CN109100439A - 一种猪肝、牛羊肉中5种β-受体激动剂残留的检测方法 - Google Patents

一种猪肝、牛羊肉中5种β-受体激动剂残留的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明是一种猪肝、牛羊肉中5种β‑受体激动剂残留的检测方法，所述的5种β‑受体激动剂为：莱克多巴胺，克伦特罗，沙丁胺醇，西马特罗，氯丙那林；检测方法包括测样品提取液制备、超高效液相色谱、质谱和定量计算，以各特征离子质量色谱峰与相应同位素内标的峰面积比为纵坐标，对照溶液的浓度为横坐标，绘制标准曲线，按回归方程计算出样品中的5种β‑受体激动剂的含量。本发明方法操作简便，灵敏度高，准确度好，具有较好重复性和日间精密度，适合大批量畜产品中β‑受体激动剂残留的定性定量检测分析。

Description

一种猪肝、牛羊肉中5种β-受体激动剂残留的检测方法
技术领域
本发明涉及一种食品中残留物的检测方法，特别是一种猪肝、牛羊肉中5种β-受体激动剂残留的检测方法。
背景技术
β-受体激动剂是一类动物兴奋剂，具有促进蛋白合成、降低脂肪沉淀等作用，当它们被用于家畜饲料时，能显著提高胴体的瘦肉率和饲料转化率。由于用于家畜生产的β-受体激动剂通常剂量高，用药时间长，因此容易造成畜禽产品中β-受体激动剂残留超标，通过食物链的传递，最终被消费者食用，造成人体内的残留和蓄积损伤。人在发生β受体激动剂类药物中毒反应时，会表现出严重的心悸、恶心、呕吐、心率加快等症状。严重的可能会危害生命健康，我国政府先后发布了176号公告、235号公告和1519号公告，明令禁止将β受体激动剂用于所有食品动物。然而在利益的驱使下，仍有养殖户将β受体激动剂类药物应用于畜禽养殖过程中，因此建立畜禽产品中残留β-受体激动剂检测方法，通过生产链追溯至不法生产者，在食品安全监管中发挥着重要作用。
常见的β-受体激动剂检测方法有：免疫检测方法：如酶联免疫法、胶体金免疫法、化学发光免疫法。色谱法：高效液相色谱法、气相色谱-质谱法和液相色谱-质谱法。近年来随着液相色谱-质谱联用仪的广泛运用，β-受体激动剂的液质检测方法也不断地得到优化。因此，研发猪肝、牛羊肉中β-受体激动剂残留的检测方法具有重要的意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种新的猪肝、牛羊肉中5种β-受体激动剂残留的检测方法，该方法操作简单，且具有较好的准确度和重复性。
本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本发明是一种猪肝、牛羊肉中5种β-受体激动剂残留的检测方法，其特点是，所述的5种β-受体激动剂为：莱克多巴胺，克伦特罗，沙丁胺醇，西马特罗，氯丙那林；检测方法步骤如下：
(1)测样品提取液制备：取猪肝或牛羊肉样品，绞碎置于离心管中，添加适量的5种β-受体激动剂内标：莱克多巴胺-D3，克伦特罗-D9，沙丁胺醇-D3，西马特罗-D7，氯丙那林-D7；用体积浓度为50％-100％的乙腈溶液漩涡、振荡提取，6000-10000rpm离心5-15min，上清液直接过PRiME HLB固相萃取柱一步净化，氮吹浓缩后用体积浓度为5％一15％甲醇复溶，用0.2μm微孔滤膜过滤，得待测样品提取液；
(2)超高效液相色谱：取待测样品提取液进行超高效液相色谱分离；
色谱条件：色谱柱为Waters Acquity BEH-C18，内径2.1mm×长100mm，填料粒径1.7μm，进样量为2μL-5μL；柱温25℃-40℃；流动相A：10mmol/L乙酸铵，pH＝5；流动相B：10mmol/L乙酸铵甲醇溶液，pH＝5；流速为0.2mL/min-0.4mL/min。
(3)质谱：洗脱液进质谱仪进行分析检测；
质谱条件：在电喷雾离子源正离子模式下进行扫描；毛细管电压0.5kV-3.0kV；离子源温度500℃-800℃；去溶剂气流速800L/Hr-1000L/Hr；采用多反应监测MRM模式进行测定；
(4)定量计算：精密量取5种β-受体激动剂混合标样溶液，用10％甲醇水溶液稀释成浓度为0.5ng/mL-100.0ng/mL的5-6个标准工作溶液，含5种β-受体激动剂内标物浓度为1ng/mL-20ng/mL，供液相色谱一串联质谱仪测定；以各特征离子质量色谱峰与相应同位素内标的峰面积比为纵坐标，对照溶液的浓度为横坐标，绘制标准曲线，按回归方程计算出样品中的5种β-受体激动剂的含量。
本发明所述的一种猪肝、牛羊肉中5种β-受体激动剂残留的检测方法，其进一步优选的技术方案是：步骤(4)中的5种β-受体激动剂的纯度为：莱克多巴胺纯度为98％，克伦特罗纯度为99.1％，沙丁胺醇纯度为99.2％，西马特罗纯度为99.9％，氯丙那林纯度为99.9％。
本发明所述的一种猪肝、牛羊肉中5种β-受体激动剂残留的检测方法，其进一步优选的技术方案是：步骤(1)中的5种β-受体激动剂内标的纯度为：莱克多巴胺-D3纯度为99％，克伦特罗-D9纯度为99.4％，沙丁胺醇-D3纯度为98.4％，西马特罗-D7纯度为99.3％，氯丙那林-D7纯度为99.8％。
本发明所述的一种猪肝、牛羊肉中5种β-受体激动剂残留的检测方法，其进一步优选的技术方案是：步骤(1)中，用体积浓度为80％的乙腈溶液漩涡、振荡提取，10000rpm离心10min，上清液直接过PRiME HLB固相萃取柱一步净化，氮吹浓缩后用体积浓度为10％甲醇复溶，
本发明所述的一种猪肝、牛羊肉中5种β-受体激动剂残留的检测方法，其进一步优选的技术方案是：步骤(2)中，进样量为4μL；柱温30℃。
本发明所述的一种猪肝、牛羊肉中5种β-受体激动剂残留的检测方法，其进一步优选的技术方案是：步骤(2)中，梯度洗脱条件如下：
本发明所述的一种猪肝、牛羊肉中5种β-受体激动剂残留的检测方法，其进一步优选的技术方案是：步骤(3)中，毛细管电压0.6kV；离子源温度500℃；去溶剂气流速1000L/Hr。
本发明所述的一种猪肝、牛羊肉中5种β-受体激动剂残留的检测方法，其进一步优选的技术方案是：步骤(3)中，多反应监测条件离子对、锥孔电压、碰撞能量如下：
本发明所述的一种猪肝、牛羊肉中5种β-受体激动剂残留的检测方法，其进一步优选的技术方案是：步骤(4)中，用10％甲醇水溶液稀释成浓度为0.5、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0ng/mL的标准工作溶液，含5种β-受体激动剂内标物浓度为5ng/mL。
本发明所述的一种猪肝、牛羊肉中5种β-受体激动剂残留的检测方法，其进一步优选的技术方案是：步骤(4)中，所述的回归方程如下：
莱克多巴胺Ractopamine Y＝0.215 98X+0.013 83
克伦特罗Clenbuterol Y＝0.267 96X+0.047 96
沙丁胺醇Salbutamol Y＝0.29 744X-0.000 88
西马特罗Cimaterol Y＝0.506 488X+0.021 00
氯丙那林Clorprenaline Y＝0.66832X+0.017 18。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
1、由于猪肝、牛羊肉中产品中含有大量蛋白质和脂肪，本发是用乙腈水溶剂沉淀蛋白质，通过离心去除蛋白质。然后用PRiME HLB进行简单、快速的净化。样品提取液直接上样至PRiME HLB固相萃取柱，既省略了以往固相萃取过程中的活化、淋洗、洗脱3个步骤，又去除了样品中的脂肪等复杂基质，实现了一步净化，净化后的样品溶液通过氮吹仪浓缩，实现批量快速处理，试验前处理省时高效，可提高检测效率。
2、本发明方法操作简便，灵敏度高，准确度好，适合大批量畜产品中β-受体激动剂残留的定性定量检测分析。
3、该方法具有较好的重复性和日间精密度。可以满足猪肝、牛肉、羊肉中5种β-受体激动剂残留的日常检测要求。
具体实施方式
以下进一步描述本发明的具体技术方案，以便于本领域的技术人员进一步地理解本发明，而不构成对其权利的限制。
实施例1，一种猪肝、牛羊肉中5种β-受体激动剂残留的检测方法，所述的5种β-受体激动剂为：莱克多巴胺，克伦特罗，沙丁胺醇，西马特罗，
氯丙那林；检测方法步骤如下：
(1)测样品提取液制备：取猪肝或牛羊肉样品，绞碎置于离心管中，添加适量的5种β-受体激动剂内标：莱克多巴胺-D3，克伦特罗-D9，沙丁胺醇-D3，西马特罗-D7，氯丙那林-D7；用体积浓度为50％的乙腈溶液漩涡、振荡提取，6000rpm离心5min，上清液直接过PRiME HLB固相萃取柱一步净化，氮吹浓缩后用体积浓度为5％甲醇复溶，用0.2μm微孔滤膜过滤，得待测样品提取液；
(2)超高效液相色谱：取待测样品提取液进行超高效液相色谱分离；
色谱条件：色谱柱为Waters Acquity BEH-C18，内径2.1mm×长100mm，填料粒径1.7μm，进样量为2μL；柱温25℃；流动相A：10mmol/L乙酸铵，pH＝5；流动相B：10mmol/L乙酸铵甲醇溶液，pH＝5；流速为0.2mL/min。
(3)质谱：洗脱液进质谱仪进行分析检测；
质谱条件：在电喷雾离子源正离子模式下进行扫描；毛细管电压0.5kV；离子源温度500℃；去溶剂气流速800L/Hr；采用多反应监测MRM模式进行测定；
(4)定量计算：精密量取5种β-受体激动剂混合标样溶液，用10％甲醇水溶液稀释成浓度为0.5ng/mL-100.0ng/mL的5-6个标准工作溶液，含5种β-受体激动剂内标物浓度为1ng/mL，供液相色谱-串联质谱仪测定；以各特征离子质量色谱峰与相应同位素内标的峰面积比为纵坐标，对照溶液的浓度为横坐标，绘制标准曲线，按回归方程计算出样品中的5种β-受体激动剂的含量。|
实施例2，一种猪肝、牛羊肉中5种β-受体激动剂残留的检测方法，所述的5种β-受体激动剂为：莱克多巴胺，克伦特罗，沙丁胺醇，西马特罗，氯丙那林；检测方法步骤如下：
(1)测样品提取液制备：取猪肝或牛羊肉样品，绞碎置于离心管中，添加适量的5种β-受体激动剂内标：莱克多巴胺-D3，克伦特罗-D9，沙丁胺醇-D3，西马特罗-D7，氯丙那林-D7；用体积浓度为100％的乙腈溶液漩涡、振荡提取，8000rpm离心15min，上清液直接过PRiMEHLB固相萃取柱一步净化，氮吹浓缩后用体积浓度为15％甲醇复溶，用0.2μm微孔滤膜过滤，得待测样品提取液；
(2)超高效液相色谱：取待测样品提取液进行超高效液相色谱分离；
色谱条件：色谱柱为Waters Acquity BEH-C18，内径2.1mm×长100mm，填料粒径1.7μm，进样量为5μL；柱温40℃；流动相A：10mmol/L乙酸铵，pH＝5；流动相B：10mmol/L乙酸铵甲醇溶液，pH＝5；流速为0.4mL/min。
(3)质谱：洗脱液进质谱仪进行分析检测；
质谱条件：在电喷雾离子源正离子模式下进行扫描；毛细管电压-3.0kV；离子源温度800℃；去溶剂气流速1000L/Hr；采用多反应监测MRM模式进行测定；
(4)定量计算：精密量取5种β-受体激动剂混合标样溶液，用10％甲醇水溶液稀释成浓度为0.5ng/mL-100.0ng/mL的6个标准工作溶液，含5种β-受体激动剂内标物浓度为20ng/mL，供液相色谱-串联质谱仪测定；以各特征离子质量色谱峰与相应同位素内标的峰面积比为纵坐标，对照溶液的浓度为横坐标，绘制标准曲线，按回归方程计算出样品中的5种β-受体激动剂的含量。
实施例3，一种猪肝、牛羊肉中5种β-受体激动剂残留的检测方法，所述的5种β-受体激动剂为：莱克多巴胺，克伦特罗，沙丁胺醇，西马特罗，氯丙那林；检测方法步骤如下：
(1)测样品提取液制备：取猪肝或牛羊肉样品，绞碎置于离心管中，添加适量的5种β-受体激动剂内标：莱克多巴胺-D3，克伦特罗-D9，沙丁胺醇-D3，西马特罗-D7，氯丙那林-D7；用体积浓度为80％的乙腈溶液漩涡、振荡提取，10000rpm离心10min，上清液直接过PRiMEHLB固相萃取柱一步净化，氮吹浓缩后用体积浓度为10％甲醇复溶，用0.2μm微孔滤膜过滤，得待测样品提取液；
(2)超高效液相色谱：取待测样品提取液进行超高效液相色谱分离；
色谱条件：色谱柱为Waters Acquity BEH-C18，内径2.1mm×长100mm，填料粒径1.7μm，进样量为4μL；柱温30℃；流动相A：10mmol/L乙酸铵，pH＝5；流动相B：10mmol/L乙酸铵甲醇溶液，pH＝5；流速为0.3mL/min。
(3)质谱：洗脱液进质谱仪进行分析检测；
质谱条件：在电喷雾离子源正离子模式下进行扫描；毛细管电压0.6kV；离子源温度500℃；去溶剂气流速1000L/Hr；采用多反应监测MRM模式进行测定；
(4)定量计算：精密量取5种β-受体激动剂混合标样溶液，用10％甲醇水溶液稀释成浓度为0.5、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0ng/mL的标准工作溶液，含5种β-受体激动剂内标物浓度为5ng/mL，供液相色谱一串联质谱仪测定；以各特征离子质量色谱峰与相应同位素内标的峰面积比为纵坐标，对照溶液的浓度为横坐标，绘制标准曲线，按回归方程计算出样品中的5种β-受体激动剂的含量。
步骤(1)中的5种β-受体激动剂内标的纯度为：莱克多巴胺-D3纯度为99％，克伦特罗-D9纯度为99.4％，沙丁胺醇-D3纯度为98.4％，西马特罗-D7纯度为99.3％，氯丙那林-D7纯度为99.8％。
步骤(4)中的5种β-受体激动剂的纯度为：莱克多巴胺纯度为98％，克伦特罗纯度为99.1％，沙丁胺醇纯度为99.2％，西马特罗纯度为99.9％，氯丙那林纯度为99.9％。
步骤(2)中，梯度洗脱条件如下：
步骤(3)中，多反应监测条件离子对、锥孔电压、碰撞能量如下：
步骤(4)中，所述的回归方程如下：
莱克多巴胺Ractopamine Y＝0.215 98X+0.013 83
克伦特罗Clenbuterol Y＝0.267 96X+0.047 96
沙丁胺醇Salbutamol Y＝0.29 744X-0.000 88
西马特罗Cimaterol Y＝0.506 48X+0.021 00
氯丙那林Clorprenaline Y＝0.668 32X+0.017 18。
实施例4，一种猪肝、牛羊肉中5种β-受体激动剂残留的检测方法实验：
1.1仪器与试剂
UPLC-TQS Micro超高效液相色谱-串联三重四级杆质谱仪，配备电喷雾离子源(Waters公司)；电子天平(德国赛多利斯)；高速冷冻离心机(德国sigma)；固相萃取仪(美国Supelco)；氮吹仪(美国Organomation)；PRiME HLB固相萃取柱(Waters公司)；精密pH计(上海精密科学仪器有限公司)；基本型圆周混合器、数显震荡摇床(德国IKA)。
5种β-受体激动剂：莱克多巴胺纯度为98％，克伦特罗纯度为99.1％，沙丁胺醇纯度为99.2％，西马特罗纯度为99.9％，氯丙那林纯度为99.9％。5种β-受体激动剂内标：莱克多巴胺-D3纯度为99％，克伦特罗-D9纯度为99.4％，沙丁胺醇-D3纯度为98.4％，西马特罗-D7纯度为99.3％，氯丙那林-D7纯度为99.8％。甲醇、乙腈为默克色谱纯；水为超纯水；其余试剂为分析纯。
标准储备液：称取5种β-受体激动剂标准品及内标标准品适量，分别用纯甲醇配置成1mg/mL单标储备液。于-18℃避光保存。准确吸取5种β-受体激动剂药物标准品溶液适量配置成混合标准溶液，再用纯甲醇逐级稀释为1μg/mL的混合溶液，5种β-受体激动剂药物内标混合溶液配制方法同上，于4℃冷藏保存。
1.2分析条件
色谱条件：色谱柱为Waters Acquity BEH-C18(2.1mm×100mm，1.7μm)；进样量为4μL；柱温30℃；流动相A：10mmol/L乙酸铵(pH＝5)，流动相B：10mmol/L乙酸铵(pH＝5)甲醇溶液；流速为0.3mL/min；梯度洗脱条件见表1。
表1梯度洗脱程序
质谱条件：电喷雾离子源，正离子模式；毛细管电压0.6kV；离子源温度500℃；去溶剂气流速1000L/Hr。
1.3样品前处理
准确称取绞碎后试样2.00g于50mL离心管中，添加适量内标。加入10mL的80％乙腈水溶液，漩涡1min，震荡提取10min，10000r/min离心10min。取6mL上清液直接加载到6mL规格PRiME HLB固相萃取柱，保持1秒每滴流速，收集全部流出液，震荡混匀。取4mL流出液在50℃下氮气吹至近干。用1mL浓度为10％甲醇水溶液复溶，用0.2μm微孔滤膜过滤，待测定。
2结果与分析
2.1色谱条件的优化
通过比较0.2％甲酸水溶液-40％甲醇乙腈溶液、0.1％甲酸乙腈溶液-0.1％甲酸水溶液和10mmol/L乙酸铵水溶液-10mmol/L乙酸铵甲醇溶液(pH＝5)三种流动相，发现当流动相中有乙酸铵存在时，峰型较好，响应值较高，因此，用10mmol/L乙酸铵水溶液-10mmol/L乙酸铵甲醇溶液(pH＝5)作为流动相进行梯度洗脱。
2.2质谱条件的优化
在ESI+模式下进行质谱条件优化。以5.0μL/min的流速注入100ng/mL的混合标准溶液，进行一级质谱扫描，获得合适的母离子条件，再对母离子进行二级扫描，调节碰撞能量和锥孔电压，筛选信号最强的子离子作为定量离子，信号次强的子离子作为定性离子，得出多反应监测条件(MRM)：离子对、锥孔电压、碰撞能量见表2。
表2 5种β受体激动剂标品及内标物多反应监测条件(MRM)
2.3方法线性和检出限
精密量取5种β-受体激动剂混合溶液，用10％甲醇水溶液稀释成浓度为0.5、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0ng/mL的标准工作溶液，含内标物浓度为5ng/mL，供液相色谱-串联质谱仪测定。内标法以各特征离子质量色谱峰与相应同位素内标的峰面积比为纵坐标，对照溶液的浓度为横坐标，绘制标准曲线[6]。回归方程及相关系数见表3。由表3可以看出，5种β-受体激动剂药物在0.5～50ng/mL的浓度范围内呈现良好的线性关系，线性相关系数(R2)在0.99963～0.99996范围内。
按照根据特征离子色谱峰信噪比S/N＝3计算方法的检出限，得出5种β-受体激动剂检出限为0.01～0.04μg/kg。按照S/N＝10得出5种β-受体激动剂定量限为0.02～0.15μg/kg
表3 5种β-受体激动剂回归方程及相关系数
2.4回收率
称取猪肝、牛肉、羊肉的空白样品，进行0.5、1、5μg/kg三个不同浓度的添加回收实验，按照1.3方法进行前处理，每个水平重复3次，计算回收率和相对标准偏差RSD。结果见表4。猪肝中5种β-受体激动剂回收率为93.7％～106.1％，牛肉中5种β-受体激动剂回收率为95.2％～104％，羊肉中5种β-受体激动剂回收率为95.1％～106％。该方法具有较好的的回收率，可以满足猪肝、牛肉、羊肉中5种β受体激动剂药物残留的日常检测要求。
表4猪肝、牛肉、羊肉中5种β-受体激动剂药物的平均回收率(n＝3)
2.5精密度
按照1.3前处理方法，分别称取猪肝、牛肉、羊肉样品，进行阳性添加，制备0.5、1、5μg/kg三个不同浓度的样品，每个水平重复6次，进行分析测定。计算相对标准偏差(RSD)。同样操作方法，连续测定三日，计算日间精密度(RSD)，结果见表5。猪肝中5种β-受体激动剂日内精密度(RSD)为：0.6％～4.5％，日间精密度(RSD)为0.5％～4.4％；牛肉中5种β-受体激动剂日内精密度(RSD)为：0.9％～4.1％，日内精密度(RSD)为：0.9％～5.3％；羊肉中5种β-受体激动剂日内精密度(RSD)为：1.2％～3.6％，日内精密度(RSD)为：1.2％～4.1％。结果表明，该方法具有较好的重复性和日间精密度。可以满足猪肝、牛肉、羊肉中5种β-受体激动剂药物残留的日常检测要求。
表5 5种β-受体激动剂药物的精密度(n＝6)
3结论
本方法前处理分为三步，即样品经80％乙腈提取，提取液直接过PRiME HLB固相萃取柱一步净化，氮吹浓缩后用10％甲醇溶解，样品前处理操作简便省时。采用多反应监测(MRM)模式进行测定，内标法定量，当添加量为0.5～5μg/kg时，猪肝中5种β-受体激动剂回收率为93.7％～106.1％，牛肉中5种β-受体激动剂回收率为95.2％～104％，羊肉中5种β-受体激动剂回收率为95.1％～106％，试验表明本法具有较好的准确度和精密度，灵敏度高，前处理省时，适合大批量猪肝、牛肉、羊肉中5种β-受体激动剂的快速检测。

Claims (10)

1.一种猪肝、牛羊肉中5种β-受体激动剂残留的检测方法，其特征在于，所述的5种β-受体激动剂为：莱克多巴胺，克伦特罗，沙丁胺醇，西马特罗，氯丙那林；检测方法步骤如下：
(1)测样品提取液制备：取猪肝或牛羊肉样品，绞碎置于离心管中，添加适量的5种β-受体激动剂内标：莱克多巴胺-D3，克伦特罗-D9，沙丁胺醇-D3，西马特罗-D7，氯丙那林-D7；用体积浓度为50％-100％的乙腈溶液漩涡、振荡提取，6000-10000rpm离心5-15min，上清液直接过PRiME HLB固相萃取柱一步净化，氮吹浓缩后用体积浓度为5％-15％甲醇复溶，用0.2μm微孔滤膜过滤，得待测样品提取液；
(2)超高效液相色谱：取待测样品提取液进行超高效液相色谱分离；
色谱条件：色谱柱为Waters Acquity BEH-C18，内径2.1mm×长100mm，填料粒径1.7μm，进样量为2μL-5μL；柱温25℃-40℃；流动相A：10mmol/L乙酸铵，pH＝5；流动相B：10mmol/L乙酸铵甲醇溶液，pH＝5；流速为0.2mL/min-0.4mL/min；
(3)质谱：洗脱液进质谱仪进行分析检测；
质谱条件：在电喷雾离子源正离子模式下进行扫描；毛细管电压0.5kV-3.0kV；离子源温度500℃-800℃；去溶剂气流速800L/Hr-1000L/Hr；采用多反应监测MRM模式进行测定；
(4)定量计算：精密量取5种β-受体激动剂混合标样溶液，用10％甲醇水溶液稀释成浓度为0.5ng/mL-100.0ng/mL的5-6个标准工作溶液，含5种β-受体激动剂内标物浓度为1ng/mL-20ng/mL，供液相色谱-串联质谱仪测定；以各特征离子质量色谱峰与相应同位素内标的峰面积比为纵坐标，对照溶液的浓度为横坐标，绘制标准曲线，按回归方程计算出样品中的5种β一受体激动剂的含量。
2.根据权利要求1所述的一种猪肝、牛羊肉中5种β-受体激动剂残留的检测方法，其特征在于，步骤(4)中的5种β-受体激动剂的纯度为：莱克多巴胺纯度为98％，克伦特罗纯度为99.1％，沙丁胺醇纯度为99.2％，西马特罗纯度为99.9％，氯丙那林纯度为99.9％。
3.根据权利要求1所述的一种猪肝、牛羊肉中5种β-受体激动剂残留的检测方法，其特征在于，步骤(1)中的5种β-受体激动剂内标的纯度为：莱克多巴胺-D3纯度为99％，克伦特罗-D9纯度为99.4％，沙丁胺醇-D3纯度为98.4％，西马特罗-D7纯度为99.3％，氯丙那林-D7纯度为99.8％。
4.根据权利要求1所述的一种猪肝、牛羊肉中5种β-受体激动剂残留的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，用体积浓度为80％的乙腈溶液漩涡、振荡提取，10000rpm离心10min，上清液直接过PRiME HLB固相萃取柱一步净化，氮吹浓缩后用体积浓度为10％甲醇复溶。
5.根据权利要求1所述的一种猪肝、牛羊肉中5种β-受体激动剂残留的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，进样量为4μL；柱温30℃。
6.根据权利要求1所述的一种猪肝、牛羊肉中5种β-受体激动剂残留的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，梯度洗脱条件如下：
7.根据权利要求1所述的一种猪肝、牛羊肉中5种β-受体激动剂残留的检测方法，其特征在于，步骤(3)中，毛细管电压0.6kV；离子源温度500℃；去溶剂气流速1000L/Hr。
8.根据权利要求1所述的一种猪肝、牛羊肉中5种β-受体激动剂残留的检测方法，其特征在于，步骤(3)中，多反应监测条件离子对、锥孔电压、碰撞能量如下：
9.根据权利要求1所述的一种猪肝、牛羊肉中5种β-受体激动剂残留的检测方法，其特征在于，步骤(4)中，用10％甲醇水溶液稀释成浓度为0.5、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0ng/mL的标准工作溶液，含5种β-受体激动剂内标物浓度为5ng/mL。
10.根据权利要求1所述的一种猪肝、牛羊肉中5种β-受体激动剂残留的检测方法，其特征在于，步骤(4)中，所述的回归方程如下：
莱克多巴胺Ractopamine Y＝0.215 98X+0.013 83
克伦特罗Clenbuterol Y＝0.267 96X+0.047 96
沙丁胺醇Salbutamol Y＝0.29 744X-0.000 88
西马特罗Cimaterol Y＝0.506 48X+0.021 00
氯丙那林Clorprenaline Y＝0.668 32X+0.017 18。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115656396A (zh) * 2022-10-25 2023-01-31 南京农业大学 一种同时测定肉类中多种β-受体激动剂的液质联用检测方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102175784A (zh) * 2011-01-19 2011-09-07 浙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心 固相萃取-液相色谱-质谱/质谱法同时测定猪肉中54种药物残留的方法
CN103472160A (zh) * 2013-09-11 2013-12-25 北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心 液-质联用快速检测瘦肉精含量的方法及样品前处理方法
CN105651869A (zh) * 2014-12-30 2016-06-08 青岛康大食品有限公司 一种猪肉中盐酸克伦特罗的提取方法
CN107525866A (zh) * 2017-08-23 2017-12-29 无锡微色谱生物科技有限公司 一种利用DPX枪头式分散固相微萃取柱萃取及分析β‑受体激动剂类瘦肉精的方法
CN108132319A (zh) * 2017-12-20 2018-06-08 浙江省食品药品检验研究院 一种同时测定畜禽中10类94种残留药物的液相色谱-串联质谱法
CN108303305A (zh) * 2017-12-20 2018-07-20 浙江省食品药品检验研究院 一种用于畜禽肉的残留药物提取剂及其制备方法和应用方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102175784A (zh) * 2011-01-19 2011-09-07 浙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心 固相萃取-液相色谱-质谱/质谱法同时测定猪肉中54种药物残留的方法
CN103472160A (zh) * 2013-09-11 2013-12-25 北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心 液-质联用快速检测瘦肉精含量的方法及样品前处理方法
CN105651869A (zh) * 2014-12-30 2016-06-08 青岛康大食品有限公司 一种猪肉中盐酸克伦特罗的提取方法
CN107525866A (zh) * 2017-08-23 2017-12-29 无锡微色谱生物科技有限公司 一种利用DPX枪头式分散固相微萃取柱萃取及分析β‑受体激动剂类瘦肉精的方法
CN108132319A (zh) * 2017-12-20 2018-06-08 浙江省食品药品检验研究院 一种同时测定畜禽中10类94种残留药物的液相色谱-串联质谱法
CN108303305A (zh) * 2017-12-20 2018-07-20 浙江省食品药品检验研究院 一种用于畜禽肉的残留药物提取剂及其制备方法和应用方法

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DENG, XIAO-JUN 等: "MULTICLASS RESIDUES SCREENING OF 105 VETERINARY DRUGS IN MEAT, MILK, AND EGG USING ULTRA HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY TANDEM QUADRUPOLE TIME-OF-FLIGHT MASS SPECTROMETRY", 《JOURNAL OF LIQUID CHROMATOGRAPHY & RELATED TECHNOLOGIES 》 *
FAN SAI 等: "Simultaneous Detection of Residues of 25 beta(2)-Agonists and 23 beta-Blockers in Animal Foods by High-Performance Liquid Chromatography Coupled with Linear Ion Trap Mass Spectrometry", 《JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY》 *
刘敏 等: "猪肝中β-受体激动剂多残留的样品前处理方法比较及同时检测", 《分析测试学报》 *
汪云花 等: "基于平行反应监测模式的液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱法快速测定猪肉中β-受体激动剂残留", 《食品安全质量检测学报》 *
王新红 等: "《海洋环境中的pops污染及其分析监测技术》", 28 February 2011, 海洋出版社 *
黄德凤 等: "Oasis PRiME HLB-UPLC-MS/MS测定猪肉中78种兽药残留", 《应用纪要》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115656396A (zh) * 2022-10-25 2023-01-31 南京农业大学 一种同时测定肉类中多种β-受体激动剂的液质联用检测方法
CN115656396B (zh) * 2022-10-25 2023-08-29 南京农业大学 一种同时测定肉类中多种β-受体激动剂的液质联用检测方法

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