JP2019514981A - 皮膚に対する化粧品または治療用途のためのSaxifraga抽出物 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、Saxifragaから得られる抽出物およびその使用に関する。
Saxifragaは、多年生草本高山植物である。この種は、イベリア半島、アルプス山脈およびバルカン半島における、中欧および南欧に生育する。
炎症は、例えば、病原体、感染、刺激物または細胞に対する損傷等、有害な刺激に応答した免疫系の活性化が関与する。損傷した細胞が、免疫系細胞、例えば、マクロファージを区域にリクルートするシグナルを分泌すると、局所的免疫系活性化が始まる。マクロファージは、炎症誘発性サイトカイン、例えば、インターロイキン−1ベータ(「IL−1β」)および腫瘍壊死因子アルファ(「TNFα」または「TNF−アルファ」)を放出する。
急性炎症は、組織統合性を維持し、組織修復に寄与することによる、傷害性刺激を除去するための身体の初期保護的応答である。重篤なまたは遷延した侵害性刺激は、組織傷害の部位に存在する細胞の型の進行性シフトを生じる慢性炎症性応答をもたらし得る。慢性炎症は、組織の同時の破壊および炎症の過程からの治癒として特徴付けることができ、修復媒介ではなくむしろ傷害誘発の最終結果によるものである。
本発明は、Saxifraga sp.、Astrantia majorならびにSaxifraga sp.およびAstrantia majorの組合せから得られる抽出物、ならびにこれらの使用に関する。さらに、本発明は、Saxifraga rotundifolia、Chrysosplenium alternifolium、Saxifraga androsacea、Saxifraga asjera、Saxifraga biflora、Saxifraga bryoides、Saxifraga caesia、Saxifraga exarata、Saxifraga muscoides、Saxifraga oppositifolia、Saxifraga stellaris、Saxifraga seguieri、Saxifraga paniculata、Saxifraga cuneifolia、Saxifraga aizoides、Saxifraga stoloniferaのうちの1種または1種より多く、Astrantia majorおよびこれらの組合せから得られる抽出物、ならびにこれらの使用を提供する。
Saxifraga rotundifolia由来の抽出物の調製
培養および収穫
Saxifraga rotundifolia植物は、BIO Suisseラベル(駆除薬、殺虫剤または化成肥料なし)にて、アルプス山脈において1000メートル超で栽培される。植物は収穫され、原材料は乾燥され、温度および湿度制御環境中に維持する。
収穫バッチ全体は、1500rpmのRetsch ZM300を使用して、4mmガーゼを備える遠心分離カットによりホモジナイズされる。粉砕したら、抽出するまで、真空包装されたアルミ箔バッグ(830mbar、溶接1,5秒間)中に材料を維持する。
Saxifraga rotundifolia抽出物は、次のパラメータを使用して、粉砕された植物材料から、例えば加速溶媒抽出(ASE;Dionex)によって得られる:
セルサイズ:66ml
植物の量:4g
支持体の量:4g
溶媒:H2O milliQ
温度:40または100℃
加熱時間:5分間
抽出持続時間:10分間
%フラッシュ(Flush):65
サイクル数:1
抽出物の特徴付け
乾物の決定
抽出物の5mlアリコートは、105℃のオーブン内で蒸発乾固される。乾物は、2回反復した重量測定決定によって決定される。
3個の主要ピーク(クロロゲン酸、ミリシトリンおよびクエルシトリン)が次の通りに測定される。抽出物のアリコートは、0.46μmフィルターを通して濾過される。HPLCは、オートサンプラー、ポンプおよび分析セルを有するDAD検出器を備えるWatersシステムで行われる。ランは、0.8ml/分の流動によりKinetex 5μ C18 150×4.6mm(Phenomenex)カラムで行われる。検出は、360nm波長で行われる。注射容量は、20μlに設定される。ピーク面積は、抽出物の乾物により正規化される。
7つの系列希釈(希釈因数4)が行われ、各希釈の20μl試料が、透明マイクロウェルプレートにて3回反復して分析される。測定は、Bertholdマイクロプレートリーダーにて520nm波長で行われる。300μlのDPPH反応性(2,2−ジフェニル−1−ピクリルヒドラジル(hadrazyl)、40mg/l、メタノール中)が、ウェルに添加され、30分間のインキュベーション後に、プレートの吸光度が測定される。得られる阻害曲線は、mg/ml単位の乾物でのEC50の決定を可能にする。
抽出物の生物学的活性
腫瘍壊死因子(TNFα)またはインターロイキン−1ベータ(IL−1β)活性の阻害
IL−6産生
TNF−アルファの活性またはTNF−アルファの生理学的応答は、例えば、ヒト上皮(CACO2)細胞からのTNF−アルファ誘導性IL−6放出(図1Aを参照)またはヒトケラチノサイト(keratinocye)からのIL−8放出(図1B)の濃度依存性阻害を測定するin vitroアッセイを使用してモニターすることができる。
SRX01の抗TNF効果が、ストレッサー、UV光に応答した皮膚の早期老化の原因となるコラゲナーゼおよびエラスターゼの放出における阻害効果を示すことができるか研究するために、2種のモデルを分析したが、これらは、UV光に曝露した、加齢したヒト線維芽細胞および皮膚外植片である。
抽出物の製剤
当業者には公知であろうが、実施例1に記載されている方法を使用して、Saxifraga sp.、例えば、Saxifraga rotundifolia、Chrysosplenium alternifolium、Saxifraga androsacea、Saxifraga asjera、Saxifraga biflora、Saxifraga bryoides、Saxifraga caesia、Saxifraga exarata、Saxifraga muscoides、Saxifraga oppositifolia、Saxifraga stellaris、Saxifraga seguieri、Saxifraga paniculata、Saxifraga cuneifolia、Saxifraga aizoides、Saxifraga stolonifera、Astrantia majorおよびこれらの組合せから得られる抽出物は、化粧品として許容されるクリーム、シャンプーまたはスプレー内に製剤化することができ、限定されないが例えば、「Cosmetic Formulation of Skin Care Products」(2006年、Zoe Diana Draelos、Lauren A Thaman編、Taylor & Francis;参照により本明細書に組み込む)。
皮疹の低下
敏感肌を有する年齢18〜60歳の23名の女性ボランティアにおける、UV曝露に起因する光線性発疹におけるSRX01の効果のランダム化単盲検臨床研究を行った。本研究は、UV光処置後に異なる皮膚区域に適用された、活性化合物がない以外は同一組成を有するクリーム(プラセボ)に対して、UV光処置後に皮膚区域に適用された、5%(乾物0.4mg/mL)のSRX01を含有するクリームの効果を評価した。UV光処置は、同じ持続時間のものであり、紅斑の誘導に十分であった。
SRX01の抗老化効果
年齢50〜70歳の34名の女性パネリストにおける3ヶ月間の二重盲検プラセボ対照臨床治験を行って、眼の輪郭の皺、加齢性のしみおよび皮膚の堅さにおけるSRX01の効果を決定した。顔および首の半分にSRX01を有するクリームを、または顔および首の残りの半分にSRX01を欠く同じクリーム(プラセボ/対照)を適用する前に(D0)、ならびにその1(D28)、2(D36)および3(D56)ヶ月後に、機器測定値を得た。プラセボ/対照クリームは、湿潤および皮膚保護効果を有することが公知の保湿成分(グリセリン、脂肪酸)を含有した。
下表3に提示されている結果に示す通り、エアブラスト誘導性皮膚変形の体積および最大深度は、1、2および3ヶ月間の処置後に、SRX01を含有するクリーム(クレームヴィサージュ(creme visage)ref.:2129.04)で処置された顔の側面で有意に減少される。加えて、プラセボクリーム(クレームヴィサージュref.:2129.08)で処置された皮膚において測定される効果よりも、SRX01を含有するクリームに曝露された皮膚において効果が増加される。1ヶ月後に、SRX01に曝露された皮膚において測定される体積および最大深度は、プラセボ/対照クリームに曝露された皮膚において測定される効果よりも有意に良好であった。
色素沈着の減少を反映する、皮膚しみの色に関連づけられる全指標の有意な変化が、SRX01を含有するクリーム(クレームヴィサージュref.:2129.04;表4)の適用により経時的に観察された。プラセボ/対照クリーム(クレームヴィサージュref.:2129.08)で処置した皮膚において、経時的な効果は観察されなかった。この効果は、色度座標b*を参照して観察され、全時点にわたって、プラセボ/対照クリームと比較して、有意な変化が、SRX01を含むクリーム製剤で処置した皮膚において観察された。その上、個々の類型学的角度(ITA)結果を参照すると、最大+23%の増加が、3ヶ月後に観察される。ITA増加が、D28のプラセボ/対照クリームと比較して観察され、ITA増加は、D56で有意に異なる。
下表5を参照すると、異なる時点における皺のシリコーンインプリントにより得られる皺の総数、皺の総表面、長さおよび深度を測定して得られた結果が提供されている。
特定の実施形態において、例えば、以下が提供される:
(項目1)
炎症関連の皮膚状態を処置または軽減する方法であって、Saxifraga sp.、Astrantia majorまたはこれらの組合せ由来の有効量の抽出物および担体を含む組成物を投与するステップを含み、前記有効量の前記抽出物が、腫瘍壊死因子(TNF)−アルファ活性を阻害する、方法。
(項目2)
前記TNF−アルファ活性が、アクチノマイシンD(ActD)の存在下で、TNF−アルファ感受性細胞株におけるTNF−アルファの用量依存性細胞傷害性を測定するin vitroアッセイによって測定可能であり、前記抽出物が、前記細胞株における外因的TNF−アルファの細胞傷害性を阻害する、項目1に記載の方法。
(項目3)
前記抽出物が、水抽出物である、項目1に記載の方法。
(項目4)
前記抽出物が、アルコール/水抽出物である、項目1に記載の方法。
(項目5)
前記Saxifraga sp.が、Saxifraga rotundifolia、Chrysosplenium alternifolium、Saxifraga androsacea、Saxifraga asjera、Saxifraga biflora、Saxifraga bryoides、Saxifraga caesia、Saxifraga exarata、Saxifraga muscoides、Saxifraga oppositifolia、Saxifraga stellaris、Saxifraga seguieri、Saxifraga paniculata、Saxifraga cuneifolia、Saxifraga aizoides、Saxifraga stoloniferaの群から選択される、項目1に記載の方法。
(項目6)
前記抽出物が、1000ng/mlのTNF−アルファを超えるTNF−アルファ濃度において、TNF−アルファの細胞傷害性を阻害する、項目4に記載の方法。
(項目7)
前記抽出物が、約0.01ng/ml〜約1000ng/mlのTNF−アルファのTNF−アルファ濃度において、TNF−アルファの細胞傷害性を阻害する、項目4に記載の方法。
(項目8)
前記抽出物が、5.0〜9mg/mlの濃度範囲にわたり、COX1、COX2およびリポキシゲナーゼ活性を阻害する、項目3に記載の方法。
(項目9)
前記炎症関連の皮膚状態が、咬傷、刺傷、皮疹、皮膚のそう痒、皮膚の水疱形成、日焼け、太陽によるしみ、皮膚の熱傷、UV曝露または照射、皮膚の老化、皮膚の発赤の低下、皮膚の堅さの減少の低下、皮膚アレルギー、加齢性のしみ、アトピー性皮膚、乾癬、アトピー性皮膚炎、脱毛症、化学的刺激物への皮膚の曝露、汚染物質への皮膚の曝露、汚物への皮膚の曝露、デブリへの皮膚の曝露およびこれらの組合せから選択される、項目1に記載の方法。
(項目10)
前記組成物が、外用のための皮膚調製物である、項目1に記載の方法。
(項目11)
前記抽出物が、1種もしくは2種以上のフェニルプロピオン酸または1種もしくは2種以上のフラボノイドを含む、項目2に記載の方法。
(項目12)
前記1種または2種以上のフェニルプロピオン酸が、クロロゲン酸である、項目11に記載の方法。
(項目13)
前記抽出物が、抗IL1細胞応答をさらに誘導する、項目1に記載の方法。
(項目14)
前記炎症関連の皮膚状態が、咬傷、刺傷、皮疹、皮膚のそう痒、皮膚の水疱形成、日焼け、太陽によるしみ、皮膚の熱傷、UV曝露または照射、皮膚の老化、皮膚の発赤の低下、皮膚の堅さの減少の低下、皮膚アレルギー、加齢性のしみ、アトピー性皮膚、乾癬、アトピー性皮膚炎、脱毛症、化学的刺激物への皮膚の曝露、汚染物質への皮膚の曝露、汚物への皮膚の曝露、デブリへの皮膚の曝露およびこれらの組合せから選択される、項目5に記載の方法。
(項目15)
皮膚状態を処置または軽減する方法であって、Saxifraga sp.、Astrantia majorまたはこれらの組合せ由来の有効量の抽出物および担体を含む組成物を投与するステップを含み、前記有効量の前記抽出物が、腫瘍壊死因子(TNF)−アルファ活性を阻害し、前記皮膚状態が、咬傷、刺傷、皮疹、皮膚のそう痒、皮膚の水疱形成、日焼け、太陽によるしみ、皮膚の熱傷、UV曝露または照射、皮膚の老化、皮膚の発赤の低下、皮膚の堅さの減少の低下、皮膚アレルギー、加齢性のしみ、アトピー性皮膚、乾癬、アトピー性皮膚炎、脱毛症、化学的刺激物への皮膚の曝露、汚染物質への皮膚の曝露、汚物への皮膚の曝露、デブリへの皮膚の曝露およびこれらの組合せに起因する、方法。
Claims (15)
- 炎症関連の皮膚状態を処置または軽減する方法であって、Saxifraga sp.、Astrantia majorまたはこれらの組合せ由来の有効量の抽出物および担体を含む組成物を投与するステップを含み、前記有効量の前記抽出物が、腫瘍壊死因子(TNF)−アルファ活性を阻害する、方法。
- 前記TNF−アルファ活性が、アクチノマイシンD(ActD)の存在下で、TNF−アルファ感受性細胞株におけるTNF−アルファの用量依存性細胞傷害性を測定するin vitroアッセイによって測定可能であり、前記抽出物が、前記細胞株における外因的TNF−アルファの細胞傷害性を阻害する、請求項1に記載の方法。
- 前記抽出物が、水抽出物である、請求項1に記載の方法。
- 前記抽出物が、アルコール/水抽出物である、請求項1に記載の方法。
- 前記Saxifraga sp.が、Saxifraga rotundifolia、Chrysosplenium alternifolium、Saxifraga androsacea、Saxifraga asjera、Saxifraga biflora、Saxifraga bryoides、Saxifraga caesia、Saxifraga exarata、Saxifraga muscoides、Saxifraga oppositifolia、Saxifraga stellaris、Saxifraga seguieri、Saxifraga paniculata、Saxifraga cuneifolia、Saxifraga aizoides、Saxifraga stoloniferaの群から選択される、請求項1に記載の方法。
- 前記抽出物が、1000ng/mlのTNF−アルファを超えるTNF−アルファ濃度において、TNF−アルファの細胞傷害性を阻害する、請求項4に記載の方法。
- 前記抽出物が、約0.01ng/ml〜約1000ng/mlのTNF−アルファのTNF−アルファ濃度において、TNF−アルファの細胞傷害性を阻害する、請求項4に記載の方法。
- 前記抽出物が、5.0〜9mg/mlの濃度範囲にわたり、COX1、COX2およびリポキシゲナーゼ活性を阻害する、請求項3に記載の方法。
- 前記炎症関連の皮膚状態が、咬傷、刺傷、皮疹、皮膚のそう痒、皮膚の水疱形成、日焼け、太陽によるしみ、皮膚の熱傷、UV曝露または照射、皮膚の老化、皮膚の発赤の低下、皮膚の堅さの減少の低下、皮膚アレルギー、加齢性のしみ、アトピー性皮膚、乾癬、アトピー性皮膚炎、脱毛症、化学的刺激物への皮膚の曝露、汚染物質への皮膚の曝露、汚物への皮膚の曝露、デブリへの皮膚の曝露およびこれらの組合せから選択される、請求項1に記載の方法。
- 前記組成物が、外用のための皮膚調製物である、請求項1に記載の方法。
- 前記抽出物が、1種もしくは2種以上のフェニルプロピオン酸または1種もしくは2種以上のフラボノイドを含む、請求項2に記載の方法。
- 前記1種または2種以上のフェニルプロピオン酸が、クロロゲン酸である、請求項11に記載の方法。
- 前記抽出物が、抗IL1細胞応答をさらに誘導する、請求項1に記載の方法。
- 前記炎症関連の皮膚状態が、咬傷、刺傷、皮疹、皮膚のそう痒、皮膚の水疱形成、日焼け、太陽によるしみ、皮膚の熱傷、UV曝露または照射、皮膚の老化、皮膚の発赤の低下、皮膚の堅さの減少の低下、皮膚アレルギー、加齢性のしみ、アトピー性皮膚、乾癬、アトピー性皮膚炎、脱毛症、化学的刺激物への皮膚の曝露、汚染物質への皮膚の曝露、汚物への皮膚の曝露、デブリへの皮膚の曝露およびこれらの組合せから選択される、請求項5に記載の方法。
- 皮膚状態を処置または軽減する方法であって、Saxifraga sp.、Astrantia majorまたはこれらの組合せ由来の有効量の抽出物および担体を含む組成物を投与するステップを含み、前記有効量の前記抽出物が、腫瘍壊死因子(TNF)−アルファ活性を阻害し、前記皮膚状態が、咬傷、刺傷、皮疹、皮膚のそう痒、皮膚の水疱形成、日焼け、太陽によるしみ、皮膚の熱傷、UV曝露または照射、皮膚の老化、皮膚の発赤の低下、皮膚の堅さの減少の低下、皮膚アレルギー、加齢性のしみ、アトピー性皮膚、乾癬、アトピー性皮膚炎、脱毛症、化学的刺激物への皮膚の曝露、汚染物質への皮膚の曝露、汚物への皮膚の曝露、デブリへの皮膚の曝露およびこれらの組合せに起因する、方法。
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