CN109125611A - 一种植物提取物及其制备方法和应用 - Google Patents

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CN109125611A CN201711486834.8A CN201711486834A CN109125611A CN 109125611 A CN109125611 A CN 109125611A CN 201711486834 A CN201711486834 A CN 201711486834A CN 109125611 A CN109125611 A CN 109125611A
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Abstract

本发明公开了一种植物提取物及其制备方法和应用。一种植物提取物的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：(1)将麦冬、铁皮石斛用银耳(Tremella fuciformis)进行微生物转化，得微生物转化物质；(2)将步骤(1)所得微生物转化物质用醇的水溶液或水提取，即得所述植物提取物。所述制备方法操作步骤简单方便，工艺合理，获得的植物提取物具有明显的延缓皮肤衰老、提高机体机能的作用，能够促进成纤维细胞中ATP的产生，抑制衰老成纤维细胞中金属蛋白酶‑1和金属蛋白酶‑3的基因表达，可通过内服给药或皮肤给药，发挥其提高机体机能、抵抗皮肤等器官衰老的效果，具有很好的经济和社会效益。

Description

一种植物提取物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及一种植物提取物及其制备方法和应用。
背景技术
衰老(ageing)指在正常状况下生物体发育成熟后，随年龄的增加，自身组织结构逐步发生退行性变化，机体器官的机能减退，内环境自稳能力减弱、对内外环境损伤因素的抵抗力降低，趋向死亡的自然现象。
在人类智慧的历史长河中，人类不断尝试着与衰老进行对抗，人类文明发现，内外环境是影响衰老的重要因素，例如：紫外线的照射、有毒物质的侵袭等等都是导致衰老的重要因素，通过躲避有害因素的伤害，以及利用自然资源激发或提高人体机体的抵抗能力，可以有效延缓衰老。随着人类与这些导致衰老的因素的对抗，人类寿命在不断的增加。
然而随着人类文明的发展，导致人类器官衰老的因素也越来越多，典型是各类辐射对人类最大器官皮肤的影响，例如手机、电脑等电子设备对皮肤的辐射伤害，以及人类文明下，制冷设备的普及，对环境掠夺式的破坏，导致太阳辐照到地表的强度加强，而提高机体对抗衰老能力的资源却日益匮乏，提高资源的利用度也就越发重要。
成纤维细胞(fibroblast)是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞(mesenchymal cell)分化而来。2013年12月，英国伦敦国王学院研究人员发现成纤维细胞具有不同类型，它们的独特性能可帮助修复受损皮肤，并降低年龄老化对皮肤的影响。
研究发现，成纤维细胞在衰老过程中ATP的产生减少，这主要是因为线粒体在衰老过程中受到了损伤：线粒体DNA受到自由基的攻击引起氧化损伤导致线粒体DNA缺失突变，从而引起线粒体氧化磷酸化功能受损，最终导致能量产出缺陷，ATP产生减少；同时衰老过程中线粒体的膜电位降低、线粒体肿胀等损害也引起了线粒体呼吸活动下降，ATP产生减少。总之，线粒体的损伤引起了ATP含量表达的降低，ATP的水平可反映线粒体的功能状态，ATP的减少标着着机体机能的衰退。
MMP是一组含锌蛋白酶家族，会降解不同的真皮基质蛋白，从而引起皮肤的衰老：它由25名成员组成，分为胶原酶类、明胶酶类、基质溶素和膜型MMPs。不同类型的MMP降解不同的真皮基质蛋白，其中与皮肤密切关系的有MMP-1和MMP-3：MMP-1主要降解Ⅰ，Ⅱ和Ⅲ型胶原蛋白，MMP-3会降解大量细胞外基质，如IV，V，IX和X型胶原，明胶，纤维蛋白-1，纤连蛋白，层粘连蛋白和蛋白聚糖，除此以外，它还会激活MMP前体，促进其它MMP的产生；研究发现在衰老的过程中，MMP-1和MMP-3表达含量增加，引起不同类型的胶原和其它蛋白的降解，从而造成皱纹加深，皮肤松弛等衰老现象。所以细胞外基质金属蛋白酶-1和细胞外基质金属蛋白酶-3的变化，也直接反映了成纤维细胞的衰老程度，越多衰老越快，越少衰老越慢。
基于现代分子生物学的研究手段，人们不断的研制各类抑制皮肤衰老的制剂，其中以中医理论为基础的中药学称为研究热点之一。研究发现，中药材在发挥延缓衰老方面的效果存在以下亟待解决的问题，1、有显著效果的中药材，往往存在资源稀缺的问题；2、资源丰富的药材又往往存在，效果不够显著，或量效比过大，不方便使用的问题；本发明针对以上问题，筛选出，具有协同作用的、常见的资源丰富的中药材，采用现代生物转化技术，大幅度提高其协同后的抗衰老效果。从而解决了以上问题，获得了资源丰富，效果显著的抗衰老植物提取物。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术中具有显著抑制皮肤衰老的中药材资源稀缺，而资源丰富的药材效果不佳的缺陷，提供一种植物提取物及其制备方法和应用。本发明的制备方法操作步骤简单方便，工艺合理，获得的植物提取物具有明显的延缓皮肤衰老、提高机体机能的作用，能够促进成纤维细胞中ATP的产生，抑制衰老成纤维细胞中金属蛋白酶-1和金属蛋白酶-3的基因表达，可通过内服给药或皮肤给药，发挥其提高机体机能、抵抗皮肤等器官衰老的效果，具有很好的的经济和社会效益。
本发明提供一种植物提取物的制备方法，其包括如下步骤：
(1)将麦冬、铁皮石斛用银耳(Tremella fuciformis)进行微生物转化，得微生物转化物质；
(2)将步骤(1)所得微生物转化物质用醇的水溶液或水提取，即得所述植物提取物；
其中，步骤(1)中所述银耳的用量为麦冬和铁皮石斛总重量的1～10％，所述的微生物转化为将银耳通过液态发酵培养获得液态菌种，将所述液态菌种接种至麦冬、铁皮石斛以及水的混合物中进行固态发酵培养。所述混合物中的水的用量为所述麦冬和所述铁皮石斛总重量的1～4倍。
步骤(1)中所述麦冬的用量可为本领域常规，较佳地为5～95％，更佳地为20～90％，进一步更佳地为70％；所述铁皮石斛的用量较佳地为5～95％，更佳地为10～80％，进一步更佳地为20～40％，最佳地为30％；所述的百分比为占麦冬和铁皮石斛总重量的百分比；
步骤(1)中所述麦冬和所述铁皮石斛的粒径大小可为本领域常规，较佳地为20～60目，更佳地为40目；
步骤(1)中所述银耳的用量较佳地为麦冬和铁皮石斛总重量的2～5％；
步骤(2)中所述的醇的水溶液可为本领域常规的醇的水溶液，较佳地为乙醇或丙二醇的水溶液；更佳地为丙二醇的水溶液；所述乙醇或所述丙二醇的水溶液的质量浓度较佳地为20～40％，更佳地为30％；所述的醇的水溶液或所述水的用量较佳地为步骤(1)所得微生物转化物质总重量的8～20倍，更佳地为15倍；
步骤(2)中所述提取的温度可为本领域常规，较佳地为40～95℃，更佳地为65～85℃，进一步更佳地为75℃；
步骤(2)中所述提取的时间可为本领域常规，较佳地为2～6小时，更佳地为3～4小时；
步骤(2)中所述提取的次数可为本领域常规，较佳地为1～3次，更佳地为2次；较佳地，当所述提取的次数为2～3次时合并提取液。
所述的液态发酵培养的温度可为本领域常规，较佳地为15～40℃，更佳地为18～35℃，进一步更佳地为27℃；所述的液态发酵培养的时间较佳地为4～15天，更佳地为6～12天，进一步更佳地为10天；
所述的固态发酵培养的温度可为本领域常规，较佳地为15～40℃，更佳地为18～35℃，进一步更佳地为28℃；所述的固态发酵培养的时间较佳地为3～18天，更佳地为5～16天，进一步更佳地为10天。
较佳地，对步骤(2)所得植物提取物进行后处理，所述后处理包括将所述植物提取物进行静置、过滤和浓缩；
所述静置的时间可为本领域常规，较佳地为3～24小时，更佳地为10～18小时，进一步更佳地为15小时；
所述静置的温度可为本领域常规，较佳地为1～10℃，更佳地为2～6℃，进一步更佳地为3℃；
所述的浓缩较佳地为将所述植物提取物浓缩至原料质量的1～3倍，所述原料质量为所述麦冬和所述铁皮石斛的总质量。
在所述的浓缩之后较佳地加入甘油和/或丙二醇，并调节含有所述甘油和/或丙二醇的植物提取物的pH值，较佳地调节所述pH为3～7，更佳地为5.5；所述甘油的用量较佳地为所述浓缩后的质量的0～0.2倍；所述丙二醇的用量较佳地为所述浓缩后的质量的0.01～0.1倍，所述百分比为占所述植物提取物总质量的百分比；调节所述pH值的pH调节剂可为本领域常规，较佳地为乳酸、柠檬酸和盐酸中的一种或多种。
所述的后处理的过程中较佳地还包括防腐剂的添加，所述防腐剂较佳地为苯甲酸、山梨酸、尼泊金甲酯和苯氧乙醇中的一种或多种，更佳地为苯氧乙醇。
本发明还提供一种上述的制备方法制得的植物提取物。
本发明还提供一种上述的植物提取物在制备药物或者化妆品中的应用，所述的药物较佳地为抗皱口服液。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：
本发明的制备方法操作步骤简单方便，工艺合理，获得的植物提取物具有明显的延缓皮肤衰老、提高机体机能的作用，能够促进成纤维细胞中ATP的产生，抑制衰老成纤维细胞中金属蛋白酶-1和金属蛋白酶-3的基因表达，可通过内服给药或皮肤给药，发挥其提高机体机能、抵抗皮肤等器官衰老的效果，具有很好的经济和社会效益。
附图说明
图1为各实施例以及对比实施例所得提取物对衰老成纤维细胞ATP表达的影响。
图2为各实施例以及对比实施例所得提取物对衰老成纤维细胞金属蛋白酶-1基因表达的影响。
图3为各实施例以及对比实施例所得提取物对衰老成纤维细胞金属蛋白酶-3基因表达的影响。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
实施例1
本发明所涉及的银耳菌，为广布种，是现代技术中已知菌种，并可以从商业途径获得。本专利在市场上随机购买了两种菌种，菌种1：保存于中国林业微生物菌种保藏管理中心的银耳，编号：CFCC 87563；菌种2：保存于中国农业微生物菌种保藏中心的银耳，编号：ACCC 50546。
1、液态发酵培养
液体培养基：马铃薯提取液1.0L，葡萄糖20.0g，KH2PO4 3.0g，MgSO4.7H2O 1.5g，维生素B1微量，琼脂15.0g，pH6.0。126℃灭菌30分钟，冷却即得；
马铃薯提取液：取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1.0L煮沸30min，滤去马铃薯块，将滤液补足至1.0L。
液态发酵培养：在上述液体培养基上接种1％的上述菌种1，于27℃发酵培养6天得银耳液态菌种；
2、固态发酵培养
取麦冬700g，铁皮石斛300g，粉碎为40目，加1.5倍质量的水，灭菌后，接种5％的银耳菌液态菌种，于28℃条件下，发酵10天，之后高温灭活；
3、提取配制
加15倍质量的30％乙醇水溶液，75℃条件下，煎煮4小时，过滤取滤液，滤渣再次加入15倍的30％乙醇水溶液，75℃条件下，煎煮2小时，过滤取滤液，合并两次滤液，3℃条件下，静置15小时，过滤，滤液浓缩至1650g，加入丙二醇150g，甘油200g，加热至126℃，保温30分钟，加入苯甲酸8g，搅拌使溶解，以柠檬酸调节pH值至5.5，搅匀，灌装，得液体成品。
实施例2
1、液态发酵培养
液体培养基：马铃薯提取液1.0L，葡萄糖20.0g，KH2PO4 3.0g，MgSO4.7H2O 1.5g，维生素B1微量，琼脂15.0g，pH6.0。126℃灭菌30分钟，冷却即得；
马铃薯提取液：取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1.0L煮沸30min，滤去马铃薯块，将滤液补足至1.0L。
液态发酵培养：在上述液体培养基上接种1％的上述菌种2，于18℃发酵培养12天得银耳液态菌种；
2、固态发酵培养
取麦冬200g，铁皮石斛800g，粉碎为20目，加2倍质量的水，灭菌后，接种10％的银耳菌液态菌种，于18℃条件下，发酵16天，之后高温灭活；
3、提取配制
加8倍质量的20％的乙醇，在温度为：85℃条件下，煎煮3小时，过滤取滤液；滤渣再次加入8倍质量的20％的乙醇，在温度为：85℃条件下，煎煮3小时；过滤取滤液；滤渣第三次加入8倍质量的20％的乙醇，在温度为：85℃条件下，煎煮3小时，过滤取滤液。合并三次滤液，10℃条件下，静置10小时，过滤，滤液浓缩至1450g，加入丙二醇300g，甘油250g，加热至126℃，保温30分钟，加入苯甲酸8g，搅拌使溶解，以盐酸调节pH值至7，搅匀，灌装，得液体成品。
实施例3
1、液态发酵培养
液体培养基：马铃薯提取液1.0L，葡萄糖20.0g，KH2PO4 3.0g，MgSO4.7H2O 1.5g，维生素B1微量，琼脂15.0g，pH6.0。126℃灭菌30分钟，冷却即得；
马铃薯提取液：取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1.0L煮沸30min，滤去马铃薯块，将滤液补足至1.0L。
液态发酵培养：在上述液体培养基上接种1％的上述菌种2，于35℃发酵培养4天得银耳液态菌种；
2、固态发酵培养
取麦冬900g，铁皮石斛100g，粉碎为60目，加2.5倍质量的水，灭菌后，接种2％的银耳菌液态菌种，于35℃条件下，发酵3天，之后高温灭活；
3、提取配制
加20倍质量的水，在温度为：95℃条件下，煎煮2小时，过滤取滤液，6℃条件下，静置24小时，过滤，滤液浓缩至1980g，加入丙二醇20g，加热至126℃，保温30分钟，加入苯甲酸8g，搅拌使溶解，以乳酸调节pH值至3，搅匀，灌装，得液体成品。
实施例4
1、液态发酵培养
液体培养基：马铃薯提取液1.0L，葡萄糖20.0g，KH2PO4 3.0g，MgSO4.7H2O 1.5g，维生素B1微量，琼脂15.0g，pH6.0。126℃灭菌30分钟，冷却即得；
马铃薯提取液：取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1.0L煮沸30min，滤去马铃薯块，将滤液补足至1.0L。
液态发酵培养：在上述液体培养基上接种1％的上述菌种2，于15℃发酵培养15天得银耳液态菌种；
2、固态发酵培养
取麦冬50g，铁皮石斛950g，粉碎为30目，加1倍质量的水，灭菌后，接种1％的银耳菌液态菌种，于40℃条件下，发酵5天，之后高温灭活；
3、提取配制
加8倍质量的40％的丙二醇，在温度为：40℃条件下，煎煮6小时，过滤取滤液，1℃条件下，静置3小时，过滤，滤液浓缩至2500g，加入丙二醇300g，加热至126℃，保温30分钟，加入苯甲酸8g，搅拌使溶解，以乳酸调节pH值至4，搅匀，灌装，得液体成品。
实施例5
1、液态发酵培养
液体培养基：马铃薯提取液1.0L，葡萄糖20.0g，KH2PO4 3.0g，MgSO4.7H2O 1.5g，维生素B1微量，琼脂15.0g，pH6.0。126℃灭菌30分钟，冷却即得；
马铃薯提取液：取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1.0L煮沸30min，滤去马铃薯块，将滤液补足至1.0L。
液态发酵培养：在上述液体培养基上接种1％的上述菌种2，于20℃发酵培养10天得银耳液态菌种；
2、固态发酵培养
取麦冬950g，铁皮石斛50g，粉碎为60目，加4倍质量的水，灭菌后，接种2％的银耳菌液态菌种，于18℃条件下，发酵18天，之后高温灭活；
3、提取配制
加15倍质量的水，在温度为：65℃条件下，煎煮5小时，过滤取滤液，2℃条件下，静置18小时，过滤，滤液浓缩至1200g，加入丙二醇120g，加入甘油200g，加热至126℃，保温30分钟，加入苯甲酸8g，搅拌使溶解，以盐酸和乳酸调节pH值至5，搅匀，灌装，得液体成品。
对比实施例1现有技术中植物提取物
制备植物提取物：取麦冬700g，铁皮石斛300g，加15倍质量倍数的30％乙醇水溶液煎煮二次，第一次2小时，第二次2小时，合并煎液，静置15小时，过滤，滤液浓缩至1650g，加入丙二醇150g，甘油200g，加热至126℃，保温30分钟，加入苯甲酸8g，搅拌使溶解，以柠檬酸调节pH值至5.5，搅匀，灌装，得液体成品。
对比实施例2现有技术中植物提取物
对比实施例中的银耳指常见市售食品，为银耳子实体的干品。
制备植物提取物：取麦冬600g，铁皮石斛300g，银耳100g，加15倍质量倍数的30％乙醇水溶液煎煮二次，第一次2小时，第二次2小时，合并煎液，静置15小时，过滤，滤液浓缩至1650g，加入丙二醇150g，甘油200g，加热至126℃，保温30分钟，加入苯甲酸8g，搅拌使溶解，以柠檬酸调节pH值至5.5，搅匀，灌装，得液体成品。
对比实施例3单味药植物提取物
制备麦冬植物提取物：1000g麦冬加15质量倍数的30％乙醇水溶液，煎煮二次，第一次2小时，第二次2小时，合并煎液，静置15小时，过滤，滤液浓缩至1650g，加入丙二醇150g，甘油200g，加热至126℃，保温30分钟，加入苯甲酸8g，搅拌使溶解，以柠檬酸调节pH值至5.5，搅匀，灌装，得液体麦冬提取物成品。
对比实施例4
制备铁皮石斛植物提取物：1000g铁皮石斛加15质量倍数的30％乙醇水溶液，煎煮二次，第一次2小时，第二次2小时，合并煎液，静置15小时，过滤，滤液浓缩至1650g，加入丙二醇150g，甘油200g，加热至126℃，保温30分钟，加入苯甲酸8g，搅拌使溶解，以柠檬酸调节pH值至5.5，搅匀，灌装，得液体铁皮石斛提取物成品。
对比实施例5
制备银耳提取物：1000g银耳(子实体干品)加15质量倍数的30％乙醇水溶液，煎煮二次，第一次2小时，第二次2小时，合并煎液，静置15小时，过滤，滤液浓缩至1650g，加入丙二醇150g，甘油200g，加热至126℃，保温30分钟，加入苯甲酸8g，搅拌使溶解，以柠檬酸调节pH值至5.5，搅匀，灌装，得液体银耳提取物成品。
效果实施例1实施例植物提取物、对比实施例植物提取物的促进ATP生成的效果实验
测定组合物促进ATP生成量的测试方法如下：
1、测试方法步骤
把成纤维细胞种于48孔培养板，每组设3复孔，培养24h后，把终浓度为1％的各实施例组合物作用于成纤维细胞，其中空白对照组(阳性对照组)及模型组加入相应浓度的溶剂，24小时之后，各组换新鲜的完全培养基，除阳性对照组外，其他各组加入300μM H2O2刺激实验组细胞，处理2小时后，裂解细胞进行ATP检测。
ATP检测相关步骤(在冰浴上溶解及操作)：
(1)在冰上吸除旧的培养液，用PBS清洗一遍。
(2)按照48孔板每孔加入50微升裂解液的比例加入裂解液，使用移液器进行反复吹打使裂解液充分接触并裂解细胞。
(3)裂解后，移入Eppendorf管，4℃，12000g离心10分钟，取上清。
(4)用ATP检测裂解液稀释ATP标准品成适当的浓度梯度，用于测定标准曲线。
(5)按照每个样品或标准品需100微升ATP检测工作液的比例配制适当量的ATP检测工作液。
(6)加100微升ATP检测工作液到检测孔内。室温放置3-5分钟。
(7)在检测孔或检测管内加上10-100μL样品或标准品，迅速用枪(微量移液器)混匀，至少间隔2s后，立即用酶标仪测定发光值。
(8)根据标准品荧光发光值作出标准曲线。按照标准曲线计算出样品中ATP的浓度。
2、测试结果
各组合物对ATP表达的影响如图1所示。
3、结果分析
从图1，我们能够明显看出，在ATP生成的测试中，麦冬提取物、铁皮石斛提取物、银耳提取物对衰老成纤维细胞ATP的生成均具有一定的促进作用；通过对比实施例1、2的提取物方法，提取后，在促进ATP生成上，三者具有明显的协同作用；而经过本发明技术，即麦冬、铁皮石斛经银耳生物转化后进行后续制备，所得的提取物，其在促进衰老成纤维细胞ATP生成的效果上，有了显著的提高。
效果实施例2实施例植物提取物、对比实施例植物提取物的抑制金属蛋白酶-1(MMP-1)和金属蛋白酶-3(MMP-3)基因表达的实验
测试抑制基质金属蛋白酶基因表达的实验如下：
1、实验方法：
(1)实验分组及处理
包括空白对照组(阳性对照组)、过氧化氢组(模型组)、1％实施例组、1％对比实施例组。细胞在培养皿中生长2-4d至80％左右融合度时，换新鲜培养进行处理。1％实施例组和1％对比实施例组分别加入相应浓度的植物提取物，24小时之后，各组换新鲜的完全培养基，除了阳性对照组添加相应的溶剂外，其他组添加300μM H2O2，处理2小时后，然后通过实时定量PCR技术进行基质金属蛋白酶(MMP-1)mRNA和基质金属蛋白酶(MMP-3)mRNA的相对含量检测。
(2)引物设计及合成
表1.引物序列及其长度
2、测试结果
各组合物对基质金属蛋白酶(MMP-1)mRNA和基质金属蛋白酶(MMP-3)mRNA的影响如图2、图3所示。
3、结果分析
从图2、图3，我们能够明显看出，在抑制金属蛋白酶基因表达的测试中，麦冬提取物、铁皮石斛提取物、银耳提取物均能衰老成纤维细胞金属蛋白酶-1(MMP-1)和金属蛋白酶-3(MMP-3)的基因表达；通过传统的提取方法，在抑制MMP-1和MMP-3的基因表达上，具有明显的协同作用；而经过本发明技术，即麦冬、铁皮石斛经银耳生物转化后进行后续制备，所得的提取物，其在抑制衰老成纤维细胞金属蛋白酶基因表达的能力上，有了显著的提高。
应用实施例1延衰凝胶的制备
表2制备延衰凝胶的原料组分及其含量
该延衰凝胶的制备按本领域常规制备，具体为：按配比称量好上述物料，先把卡波U21分散在丙二醇中，然后加水分散；同时升温到60℃，分散完全后，加入透明质酸钠，继续分散；分散完成后，将A相所有组分分散到水中并同时升高温度到85℃，搅拌均匀；预先把D相增溶好；将A相冷却到45℃后，加入B相，搅拌均匀后，加入C、D相各组分；搅拌均匀后出料，pH控制在5.0～6.0。
应用实施例2抗皱口服液
表3制备抗皱口服液的原料组分及其含量
该口服液的制备按本领域常规制备，具体为：按配比称量好上述物料，先把A相卡拉胶分散在丙二醇中，搅匀，然后加饮用水，搅拌均匀后加入C相，加热升温到126℃，保温搅拌30分钟；加入B相，搅拌均匀，搅拌下冷却至45～50℃；加入D相，搅拌均匀出料。

Claims (10)

1.一种植物提取物的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：
(1)将麦冬、铁皮石斛用银耳(Tremella fuciformis)进行微生物转化，得微生物转化物质；
(2)将步骤(1)所得微生物转化物质用醇的水溶液或水提取，即得所述植物提取物；
步骤(1)中所述银耳的用量为麦冬和铁皮石斛总重量的1～10％，所述的微生物转化为将银耳通过液态发酵培养获得液态菌种，将所述液态菌种接种至麦冬、铁皮石斛以及水的混合物中进行固态发酵培养。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述麦冬的用量为5～95％，较佳地为20～90％，更佳地为70％；所述铁皮石斛的用量为5～95％，较佳地为10～80％，更佳地为20～40％，进一步更佳地为30％；所述的百分比为占麦冬和铁皮石斛总重量的百分比；
步骤(1)中所述麦冬和所述铁皮石斛的粒径大小为20～60目，较佳地为40目；
步骤(1)中所述银耳的用量为麦冬和铁皮石斛总重量的2～5％；
和/或，所述混合物中的水的用量为所述麦冬和所述铁皮石斛总重量的1～4倍。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述的醇的水溶液为乙醇或丙二醇的水溶液；较佳地为乙醇的水溶液；所述乙醇或所述丙二醇的水溶液的质量浓度为20～40％，较佳地为30％；所述的醇的水溶液或所述水的用量为步骤(1)所得微生物转化物质总重量的8～20倍，较佳地为15倍；
步骤(2)中所述提取的温度为40～95℃，较佳地为65～85℃，更佳地为75℃；
步骤(2)中所述提取的时间为2～6小时，较佳地为3～4小时；
和/或，步骤(2)中所述提取的次数为1～3次，较佳地为2次；较佳地，当所述提取的次数为2～3次时合并提取液。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的液态发酵培养的温度为15～40℃，较佳地为18～35℃，更佳地为27℃；所述的液态发酵培养的时间为4～15天，较佳地为6～12天，更佳地为10天。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的固态发酵培养的温度为15～40℃，较佳地为18～35℃，更佳地为28℃；所述的固态发酵培养的时间为3～18天，较佳地为5～16天，更佳地为10天。
6.如权利要求1～5任一项所述的制备方法，其特征在于，对步骤(2)所得植物提取物进行后处理，所述后处理包括将所述植物提取物进行静置、过滤和浓缩；
所述静置的时间为3～24小时，较佳地为10～18小时，更佳地为15小时；
所述静置的温度为1～10℃，较佳地为2～6℃，更佳地为3℃；
和/或，所述的浓缩为将所述植物提取物浓缩至原料质量的1～3倍，所述原料质量为所述麦冬和所述铁皮石斛的总质量。
7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，在所述的浓缩之后加入甘油和/或丙二醇，并调节含有所述甘油和/或丙二醇的植物提取物的pH值为3～7，较佳地为5.5；所述甘油的用量为所述浓缩后的质量的0～0.2倍；所述丙二醇的用量为所述浓缩后的质量的0.01～0.1倍，所述百分比为占所述植物提取物总质量的百分比；调节所述pH值的pH调节剂为乳酸、柠檬酸和盐酸中的一种或多种。
8.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述的后处理的过程中还包括防腐剂的添加，所述防腐剂较佳地为苯甲酸、山梨酸、尼泊金甲酯和苯氧乙醇中的一种或多种，更佳地为苯氧乙醇。
9.一种如权利要求1～8任一项所述的制备方法制得的植物提取物。
10.如权利要求9所述的植物提取物在制备药物或者化妆品中的用途；较佳地，所述的用途为将所述的植物提取物应用于抗皱口服液和/或延衰凝胶中。
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