(或激动剂)、肿瘤坏死因子α抑制剂(或激动剂)、TNFα抑制剂(或激动剂)，是指阻断、抑制、预防、压制或减弱对TNF-alpha的生理反应的化合物或组合物。所述抑制剂可直接或间接阻断或降低TNF-alpha的活性。所述TNF-alpha抑制剂可以减缓、干扰、部分阻断或阻断TNF-alpha反应。如本文所用，TNF-alpha抑制剂或TNF-alpha拮抗剂不阻断或改变细胞中TNF-alpha的合成或产生。本文描述的提取物阻断TNF-alpha活性。

本文描述的方法包括，给受试者施用来自圆叶虎耳草，互叶金腰，Saxifragaandrosacea，Saxifraga asjera，Saxifraga biflora，Saxifraga bryoides，Saxifragacaesia，麝香虎耳草，Saxifraga muscoides，对叶虎耳草，Saxifraga stellaris，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草，楔叶虎耳草，番杏虎耳草，Saxifraga stolonifera中的一种或多种，大星芹，及其组合的提取物；或者施用包含来自圆叶虎耳草，互叶金腰，Saxifraga androsacea，Saxifraga asjera，Saxifraga biflora，Saxifraga bryoides，Saxifraga caesia，麝香虎耳草，Saxifraga muscoides，对叶虎耳草，星虎耳草，Saxifragaseguieri，圆锥虎耳草，楔叶虎耳草，番杏虎耳草，Saxifraga stolonifera，大星芹中的一种或多种，及其组合的提取物的组合物，所述受试者需要获得缓解与炎症相关的皮肤状况，减少雀斑，延缓皮肤和相关组织的老化(抗老化)，减少皮肤和相关组织发红(抗发红)或其组合。皮肤发红、皮肤老化的减轻，炎症相关皮肤状况的缓解或其组合可能是由于体外观察到的提取物抗炎活性。因此，所述组合物包含有效量的来自：圆叶虎耳草，互叶金腰，Saxifraga androsacea，Saxifraga asjera，Saxifraga biflora，Saxifraga bryoides，Saxifraga caesia，麝香虎耳草，Saxifraga muscoides，对叶虎耳草，Saxifragastellaris，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草，楔叶虎耳草，番杏虎耳草，Saxifragastolonifera，大星芹中的一种或多种，及其组合的提取物以及合适的载体或化妆品可接受的载体，有效量的提取物的特征在于抑制肿瘤坏死因子(TNF)alpha活性。

如本文所用，“抗炎活性”或“调节炎症”是指物质或组合物减少急性和/或慢性炎症反应和/或预防或治疗炎症相关状况的性质，炎症相关状况优选皮肤相关状况，例如炎症相关的皮肤状况。可使用本文描述的组合物缓解的炎症相关皮肤状况的非限制性实例包括咬伤或蛰伤、皮疹、皮肤瘙痒、皮肤起泡、晒伤、雀斑、皮肤灼伤、UV暴露或辐射、皮肤老化、皮肤过敏、年龄相关斑点、过敏性皮肤、牛皮癣、特应性皮炎、脱发和接触化学刺激物、污染物、污垢或杂质中的一种或多种。

皮肤老化是由慢性炎症引起的病症的实例，并可以使用已知标准测定(例如Farage MA et al，2013，Adv Wound Care 2：5-10，其通过引用并入本文)。可以例如使用与皮肤状况相关的生化标志物的变化来确定皮肤老化；皮肤结构评估，例如皮肤厚度、胶原蛋白和弹性蛋白含量和周转、胶原酶和弹性蛋白酶产生、细胞大小、角质形成细胞形状变化(变得更短和更胖)和/或角质细胞(由于表皮周转减少而变大)、皮肤脂质含量的减少、氨基酸含量的变化、皮肤—表皮连接处的扁平化，皮肤的功能评估，包括弹性、扭转伸展性、神经感知、经皮水分流失(TEWL)和皮肤增殖率。可以使用皮肤的定性测定法或使用与皮肤着色相关的生化标志物来确定皮肤发红。

某些太阳光线，特别是UV A和B、寒冷、机械刺激和污染都是引起皮肤急性反应的因素，导致出现发红和肿胀伴有疼痛感。这是炎症反应。这些侵袭，即使是低强度的，也直接引起TNF和IL1释放，特别是由表皮的角质形成细胞释放。TNF是一种非常强大的因子，尽管是有益的生理警报信号，但它可能成为导致皮肤过早和加速老化的损害的直接原因。TNF实际上引起酶(胶原酶和弹性蛋白酶)的释放，其有效地降解由胶原蛋白和弹性蛋白组成的真皮基质的纤维，这导致后者的局部分解并导致皮肤丧失弹性并出现皱纹。这种作用很重要，特别是对于弹性蛋白而言，弹性蛋白参与维持皮肤的紧致度，并且是主要在生命的前三年产生的蛋白质，之后更少。

太阳除了对皮肤柔韧性和皮肤保持完整的真皮结构蛋白的能力的不利影响之外，还对雀斑(也称为痣)的形成具有直接影响。这些与年龄有关的斑点是由于反复或长时间暴露在阳光下引起的，并且在年轻人身上也可以看到。它们对应于黑素细胞过量产生引起的黑色素聚集体，其对长时间或强烈暴露于阳光而起反应。两种细胞因子可能通过黑素细胞对太阳光的作用刺激黑色素生成：TNF和IL1。

缓解炎症皮肤状况或治疗炎症皮肤状况，意指减轻与炎症相关的症状、不适、外观或其组合。缓解或治疗的程度可以通过将已经接受包含有效量本发明提取物的组合物的受试者相关的一种或多种定性或定量因素与未接受该组合物的受试者或者接受的组合物并不包含有效量的本文所述提取物的受试者的相同的一种或多种因素相比较来确定。所述一种或多种因素可以是定性因素，例如，减少瘙痒，减少发红等，并且使用指数进行分类，所述一种或多种因素可以是定量因素，例如，基于测定从受试者获得的样品并确定例如TNF-alpha活性，或者所述一种或多种因素可以是定性和定量因素的组合。

本公开内容还提供了一种降低TNF-alpha启动的细胞因子活性或IL-1β(IL-1beta)启动的细胞因子活性的作用的方法，所述活性可以与炎症相关的皮肤状况相关，例如但不限于皮肤老化、皮肤发红或两者兼有，通过给受试者施用来自下述物质的提取物：圆叶虎耳草，互叶金腰，Saxifraga androsacea，Saxifraga asjera，Saxifraga biflora，Saxifraga bryoides，Saxifraga caesia，麝香虎耳草，Saxifraga muscoides，对叶虎耳草，星虎耳草，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草，楔叶虎耳草，番杏虎耳草，Saxifragastolonifera中的一种或多种，大星芹，及其组合；或者施用包含来自下述物质的提取物的组合物：圆叶虎耳草，互叶金腰，Saxifraga androsacea，Saxifraga asjera，Saxifragabiflora，Saxifraga bryoides，Saxifraga caesia，麝香虎耳草，Saxifraga muscoides，对叶虎耳草，Saxifraga stellaris，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草，楔叶虎耳草，番杏虎耳草，Saxifraga stolonifera中的一种或多种，大星芹，及其组合。

TNF-alpha的直接活性或TNF alpha的生理反应可以例如使用体外测定法监测，其测定TNF-alpha诱导人上皮细胞释放IL-6的浓度依赖性抑制。

IL-1beta的直接活性或IL-1beta的生理反应可以例如使用体外测定法监测，其测定TNF-alpha诱导人上皮细胞释放IL-6的浓度依赖性抑制。

例如，可以使用人肠上皮Caco-2细胞确定提取物对TNF-alpha或IL-1beta产生的IL-6的直接刺激，并确定在植物提取物中孵育细胞后，再加入TNF-alpha或IL-1beta，细胞培养基中分泌的IL-6的量。如图1A所示，观察到在TNF-alpha或IL-1beta存在下，随着植物提取物，圆叶虎耳草的水提取物的量增加，IL-6的产生减少。在人类角质形成细胞中观察到类似的反应(图1B)。圆叶虎耳草的水提取物的抗TNF诱导的细胞反应在IC50为0.0403mg干物质/ml时显示。使用从Saxifraga androsacea，Saxifraga asjera，Saxifraga biflora，Saxifraga bryoides，Saxifraga caesia，麝香虎耳草，Saxifraga muscoides，对叶虎耳草，星虎耳草，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草，楔叶虎耳草，番杏虎耳草，Saxifragastolonifera，互叶金腰，和大星芹制备的提取物观察到类似的结果(参见实施例3中的表2)，其中抗TNF诱导的细胞反应的IC50范围为0.0392mg/ml DM至0.51mg/ml DM。表2中还显示了抗IL-1beta诱导的细胞反应的IC50，其范围为0.0299mg/ml DM至0.53mg/ml DM。

TNF-alpha的活性或TNF-alpha的生理反应可以例如通过体外测定法来确定，其测定在放线菌素D(ActD)存在下，外源TNF-alpha对TNF-alpha敏感细胞系的剂量依赖性细胞毒性。如图2所示(也参见实施例3)，圆叶虎耳草提取物对TNF-alpha活性的影响是由外源TNF-alpha的直接抑制产生的，并且在数分钟至数小时内的短时间内观察到这种影响。如图2所示，该提取物对TNF-alpha活性的这种影响可导致整体TNF活性的部分阻断。因此，添加来自圆叶虎耳草的提取物可抑制TNF-alpha对细胞的细胞毒性，并调节炎症过程。

所述提取物可以将TNF-alpha或IL-1beta的活性降低30％-100％或其间的任何量，例如30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100％或其间的任何量，例如使用本文描述的体外测定法确定。

此外，所述提取物可以将TNF-alpha/ActD诱导的细胞死亡减少30％至100％或其间的任何量，例如30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100％或其间的任何量，例如使用本文描述的体外测定法确定。

在另一个方面，本公开内容涉及抑制IL-1β诱导的活性的方法，其可以与炎症相关的皮肤状况相关，例如皮肤老化、雀斑、皮肤发红、年龄相关斑点、过敏性皮肤、牛皮癣、特应性皮炎、脱发或其组合。

所述提取物的IC50可以为0.005mg/ml至2.5mg/ml或其间的任何量，为0.02mg/ml至2.5mg/ml或其间的任何量，例如0.005mg/ml、0.006mg/ml、0.007mg/ml、0.008mg/ml、0.009mg/ml、0.01mg/ml、0.012mg/ml、0.015mg/ml、0.018mg/ml、0.02mg/ml、0.025mg/ml、0.03mg/ml、0.035mg/ml、0.04mg/ml、0.045mg/ml、0.05mg/ml、0.055mg/ml、0.06mg/ml、0.065mg/ml、0.07mg/ml、0.075mg/ml、0.08mg/ml、0.085mg/ml、0.09mg/ml、0.095mg/ml、0.1mg/ml、0.15mg/ml、0.2mg/ml、0.22mg/ml、0.23mg/ml、0.24mg/ml、0.25mg/ml ml、0.3mg/ml、0.35mg/ml、0.4mg/ml、0.45mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml、1.5mg/ml、2.0mg/ml、2.5mg/ml或其间的任何量，其由体外TNF诱导的人上皮细胞释放IL-6或体外IL-1诱导的人上皮细胞释放IL-6所测定(如本文描述的)，或本领域已知的任何体外测定法测定的。

来自圆叶虎耳草，互叶金腰，Saxifraga androsacea，Saxifraga asjera，Saxifraga biflora，Saxifraga bryoides，Saxifraga caesia，麝香虎耳草，Saxifragamuscoides，对叶虎耳草，星虎耳草，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草，楔叶虎耳草，番杏虎耳草，Saxifraga stolonifera中的一种或多种，大星芹，及其组合的所述提取物可以是乙醇/水提取物，或水提取物(也称为含水提取物)。例如，来自圆叶虎耳草，互叶金腰，Saxifraga androsacea，Saxifraga asjera，Saxifraga biflora，Saxifraga bryoides，Saxifraga caesia，麝香虎耳草，Saxifraga muscoides，对叶虎耳草，星虎耳草，Saxifragaseguieri，圆锥虎耳草，楔叶虎耳草，番杏虎耳草，Saxifraga stolonifera中的一种或多种，大星芹，及其组合的水提取物可具有直接的抗TNF和抗IL1诱导的细胞反应，其IC50为约0.02至约2.5mg干物质/ml或其间的任何量。

TNF-alpha是免疫和炎症反应的主要介质。如本文所用，“TNF-alpha介导的应答”、TNF介导的应答可包括但不限于急性和慢性免疫和自身免疫病症，炎性病症等。例如，炎症相关的皮肤状况。

本公开内容的一个方面涉及来自圆叶虎耳草，互叶金腰，Saxifraga androsacea，Saxifraga asjera，Saxifraga biflora，Saxifraga bryoides，Saxifraga caesia，麝香虎耳草，Saxifraga muscoides，对叶虎耳草，星虎耳草，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草，楔叶虎耳草，番杏虎耳草，Saxifraga stolonifera，大星芹中的一种或多种，及其组合的植物提取物具有抗炎活性，例如炎症相关的皮肤状况，其中所述提取物抑制TNF-alpha或IL-1beta的活性。

如参考图2所示，外源TNF-alpha添加至对照细胞的量不断增加导致细胞活力显著降低(TNF-alpha浓度高于1ng/ml)。使用TNF-alpha特异性抗体(TNRF1-Fc)也未改善高浓度TNF-alpha下细胞活力的降低。然而，添加来自圆叶虎耳草(SRX01)的植物提取物在跨越5个量级范围的外源TNF-alpha浓度下表现出部分地保护细胞群免受TNF-alpha诱导的细胞死亡。在高达1000ng/ml TNF-alpha浓度存在下，在TNF-alpha浓度高于1ng/ml时，观察到细胞活力降低0-5％，大约50-70％的细胞群保持存活。

这些结果表明来自虎耳草物种例如但不限于SRX01或来自大星芹的提取物，以直接方式起作用以阻断TNF作用，并保护细胞免受TNF诱导的细胞死亡。SRX01提取物的保护作用与TNF-alpha浓度无关。由于SRX01对TNF-alpha诱导的细胞死亡的保护作用在跨越5个量级范围内观察到，从0.01-1000ng/ml TNF-alpha(远远超过细胞内TNF-alpha的量)，因此这种作用不是TNF-alpha合成的结果。此外，在SRX01存在下，并且在没有任何添加的TNF的情况下，未观察到TNF诱导的细胞死亡。

不希望受理论束缚，来自虎耳草物种例如SRX01或来自大星芹的提取物的保护作用可能是改变TNF-alpha诱导的细胞应答的结果，例如，调节可能影响TNF-alpha作用的转运蛋白、调节生化途径、作为TNF-alpha活性相关过程的抑制剂或激活剂、调节基因表达(激活或抑制与TNF-alpha诱导活性相关基因的表达)，或其组合。

皮肤(或皮)包括表皮层，其包括角质形成细胞、基底膜和通过基底膜连接到表皮的真皮层(包括乳突区域和网状区域)。皮肤的相关组织还可包括下皮组织、皮下组织，和外胚层或中胚层的组织。皮肤对环境刺激具有高度反应性，角质形成细胞的表皮成分是花生四烯酸以及促炎细胞因子IL-1beta和TNF-alpha的非常丰富的来源。皮肤树突细胞，朗格汉斯细胞识别和加工抗原以进一步对各种淋巴细胞产生免疫应答，并且所有这些细胞主要通过细胞因子特异性细胞表面受体来调节。高度受神经支配的皮肤具有很高的发红、肿胀和发热能力。在皮肤系统中，组织损伤的程度经常被放大，与所产生的炎症反应不成比例。

当皮肤经受压力时产生的自由基可能导致皮肤细胞的逐渐恶化，并且自由基也涉及过早老化。如本文所述，当暴露于压力后，来自虎耳草物种例如SRX01或来自大星芹的提取物减少皮肤组织中自由基的量，从而减缓皮肤老化过程。例如，SRX01表现出使用2,2-二苯基-1-苦肼基(DPPH)测试测定的抗自由基活性(参见实施例2)。在该试验中，SRX01显示出浓度依赖性抗氧化活性，EC50为0.2mg干物质/mL。

此外，如下文实施例3中所述，将来自虎耳草物种例如SRX01或来自大星芹的提取物添加至成纤维细胞衰老培养模型中，减少了向培养基释放胶原酶和弹性蛋白酶。胶原酶和弹性蛋白酶是对应激源例如UV光的应答导致皮肤过早老化的原因。此外，在暴露于UV光下的皮肤样品外植体中，添加SRX01减少了这些酶的产生。因此，应用来自虎耳草物种例如SRX01或来自大星芹的提取物可有效减少皮肤的过早老化。

因此，来自圆叶虎耳草，互叶金腰，Saxifraga androsacea，Saxifraga asjera，Saxifraga biflora，Saxifraga bryoides，Saxifraga caesia，麝香虎耳草，Saxifragamuscoides，对叶虎耳草，星虎耳草，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草，楔叶虎耳草，番杏虎耳草，Saxifraga stolonifera，大星芹，及其组合的提取物也可用于治疗皮肤炎症，本公开内容提供了一种治疗炎症皮肤状况的方法，包括但不限于炎症相关的皮肤状况，可包括咬伤或蛰伤，皮疹，皮肤瘙痒，皮肤起泡，晒伤，雀斑，皮肤灼伤，UV暴露或辐射，皮肤老化，皮肤过敏，年龄相关斑点，过敏性皮肤，牛皮癣，特应性皮炎，脱发和接触化学刺激物或污染物中的一种或多种。

因此，包含有效量的来自圆叶虎耳草，互叶金腰，Saxifraga androsacea，Saxifraga asjera，Saxifraga biflora，Saxifraga bryoides，Saxifraga caesia，麝香虎耳草，Saxifraga muscoides，对叶虎耳草，星虎耳草，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草，楔叶虎耳草，番杏虎耳草，Saxifraga stolonifera，大星芹，及其组合的提取物的组合物可以配制成包含合适的载体或化妆品可接受的载体的化妆品。这种产品的非限制性实例包括护肤霜、皮肤清洁产品、皮肤调色产品、皮肤保湿产品、用于皮肤的面膜产品、用于头发处理的洗发剂；用于皮肤或头发处理的喷雾剂。所述组合物中有效量的所述提取物引起肿瘤坏死因子(TNF)alpha或IL-1beta活性的抑制。

包含有效量的来自圆叶虎耳草，互叶金腰，Saxifraga androsacea，Saxifragaasjera，Saxifraga biflora，Saxifraga bryoides，Saxifraga caesia，麝香虎耳草，Saxifraga muscoides，对叶虎耳草，星虎耳草，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草，楔叶虎耳草，番杏虎耳草，Saxifraga stolonifera，大星芹，及其组合的提取物的组合物可以配制成包含合适的载体的产品。其中，所述组合物中有效量的所述提取物引起肿瘤坏死因子(TNF)alpha活性的抑制。

还公开了使用组合物治疗有此需要的受试者的皮肤、脱发或炎症相关的皮肤状况的方法，所述组合物包含有效量的来自圆叶虎耳草，互叶金腰，Saxifraga androsacea，Saxifraga asjera，Saxifraga biflora，Saxifraga bryoides，Saxifraga caesia，麝香虎耳草，Saxifraga muscoides，对叶虎耳草，星虎耳草，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草，楔叶虎耳草，番杏虎耳草，Saxifraga stolonifera，大星芹，及其组合的提取物。所述组合物可抑制、降低或同时抑制和降低皮肤中的TNF-alpha活性。所述组合物可进一步抑制皮肤中的COX1、COX2和/或脂氧合酶活性。

本文描述的组合物还可用于缓解咬伤或蛰伤、皮疹、皮肤瘙痒、皮肤起泡、晒伤、雀斑、皮肤灼伤、皮肤发红、皮肤紧致度下降(即保持皮肤紧致)、皮肤老化、皮肤过敏、脱发等中的一种或多种。例如，如实施例5和6中所示，观察到包含来自圆叶虎耳草(SRX01)的提取物的乳膏制剂减轻皮疹(实施例5；图3A、3B)，减少与年龄相关的斑点并保持皮肤紧致(实施例6；表3和4)并且还表现出皱纹减弱的趋势(实施例6；表5)，从而证明所述组合物和包含组合物的乳膏制剂具有有益的抗老化潜力。

在一个方面，本文公开了来自虎耳草物种，例如圆叶虎耳草，互叶金腰，Saxifragaandrosacea，Saxifraga asjera，Saxifraga biflora，Saxifraga bryoides，Saxifragacaesia，麝香虎耳草，Saxifraga muscoides，对叶虎耳草，星虎耳草，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草，楔叶虎耳草，番杏虎耳草，Saxifraga stolonifera，来自大星芹，及其组合的提取物的局部皮肤组合物，其中所述提取物是来自虎耳草物种，例如圆叶虎耳草，互叶金腰，Saxifraga androsacea，Saxifraga asjera，Saxifraga biflora，Saxifragabryoides，Saxifraga caesia，麝香虎耳草，Saxifraga muscoides，对叶虎耳草，星虎耳草，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草，楔叶虎耳草，番杏虎耳草，Saxifraga stolonifera，来自大星芹，及其组合的完整植株(或其任何部分)的水提取物。来自虎耳草物种，例如圆叶虎耳草，互叶金腰，Saxifraga androsacea，Saxifraga asjera，Saxifraga biflora，Saxifraga bryoides，Saxifraga caesia，麝香虎耳草，Saxifraga muscoides，对叶虎耳草，星虎耳草，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草，楔叶虎耳草，番杏虎耳草，Saxifragastolonifera，来自大星芹，及其组合的提取物可用于降低TNF-alpha活性增加的皮肤细胞中的TNF-alpha活性，例如在发炎的皮肤中。

本文描述的圆叶虎耳草，互叶金腰，Saxifraga androsacea，Saxifraga asjera，Saxifraga biflora，Saxifraga bryoides，Saxifraga caesia，麝香虎耳草，Saxifragamuscoides，对叶虎耳草，星虎耳草，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草，楔叶虎耳草，番杏虎耳草，Saxifraga stolonifera，来自大星芹，及其组合的提取物还表现出抗氧化性质，因此该提取物可用于治疗、预防或减少来自外部环境因素的皮肤细胞的氧化损伤，例如污染、晒伤、化学品等。因此，本文公开的提取物可用于治疗与皮肤细胞氧化相关的皮肤状况。

本文进一步涉及包含如本文定义的植物提取物和/或通过本文任何纯化方法获得的植物提取物与合适的载体、稀释剂或赋形剂组合的组合物。

可以通过本领域普通技术人员已知的标准培养和提取技术获得植物。可以使用本领域已知的任何合适的提取技术来制备具有本文所述性质的植物提取物。在一个非限制性实例中，植物(或植物的任何部分，例如叶、茎、树皮、根、果实、花或花蕾、种子、种子荚、汁液、完整植株等)可以通过研磨植物而破坏，和可以通过快速溶剂萃取(ASE)从研磨过的材料中获得提取物。其他提取方法可包括浸渍、浸泡、渗滤、消化、煎煮、热连续提取、水—醇提取、逆流提取，微波辅助提取、超声提取、超临界流体提取、冷媒萃取(例如，用水—氟—碳溶剂)等。

基于水、醇或油的提取技术或其组合可以用于完整植株或其任何部分(例如，叶、茎、树皮、根、果实、花或花蕾、种子、种子荚、汁液、完整植株等)以产生提取物。在这样的方法中，将期望的植物部分或完整植株粉碎(例如，搅拌器)，然后使其施用期望的溶剂(例如，基于水、醇、水/醇或油基溶剂)以获得提取物。使用该方法可以获得乙醇提取物或水/醇提取物。优选的提取物是含水提取物。

然后可以将提取物以液体形式储存、冻干，或进行进一步的加工技术(例如，加热、冷却等)。提取物也可以配制成乳膏用于局部使用，例如，如实施例4中所述。

本文描述的植物提取物具有有益的抗炎特性，因此可以在预防和/或治疗炎症中具有有用的应用。因此，本文进一步考虑了使用方法、治疗方法和减轻一种或多种炎症相关皮肤状况的方法，包括使用或施用有效量的如本文所定义的植物提取物和/或组合物。包含有效量的来自虎耳草物种或大星芹的提取物的组合物可以配制成化妆品。化妆品制剂是本领域熟知的，例如如“Cosmetic Formulation of Skin Care Products”(2006，Zoe DianaDraelos，Lauren A Thaman，eds.，Taylor&Francis)中所述，其通过引用并入本文。

“载体”或“化妆品可接受的载体”是指与化合物一起施用的稀释剂、佐剂、赋形剂。“化妆品可接受的”是指另外的组分、惰性成分等，它们适用于与人和动物的皮肤组织接触而没有不适当的毒性、不相容性、不稳定性、刺激性、过敏反应等，和与本发明的提取物一起加入—混合。载体或化妆品可接受的载体可以是溶剂或分散介质，其含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)，其合适的混合物，和植物油。可与水混溶的载体，例如但不限于乙醇、聚乙二醇和聚丙二醇；和非水性载体，例如但不限于玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯和苯甲酸苄酯。常见的保湿成分(闭塞剂)可以阻挡水分逃逸皮肤，包括凡士林、矿物油和聚二甲基硅氧烷。吸水(保湿剂)的成分例如甘油也可以加入到洗剂，以及润肤剂，如椰子油、十六烷基酯和一些硅酮，以改善组合物在皮肤上的感觉。润肤剂可以减少由其他保湿成分引起的粘性和油腻感。组合物中的其他成分可包括乳化剂，例如硬脂酸甘油酯和硬脂酸将油材料与水结合，还可包括增稠剂、香料、防腐剂和着色剂。

可以通过各种抗细菌剂和抗真菌剂来防止组合物中微生物的作用，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等。等渗剂，例如糖、氯化钠，或多元醇如甘露醇和山梨糖醇，也可包括在组合物中。

实施例1-来自圆叶虎耳草的提取物的制备

培养和收获

将圆叶虎耳草植物养殖在BIO Suisse标记(不含杀虫剂、杀虫剂或化学肥料)的阿尔卑斯山的1000米以上。收获植物并将原料干燥并保持在温度和湿度受控的环境中。

研磨植物

通过使用Retsch ZM300以1500rpm离心切割，用4mm纱布将整个收获的批料均质化。一旦研磨过后，就将材料保存在真空密封的铝箔袋中(830mbar，焊接1.5秒)直至提取。

提取

圆叶虎耳草提取物例如通过快速溶剂萃取法(ASE；Dionex)从研磨的植物材料中使用以下参数获得：

池体积：66毫升

植物量：4克

支撑量：4克

溶剂：H2O milliQ

温度：40或100℃

加热时间：5分钟

提取时间：10分钟

冲洗％：65

周期数：1

在ASE之后，可以过滤提取物。

还可以通过挤出方法(使用螺旋或螺旋压榨机)获得圆叶虎耳草提取物。ASE和挤出方法都可以用水作为溶剂进行，如使用醇/水溶剂，例如乙醇/水溶剂。水是优选的溶剂。如果使用醇/水溶剂，则醇：水(通常为乙醇：水)的比例为30％:70％，例如Bastian等人2009所述(同上)。

还可以通过任何其他提取方法获得圆叶虎耳草提取物，包括浸渍、浸泡、渗滤、消化、煎煮、热连续提取、水—醇提取、逆流提取、微波辅助提取、超声提取、超临界流体提取、冷媒萃取(例如，用水—氟—碳溶剂)等。

使用水作为溶剂通过ASE、浸渍和在压力下浸渍获得的提取物的实例是“SRX01”。

上述方法还用于制备以下植物的提取物：圆叶虎耳草，互叶金腰，Saxifragaandrosacea，Saxifraga asjera，Saxifraga biflora，Saxifraga bryoides，Saxifragacaesia，麝香虎耳草，Saxifraga muscoides，对叶虎耳草，星虎耳草，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草，楔叶虎耳草，番杏虎耳草，Saxifraga stolonifera和大星芹。

实施例2-提取物的表征

干物质的测定

在105℃的烘箱中蒸发5ml等份的提取物直至干燥。干物质通过两次重量测定确定。

高压液相色谱(HPLC)曲线

如下测定三个主要峰(绿原酸、杨梅苷和槲皮甙)。将等分试样的提取物通过0.46μm过滤器过滤。HPLC在配备有自动进样器、泵和具有分析池的DAD检测器的Waters系统上进行。在Kinetex 5μC18150x4.6mm(Phenomenex)柱上以0.8ml/min的流运行。在360nm波长下进行检测。注射量设定为20μl。峰面积用提取物的干物质归一化。

DPPH测定

进行七次连续稀释(稀释因子4)，并在透明微孔板上三次分析每种稀释液的20μl样品。在Berthold酶标仪上以520nm波长进行测定。向孔中加入300μlDPPH反应物(2,2-二苯基-1-苦肼基，40mg/l甲醇溶液)，孵育30分钟后，测定板的吸光度。获得的抑制曲线允许确定以mg/ml干物质计的EC50。

表1中列出了提取物的几种组分。

表1：从圆叶虎耳草(SRX01)获得的各种水提取物的干物质(MS)、DPPH和HPLC结果。

实施例3-提取物的生物活性

肿瘤坏死因子(TNFα)或白细胞介素-1beta(IL-1β)活性的抑制

IL-6的产生

TNF-alpha的活性或TNF-alpha的生理反应可以例如使用体外测定法监测，其测定TNF-alpha诱导的人上皮(CACO2)细胞释放IL-6(参见图1A)或人角质形成细胞释放IL-8(图1B)的浓度依赖性抑制。

如下测定提取物对肿瘤坏死因子(TNF-alpha)或白细胞介素-1(IL-1β)直接刺激IL-6产生的影响。将贴壁的人肠上皮Caco-2细胞与待测提取物一起温育45分钟。随后，将TNF-alpha或IL-1β加入细胞中以引发反应。24小时后，通过ELISA测定分泌到细胞培养基中的白细胞介素-6(IL-6)的量。将该值与作为对照的从用TNF-alpha或IL-1β刺激的而未事先与提取物一起孵育的细胞获得的值进行比较。为了检测测试化合物的细胞毒性，使用3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴盐(MTT)测试，平行评估细胞活力。莱服子硫(Sulphoraphane)用作阳性对照，在培养基(含有1％FCS)中准备的最终浓度为6μM。

观察到从圆叶虎耳草获得的水提取物具有直接的抗TNF诱导的细胞应答，IC50为0.0403mg干物质/ml(参见图1A)。类似地，SRX01显示培养物中人角质形成细胞中TNF诱导的IL8释放的干物质的IC50为0.004mg/mL。该IC50比在CACO2上皮细胞中观察到的IC50低十倍(图1A)，和提示该提取物在表皮的这种主要细胞群中是有效的。

互叶金腰，Saxifraga androsacea，Saxifraga asjera，Saxifraga biflora，Saxifraga bryoides，Saxifraga caesia，麝香虎耳草，Saxifraga muscoides，对叶虎耳草，星虎耳草，Saxifraga seguieri，圆锥虎耳草，楔叶虎耳草，番杏虎耳草，Saxifragastolonifera和大星芹的水提取物根据实施例1的方法制备，并测试如上所述的TNF alpha或IL-1β活性的抑制。从这些植物中获得的提取物的IC 50结果列于表2中。

表2：植物提取物对肿瘤坏死因子(TNF-alpha)或白细胞介素-1(IL-1β)直接刺激IL-6产生的影响。DM：干物质。

还使用体外测定法测定TNF-alpha活性的抑制，其在放线菌素D(ActD；参见图2)存在下测定TNF-alpha敏感细胞系中外源TNF-alpha的剂量依赖性细胞毒性，为期24小时。将细胞在DMSO(对照)中、TNFR1-Fc抗体[ref]存在下、或在根据实施例1的方法产生的提取物(SRX01)存在下孵育，并在490nm处测定细胞活力。

在DMSO存在下，并且不存在外源TNF-alpha，细胞在测定期间是有活力的。随着外源TNF-alpha不断增加地添加到DMSO处理的细胞，在TNF-alpha浓度高于1ng/ml时观察到细胞活力显著降低。添加TNF-alpha特异性抗体，TNRF1-Fc，约100ng/ml外源TNF-alpha下，维持细胞活力，然后随着TNF-alpha浓度的增加，细胞活力急剧降低。不希望受理论束缚，在一定浓度的TNF-alpha后，TNRF1-Fc抗体可能变得饱和并且不能结合另外的TNF-alpha。

令人感兴趣的是，在宽泛的外源TNF-alpha浓度范围内，添加SRX01部分地保护细胞免受TNF-alpha诱导的细胞死亡。虽然在TNF-alpha浓度高于1ng/ml时观察到细胞存活率略有下降，但约50-70％的细胞群仍然存活，即使在非常高的TNF alpha浓度1000ng/ml下孵育时。该结果表明SRX01能够在高浓度TNF-alpha存在下为这些细胞提供部分保护。

在非常高浓度的外源TNF-alpha存在下(并且跨越5个数量级的范围内；0.01-1000ng/ml TNF-alpha)观察到SRX01对TNF-alpha诱导的细胞死亡的保护作用，并且其浓度远远超过由于各种处理可在细胞内产生的任何内部TNF-alpha的浓度。因此，SRX01提取物的保护作用不是TNF-alpha合成的结果。

圆叶虎耳草提取物对TNF-alpha活性的影响源于外源TNF-alpha的作用的抑制或调节，并且在短时间(数小时)内观察到该影响，这提示是直接应答。这种抑制不是改变TNF-alpha合成或产生的结果。

因此，添加来自圆叶虎耳草的提取物可用于抑制外源TNF-alpha对细胞的细胞毒性作用，例如，调节炎症反应。

该提取物对TNF-alpha活性的影响是由直接抑制/阻断外源施用TNF的作用引起的，并且似乎不是改变TNF-alpha的合成或产生的结果。此外，如在图1A和1B中所见，也称为“SRX01”的水提取物对TNF-alpha活性的影响可导致整体TNF活性的部分阻断。

SRX01对胶原酶和弹性蛋白酶的影响

为了研究SRX01的抗TNF作用是否能够对胶原酶和弹性蛋白酶的释放产生抑制作用，分析了两种模型，暴露于紫外线下的老年人成纤维细胞和皮肤外植体，其中胶原酶和弹性蛋白酶是对应激源UV光应答，导致皮肤过早老化的原因。

培养基中大量复制的人成纤维细胞逐渐呈现衰老特征的表型(Hayflick模型)，其中基质金属蛋白酶1(MMP-1；也称为间质胶原酶)的分泌显著增加。MMP-1负责真皮基质中胶原纤维的降解。将该测试中使用的成纤维细胞老化(17次重复)并比较MMP-1的水平。老年对照成纤维细胞比年轻对照成纤维细胞分泌MMP-1约多四倍。加入浓度为0.02mg/mL干物质的SRX01抑制老化成纤维细胞分泌的约40％的MMP-1。因此，这些结果证明了SRX01对产生攻击皮肤结构的酶MMP-1的有益抑制作用。

为了证明在细胞培养物中观察到的作用可以在完整组织中复制。SRX01对皮肤外植体释放弹性蛋白酶和胶原酶的作用保持存在24小时，并经历UV暴露，进行测试。皮肤外植体从患者的整形手术获得。根据供体皮肤暴露于UV的敏感性，对皮肤外植体的处理通过级联引起这两种酶的显著释放，暗示了表皮中产生的TNF的作用。浓度为2.658mg/mL干物质的SRX01以统计学上显著的方式抑制93.5％的MMP-1产生和67.2％的弹性蛋白酶产生。在较低浓度下也观察到该作用，但具有较高的可变性(这可能是测试的皮肤外植体多样的结果，因为一些外植体对UV刺激没有反应)。

实施例4：提取物的剂型

使用实施例1中描述的方法，从虎耳草物种，例如圆叶虎耳草、互叶金腰、Saxifraga androsacea、Saxifraga asjera、Saxifraga biflora、Saxifraga bryoides、Saxifraga caesia、麝香虎耳草、Saxifraga muscoides、对叶虎耳草、星虎耳草、Saxifragaseguieri、圆锥虎耳草、楔叶虎耳草、番杏虎耳草、Saxifraga stolonifera，从大星芹及其组合获得的提取物，可以配制在化妆品可接受的乳膏、洗发剂或喷雾剂中，如本领域技术人员已知的，例如但不限于“Cosmetic Formulation of Skin Care Products”(2006，ZoeDiana Draelos，Lauren A Thaman，eds.，Taylor&Francis；其通过引用并入本文)。

为了研究SRX01作为化妆品中的活性成分的潜力和能够测试其在人体中的临床有效性，将其掺入不同的化妆品配方中。开发了几种掺入提取物的药物形式(凝胶—乳膏、乳液)。没有观察到制剂的不稳定性或所测试的模型配方中的主要感官变化。

在简单乳液配方中以5％(w/w)配制SRX01。在角蛋白测试中以0.4mg/mL干物质进行毒理学研究后测定SRX01的浓度为5％(w/w)(OECD guide line N°442D，2015年2月4日：In Vitro Ski Sentitisation:ARE-Nrf2Luciferase Test Method)。该浓度允许每日重复施用和累积使用含有SRX01的乳膏。以这种方式制造的乳膏是稳定的并且通过挑战测试(根据ISO 11930在28天符合标准A)和皮肤耐受性测试(非刺激性贴片测试)。单次施用0.02ml测试样品将其置于手臂的外表面，并在闭塞贴片(Finn Chamber)的帮助下保持与皮肤接触48小时。

实施例5：减少皮疹

实施随机、单盲临床研究，其研究SRX01对23名年龄在18至60岁的敏感皮肤的女性志愿者暴露于UV引起的光化性皮疹的影响。该研究评估了含有5％(0.4mg/mL干物质)SRX01的乳膏在UV光处理后应用于皮肤区域的作用，相对于在UV光处理后施用于不同的皮肤区域的具有相同成分但不含活性化合物(安慰剂)的乳膏的作用。UV光处理的持续时间相同并且足以诱发红斑。

皮肤处理区域暴露于UV光引起皮疹发生。在暴露于UV后2、4、6和24小时，对适当的皮肤区域应用乳膏处理。在第一次施用之前，然后在暴露后2、4、6、24和48小时，通过比色法测定皮疹的发展和强度(使用色度计CR400KONICA MINOLTA进行色度测定；参见图3A)并且由训练有素的技术人员(图3B)进行视觉评估。

如图3B所示，与暴露于UV后6小时变得可见的安慰剂乳膏相比，色度测定显示含有5％SRX01的乳膏的效果，并且在暴露于UV后24和48小时具有统计学显著性。视觉评估(图3B)给出了类似的结果，观察到含有SRX01的乳膏的皮疹的强度降低，在暴露于UV后6小时出现，并且在暴露于UV后48小时变得具有统计学意义。

这些结果表明SRX01提取物在治疗后24和48小时观察到减少皮疹发展，统计学上显著的差异。除了考虑提取物用于光化或机械皮疹之外，这证实了活性成分渗透到表皮中，并且证明了对扩大的炎症反应引起的皮肤损伤的影响具有真实的抑制能力。这种效果应该有效地转化为减缓由所有这些皮肤损伤引起的加速老化。

上述特性表明，包含SRX01的乳膏制剂有效地预防由于反复长期暴露于阳光、寒冷、污染和机械刺激而诱发的皮肤加速老化和皱纹形成。

实施例6：SRX01的抗老化作用

对34名年龄在50至70岁的女性专门小组成员进行了为期三个月的双盲、安慰剂对照临床试验，以确定SRX01对眼部轮廓皱纹、年龄相关斑点和皮肤紧致度的影响。在面部和颈部的一半上应用含有SRX01的乳膏，和在面部和脖颈部的另一半上应用没有SRX01的相同乳膏(安慰剂/控制)(D0)之前，和应用1个月(D28)、2个月(D36)和3个月(D56)之后进行仪器测量。安慰剂/对照乳膏含有已知具有滋润和保护皮肤功效的保湿成分(甘油、脂肪酸)。

皮肤紧致度的仪器测量使用与校准的鼓风(Dynaskin-4DTM)相关的条纹投影技术。在重复施用乳膏产品或安慰剂/对照乳膏之前和之后测定皮肤变形的体积、面积和最大深度。通过比色法使用Konica-Minolta CM-700d分光光度计对接触SRX01或安慰剂/对照乳膏的面部每一侧的皮皮肤的着色斑点以及相邻无斑点区域评估对年龄相关斑点的影响。评估光变量L*、个体类型角ITA°和色度坐标b*。

通过采用右眼和左眼轮廓(鱼尾纹和两个半脸的颧骨的上部)的皮肤的硅橡胶(SilfloTM，Flexico Corp.)复制品测定眼部轮廓的皱纹总数、具有皱纹的总表面(mm 2)、皱纹的总长度(mm)和平均深度(μm)。在试验完成时的分析涉及在具有已知的入射角(35°)的釉面光线下在波峰后面产生阴影。依靠视频图像分析系统对灰度级进行分析(具有过滤器的QuantiridesTM Version 2.2.1.0软件，Monaderm)以表征皮肤缓解。

皮肤紧致度

如下表3中所示的结果所示，在用含有SRX01的乳膏(crème visage ref.:2129.04)处理1，2和3个月的面部侧，鼓风炸引起的皮肤变形的体积和最大深度显著降低。此外，接触含有SRX01的乳膏的皮肤上的效果比用安慰剂乳膏(crème visage ref.:2129.08)处理的皮肤上测定的效果增加。一个月后，接触SRX01的皮肤上测定的体积和最大深度明显好于接触安慰剂/对照乳膏的皮肤上测定的效果。

这些结果表明，与安慰剂/对照乳膏相比，在处理一个月后，包含SRX01的乳膏制剂显著改善皮肤紧致度的三个参数中的两个。

与年龄相关的皮肤斑点：

随着时间的推移，应用含有SRX01的乳膏(crème visage ref.:2129.04；表4)观察到与皮肤斑点的颜色相关的所有指标的显著变化，反映了色素沉着减少。随着时间的推移，在用安慰剂/对照乳膏(crème visage ref.:2129.08)处理的皮肤中没有观察到效果。参考色度坐标b*，观察该效果，与安慰剂/对照乳膏相比，在所有时间点，用包含SRX01的乳膏制剂处理的皮肤中观察到显著变化。另外，参考个体类型角(ITA)结果，3个月后观察到增加至+23％。与D28的安慰剂/对照乳膏相比，观察到ITA增加，并且在D56的ITA增加显著不同。

表3：包含SRX01的乳膏制剂对皮肤紧致度的影响。包含SRX01的乳膏制剂(crèmevisage ref.:2129.04)；安慰剂/对照乳膏制剂(crème visage ref.:2129.08)。在1(D28)、2(D56)和3(D84)个月处理后获得测定值。

*绝对值

S:统计学上显著的概率:p<0.05

LS:概率接近于有意义:0.05≤p<0.10

NS:概率不大:p>0.10.

*支持研究的产品CREME VISAGE(ref.:2129.04)

表4：包含SRX01的乳膏制剂对年龄相关皮肤斑点的影响

*绝对值

S:统计学上显著的概率:p<0.05

LS:概率接近于有意义:0.05≤p<0.10

NS:概率不大:p>0.10.

*支持研究的产品CREME VISAGE(ref.:2129.04)

眼部轮廓皱纹：

参考下面的表5，提供了在不同时间点，皱纹的硅酮印迹获得的皱纹总数、皱纹的总表面、皱纹长度和深度的结果。

表5：包含SRX01的乳膏制剂对眼部轮廓皱纹的影响。包含SRX01的乳膏制剂(crèmevisage Ref.:2129.04)；安慰剂/对照乳膏制剂(crème visage Ref.:2129.08)。在1(D28)、2(D56)和3(D84)个月处理后获得的测定值。

S:统计学上显著的概率:p<0.05

LS:概率接近于有意义:0.05≤p<0.10

NS:概率不大:p>0.10

可以观察到随着时间的推移，使用含有SRX01的乳膏(crème visage Ref.:2129.04)改善这些参数中的一些参数的趋势。然而，在用于该研究的时间段内，这些效果与用安慰剂乳膏(crème visage Ref.:2129.08)测定的那些效果在统计学上没有显著差异。SRX01在保护皮肤结构损伤方面的功效可以防止皱纹形成，而不是减少现有的皱纹。

这些关于年龄相关斑点和皮肤紧致度以及皱纹减弱趋势的结果说明了SRX01和包含SRX01的乳膏制剂的有益抗老化潜力。

此外，包含SRX01的乳膏制剂对年龄相关斑点和皮肤紧致度表现出显著的效果。不希望受理论束缚，这些效果可归因于上文关于SRX01的实施例3中描述的作用机理。

所有引文在此引入作为参考。

已经参照一个或多个实施例描述了本发明。然而，对于本领域技术人员显而易见的是，在不脱离权利要求所限定的本发明的范围的情况下，可以进行许多变化和修改。

Claims (15)

1.一种治疗或缓解炎症相关皮肤状况的方法，包括施用包含有效量的来自虎耳草物种、大星芹或其组合的提取物和载体的组合物，其中有效量的所述提取物抑制肿瘤坏死因子(TNF)-alpha的活性。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述TNF-alpha的活性能够通过体外测定法测定，所述体外测定法测定在放线菌素D(ActD)存在下，TNF-alpha对TNF-alpha敏感细胞系的剂量依赖性细胞毒性，其中所述提取物抑制外源TNF-alpha对所述细胞系的细胞毒性。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述提取物是水提取物。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述提取物是醇/水提取物。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述虎耳草物种选自圆叶虎耳草(Saxifragarotundifolia)、互叶金腰(Chrysosplenium alternifolium)、Saxifraga androsacea、Saxifraga asjera、Saxifraga biflora、Saxifraga bryoides、Saxifraga caesia、麝香虎耳草(Saxifraga exarata)、Saxifraga muscoides、对叶虎耳草(Saxifragaoppositifolia)、星虎耳草(Saxifraga stellaris)、Saxifraga seguieri、圆锥虎耳草(Saxifraga paniculata)、楔叶虎耳草(Saxifraga cuneifolia)、番杏虎耳草(Saxifragaaizoides)、Saxifraga stolonifera。

6.根据权利要求4所述的方法，其中所述提取物在TNF-alpha浓度大于1000ng/ml TNF-alpha时抑制TNF-alpha的细胞毒性。

7.根据权利要求4所述的方法，其中所述提取物在TNF-alpha浓度为约0.01ng/ml至约1000ng/mlTNF-alpha时抑制TNF-alpha的细胞毒性。

8.根据权利要求3所述的方法，其中所述提取物在5.0-9mg/ml的浓度范围内抑制COX1、COX2和脂氧合酶的活性。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述炎症相关的皮肤状况选自咬伤、蜇伤、皮疹、皮肤瘙痒、皮肤起泡、晒伤、雀斑、皮肤灼伤、UV暴露或辐射、皮肤老化、减少皮肤发红、减少皮肤紧致度下降、皮肤过敏、年龄相关斑点、过敏性皮肤、牛皮癣、特应性皮炎、脱发、皮肤接触化学刺激物、皮肤接触污染物、皮肤接触污垢、皮肤接触杂质、以及它们的组合。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物是外用皮肤制剂。

11.根据权利要求2所述的方法，其中所述提取物包含一种或多种苯基丙烯酸或一种或多于一种类黄酮。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述一种或多种苯基丙烯酸是绿原酸。

13.根据权利要求1所述的方法，其中所述提取物还诱导抗IL1-细胞应答。

14.根据权利要求5所述的方法，其中所述炎症相关的皮肤状况选自咬伤、蜇伤、皮疹、皮肤瘙痒、皮肤起泡、晒伤、雀斑、皮肤灼伤、UV暴露或辐射、皮肤老化、减少皮肤发红、减少皮肤紧致度下降、皮肤过敏、年龄相关斑点、过敏性皮肤、牛皮癣、特应性皮炎、脱发、皮肤接触化学刺激物、皮肤接触污染物、皮肤接触污垢、皮肤接触杂质、以及它们的组合。

15.一种治疗或缓解皮肤状况的方法，包括施用包含有效量的来自虎耳草物种、大星芹或其组合的提取物和载体的组合物，其中有效量的所述提取物抑制肿瘤坏死因子(TNF)-alpha的活性，所述皮肤状况由下列引起：咬伤、蜇伤、皮疹、皮肤瘙痒、皮肤起泡、晒伤、雀斑、皮肤灼伤、UV暴露或辐射、皮肤老化、减少皮肤发红、减少皮肤紧致度下降、皮肤过敏、年龄相关斑点、特应性皮肤、牛皮癣、特应性皮炎、脱发、皮肤接触化学刺激物、皮肤接触污染物、皮肤接触污垢、皮肤接触杂质、以及它们的组合。