CN109142485A - 一种葡萄糖传感器及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种葡萄糖传感器及其制备方法,涉及柔性传感器领域。葡萄糖传感器包括包括柔性基底层、设置在柔性基底层上的石墨烯层以及设置在石墨烯层上的电极和复合薄膜层,复合薄膜附着在电极和石墨烯层上,且复合薄膜层由混合溶液制得,混合溶液包括第一蛋白溶液和葡萄糖氧化酶溶液。该传感器稳定性好、灵敏度高、生物相容性高。本发明还提供了葡萄糖传感器的制备方法,制备工艺简单,各项参数易于控制,重复性强。
Description
技术领域
本发明涉及柔性传感器领域,且特别涉及一种葡萄糖传感器及其制备方法。
背景技术
近年来糖尿病的发病率越来越高,严重威胁人类的健康。长期存在的高血糖导致各种组织的慢性损害、功能性障碍,严重者导致死亡。糖尿病患者的血糖含量高于正常水平,同时,汗液与尿液中排泄出的葡萄糖也可以在一定程度上反应一些疾病,因此,精确监测体液中的葡萄糖含量尤为重要。目前广泛应用的葡萄糖传感器是基于酶催化的传感器,但是基于酶催化的传感器的稳定性较差、不便携带。
发明人研究发现,石墨烯具有优良的电催化性能,使其成为制备酶电化学生物传感器理想材料之一。此外,石墨烯良好的生物相容性能够保持传感器所负载酶的生物活性,改善传感器的稳定性。而天然蛋白质是一种天然的蛋白聚合物,含有大量的氨基和羧基,具有很好的生物相容性、热稳定性及无毒等优良特点,是一种优良生物材料。将石墨烯和天然蛋白质的优点相结合,制备生物相容性好,稳定度高、可实时监测血糖含量的可穿戴的葡萄糖传感器十分有意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种葡萄糖传感器,此葡萄糖传感器结构简单,柔韧性好、生物相容性好、稳定性和灵敏度高。
本发明的另一目的在于提供一种葡萄糖传感器的制备方法,制备工艺简单,各项参数易于控制,重复性强。
本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。
本发明提供了一种葡萄糖传感器,包括柔性基底层、设置在所述柔性基底层上的石墨烯层以及设置在所述石墨烯层上的电极和复合薄膜层,所述复合薄膜层附着在所述电极和所述石墨烯层上,且所述复合薄膜层由混合溶液固化制得,所述混合溶液包括第一蛋白质溶液和葡萄糖氧化酶溶液。
本发明还提供了一种葡萄糖传感器的制备方法,包括以下步骤:
S1,获得所述柔性基底层;
S2,在所述柔性基底层上形成石墨烯层;
S3,在所述石墨烯层上形成所述电极,得到预组装物;
S4,将所述预组装物置于所述混合溶液中进行提拉镀膜,而后固化形成所述复合薄膜层。
本发明实施例的一种葡萄糖传感器及其制备方法的有益效果是:
(1)本发明实施例提供的葡萄糖传感器采用天然蛋白作为柔性基底,具有良好的生物相容性,可直接与皮肤接触,为实现制备可穿戴葡萄糖传感器提供了基础,将来可应用于生物医学和可穿戴电子设备等领域。
(2)本发明还利用天然蛋白质固定葡萄糖氧化酶,对葡萄糖氧化酶固定的同时,又能长期保存葡萄糖氧化酶的活性,使得制备得到的葡萄糖传感器拥有有较长的寿命及灵敏性。
(3)本发明还以石墨烯作为传输层,石墨烯具有良好的导电性和较大的比表面积,从而制得的葡萄糖传感器的稳定性好,灵敏度高。
(4)本发明实施例提供的葡萄糖传感器结构简单,其制备工艺简单,各项参数易于控制,重复性强。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案,下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍,应当理解,以下附图仅示出了本发明的某些实施例,因此不应被看作是对范围的限定,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本发明实施例的葡萄糖传感器的结构示意图;
图2为本发明实施例1提供的葡萄糖传感器对不同浓度的葡萄糖的响应电流增量;
图3为本发明实施例1提供的葡萄糖传感器在不同时间条件下对不同浓度的葡萄糖的响应电流增量。
图标:1-柔性基底层;2-石墨烯层;3-电极;4-复合薄膜层。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者,按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明实施例的一种葡萄糖传感器及其制备方法进行具体说明。
本发明提供了一种葡萄糖传感器,包括柔性基底层1、设置在所述柔性基底层1上的石墨烯层2以及设置在所述石墨烯层2上的电极3和复合薄膜层4,所述复合薄膜层4附着在所述电极3和所述石墨烯层2上,且所述复合薄膜层4由混合溶液固化制得,所述混合溶液包括第一蛋白质溶液和葡萄糖氧化酶溶液。
进一步地,所述柔性基底层1为蛋白质薄膜。使用天然蛋白质作为柔性基底层1,生物相容性好,可直接与皮肤接触,为实现制备可穿戴葡萄糖传感器提供了基础,将来可应用于生物医学和可穿戴电子设备等领域。
本发明实施例提供的葡萄糖传感器的构造如图1所示,通过天然蛋白质固定葡萄糖氧化酶,固定葡萄糖氧化酶的同时又能长期保存葡萄糖氧化酶的活性,使得传感器有较长的寿命。此外,使用石墨烯作为传输层具有良好的导电性和较大的比表面积,从而制得稳定性好、灵敏度高的葡萄糖传感器。
本发明实施例提供的一种葡萄糖传感器的制备方法,包括以下步骤:
S1,获得所述柔性基底层1。
进一步地,获得所述柔性基底层1的步骤包括:将第二蛋白质溶液与水溶性聚合物溶液进行混合,浇筑成膜,得到所述柔性基底层1;其中,所述第二蛋白质的质量分数为3%~8%。
进一步地,所述第二蛋白质为羊毛角蛋白、牛血清蛋白和丝素蛋白中的一种;所述水溶性聚合物为嵌段共聚物、接枝共聚物、无规共聚物、支化共聚物和共轭共聚物中的一种。
优选地,本实施例较佳实施例中,选用丝素蛋白溶液和聚氨酯溶液的混合溶液。丝素蛋白是源于家蚕蚕丝的一种天然蛋白质,具有非常优异的机械性能和生物相容性,对细胞无毒副作用,且能在生物体内/体外进行降解。聚氨酯具有较高的机械强度和氧化稳定性,且拥有较高的柔曲性和回弹性。将丝素蛋白溶液和聚氨酯溶液混合制备得到的蛋白质薄膜的柔韧性好、生物相容性好,适合作为葡萄糖传感器的柔性基底层1。
进一步地,丝素蛋白溶液的制备方法为:将天然蚕茧利用碳酸氢钠溶液脱胶处理得到干净的丝素蛋白纤维,然后利用8~10mol/L的LiBr溶液溶解后透析,然后浓缩得到再生丝素蛋白溶液。优选地,再生丝素蛋白溶液中含有质量分数为3%~8%的丝素蛋白。
进一步地,所述水溶性聚合物与所述第二蛋白质的质量比为1:1~3。优选地,在本发明较佳实施例中,水溶性聚合物与所述第二蛋白质的质量比为1:1~2。按照上述比例制备的柔性基底层1生物相容性较好,缺不丧失柔韧性。
S2,在所述柔性基底层1上形成石墨烯层2。
进一步地,在所述柔性基底层1上形成石墨烯层2的步骤包括:采用化学气相沉积法制得石墨烯,将所述石墨烯转移到所述柔性基底层1上。
进一步地,石墨烯转移到柔性基底层1的方法为:将铜箔上化学气相沉积(CVD)生长的石墨烯,旋涂上聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA),放入1~6%wt的过硫酸铵溶液中腐蚀铜箔,PMMA保护石墨烯不被过硫酸铵溶液腐蚀。而后用柔性基底层1捞起石墨烯,晾干后,在丙酮溶液中除去石墨烯表面的PMMA。
S3,在所述石墨烯层2上形成所述电极3,得到预组装物。
进一步地,在所述石墨烯层2上形成所述电极3的步骤包括:利用掩膜版在石墨烯层2上磁控溅射形成多个银电极3。
进一步地,每个所述电极3宽度S2为0.3mm~2mm,每两个所述电极3之间的距离S1为0.1mm~0.6mm。按照上述方法制备得到的电极3稳定性高,且包含在葡萄糖传感器里面,不与皮肤直接接触,造成误差。
S4,将所述预组装物置于所述混合溶液中进行提拉镀膜,而后固化形成所述复合薄膜层4。
进一步地,所述混合溶液中,第一蛋白质为羊毛角蛋白、牛血清蛋白和丝素蛋白中的一种。所述第一蛋白质的质量分数为0.5~2.5%。优选地,蛋白质的质量分数为1%。
进一步地,所述混合溶液中,所述第一蛋白质与所述葡萄糖氧化酶的质量比为为5~100:1。优选地,在本发明的较佳实施例中,蛋白质与葡萄糖氧化酶的质量比为为10~100:1。
天然蛋白质的作用是将葡萄糖氧化酶固定在石墨烯-蛋白质薄膜,因此天然蛋白质的质量分数要多于葡萄糖氧化酶的质量分数。但是,天然蛋白质的数量又不能比葡萄糖氧化酶多太多,否则制备成的葡萄糖传感器因葡萄糖氧化酶过少,不灵敏。
进一步地,在提拉镀膜过程中,所述预组装物以100μm/s~700μm/s的速度浸渍至所述混合溶液中,以100μm/s~1000μm/s的速度提拉出所述混合溶液。
优选地,在本发明较佳实施例中,所述提拉镀膜的步骤为:将含有电极3的石墨烯-蛋白质薄膜的一面以100μm/s~700μm/s的速度垂直、匀速浸渍到蛋白质-葡萄糖氧化酶混合溶液中。待一段时间后,将石墨烯-蛋白质薄膜以100μm/s~1000μm/s的速度垂直、匀速、连续上升,确保液面无振动,这样才能在石墨烯-蛋白质薄膜形成膜层连续、厚度均匀的薄膜。其中薄膜的厚度为1~20nm。
进一步地,所述固化步骤为:将镀膜后的预组装物置于固化剂中12h。
进一步地,所述固化剂为甘油或丙酮。优选地,使用甘油进行固化,有助于提高蛋白质溶液的成膜性能。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
本实施例提供的一种葡萄糖传感器,按照以下步骤制备而成:
(1)丝素蛋白溶液制备:将蚕茧进行除杂处理后放进沸腾的碳酸氢钠溶液中进行除胶,重复碱洗两次,其中碳酸氢钠溶液质量浓度为6g/L。然后于温清水中漂洗,于60℃烘箱中烘干。将烘干的丝素纤维置于9.3mol/L的LiBr溶液中,于60℃烘箱中溶解4h。接着将溶解后的丝素蛋白溶液放入截留量为3500D的透析袋中于去离子水中透析3天,最后过滤得到丝素蛋白溶液原液,其中,丝素蛋白的质量分数约为7.4%。
(2)制备柔性基底层:将丝素蛋白溶液原液配置成5%wt的丝素蛋白溶液,而后加入聚氨酯溶液,混合均匀,浇筑在玻璃基底上恒温恒湿成膜,得到柔性自支撑的蛋白质薄膜。其中,丝素蛋白与聚氨酯的质量比为1:1。
(3)转移石墨烯:将铜箔上CVD生长的石墨烯,旋涂上PMMA,放入3%wt的过硫酸铵溶液中腐蚀铜箔,PMMA保护石墨烯不被过硫酸铵溶液腐蚀。而后用蛋白质薄膜捞起石墨烯,晾干后,在丙酮溶液中除去石墨烯表面的PMMA,得到石墨烯-蛋白质薄膜。
(4)制备电极:利用掩膜版在石墨烯-蛋白质薄膜上磁控溅射银电极,两个电极间的距离为0.6mm,电极宽度为2mm。
(5)配制蛋白质-葡萄糖氧化酶混合溶液:在丝素蛋白溶液原液中加入葡萄糖氧化酶溶液,最终,丝素蛋白与葡萄糖氧化酶的质量比为10:1且丝素蛋白的质量分数为1%。
(6)将含有电极的石墨烯-蛋白质薄膜的一面以500μm/s的速度下降,浸渍到蛋白质-葡萄糖氧化酶混合溶液中。待一段时间后,以500μm/s的速度上升,形成10nm薄膜。而后在甘油中浸泡12h,固化丝素蛋白,使用银线引出导线即得到葡萄糖传感器。
实施例2
本实施例提供的一种葡萄糖传感器,与实施例1的区别之处在于:
步骤(5)中,丝素蛋白与葡萄糖氧化酶的质量比为20:1。
实施例3
本实施例提供的一种葡萄糖传感器,与实施例1的区别之处在于:
步骤(5)中,丝素蛋白与葡萄糖氧化酶的质量比为100:1。
试验例1
将实施例1制备得到的葡萄糖传感器放到不同浓度的葡萄糖溶液中,对其响应电流进行测试,结果如图2所示。
图2为本发明实施例1的葡萄糖传感器对不同浓度的葡萄糖的响应电流增量。从图上可以明显看出,随着葡萄糖浓度的增加,本发明实施例1的葡萄糖传感器响应电流增量呈现稳步增加趋势,证明了本发明制备的葡萄糖传感器在低浓度的葡萄糖溶液中,也有电流变化,灵敏度高。且响应电流增量曲线平滑,证明了本发明制备的葡萄糖传感器具有较高的稳定性。
试验例2
将实施例1制备得到的葡萄糖传感器放到葡萄糖溶液中随着时间的增加,加入定量的葡萄糖,改变葡萄糖溶液浓度,对葡萄糖传感器在不同时间条件下对不同浓度的葡萄糖的响应电流进行测试,结果如图3所示。
图3为本发明实施例1的葡萄糖传感器在不同时间条件下对不同浓度的葡萄糖的响应电流增量。从图3可见,即使是20微摩尔的葡萄糖浓度,实施例1提供的葡萄糖传感器也有电流变化,灵敏度高。且随着时间和葡萄糖浓度的增加,实施例1提供的葡萄糖传感器并没有丧失其灵敏性,且可长时间进行测试,证明了实施例1提供的葡萄糖传感器稳定性好,可进行连续使用。
综上所述,本发明通过天然蛋白质固定葡萄糖氧化酶,固定葡萄糖氧化酶的同时又能长期保存葡萄糖氧化酶的活性,使得传感器有较长的寿命。此外,使用石墨烯作为传输层具有良好的导电性和较大的比表面积,从而制得稳定性好、灵敏度高的葡萄糖传感器。
以上所描述的实施例是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围,而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
Claims (10)
1.一种葡萄糖传感器,其特征在于,包括柔性基底层、设置在所述柔性基底层上的石墨烯层以及设置在所述石墨烯层上的电极和复合薄膜层,所述复合薄膜层附着在所述电极和所述石墨烯层上,且所述复合薄膜层由混合溶液固化制得,所述混合溶液包括第一蛋白质溶液和葡萄糖氧化酶溶液。
2.根据权利要求1所述葡萄糖传感器的制备方法,其特征在于,所述柔性基底层为蛋白质薄膜。
3.一种如权利要求1~2任意一项所述的葡萄糖传感器的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1,获得所述柔性基底层;
S2,在所述柔性基底层上形成石墨烯层;
S3,在所述石墨烯层上形成所述电极,得到预组装物;
S4,将所述预组装物置于所述混合溶液中进行提拉镀膜,而后固化形成所述复合薄膜层。
4.根据权利要求3所述葡萄糖传感器的制备方法,其特征在于,获得所述柔性基底层的步骤包括:将第二蛋白质溶液与水溶性聚合物溶液进行混合,浇筑成膜,得到所述柔性基底层;其中,第二蛋白质溶液中第二蛋白质的质量分数为3%~8%。
5.根据权利要求4所述葡萄糖传感器的制备方法,其特征在于,所述第二蛋白质为羊毛角蛋白、牛血清蛋白和丝素蛋白中的一种;所述水溶性聚合物为嵌段共聚物、接枝共聚物、无规共聚物、支化共聚物和共轭共聚物中的一种;其中,所述水溶性聚合物与所述第二蛋白质的质量比为1:1~3。
6.根据权利要求3所述葡萄糖传感器的制备方法,其特征在于,在所述柔性基底层上形成石墨烯层的步骤包括:
采用化学气相沉积法制得石墨烯,将所述石墨烯转移到所述基底层上。
7.根据权利要求3所述葡萄糖传感器的制备方法,其特征在于,在所述石墨烯层上形成所述电极的步骤包括:
利用掩膜版在石墨烯层上磁控溅射形成多个银电极;其中,每个所述电极宽度为0.3mm~2mm,相邻两个所述电极之间的距离为0.1mm~0.6mm。
8.根据权利要求3所述葡萄糖传感器的制备方法,其特征在于,在步骤S4中,所述混合溶液中,第一蛋白质溶液为羊毛角蛋白溶液、牛血清蛋白溶液和丝素蛋白溶液中的一种;其中,所述混合溶液中第一蛋白质的质量分数为0.5~2.5%。
9.根据权利要求3所述葡萄糖传感器的制备方法,其特征在于,在步骤S4中,所述混合溶液中,所述第一蛋白质与所述葡萄糖氧化酶的质量比为为5~100:1。
10.根据权利要求3所述葡萄糖传感器的制备方法,其特征在于,在步骤S4中,在提拉镀膜过程中,所述预组装物以100μm/s~700μm/s的速度浸渍至所述混合溶液中,以100μm/s~1000μm/s的速度提拉出所述混合溶液。
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Legal Events
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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