CN109096370A - 多肽环氧酮化合物 - Google Patents
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Abstract
本发明公开的新化合物和药物组合物可作为蛋白酶体的抑制剂。本发明提供的化合物能抑制蛋白酶体的CT‑L，T‑L和PGPH三种活性，可用于治疗与蛋白酶体相关的各种疾病。
Description
本申请是申请日为2013年7月26日、名称为“多肽环氧酮化合物”的中国专利申请201310317766.8的分案申请。本申请要求于2012年7月26日提交的美国临时申请号61/675,827的优先权，以及于2012年9月20日提交的中国申请号201210352544.5的优先权。两份申请都在此全文引用并入。
发明领域
本发明涉及多肽环氧酮结构的化合物。这些化合物可以用于抑制蛋白酶体的活性。
技术背景
蛋白酶体是一个具有多催化功能的蛋白酶复合体，在细胞内蛋白的降解过程中起关键作用。通常认为蛋白酶体在体内以26S蛋白酶体存在，其分子量约为2000kDa，包含有一个20S核心颗粒(20S蛋白酶体)和两个19S调节颗粒。20S核心颗粒为中空结构，将降解蛋白质的活性位点围在空腔中。核心颗粒的每一端都连接着一个19S调节颗粒，每个调节颗粒都含有多个ATP酶活性位点和泛素结合位点；调节颗粒可以识别多泛素化的蛋白质，并将它们传送到核心颗粒中。除了19S调节颗粒外，还存在另一种调节颗粒，即11S颗粒；11S调节颗粒可以以类似于19S颗粒的方式与核心颗粒结合；11S颗粒可能在降解外源肽上发挥作用。核心颗粒20S蛋白酶体分子量约为700kDa，有28个亚基构成4个环。在酵母和其它真核生物中，两个外环各由7个α亚基构成，两个内环各由七个β亚基组成。α环是19S或11S调节复合体的结合位点，也是两个β内环的物理屏障。两个β内环含有蛋白酶的催化活性位点，蛋白质的降解由20S核心颗粒中的β亚基进行。在体内，抑制20S蛋白酶体很容易与抑制26S蛋白酶体直接关联。已知有两种形式的蛋白酶体：一种是结构蛋白酶体，存在于绝大多数真核生物的细胞内；另一种是免疫蛋白酶体，主要存在于造血细胞及暴露于炎性细胞因子的细胞中。蛋白酶体介导的蛋白质降解是一个高度有规律可循的过程，是细胞内各种生化过程所必需的程序。通过使用不同的肽底物，已定义了真核生物蛋白酶体的三个主要蛋白酶活性：糜蛋白酶样活性(Chymotrypsin-Like,简写为CT-L)，其功能为水解大的疏水氨基酸残基；胰蛋白酶样活性(Trypsin-Like,简写为T-L)，其功能为水解碱性氨基酸残基；及肽基谷氨酰肽水解活性(Peptidyl Glutamyl Peptide Hydrolyzing,简写为PGPH)，其功能为水解酸性氨基酸残基。很长时间以来蛋白酶体一直被认为是药物开发有吸引力的分子靶标，并且在抗肿瘤药物领域获得了临床验证(Orlowski and Kuhn,Clin.Cancer Res.(2008),14,1649-1657)。
已有几类小分子化合物被用来抑制蛋白酶体活性，这些化合物包括肽硼酸，β内酯和多肽环氧酮(Bennett and Kirk,Current Opinion in Drug Discovery&Development(2008),11,616-625；Borissenko and Groll,Chem.Rev.(2007)107,687-717)。然而，这些化合物通常缺乏适当的特异性与生物活性，难以用来在分子水平,细胞水平及体内充分开发和利用蛋白酶体。例如，多肽硼酸和β-内酯都是非特异性的20S蛋白酶体抑制剂，因为它们也可以抑制其他蛋白酶(Borissenko and Groll,Chem.Rev.(2007)107,687-717；Myunget al.,Medicinal Research Reviews(2001),21,245-273)。这就可能导致这些抑制剂在体内除了抑制蛋白酶体以外也抑制其它蛋白酶，从而产生脱靶毒性。另一方面，在专利US6831099B1,WO2005/105827,CN101044157A,US2007/0105786A1中公开的多肽环氧酮作为20S蛋白酶体的抑制剂具有高度的选择性。但是这些多肽环氧酮只抑制20S蛋白酶体的CT-L活性，而不能抑制T-L活性和/或PGPH活性。已有研究表明，同时抑制20S蛋白酶体的CT-L，T-L，和PGPH三个活性，可以比抑制其中一个或两个活性更显著地减少蛋白质水解，从而对抑制肿瘤细胞生长产生协同作用，提高肿瘤治疗的疗效(Chauchan et al.,Blood(2008),111,1654-1664；Kisselev et al.,J.Biol.Chem.(2006),281,8582-8590)。因此，有必要开发出能同时抑制蛋白酶体的CT-L，T-L，和PGPH三个活性的新型蛋白酶体抑制剂。
发明内容
本发明提供具有肽环氧酮结构的化合物，这些化合物能同时抑制蛋白酶体的CT-L，T-L，和PGPH活性。
在某些实施方式中，本发明的化合物具有如下式(Ⅰ)所示的结构，及其对映体，非对映体，互变异构体，和药物可接受的盐或溶剂化物或前体药物：
其中R1选自
和R4；
R4为
R2是–(CH2)mR5；
R3独立选自氢，羟基，C1-10烷基，C1-10烷氧基，C1-10烷羟基，C1-10烷氧烷基，氨基，
NHR6，-R7-O(C＝O)-R8，-R7-(C＝O)X-R8，-R7-OPO3M1M2，
R5为苯基，或Ry；
Ry为羟基，-OPO3M1M2，-R10-O(C＝O)-R11，
R6为C1-10烷基，苯基，-(C＝O)C1-6烷基，-(C＝O)苯基；
每个R7，R9和R10独立选自不存在，或C1-10亚烷基(优选-CH2-，-C2H4-，-C3H7-)；
每个R8和R11独立选自氢，羟基，金属离子(优选Na+，和K+)；C1-10烷基(优选C1-4烷基)，-C1-10亚烷基-NR12R13，-NR12R13，或-OPO3M1M2；
每个R12和R13独立选自氢，C1-10烷基(优选C1-4烷基)或取代的C1-10烷基(优选C1-4烷基)；
每个M1，和M2独立选自氢，金属离子(优选Na+，和K+)；
X为不存在或O；
Y为不存在或-(C＝O)-；
Z为不存在或O；且
m为0，1，2，3，4或5。
在某些实施方式中，当R5是苯基时，R1不是R4。在某些实施方式中，当R1是R4时，R5不是苯基。
在某些实施方式中，式(I)化合物包括选自化合物I-1，I-2，I-3，I-4，I-5，I-6，I-7，I-8，I-9，I-10，I-11，I-12，I-13，I-14，I-15，I-16中的结构。
在某些实施方式中，式(I)化合物具有式(II)的结构：
其中每个R1和R2定义如上所述。
在某些实施方式中，式(II)化合物包括选自化合物1-5，7-13，20，25，27和28的结构，以及其对映体，非对映体，互变异构体，和药物可接受的盐或溶剂化物或前体药物。
在某些实施方式中，式(I)化合物具有式(III)的结构：
其中R3定义如上所述。
在某些实施方式中，式(I)化合物具有式(IV)或者(V)的结构：
其中R3定义如上所述。
在某些实施方式中，式(I)化合物具有式(VI)的结构：
其中R4和Ry定义如上所述。
在某些实施方式中，本申请的化合物包括下式(VII)的结构：
其中R1选自下列基团：
其中R3定义如上所述。
在某些实施方式中，本申请的式(I)的化合物包括下式(VIII)的结构：
其中R1选自下列基团：
一方面，本发明提供的多肽环氧酮能抑制20S蛋白酶体的催化活性。在某些实施方式中，本申请提供的多肽环氧酮在浓度低于约5μM，2μM，或1μM时能抑制20S蛋白酶体催化活性。在某些实施方式中，本发明提供的多肽环氧酮不仅对20S蛋白酶体的CT-L活性有更强的抑制作用，而且也能在浓度低于约5μM时有效地抑制20S蛋白酶体的T-L活性和PGPH活性。在优选实施方式中，本发明提供的多肽环氧酮在浓度低于约5μM，2μM，或1μM时，能同时抑制20S蛋白酶体的CT-L，T-L活性和PGPH活性。
另一方面，本发明还提供了动物实验以证明本发明提供的多肽环氧酮化合物能在体内同时抑制20S蛋白酶体的CT-L，T-L活性和PGPH活性。比如，以本发明中所述的多肽环氧酮化合物为受试品对小鼠给药，小鼠血液中蛋白酶体的CT-L活性，T-L活性和PGPH活性就会同时被抑制。
另一方面，本发明也提供了可用于治疗人类各种疾病的药物组合物。这些药物组合物包括有效剂量的本发明提供的蛋白酶体抑制剂和药用载体；人类疾病包括但不限于癌症、炎症、神经退行性疾病(例如老年性痴呆)、肌肉萎缩症、慢性传染病、发烧、肌肉废用，去神经支配，神经损伤，和免疫相关的疾病等。
在某些实施方式中，药物组合物包括约10-9克至约10克本发明提供的化合物。合适的剂量范围为每人每天约0.01毫克至约5克。
在某些实施方式中，本发明提供的化合物和药物组合物可以配方成适当的制剂以便通过注射途径给药(如皮下，静脉，肌肉，动脉，鞘膜，囊内，眼框内，心脏内，皮层内，腹膜内，经气管，表皮下，关节内，囊下，蛛网膜下，脊柱内，胸骨内，和/或输液)和非注射途径给药(如口服，肠道，口腔，鼻，鼻内，经粘膜，表皮，贴膏，皮肤，眼药，肺部，舌下，直肠，阴道或局部给药)。
另一方面，本发明提供了治疗与蛋白酶体相关的疾病的方法以及同时抑制体内蛋白酶体的CT-L，T-L活性和PGPH活性的方法，这些方法包括施用有效剂量的本发明提供的蛋白酶体抑制剂。
另一方面，本发明提供了制备多肽环氧酮的方法。
本发明的其它特点和优势可见下面的详细叙述和权利要求书。
发明详述
化合物及其盐
一方面，本发明的化合物含有式(I)的结构，及其对映体，非对映体，互变异构体，和药物可接受的盐或溶剂化物或前体药物：
其中R1选自
和R4；
R4为
R2是–(CH2)mR5；
每个R3独立选自氢，羟基，C1-10烷基，C1-10烷氧基，C1-10烷羟基，C1-10烷氧烷基，氨基，NHR6，-R7-O(C＝O)-R8，-R7-(C＝O)X-R8，-R7-OPO3M1M2，
R5为苯基，或Ry；Ry为–羟基，-OPO3M1M2，-R10-O(C＝O)-R11，
R6为C1-10烷基，苯基，-(C＝O)C1-6烷基，-(C＝O)苯基；
每个R7，R9和R10独立选自不存在，或C1-10亚烷基(优选-CH2-，-C2H4-，-C3H7-)；
每个R8和R11独立选自氢，羟基，金属离子(优选Na+，和K+)，C1-10烷基(优选C1-4烷基)，-C1-10亚烷基-NR12R13，-NR12R13，或-OPO3M1M2；
每个R12和R13是独立选自氢，C1-10烷基(优选C1-4烷基)或取代C1-10烷基(优选C1-4烷基)；
每个M1，和M2独立选自氢，金属离子(优选Na+，和K+)；
X为不存在或O；
Y为不存在或-(C＝O)-；
Z为不存在或O；且
m为0，1，2，3，4或5。
在某些实施方式中，当R5是苯基时，R1不是R4。在某些实施方式中，当R1是R4时，R5不是苯基。
在某些实施方式中，R3是-R7-O(C＝O)-R8，R7和R8定义如上所述。在某些实施方式中，R7为不存在，R8选自氢，C1-10烷基(优选C1-4烷基)，-C1-10亚烷基-NR12R13，-NR12R13，其中R12和R13定义如上所述。在某些实施方式中，R7是C1-10亚烷基(优选-CH2-，-C2H4-，-C3H7-)，R8为氢，C1-10烷基(优选C1-4烷基)，-C1-10亚烷基-NR12R13，-NR12R13，其中R12和R13定义如上所述。
在某些实施方式中，R3为-R7-(C＝O)X-R8，R7和R8定义如上所述。在某些实施方式中，R7为不存在，X为O，R8选自氢，金属离子(优选Na+和K+)，NH4，C1-10烷基(优选C1-4烷基)，-C1-10亚烷基-NR12R13，-NR12R13，其中R12和R13定义如上所述。在某些实施方式中，R7为不存在，X为不存在，R8选自-NR12R13，其中R12和R13定义如上所述。
在某些实施方式中，R3为氨基，NHCOMe，NHCOEt，NHCOC3H7，或NHBoc。
在某些实施方式中，R3为 且R7，R9，X，Y，和Z的定义如上所述。在某些实施方式中，R7，R9，X，Y，和Z中至少有一个存在。在某些实施方式中，X，Y，Z和R7都是不存在，而R9为C1-10亚烷基(优选-CH2-，-C2H4-，-C3H7-)。在某些实施方式中，R7，R9和X都不存在，Y是-(C＝O)-，Z是O。在某些实施方式中，R7和X都不存在时，R9是C1-10亚烷基(优选-CH2-，-C2H4-，-C3H7-)，Y是-(C＝O)-，Z是O。在某些实施方式中，R9和X都不存在时，R7是C1-10亚烷基(优选-CH2-，-C2H4-，-C3H7-)，Y是-(C＝O)-，Z是O。
在某些实施方式中，X不存在，R7和R9都是独立的C1-10亚烷基(优选-CH2-，-C2H4-，-C3H7-)，Y是-(C＝O)-，Z是O。在某些实施方式中，当R7，R9，X和Z都是不存在时，Y是-(C＝O)-。
在某些实施方式中，R1是R4，R4是R5是Ry，Ry是-羟基；-OPO3M1M2，其中M1和M2定义如上所述；
-R10-O(C＝O)-R11，其中R10为不存在，R11选自氢，C1-10烷基(优选C1-4烷基)之一，-C1-10亚烷基-NR12R13，-NR12R13，其中R12和R13定义如上所述；或 其中R9和X都不存在，Y是(C＝O)，Z是O，R7可选地可以是不存在或C1-10亚烷基(优选-CH2-，-C2H4-，-C3H7-等)。
在某些实施方式中，每个R3独立选自氢，甲基，乙基，丙基，
在某些实施方式中，每个R3独立选自羟基，甲氧基，乙氧基，丙氧基，-OPO3Na2，-OC(＝O)CH3，-OC(＝O)C2H5，-OC(＝O)C3H7，-OC(＝O)C4H9，-OC(＝O)CH2NH2，-OC(＝O)CH2N(CH3)2，-OC(＝O)CH2N(C2H5)2，-OC(＝O)NH2，-OC(＝O)N(CH3)2，-OC(＝O)N(C2H5)2，
在某些实施方式中，每个R3独立选自羟甲基，羟乙基，羟丙基，-CH2OC(＝O)CH3，-CH2OC(＝O)C2H5，-CH2OC(＝O)C3H7，-CH2OC(＝O)C4H9，-CH2OPO3Na2，-CH2OC(＝O)CH2NH2，-CH2OC(＝O)CH2N(CH3)2，-CH2OC(＝O)CH2N(C2H5)2，-CH2OC(＝O)NH2，-CH2OC(＝O)N(CH3)2，-CH2OC(＝O)N(C2H5)2，：
在某些实施方式中，每个R3独立选自-(C＝O)OH，-(C＝O)ONa，-(C＝O)ONH4，-(C＝O)OCH3，-(C＝O)OC2H5，-(C＝O)OC3H7，或-(C＝O)OC4H9。
在某些实施方式中，每个R3独立选自-CONH2，-CON(CH3)2，-CON(C2H5)2，
在某些实施方式中，R5为苯基或Ry。Ry为羟基，-OPO3H2，-OPO3Na2，-OC(＝O)H，-OC(＝O)CH3，-OC(＝O)C2H5，-OC(＝O)C3H7，-OC(＝O)C4H9，-OC(＝O)CH2N(CH3)2，-OC(＝O)CH2N(C2H5)2，-OC(＝O)NH2，-OC(＝O)N(CH3)2，-OC(＝O)N(C2H5)2，
在某些实施方式中，R6为C1-10烷基(优选C1-4烷基)或取代的C1-10烷基(优选C1-4烷基)，苯基，-(C＝O)C1-6烷基，-(C＝O)苯基。
式(I)的化合物具体实施方式包括但不局限于如下所列的化合物I-1至I-16:
式(I)中的任一手性碳原子均为独立的R构型或S构型。
在某些实施方式中，式(I)化合物具有式(II)的结构，其中R1和R2定义如上所述。
在某些实施方式中，涉及的化合物含有以下结构式包括化合物1-5，7-13，20，25，27-28及其对映体，非对映体，互变异构体，和药物可接受的盐或溶剂化物以及可能的前体药物：
在某些实施方式中，式(I)化合物具有式(III)的结构，其中R3定义如上所述。
在某些实施方式中，式(III)包括以下53个化合物(化合物III-1至III-53)和化合物1，4，5和7。同样也包括这些化合物的对映体，非对映体，互变异构体，及其药物可接受的盐或溶剂化物及前体药物。
在某些实施方式中，式(I)化合物具有式(IV)或者(V)的结构，其中R3基团的定义如上所述。
在某些实施方式中，式(IV)或(V)包括以下54个化合物(化合物IV-1至IV-27，V-1至V-27)和化合物2，8-11，13和28。同样也包括这些化合物的对映体，非对映体，互变异构体，及其药物可接受的盐或溶剂化物及前体药物。
在某些实施方式中，式(I)化合物具有式(VI)的结构。
其中R4和Ry定义如上所述。
在某些实施方式中，结构式(VI)包括以下20个化合物(化合物VI-1至VI-20)和化合物3和12。同样也包括这些化合物的对映体，非对映体，互变异构体，及其药物可接受的盐或溶剂化物及前体药物。
在某些实施方式中，式(I)包含具有式(VII)的结构。
其中R1选自下组：
R3定义如上所述。
在某些实施方式中，式(VII)包括以下43个化合物(化合物VII-1至VII-43和化合物20，25和27。同样也包括这些化合物的对映体，非对映体，互变异构体，及其药物可接受的盐或溶剂化物及前体药物。
在某些实施方式中，本申请中提供的具有式(I)的化合物具有如式(VIII)所示的结构：
其中R1选自下组：
在某些实施方式中，式(VIII)所示的化合物包括选自化合物I-1、I-2、I-3、I-4、I-5、I-6、I-7、I-8、I-9、I-10、I-11、I-12、I-13、I-14、I-15、和I-16的结构。在某些实施方式中，式(VIII)所示的化合物包括选自化合物1、2、4、5、7-11、13、20、25、27和28的结构。同样也包括这些化合物的对映体，非对映体，互变异构体，及其药物可接受的盐或溶剂化物及前体药物。
以上式(VIII)所示的化合物中每一个都能够同时抑制20S蛋白酶体的CT-L活性、T-L活性和PGPH活性。在某些实施方式中，以上式(VIII)所示的化合物中每一个在低于约5μM、约2μM、或约1μM的浓度时都能够同时抑制20S蛋白酶体的CT-L活性、T-L活性和PGPH活性。在某些实施方式中，这些化合物对20S蛋白酶体的CT-L活性、T-L活性和PGPH活性的IC50值都低于约5μM、约2μM、或约1μM。上述列出的式(VIII)所示的化合物具有的这种同时抑制是意想不到的，因为当某化合物具有其他的R1基团(例如下述化合物21中的基团)时，其活性显著降低，难以同时抑制20S蛋白酶体的CT-L活性、T-L活性和PGPH活性，因此效果欠佳，不适合用于同时抑制20S蛋白酶体的CT-L活性、T-L活性和PGPH活性：
药学上可接受的盐可以是生理上可接受的和适合给药的任何盐或酯。例如，药学上可接受的盐包括酸加成盐(如盐酸盐，氢溴酸盐，氢碘酸盐，硝酸盐，硫酸盐，硫酸氢盐，磷酸盐，酸性磷酸盐，异烟酸盐，醋酸盐，乳酸盐，水杨酸盐，柠檬酸盐，酒石酸盐，泛酸盐、胆碱盐，抗坏血酸盐，琥珀酸盐，顺丁烯二酸盐，富马酸盐，葡萄糖酸盐，葡萄糖醛酸酯，蔗糖酸盐，甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐，甲磺酸盐、乙磺酸盐，苯磺酸盐，对甲苯磺酸盐和扑酸盐)和碱加成盐(如铝盐，钙盐，锂盐，镁盐，钾盐，钠盐，锌盐，和二乙醇胺盐)。
制备方法
本发明涉及的化合物合成图如下所示。该过程只是例证说明而非限止其它可能制备该化合物的方法。此外，流程图中的步骤只为更好的说明，视情况而定可做更改。
流程1
步骤1:化合物1001与氯甲酸异丁酯反应得到化合物1002。
步骤2:化合物1002与溴丙烯反应得到化合物1003。
步骤3:化合物1003与DIEA和过氧化氢溶液反应得到环氧化合物。
步骤4:化合物1004与TFA二氯甲烷溶液反应得到化合物1005。
流程2
化合物1006与NaCN反应得到化合物1007，再与KOH进一步反应，酸化后得到产物化合物1008。
流程3
氯三苯甲基氯树脂依次与Fmoc-Phe-OH，Fmoc-Leu-OH，和Fmoc-HomoPhe-OH反应，合成并延长了肽主链。得到的产品与化合物1008反应，树脂分解后得到化合物1013，化合物1013与1005反应得到化合物1。
生物活性和选择性
本发明提供的化合物具有抑制蛋白酶体催化活性的生物性能。蛋白酶体的活性可以通过本领域已知的实验方法确定，这些方法在Stein et al.,Biochemistry(1996),35,3899-3908,Lightcap et al.,Clinical Chemistry,2000,46,673-683、Kisselev et al.,Journal of Biological Chemistry，(2006),281,8582-8590以及美国专利申请09/569748中均有公开。20S蛋白酶体的CT-L，PGPH和T-L活性通过使用荧光底物检测方法来确定。该方法使用succinyl-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC、Z-leu-Leu-Glu-AMC和Boc-Leu-Arg-Arg-AMC分别作为CT-L，PGPH和T-L的底物，反应在缓冲液中完成，分解出的自由荧光团7-胺基-4-甲基香豆素(AMC)用荧光光度计进行检测，可以测得20S蛋白酶体的CT-L，PGPH和T-L活性。
本发明提供的化合物的部分用途在于能够抑制蛋白酶体的催化活性。
在某些实施方式中，本发明提供的化合物在浓度低于5μM时(比如化合物1-5，7-13，20，25，27和28)能抑制20S蛋白酶体中CT-L，T-L和PGPH的任一活性(比如有50％或更高的抑制作用)。在某些实施方式中，本发明提供的化合物在浓度低于5μM，2μM，1μM时(比如化合物1-5，7-13，20，25，27和28)或低于0.01μM时(比如化合物1-2，4-5，7-13，20，25，27和28)能抑制20S蛋白酶体的CT-L活性。在某些实施方式中，本发明提供的化合物在浓度低于5μM时(比如化合物1-5，7-13，20，25，27和28)，低于2μM时(比如化合物1-5，8-13，20，25，27和28)，低于1μM时(比如化合物1-5，8-13，20，25，27和28)，或低于0.5μM时(比如化合物1，2，8-11，13，25和27)能抑制20S蛋白酶体的T-L活性。在某些实施方式中，本发明提供的化合物在浓度低于5μM时(比如化合物1-5，7-13，20，25，27和28)，低于2μM时(比如化合物1，2，4，5，7-11，13，25，27和28)，低于1μM时(比如化合物1，2，4，5，7-11，13，25，27和28)，或低于0.5μM时(比如化合物2，5，8-11，13，25和27)能抑制20S蛋白酶体的PGPH活性。
本发明提供的化合物能同时抑制20S蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性。在本申请中，“同时抑制”是指化合物能大幅抑制20S蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性中的每一个。在较佳的实施方式中，本发明提供的化合物在浓度低于5μM，2μM或约1μM时能同时抑制20S蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性。在更佳的实施方式中，本发明提供的化合物在浓度低于5μM(比如化合物1-5，7-13，20，25，27和28)，低于2μM(比如化合物1，2，4，5，8-11，13，25，27和28)，低于1μM(比如化合物1，2，4，5，8-11，13，25，27和28)，或低于0.5μM时(比如化合物2，8-11，13，25和27)时能同时抑制20S蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性。
在某些实施方式中，本发明提供的化合物能在体内同时抑制20S蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性，以及在体内中取出的生物组织中(离体)同时抑制20S蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性。
在一示例的离体实施方式中，从体内(比如小鼠)取血，然后用本发明提供的化合物处理血样，本申请提供的化合物能够在这样的离体条件下抑制血液中20S蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH三种活性。在某些离体实施方式中，本发明提供的化合物在浓度低于5μM、2μM、1μM、或0.5μM时能同时抑制20S蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性(比如化合物1-2，4-5，7-13，20，25，27和28)。
本发明提供的化合物能同时抑制体内20S蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性。比如，以本发明中所述的多肽环氧酮化合物为受试品对活体(如小鼠)给药，采集该生物的血液并对血液标本中20S蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性进行测定。在某些实施方式中，本发明提供的化合物能在体内同时抑制该20S蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性(比如化合物1-5，7-13，20，25，27和28)。
化合物的用途
本发明提供了能同时抑制蛋白酶体CT-L，T-L，和PGPH活性的方法，包括给予治疗有效剂量的本发明化合物。“治疗有效剂量”是指在给药化合物的个体中，足以提供所需治疗效果或活性的所述化合物的量。该有效剂量可能会根据不同的因素而变化，比如接受治疗者的年龄，性别，健康状况，化合物的剂型，接受治疗者疾病的严重性等等。治疗有效剂量可以通过医生根据上面提到的因素或其它因素而定。
另一方面，本发明提供了治疗与蛋白酶体相关的疾病的方法。该方法包括给予治疗有效剂量的本发明中的化合物。这些化合物可以用来治疗与蛋白酶体有关的各种情况或疾病，包括但不限于下面列举的这些。
已知有多种疾病或状况与蛋白酶体催化功能的调节有关。蛋白酶体抑制剂已被建议用来预防或治疗多种疾病，包括癌症，神经中毒/退行性疾病，阿尔兹海默症，缺血性疾病，炎症，免疫相关的疾病，HIV感染，器官移植排斥，感染性休克，抗原呈递抑制，寄生虫感染，酸中毒有关的疾病，黄斑变性，肺部疾病，肌肉萎缩症，纤维化疾病，骨骼和毛发生长疾病。因此，本发明提供的多肽环氧酮蛋白酶体抑制剂为上述疾病提供了一种治疗的途径。
蛋白酶体抑制剂已被临床证明具有治疗恶性肿瘤功能。因此，本文所提供的化合物可用于治疗癌症。示例的可被治疗的癌症包括白血病，淋巴瘤，骨髓瘤，肝细胞癌等等。本发明所述的化合物还可能治疗以下癌症：肾上腺皮质癌，艾滋病相关的癌症，星形细胞瘤，骨癌，骨肉瘤，多形性神经母细胞瘤，恶性纤维组织细胞瘤，黑素瘤，恶性间皮细胞瘤，嗜铬细胞瘤，成松果体细胞瘤和原始神经外胚层肿瘤，神经母细胞瘤，子宫肉瘤，胆管癌，膀胱癌，乳房癌，肠胃癌，宫颈癌，结肠癌，直肠癌，食道癌，眼癌，卵巢癌，头颈部癌，肾癌，嘴唇和口腔癌，肺癌，鼻腔及副鼻窦癌，鼻窦癌，阴茎癌，前列腺癌，移行细胞癌，唾腺癌，软组织癌，皮肤癌，甲状腺和副甲状腺癌，阴道癌等。
蛋白酶体抑制剂与NF-κB活性抑制相关。NF-κB是一种高效的转录因子，可以调节基因的转录包括炎症分子如肿瘤坏死因子，白细胞介素1，环氧化酶，细胞间粘附分子1等。因此，本发明中的化合物作为一种免疫抑制剂能用于治疗炎症性疾病，如过敏，哮喘，器官/组织移植排斥反应，自身免疫性红斑狼疮，风湿性关节炎，牛皮癣，多发性硬化和炎性肠病。可以对患有上述疾病的患者给予有效剂量的本发明中提供的化合物，该化合物可以包括在药物组合物中，以治疗这些疾病。
已发现蛋白酶体抑制剂可以减少肌肉蛋白质的降解，因而在抑制肌肉萎缩和肌纤维萎缩中很有用。因此本发明中涉及的化合物可用于治疗恶病质和肌肉萎缩症，例如慢性感染性疾病，发烧，肌肉废用和去神经，神经损伤，因酸毒症引起的肾功能衰竭，肝功能衰竭。可以对患有上述疾病的患者给予有效剂量的本发明中提供的化合物，该化合物可以包括在药物组合物中，从而减少或降低肌肉蛋白、细胞内结合蛋白或p53蛋白的降解。
本发明中涉及的化合物同样可用于治疗神经退行性疾病，包括中风，神经系统缺血性损伤，神经创伤(例如敲击后脑损伤，脊髓损伤，神经系统外损伤)，多发性硬化和其它免疫介导性神经病(如急性感染性多发性神经炎和它的变异体，急性运动轴索型神经病，急性炎症性脱髓鞘性多发性神经病，菲希尔综合征)，艾滋病病毒/艾滋病痴呆综合症，糖尿病神经病变，帕金森综合症，亨丁顿舞蹈症，多发性硬化，细菌性斑点病，寄生虫、真菌和病毒性脑膜炎，脑炎，血管性痴呆症，多发性脑梗死性痴呆，路易体痴呆，额叶痴呆如皮克氏病，皮质下痴呆(如亨丁顿或进行性核上性麻痹)，焦皮质萎缩综合征(如原发性进行性失语)，代谢有毒痴呆，因感染引起的痴呆(如梅毒或慢性脑膜炎)。
本发明中涉及的化合物还可以用于调控与细胞外基质的β淀粉样蛋白沉积相关的蛋白处理，β淀粉样蛋白是阿兹海默症的主要原因。因此，本发明中涉及的化合物对治疗阿兹海默症很有用，例如通过降低β淀粉样蛋白调控过程的速度，降低β淀粉样蛋白的空斑形成的速度，降低β淀粉样蛋白的生成速度和减少阿兹海默症的临床症状。
蛋白酶体抑制剂对减少纤维症也很有帮助。因此，本发明中涉及的化合物可用于治疗纤维化相关的疾病，例如糖尿病肾病，肾小球硬化症，IgA肾病，肝硬化，胆道闭锁，充血性心力衰竭，硬皮病，放射性纤维化，肺纤维化，心肌纤维化。
药物组合物和给药方式
另一方面，本发明提供的药物组合物包括本发明提供的化合物及药学上可接受的载体。
在此提到的术语“药学上可接受的载体”是指一种药学上可接受的物质，成分或者介质，比如液体或固体填充剂，稀释剂，赋形剂，溶剂或灌封材料，其参与将本发明涉及的化合物从某一位置，体液，组织，器官(内部或外部)，或身体部分装载或传递到另一位置，体液，器官(内部或外部)，或身体部分。药学上可接受的载体可以是介质，稀释剂，赋形剂或者其它没有过度毒性或者副作用并能用于接触动物组织的材料。典型的药学上可接受的载体包括糖类，淀粉，纤维素类，麦芽糖，黄蓍胶，明胶，林格氏溶液，海藻酸，生理盐水，缓冲剂等。
每种药学上可接受的载体应该与其它组成成分相容，例如与本发明中提供的化合物形成制剂，对生物活体组织或者器官没有过度毒性、刺激、过敏性反应、免疫原性或其它问题或并发症，且有较合理的效益风险比。
一些药学上可接受的载体的物质包括：(1)糖类，比如乳糖，葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，比如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素和其衍生物，比如羧甲基纤维素钠，乙基纤维素，醋酸纤维素；(4)西黄蓍胶粉；(5)麦芽糖；(6)明胶；(7)滑石粉；(8)赋形剂，比如可可脂和栓剂蜡；(9)油类，比如花生油，棉籽油，红花油，芝麻油，橄榄油，玉米油和大豆油；(10)二醇类，比如丙二醇；(11)多元醇类，比如甘油，山梨醇，甘露醇和聚乙二醇；(12)脂类，比如油酸乙酯，月桂酸乙酯；(13)琼脂胶；(14)缓冲剂，比如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)灭菌无热原水；(17)生理盐水；(18)林格氏溶液；(19)醇类，比如乙醇和丙醇；(20)磷酸缓冲液；(21)其它在药物剂型中无毒性可相容的物质，比如丙酮。
药物组合物可能包括药学上可接受的辅料，以模拟生理条件，比如pH调节和缓冲剂，毒性调节剂等等，如乙酸钠，氯化钠，氯化钾，氯化钙，乳酸钠等。
药物成分可制成任何合适的剂型，如固体剂型(例如片剂，胶囊，粉末，颗粒等)和液体剂型(例如水溶液，乳浊液，酏剂，糖浆等)。药物组合物的制备方法工艺已众所周知，可根据常规工艺进行制备，比如在Remington，The Science and Practice of Pharmacy(Gennaro ed.20th edition,Williams&Wilkins PA,USA)(2000)中提供。
在某些实施方式中，药物组合物包括约10-9g至约10g的本发明中提供的化合物(比如约0.01mg至约10g，约0.1mg至约10g，约1mg至约10g，约5mg至约10g，约10mg至约10g，约20mg至约10g，约30mg至约10g，约40mg至约10g，约50mg至约10g，约80mg至约10g，约100mg至约10g，约150mg至约10g，约200mg至约10g，约300mg至约10g，约400mg至约10g，约500mg至约10g，约600mg至约10g，约700mg至约10g，约800mg至约10g，约900mg至约10g，约1g至约10g，约10mg至约5g，约10mg至约3g，约10mg至约1g，约10mg至约900mg，约10mg至约700mg，约10mg至约500mg，或约10mg至约300mg)。合理的剂量为每人每天约0.01mg至约5g。
在某些实施方式中，本发明中提供的化合物或药物组合物可以被制成适于药物释放的剂型，通过注射途径给药(如皮下，静脉，肌肉，动脉，鞘膜，囊内，框内，心脏内，真皮内，腹膜内，经气管，表皮，关节内，囊下，蛛网膜下，脊柱内，胸骨内，和/或输液)和非注射途径给药(如口服，肠道，口腔，鼻，鼻内，粘膜，表皮，贴膏剂，真皮，眼药，肺部，舌下，直肠，阴道或表皮局部给药)。
合适的剂型包括(但不局限于)注射用途的剂型比如乳状液，溶液和混悬液，口服用途的剂型如片剂，胶囊，丸剂，糖衣丸，粉末和颗粒，局部用药或经皮肤吸收的剂型如喷剂，软膏，糊剂，乳霜，洗剂，凝胶，溶液，药物贴片和吸入剂，阴道或直肠给药的剂型如栓剂。这些剂型可根据化合物以及合适的赋形剂在合适条件下制备，制备方法及工艺众所周知，比如由Remington:在The Science and Practice of Pharmacy(Gennaro ed.20thedition,Williams&Wilkins PA,USA)(2000)提供。
药物成分可通过任何合适的途径进入生物体内，比如通过口服，静脉注射，鼻内，外用，肌注，真皮内注射，经皮给药或皮下途径。
在某些实施方式中，本发明涉及的化合物或药物组合物可以与第二活性物质同时进行施用，这样能在生物体内达到叠加甚至协同的作用。例如，本发明涉及的化合物可以和第二活性物质组合成一个药物组合物，或者以单独的组合物同时施用，或者以单独的组合物依次施用。能与本发明化合物同时施用、用于治疗癌症的第二活性物质包括但不局限于：氟尿嘧啶，阿霉素，柔红霉素，它莫西芬，亮丙瑞林，戈舍瑞林，氟他米特，尼鲁米特，非那雄胺，地塞米松，氨鲁米特，安吖啶、阿那曲唑，天冬酰胺酶，卡介苗，比卡鲁胺、博来霉素、临床、白消安，喜树碱，卡培他滨，卡铂，卡莫司汀，苯丁酸氮芥，顺铂，克拉屈滨，秋水仙碱，环磷酰胺、药物、环丙孕酮、阿糖胞苷、达卡巴嗪，放线菌素d，正定霉素，双烯雌酚、己烯雌酚、多西紫杉醇、阿霉素，亚德里亚霉素、表柔比星、雌二醇，雌氮芥、依托泊苷、依西美坦，非格司亭，氟达拉滨，氟氢可的松、氟尿嘧啶、氟甲睾酮、氟他米特，吉西他滨，染料木黄酮，戈舍瑞林，三苯氧胺、替尼泊苷、睾酮、二氯化二茂钛，拓普泰康，曲妥单抗、维甲酸、长春花碱、羟基脲，伊达比星，异环磷酰胺、伊马替尼、干扰素、伊立替康，伊立替康、来曲唑、甲酰四氢叶酸，喷司他丁，光神霉素、甲基苄肼、雷替曲塞卟菲尔，利妥昔链脲菌素，苏拉明，亮丙瑞林、左旋咪唑，环己亚硝脲、氮芥、甲羟孕酮、甲地孕酮，美法仑、巯嘌呤、巯乙磺酸钠、甲氨蝶呤、丝裂霉素、米托坦、米托蒽醌，尼鲁米特，诺考达唑、奥曲肽、铂、紫杉醇、帕米磷酸，硫鸟嘌呤，三胺硫磷、氯甲烷、拓扑替康二茂钛，曲妥单抗，维甲酸、长春花碱，长春新碱、长春地辛，长春瑞斌。
在某些实施方式中，本发明提供的化合物可与非化学方法同时使用进行癌症治疗。在某些实施方式中，本发明提供的化合物可与放射疗法同时进行。在某些实施方式中，本发明提供的化合物可与外科手术，肿瘤热治疗，超声聚焦疗法，冷冻疗法或以上几种疗法结合使用。
在某些实施方式中，本发明提供的化合物可与类固醇同时使用。合适的类固醇包括但不局限于：安西缩松、倍氯米松，倍他米松，布地奈德，氯泼尼松，氯倍他索，皮质甾酮，可的松，羟泼尼缩松，去羟米松，地塞米松，双氟拉松，双氟米松，二氟孕甾丁酯，甘草次酸，氟扎可松，氟米松，氟尼缩松，氟氯奈德，肤轻松醋酸酯，氟轻松醋酸酯，氟可丁丁酯，氟可龙，丙酮缩氟氢羟龙，醋酸氟培龙，醋酸氟泼尼定，氟泼尼龙，氟氢缩松，丙酸氟、醛基缩松，丙酸氯倍他索，哈西缩松，卤米松，氢化可的松，氯替泼诺碳酸乙酯，甲哌地强龙，甲羟松，甲泼尼松，6-甲氢化泼尼松，在任糠酸盐，帕拉米松，泼尼松龙，地塞米松，和25-二乙胺醋强的松龙。
在某些实施方式中，本发明提供的化合物可与免疫治疗剂同时使用。合适的免疫治疗剂包括：肿瘤细胞多药耐药性逆转剂(比如维拉帕米)，雷帕霉素，霉酚酸酯，沙利度胺，环磷酰胺，环孢霉素，和单克隆抗体类。
实施例
实施例1:体外20S蛋白酶体CT-L，T-L,和PGPH活性抑制作用的测定。
用纯化的人源20S蛋白酶体进行CT-L，T-L和PGPH活性的体外测定，20S蛋白酶体的浓度分别为2，4和8nmol/L，分别用succinyl-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC(10μmol/L)，Z-leu-Leu-Glu-AMC(10μmol/L)和Boc-Leu-Arg-Arg-AMC(50μmol/L)作为底物，反应在包含0.5mM乙二胺四乙酸、0.001％十二烷基硫酸钠(SDS)和0.05％NP-40的20mM三异丙基乙磺酰缓冲溶液(pH 8.0)中进行。蛋白酶体抑制剂的原液在二甲基亚砜(DMSO)中制备，在测试混合物中DMSO的最终浓度是1％。反应在27℃温度下进行。用荧光光度计检测裂解出来的7-氨基-4-甲基香豆素荧光团，从而测定蛋白酶体活性。IC50(半抑制浓度)数值的检测基于60至75分钟之间的反应速度。IC50值是抑制剂对20S蛋白酶体活性的抑制达到50％时的浓度。
实施例2:血液中20S蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性抑制作用的测定。
通过心脏穿刺从CD-1小鼠中取800微升新鲜全血标本注入含有肝素钠的试管中，在4℃下于150xg离心5分钟，离心出来的沉淀物用冰冷的磷酸盐缓冲生理盐水清洗三次。每次将沉淀物回溶于1mL冷的磷酸盐缓冲生理盐水中，并在4℃下于6000xg离心10分钟。最后一次清洗后，加入200μL分解液(含有5mM EDTA的磷酸盐缓冲生理盐水，pH 8.0)，保持1小时后细胞被分解，然后在4℃下于6000xg离心10分钟。上述血液的溶解产物中的蛋白浓度用二喹啉酸方法(BCA)测定。将约100μg蛋白质加至HEPES缓冲溶液(pH 7.5)中；再加入0.2，1或5μM的本发明中的化合物至上述混合物中；再加入Succinyl-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC(25μmol/L)Z-leu-Leu-Glu-AMC(10μmol/L)或Boc-Leu-Arg-Arg-AMC(10μmol/L)分别作为CT-L，PGPH或T-L的底物，最后反应液体积为50μL，含有0.5mM EDTA，0.05％NP-40和0.002％SDS。将上述混合物于37℃下孵化30分钟后置于荧光光度计中，用360/460nm滤波对三个7-氨基-4-甲基香豆素荧光团进行定量，进而测定20S蛋白酶体的CT-L，T-L或PGPH活性。通过与对照品比较来计算抑制百分率。
实施例3：体内20S蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性抑制作用的测定。
体内的蛋白酶体活性测定在BALB/c裸鼠中进行。以本发明中所述的多肽环氧酮化合物为受试品以可耐受的剂量通过静脉注射对小鼠(每组5-6只小鼠)给药，受试品配制在含有10-20％(w/v)羟丙基-β-环糊精、2.5％DMSO以及10mM柠檬酸钠的载体(pH 3.0-3.5)中。注射后一小时，通过心脏穿刺采集全血标本注入含有肝素钠的试管中，在4℃下于150xg离心5分钟。离心出来的沉淀物用冰冷的磷酸盐缓冲生理盐水清洗三次。每次将沉淀物回溶于1mL冷的磷酸盐缓冲生理盐水中，在4℃下于6000xg离心10分钟。最后一次清洗后，加入200μL分解液(含有5mM EDTA的磷酸盐缓冲生理盐水，pH 8.0)保持1小时，细胞被分解，然后在4℃下于6000xg离心10分钟。血液的溶解产物中的蛋白质浓度用二喹啉酸方法(BCA)进行测定。将约100μg蛋白质加至含有0.5mM EDTA，0.05％NP-40和0.002％SDS(pH 7.5)的HEPES缓冲液中，再加入Succinyl-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC(25μmol/L)，Z-leu-Leu-Glu-AMC(10μmol/L)或Boc-Leu-Arg-Arg-AMC(10μmol/L)分别作为CT-L，PGPH或T-L活性测定的底物。然后将混合物置于37℃下孵化30分钟。用荧光光度计在360/460nm波长处定量7-氨基-4-甲基香豆素的自由荧光团，进而测定20S蛋白酶体的CT-L，T-L或PGPH的活性。通过与载体组比较，计算受试品对体内蛋白酶体活性的抑制百分率。
实施例4：化合物1，结构，蛋白酶体活性抑制性能，离体蛋白酶体活性抑制性能，体内蛋白酶体活性抑制性能，以及合成方法
化合物1结构式如下
化合物1对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体活性的抑制作用通过实施例1中所提供的酶活性抑制测定方法完成。下面表格列出了对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性抑制的IC50值。化合物1和卡非佐米(Carfilzomib)对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L活性抑制的IC50比值(IC50化合物1/IC50卡非佐米)分别是0.18和0.26。
在小鼠血液溶解产物中化合物1对蛋白酶体的抑制作用通过实施例2中所提供的测定方法完成。当化合物1浓度为0.2μM时，CT-L活性96.7％被抑制，T-L活性60.5％被抑制，PGPH活性40.2％被抑制。当化合物1浓度为1μM时，CT-L活性99.2％被抑制，T-L活性82.5％被抑制，PGPH活性61.5％被抑制。当化合物1浓度为5μM时，CT-L活性98.9％被抑制，T-L活性87.3％被抑制，PGPH活性74.3％被抑制。
在体内化合物1对蛋白酶体活性抑制作用通过实施例3中所提供的方法进行测定。当注射剂量为2mg/kg时，化合物1能同时抑制小鼠血液中CT-L，T-L和PGPH活性，抑制率超过40％。
化合物1的合成
流程1
合成化合物1002。游离二甲基羟胺溶液制备：向反应瓶1中加入N,O-二甲羟胺盐酸盐(8.2g，84mmol)的二氯甲烷(100毫升)溶液，滴加TEA(11.7毫升，84mmol)的二氯甲烷(50毫升)溶液，约20分钟滴完。向反应瓶2加入化合物1001(18.5g，80mmol)的二氯甲烷(200毫升)溶液，再加入氯甲酸异丁酯(10.9g，80mmol)，冷至-10℃以下加入NMM(8.1克，80mmol)。再将反应瓶1中的二甲基羟胺溶液缓慢加入。然后将得到的溶液在室温下搅拌过夜，再用水稀释，分层，水相用DCM萃取一次。合并有机相用盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去硫酸镁。减压蒸干溶剂得到化合物1002(17.5g)。
合成化合物1003。氩气保护下，把化合物1002(8.2克，30mmol)的四氢呋喃(100毫升)溶液冷至-78℃，加入t-BuLi溶液(46mL 1.3M)。于-78℃搅拌下，加入异丙烯基溴(3.63g，30mmol)。再加入饱和氯化铵水溶液(100毫升)，于-78℃搅拌反应1小时。然后用乙酸乙酯提取。合并后的有机层，用盐水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏浓缩后，过柱得到化合物1003。
合成化合物1004。向化合物1003(5.1克，20mmol)的甲醇(50毫升)溶液中加入DIEA和H2O2溶液(4.6毫升30％，80mmol)。搅拌2小时后，注入亚硫酸氢钠水溶液(100毫升)。然后用乙酸乙酯提取。合并有机层后，用盐水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩后，过柱得到所需的化合物1004。
合成化合物1005。向化合物1004(2.7克，10mmol)的DCM溶液中加入TFA。充分搅拌反应后，减压蒸干得到化合物1005。
流程2
合成化合物1007。向化合物1006(2.6克，20mmol)的DMSO(10毫升)溶液中加入氰化钠(2克，40mmol)。室温搅拌过夜后，用水稀释，乙酸乙酯提取。有机相用盐水洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去挥发分，再重结晶得到化合物1007。
合成化合物1008。向化合物1007(1.2克，10mmol)的在二氧六环(20毫升)溶液中加入氢氧化钾溶液(1毫升，3M)。搅拌过夜后，反应液缓慢加入水中，过滤，滤饼重结晶得到化合物1008。
流程3
合成树脂1009。向2-氯三苯甲基氯树脂(3.2mmol)和Fmoc-Phe-OH(6.4mmol)的二氯乙烷(30毫升)中，加入DIEA(1.2毫升，6.6mmol)搅拌1小时。用DCE、二甲基甲酰胺，异丙醇，乙醚洗，然后空气干燥。向所得树脂的二甲基甲酰胺(40毫升)溶液中加入20％哌啶的二甲基甲酰胺溶液，充分搅拌后过滤，用DMF、甲醇和二氯甲烷冲洗，空气干燥得到树脂1009。
合成树脂1010。向树脂1009(3.2mmol)中加入DCE(40毫升)、Fmoc-Leu-OH(2.2g，6.2mmol)、DIED(2.3毫升，13.2mmol)、HOBT(0.86g，6.4mmol)和BOP(1.78g，6.4mmol)，将混合物充分搅拌。过滤，用DCE、二甲基甲酰胺、异丙醇和乙醚冲洗，然后空气干燥。向所得树脂的二甲基甲酰胺(40毫升)溶液中加入20％哌啶的二甲基甲酰胺溶液，充分搅拌后过滤，用DMF和DCM冲洗，空气干燥得到树脂1010。
合成树脂1011。向树脂1010(3.2mmol)中加入DCE(40毫升)，Fmoc-HFE-OH(2.56g，6.4mmol)，DIAD(2.3毫升，13.2mmol)，HOBT(0.86g，6.4mmol)和BOP(1.78g，6.4mmol)，充分搅拌后过滤，用DCE，二甲基甲酰胺，异丙醇，和乙醚冲洗，空气干燥。向所得树脂的二甲基甲酰胺(40毫升)溶液加入20％哌啶的二甲基甲酰胺溶液，充分搅拌后过滤，用DMF，甲醇和DCM冲洗，空气干燥得到树脂1011。
合成树脂1012。向树脂1011(1.6mmol)中加入DCE(30毫升)，化合物1008(0.40g，2.8mmol)，DIED(1.1毫升，6.3mmol)，HOBT(0.43g，3.2mmol)，和BOP(0.89g，3.2mmol)，充分搅拌后过滤，用DCE、二甲基甲酰胺，异丙醇和乙醚冲洗，空气干燥24小时得到树脂1012。
合成化合物1013。向树脂1012(1.6mmol)中加入10毫升TFA/DCM＝1/4(V/V)的混合溶液。室温搅拌，过滤，减压蒸干得到化合物1013。
合成化合物1。向反应瓶中加入化合物1005(0.33mmol)的乙腈溶液，再加入化合物1013(0.3mmol)，DIEA(1.5mmol)，HOBT(0.6mmol)，和BOP(0.64mmol)，室温下搅拌。然后用水稀释，乙酸乙酯提取。有机相用水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压蒸干，过柱得到化合物1(110毫克)。化合物1核磁共振数据:1HNMR(400HZ,Methanol-d4)δ7.32-7.28(m,2H),7.29-7.19(m,3H),7.14-7.10(m,5H),6.20(s,1H),4.61-4.53(m,2H),4.31-4.27(m,2H),3.70(dd,2H),3.23-3.14(m,2H),2.93-2.82(m,2H),2.74-2.66(m,2H),2.44(s,3H),2.12-2.02(m,1H),2.01-1.89(m,1H),1.75-1.38(m,9H),0.96-0.87(m,12H).低分辨质谱:分子式C40H53N5O7,分子量计算值715.4,测量值(M+H+)716.3。
实施例5：化合物2，蛋白酶体活性抑制性能，离体蛋白酶体活性抑制性能，体内蛋白酶体活性抑制性能，以及合成方法
化合物2结构如下
化合物2对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体活性的抑制作用通过实施例1中所提供的酶活性抑制测定方法完成。下面表格列出了化合物2对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性抑制的IC50值。化合物2和卡非佐米(Carfilzomib)对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L活性抑制的IC50比值(IC50化合物2/IC50卡非佐米)分别是0.05和0.21。
在小鼠血液溶解产物中化合物2对20S蛋白酶体的抑制作用通过实施例2中所提供的分析方法完成。当化合物2浓度为0.2μM时，CT-L活性98.0％被抑制，T-L活性70.1％被抑制，PGPH活性44.7％被抑制。当化合物2浓度为1μM时，CT-L活性98.1％被抑制，T-L活性81.8％被抑制，PGPH活性68.4％被抑制。当化合物2浓度为5μM时，CT-L活性93.0％被抑制，T-L活性89.3％被抑制，PGPH活性68.5％被抑制。
在体内化合物2对蛋白酶体活性抑制作用通过实施例3中所提供的方法进行评估。当注射剂量为2mg/kg时，化合物2能同时抑制小鼠血液中CT-L 97.1％，T-L 57.8％和PGPH45.7％活性。
化合物2的合成
流程4
合成树脂1015。向树脂1011(1.6mmol)中加入DCE(30毫升)，化合物1014(2.8mmol)，DIEA(6.3mmol)，HOBT(3.2mmol)，和BOP(3.2mmol)，充分搅拌后过滤，用DCE、二甲基甲酰胺，异丙醇和乙醚冲洗，空气干燥24小时得到树脂1015。
合成化合物1016。化合物1016与化合物1013的制备过程相同。
合成化合物2。向加至化合物1016(0.17mmol)的二氯甲烷溶液中加入DEPBT(0.21mmol)和DIEA(0.34mol)，搅拌半小时，加入化合物1005(0.20mmol)，室温搅拌过夜，浓缩过柱得到化合物2。化合物2核磁共振数据:1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ0.76-0.87(m,12H),1.26-1.39(m,7H),1.45-1.63(m,2H),1.73-1.87(m,2H),2.44-2.54(t,2H),2.57(s,3H),2.9-2.76(m,1H),2.93-2.98(m,2H),3.08-3.10(d,J＝5.2Hz,1H),3.65-3.76(m,2H),4.20-4.4(m,3H),4.51-4.55(t,1H),7.06-7.19(m,8H),7.25-7.29(t,2H),7.38(s,1H),7.82-7.84(d,J＝7.6Hz,1H),7.99-8.01(d,J＝8.4Hz,1H),8.20-8.22(d,J＝7.2Hz,1H),8.39-8.41(d,J＝7.6Hz,1H).低分辨质谱:分子式C40H53N5O6S,分子量计算值731.4,测量值(M+H+)732.5。
实施例6：化合物3，结构，蛋白酶体活性抑制性能，离体蛋白酶体活性抑制性能，体内蛋白酶体活性抑制性能，以及合成方法
化合物3结构式如下
化合物3对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体活性的抑制作用通过实施例1中所提供的酶活性抑制测定方法完成。下面表格列出了化合物3对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性抑制的IC50值。化合物3和卡非佐米(Carfilzomib)对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L活性抑制的IC50比值(IC50化合物3/IC50卡非佐米)分别是2.40和4.08。
在小鼠血液溶解产物中化合物3对20S蛋白酶体的抑制作用通过实施例2中所提供的分析方法完成。当化合物3浓度为5μM时，＞80％的CT-L活性被抑制，＞50％的T-L活性被抑制，＞40％的PGPH活性被抑制。
在体内化合物3对蛋白酶体活性抑制作用可通过实施例3中所提供的方法进行评估。当注射剂量为4mg/kg时，化合物3能同时抑制小鼠血液中＞30％的CT-L，T-L和PGPH活性。
化合物3的合成
流程5
合成树脂1017。向2-氯三苯甲基氯树脂(3.2mmol)和Fmoc-Phe-OH(6.4mmol)的二氯乙烷(30毫升)溶液中，加入DIEA(6.6mmol)后搅拌1小时。然后用DCE、二甲基甲酰胺，异丙醇，乙醚洗涤，然后空气干燥。向所得树脂的二甲基甲酰胺(40毫升)溶液中加入20％哌啶的二甲基甲酰胺溶液，充分搅拌后过滤，用DMF、甲醇和二氯甲烷冲洗，空气干燥得到树脂1017。
合成树脂1018。树脂1018与树脂1010的制备过程相同
合成树脂1019。树脂1019与树脂1011的制备过程相同
合成树脂1021。向树脂1019(1.6mmol)中加入DCE，化合物1020(2.8mmol)，DIEA(6.3mmol)，HOBT(3.2mmol)和BOP(3.2mmol)，充分搅拌后过滤，用DCE，DMF和乙醚冲洗，空气干燥得到树脂1021。
合成化合物1022。化合物1022与化合物1013的制备过程相同。
合成化合物3。向加至化合物1022(0.2mmol)的二氯甲烷溶液中加入DEPBT(0.26mmol)和DIEA(0.4mol)，搅拌半小时，加入化合物1005(0.24mmol)，室温搅拌过夜，浓缩过柱得到化合物3。化合物3核磁共振数据1HNMR(400MHz,Methanol-d4):δ0.92-1.00(m,12H),1.30-1.42(m,2H),1.46-1.55(m,4H),1.63-1.75(m,4H),1.99-2.20(m,1H),2.00-2.20(m,1H),2.65-2.79(m,6H),2.92-2.94(d,J＝4.8Hz,1H),3.23-3.25(d,J＝5.2Hz,1H),3.77-3.80(m,6H),4.40-4.48(m,3H),4.56-4.60(m,1H),4.62-4.80(br,1H),7.19-7.32(m,5H).低分辨质谱:分子式C34H53N5O8,分子量计算值659.4,测量值(M+H+)660.3。
实施例7：化合物4，结构，蛋白酶体活性抑制性能，离体蛋白酶体活性抑制性能，体内蛋白酶体活性抑制性能，以及合成方法
化合物4结构式如下所示
化合物4对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体活性的抑制作用通过实施例1中所提供的酶活性抑制测定方法完成。下面表格列出了化合物4对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性抑制的IC50值。化合物4和卡非佐米(Carfilzomib)对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L活性抑制的IC50比值(IC50化合物4/IC50卡非佐米)分别是0.66和0.93。
在小鼠血液溶解产物中化合物4对20S蛋白酶体的抑制作用通过实施例2中所提供的分析方法完成。当化合物4浓度为1μM时，＞90％的CT-L活性被抑制，＞60％的T-L活性被抑制，＞40％的PGPH活性被抑制。
在体内化合物4对蛋白酶体活性抑制作用通过实施例3中所提供的方法进行评估。当注射剂量为2mg/kg时，化合物4能同时抑制小鼠血液中＞30％的CT-L，T-L和PGPH活性。
化合物4的合成
流程6
合成化合物1024。化合物1023(0.6mol)和盐酸羟胺(0.718mol)的甲醇溶液室温搅拌过夜，蒸除溶剂后，加入水，用二氯甲烷萃取，有机相用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，蒸干得到粗的化合物1024。
合成化合物1026。向化合物1024的DMF溶液中加入NCS(0.5mol)，加热至60，搅拌一小时得到化合物1025。反应体系冷至0℃后，加入prop-2-yn-1-ol(0.5mol)和三乙胺(0.5mol)，搅拌10分钟，加入水中，用乙酸乙酯萃取，有机相用盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩，过柱得到化合物1026。
合成化合物1027。向化合物1026(40mmol)和咪唑(123mol)的二氯甲烷溶液中加入叔丁基二甲基硅(TBDPSCl)(45mmol)。室温下搅拌2小时，加入水，用二氯甲烷萃取，有机相用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到化合物1027。
合成化合物1028。向化合物1027(37mmol)的THF溶液中加入二异丁基氢化铝(15mmol)，室温下搅拌1小时，滴加水，用二氯甲烷萃取，有机相用碳酸氢钠洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到化合物1028。
合成化合物1029。将化合物1028(40.87mmol)，四溴甲烷(44.96mmol)和三苯基膦(44.96mmol)的二氯甲烷溶液于0℃搅拌1小时。混合物浓缩，过柱纯化得到化合物1029。
合成化合物1030。将化合物1029(22.8mmol)和氰化钠(27.3mmol)的DMSO溶液室温下搅拌3小时，加入水，用乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩得到化合物1030。
合成化合物1031。将化合物1030(16mmol)的盐酸/甲醇溶液搅拌过夜，加入水，搅拌1小时，真空下蒸除溶剂，过柱得到化合物1031。
合成化合物1032。将化合物1031(4.68mmol)和NaOH(9.35mmol)的甲醇溶液室温下搅拌过夜，真空下蒸除甲醇，pH调至5，得到化合物1032.
流程7
合成树脂1033。向树脂1011(1.6mmol)中加入DCE(30毫升)、化合物1032(2.8mmol)、DIEA(6.3mmol)、HOBT(3.2mmol)和BOP(3.2mmol)，将混合物充分搅拌。过滤，用DCE、二甲基甲酰胺、异丙醇和乙醚冲洗，然后空气干燥24小时，得到树脂1033。
合成化合物1034。化合物1034与化合物1013的制备过程相同。
合成化合物4。将DEPBT(0.31mmol)加至化合物1034(0.24mmol)的二氯甲烷溶液中。0℃搅拌2小时，加入化合物1005(0.31mmol)，室温搅拌过夜，减压浓缩，过柱得到化合物4。化合物4核磁共振数据:1HNMR(400MHz,Methanol-d4):δ0.84-0.94(m,12H),1.36-1.68(m,9H),1.91-2.10(m,2H),2.57-2.68(m,2H),2.78-2.89(m,2H),3.10-3.19(m,2H),3.70(q,2H),4.24-4.30(m,2H),4.49-4.64(m,5H),6.37(s,1H),7.06-7.28(m,10H).低分辨质谱:分子式C40H53N5O8,分子量计算值731.4,测量值(M+H+)732.3。
实施例8：化合物5，结构，蛋白酶体活性抑制性能，离体蛋白酶体活性抑制性能，体内蛋白酶体活性抑制性能，以及合成方法
化合物5结构式如下所示
化合物5对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体活性的抑制作用通过实施例1中所提供的酶活性抑制测定方法完成。下面表格列出了化合物5对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性抑制的IC50值。化合物5和卡非佐米(Carfilzomib)对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L活性抑制的IC50比值(IC50化合物5/IC50卡非佐米)分别是0.27和0.52。
在小鼠血液溶解产物中化合物5对20S蛋白酶体的抑制作用通过实施例2中所提供的分析方法完成。当化合物5浓度为1μM时，＞80％的CT-L活性被抑制，＞60％的T-L活性被抑制，＞40％的PGPH活性被抑制。
在体内化合物5对蛋白酶体活性抑制作用通过实施例3中所提供的方法进行评估。当注射剂量为2mg/kg时，化合物5能同时抑制小鼠血液中＞40％的CT-L，T-L和PGPH活性。
化合物5的合成
流程8
合成化合物1036。将化合物1035(7mmol)和羰基二咪唑(7.7mmol)的二氯甲烷溶液搅拌4小时，浓缩得到化合物1036，直接用于下一步。
合成化合物1037。于0℃下，往化合物1036(7mmol)和三乙胺(21mmol)的二氯甲烷溶液中加入二甲胺盐酸盐(14mmol)，室温下搅拌3小时，浓缩，纯化得到化合物1037。
合成化合物1038。将化合物1037(2.07mmol)和氢氧化锂(4.14mmol)的甲醇溶液室温搅拌4小时，真空下蒸除甲醇，加入水，用乙酸调节pH＝6，乙酸乙酯萃取，有机相用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到化合物1038。
流程9
合成树脂1039。向树脂1011(1.6mmol)中加入DCE(30毫升)、化合物1038(2.8mmol)、DIEA(6.3mmol)、HOBT(3.2mmol)和BOP(3.2mmol)，将混合物充分搅拌。过滤，用DCE、二甲基甲酰胺、异丙醇和乙醚冲洗，然后空气干燥24小时，得到产品树脂1039。
合成化合物1040。化合物1040与化合物1013的制备过程相同。
合成化合物5。将DEPBT(0.26mmol)和DIEA(0.60mol)加至化合物1040(0.2mmol)的二氯甲烷溶液中，于0℃搅拌2小时，加入化合物1005(0.26mmol)，室温搅拌过夜，浓缩纯化得到化合物5。化合物5核磁共振数据:1HNMR(400MHz,CDCl3):δ0.84-0.94(m,12H),1.32-1.72(m,9H),1.91-2.10(m,2H),2.50-2.64(m,2H),2.80-2.93(m,7H),3.10-3.17(m,1H),3.21-3.30(m,1H),3.50-3.70(m,2H),4.49-4.90(m,5H),5.17(s,1H),6.30-6.45(d,J＝13.2Hz,1H),7.00-7.26(m,11H).低分辨质谱:分子式C43H58N6O9,分子量计算值802.4,测量值(M+H+)803.4。
实施例9：化合物7，结构，蛋白酶体活性抑制性能，离体蛋白酶体活性抑制性能，体内蛋白酶体活性抑制性能，以及合成方法
化合物7结构式如下所示
化合物7对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体活性的抑制作用通过实施例1中所提供的酶活性抑制测定方法完成。下面表格列出了化合物7对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性抑制的IC50值。化合物7和卡非佐米(Carfilzomib)对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L活性抑制的IC50比值(IC50化合物7/IC50卡非佐米)分别是1.61和2.00。
在小鼠血液溶解产物中化合物7对20S蛋白酶体的抑制作用可通过实施例2中所提供的分析方法完成。当化合物7浓度为1μM时，＞80％的CT-L活性被抑制，＞60％的T-L活性被抑制，＞40％的PGPH活性被抑制。
在体内化合物7对蛋白酶体活性抑制作用可通过实施例3中所提供的方法进行评估。当注射剂量为4mg/kg时，化合物7能同时抑制小鼠血液中＞40％的CT-L，T-L和PGPH活性。
化合物7的合成
流程10
合成化合物1042。室温下将盐酸羟胺水溶液(149mmol)加至化合物1041(57mmol)的甲醇溶液中，室温搅拌过夜，蒸除甲醇，剩余物用乙酸乙酯溶解，滤液用无水硫酸钠干燥，去除溶剂得到化合物1042。
合成化合物1043。将化合物1042(53mmol)和100ml的1.5N氢氧化钠溶液混合而成的甲醇溶液搅拌3小时，蒸除甲醇，得到的溶液进行酸化，然后用乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩得到油状化合物1043。
流程11
树脂1044。向树脂1011(1.6mmol)中加入DCE(30毫升)、化合物1043(2.8mmol)、DIEA(6.3mmol)、HOBT(3.2mmol)和BOP(3.2mmol)，将混合物充分搅拌，过滤，用DCE、二甲基甲酰胺、异丙醇和乙醚冲洗，然后空气干燥24小时，得到树脂1044。
合成化合物1045。化合物1045与化合物1013的制备过程相同。
合成化合物7。将DEPBT(0.179mmol)和DIEA(0.411mol)加至化合物1045(0.137mmol)的二氯甲烷溶液中。于0℃搅拌2小时，加入化合物1005(0.179mmol)，室温搅拌过夜，浓缩，过柱得到化合物7。化合物7核磁共振数据:1HNMR(400MHz,Methanol-d4):δ0.83-0.91(m,12H),1.25-1.61(m,9H),1.85-2.02(m,2H),2.62-2.68(m,2H),2.85-2.88(m,2H),3.07-3.19(m,2H),3.48-3.60(m,2H),4.23-4.31(m,2H),4.47-4.60(m,2H),7.06-7.28(m,11H).低分辨质谱:分子式C39H51N5O8,分子量计算值717.4,测量值(M+H+)718.4。
实施例10：化合物8，结构，蛋白酶体活性抑制性能，离体蛋白酶体活性抑制性能，体内蛋白酶体活性抑制性能，以及合成方法
化合物8的结构式如下所示
化合物8对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体活性的抑制作用通过实施例1中所提供的酶活性抑制测定方法完成。下面表格列出了化合物8对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性抑制的IC50值。化合物8和卡非佐米(Carfilzomib)对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L活性抑制的IC50比值(IC50化合物8/IC50卡非佐米)分别是0.28和0.55。
在小鼠血液溶解产物中化合物8对20S蛋白酶体的抑制作用可通过实施例2中所提供的分析方法完成。当化合物8浓度为0.2μM时，CT-L活性98.0％被抑制，T-L活性65.2％被抑制，PGPH活性50.1％被抑制。当化合物8浓度为1μM时，CT-L活性100％被抑制，T-L活性79.5％被抑制，PGPH活性75.1％被抑制。当化合物8浓度为5μM时，CT-L活性98.5％被抑制，T-L活性90.2％被抑制，PGPH活性89.4％被抑制。
在体内化合物8对蛋白酶体活性抑制作用可通过实施例3中所提供的方法进行评估。当注射剂量为5mg/kg时，化合物8能同时抑制小鼠血液中92.5％的CT-L，50.5％的T-L，和41.0％的PGPH活性。
化合物8的合成
流程12
化合物1047。将化合物1046(0.120mol)和氰化钾(0.156mol)的DMF溶液室温搅拌过夜，将水和乙酸乙酯依次加入反应液进行萃取，然后有机相进行浓缩，过柱得到化合物1047。
合成化合物1048。将化合物1047(25.2mmol)的盐酸/甲醇溶液(50ml，4N)室温搅拌3小时，将混合物蒸馏，得到的产物纯化得到化合物1048。
合成化合物1049。将化合物1048(15.7mmol)的甲醇钠甲醇溶液(3N，30ml)于40℃搅拌3小时，冷至室温后加入水，室温下搅拌3小时，用DCM萃取，有机相浓缩得到化合物1049。
流程13
合成树脂1050。向树脂1011(1.6mmol)中加入DCE(30毫升)、化合物1038(2.8mmol)、DIEA(6.3mmol)、HOBT(3.2mmol)和BOP(3.2mmol)，将混合物充分搅拌。过滤，用DCE、二甲基甲酰胺、异丙醇和乙醚冲洗，然后空气干燥24小时，得到产品树脂1050。
合成化合物1051。化合物1051与化合物1013的制备过程相同。
合成化合物8。向DEPBT(0.21mmol)和DIEA(0.48mol)加至化合物1051(0.16mmol)的二氯甲烷溶液中。于0℃搅拌2小时，加入化合物1005(0.213mmol)，室温搅拌过夜，浓缩，过柱得到化合物8。化合物8核磁共振数据:1HNMR(400MHz,Methanol-d4):δ0.74-0.91(m,12H),1.32-1.58(m,9H),1.90-2.02(m,2H),2.52-2.65(m,2H),2.85-2.90(m,2H),3.06-3.16(m,2H),3.45(s,2H),4.26-4.33(m,2H),4.49-4.60(m,2H),6.59(s,1H),7.06-7.26(m,10H).低分辨质谱:分子式C39H51N5O7S,分子量计算值733.4,测量值(M+H+)734.3。
实施例11：化合物9，结构，蛋白酶体活性抑制性能，离体蛋白酶体活性抑制性能，体内蛋白酶体活性抑制性能，以及合成方法
化合物9结构式如下所示
化合物9对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体活性的抑制作用通过实施例1中所提供的酶活性抑制测定方法完成。下面表格列出了化合物9对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性抑制的IC50值。化合物9和卡非佐米(Carfilzomib)对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L活性抑制的IC50比值(IC50化合物9/IC50卡非佐米)分别是0.35和0.54。
在小鼠血液溶解产物中化合物9对20S蛋白酶体的抑制作用可通过实施例2中所提供的分析方法完成。当化合物9浓度为1μM时，CT-L活性＞80％被抑制，T-L活性＞60％被抑制，PGPH活性＞40％被抑制。
在体内化合物9对蛋白酶体活性抑制作用可通过实施例3中所提供的方法进行评估。当注射剂量为2mg/kg时，化合物9能同时抑制小鼠血液中＞40％的CT-L，T-L和PGPH活性。
化合物9的合成
流程14
合成化合物1054。将化合物1052(40mmol)和化合物1053(20mmol)的DMF溶液加热至回流12小时，加入水并用乙酸乙酯萃取，有机相用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，过柱纯化，得到化合物1054。
合成化合物1055。将化合物1054(10mmol)和浓硫酸(5ml)的乙醇溶液加热至回流6小时，真空下蒸馏，加入水并用乙酸乙酯萃取，用碳酸钠调节水相的pH＝8。乙酸乙酯萃取，有机相用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到化合物1055。
合成化合物1056。将化合物1055(10mmol)和氢氧化钠(8mmol)的乙醇溶液室温下搅拌过夜。真空下减压蒸去乙醇，调pH＝5，过滤，滤液浓缩得到化合物1056。
流程15
合成树脂1057。向树脂1011(1.6mmol)中加入DCE(30毫升)、化合物1038(2.8mmol)、DIEA(6.3mmol)、HOBT(3.2mmol)和BOP(3.2mmol)，将混合物充分搅拌。过滤，用DCE、二甲基甲酰胺、异丙醇和乙醚冲洗，然后空气干燥24小时，得到树脂1057。
合成化合物1058。化合物1058与化合物1013的制备过程相同。
合成化合物9。将DEPBT(0.65mmol)和DIEA(1.5mol)加至化合物1058(0.50mmol)的二氯甲烷溶液中。于0℃搅拌2小时，加入化合物1005(0.65mmol)，室温搅拌过夜，浓缩，过柱纯化得到化合物9。化合物9核磁共振数据:1HNMR(400MHz,Methanol-d4):δ0.83-0.90(m,12H),1.32-1.60(m,9H),1.90-2.04(m,2H),2.59-2.63(m,2H),2.81-2.87(m,2H),3.05-3.16(m,2H),3.73(s,2H),4.26-4.32(m,2H),4.48-4.60(m,2H),4.79(s,2H),7.06-7.30(m,11H).低分辨质谱:分子式C40H53N5O7S,分子量计算值747.4,测量值(M+H+)748.3。
实施例12：化合物10，结构，蛋白酶体活性抑制性能，离体蛋白酶体活性抑制性能，体内蛋白酶体活性抑制性能，以及合成方法
化合物10结构式如下所示:
化合物10对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体活性的抑制作用通过实施例1中所提供的酶活性抑制测定方法完成。下面表格列出了化合物10对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性抑制的IC50值。化合物10和卡非佐米(Carfilzomib)对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L活性抑制的IC50比值(IC50化合物10/IC50卡非佐米)分别是0.27和0.35。
在小鼠血液溶解产物中化合物10对20S蛋白酶体的抑制作用可通过实施例2中所提供的分析方法完成。当化合物10浓度为1μM时，CT-L活性＞80％被抑制，T-L活性＞60％被抑制，PGPH活性＞40％被抑制。
在体内化合物10对蛋白酶体活性抑制作用可通过实施例3中所提供的方法进行评估。当注射剂量为2mg/kg时，化合物10能同时抑制小鼠血液中＞40％的CT-L，T-L和PGPH活性
化合物10的合成
流程16
合成化合物10。将化合物9(0.087mmol)溶于1ml吡啶，再加入1ml乙酸酐，室温下搅拌过夜，浓缩，过柱得到化合物10。化合物10核磁共振数据:1HNMR(400MHz,Methanol-d4):δ0.83-0.90(m,12H),1.32-1.57(m,9H),1.91-2.07(m,2H),2.06(s,3H),2.60-2.63(m,2H),2.81-2.87(m,2H),3.05-3.16(m,2H),3.76(d,J＝5.2Hz,2H),4.26-4.32(m,2H),4.48-4.51(m,1H),4.56-4.57(m,1H),5.31(s,2H),7.06-7.27(m,10H),7.40(s,1H).低分辨质谱:分子式C42H55N5O8S,分子量计算值789.4,测量值(M+H+)790.3。
实施例13：化合物11，结构，蛋白酶体活性抑制性能，离体蛋白酶体活性抑制性能，体内蛋白酶体活性抑制性能，以及合成方法
化合物11结构式如下所示
化合物11对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体活性的抑制作用通过实施例1中所提供的酶活性抑制测定方法完成。下面表格列出了化合物11对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性抑制的IC50值。化合物11和卡非佐米(Carfilzomib)对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L活性抑制的IC50比值(IC50化合物11/IC50卡非佐米)分别是0.36和0.56。
在小鼠血液溶解产物中化合物11对20S蛋白酶体的抑制作用可通过实施例2中所提供的分析方法完成。当化合物11浓度为1μM时，CT-L活性＞80％被抑制，T-L活性＞60％被抑制，PGPH活性＞40％被抑制。
在体内化合物11对蛋白酶体活性抑制作用可通过实施例3中所提供的方法进行评估。当注射剂量为4mg/kg时，化合物11能同时抑制小鼠血液中＞40％的CT-L，T-L和PGPH活性。
化合物11的合成
流程17
合成化合物11。向化合物9(0.1mmol)的二氯甲烷溶液中加入N,N-二甲基甘氨酸酯(0.1mmol)，EDCI(0.1mmol),HOBt(0.05mmol)和DIEA(0.3mmol)。室温下搅拌过夜，浓缩，过柱得到化合物11。化合物11核磁共振数据:1HNMR(400MHz,Methanol-d4):δ0.83-0.90(m,12H),1.32-1.60(m,9H),1.91-2.06(m,2H),2.30(s,6H),2.61-2.66(m,2H),2.80-2.87(m,2H),3.04-3.06(m,1H),3.15(d,J＝4.8Hz,1H),3.24(s,2H),3.76(d,J＝7.2Hz,2H),4.27-4.33(m,2H),4.47-4.51(m,1H),4.56-4.57(m,1H),5.38(s,2H),7.06-7.27(m,10H),7.41(s,1H).低分辨质谱:分子式C44H60N6O8S,分子量计算值832.4,测量值(M+H+)833.4。
实施例14：化合物12，结构，蛋白酶体活性抑制性能，离体蛋白酶体活性抑制性能，体内蛋白酶体活性抑制性能，以及合成方法
化合物12结构式如下所示
化合物12对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体活性的抑制作用通过实施例1中所提供的酶活性抑制测定方法完成。下面表格列出了化合物12对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性抑制的IC50值。化合物12和卡非佐米(Carfilzomib)对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L活性抑制的IC50比值(IC50化合物12/IC50卡非佐米)分别是1.16和1.71。
在小鼠血液溶解产物中化合物12对20S蛋白酶体的抑制作用可通过实施例2中所提供的分析方法完成。当化合物12浓度为5μM时，CT-L活性＞80％被抑制，T-L活性＞40％被抑制，PGPH活性＞30％被抑制。
在体内化合物12对蛋白酶体活性抑制作用可通过实施例3中所提供的方法进行评估。当注射剂量为4mg/kg时，化合物12能同时抑制小鼠血液中＞30％的CT-L，T-L和PGPH活性
化合物12的合成
流程18
合成化合物12。向化合物3(0.11mmol)的THF溶液中，加入7mg氢化钠，室温下搅拌30分钟，再加入31.6mg二甲氨基甲酰氯，室温下搅拌6小时，反应产物浓缩，纯化得到化合物12。化合物12核磁共振数据:1HNMR(400MHz,CDCl3):δ0.87-0.95(m,12H),1.26-1.35(m,3H),1.50-1.72(m,7H),1.96-2.06(m,1H),2.15-2.25(m,1H),2.53(d,J＝2.4Hz,4H),2.63-2.70(m,2H),2.82-2.90(m,6H),3.04(s,2H),3.28-3.30(m,1H),3.73(d,J＝2.4Hz,4H),4.27-4.35(m,2H),4.40-4.50(m,2H),4.55-4.63(m,2H),7.16-7.32(m,5H),6.71(d,J＝6.0Hz,1H),6.91(d,J＝8.0Hz,1H),7.54-5.78(m,2H).低分辨质谱:分子式C37H58N6O9,分子量计算值730.4,测量值(M+H+)731.4。
实施例15：化合物13，结构，蛋白酶体活性抑制性能，离体蛋白酶体活性抑制性能，体内蛋白酶体活性抑制性能，以及合成方法
化合物13结构式如下所示:
化合物13对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体活性的抑制作用通过实施例1中所提供的酶活性抑制测定方法完成。下面表格列出了化合物13对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性抑制的IC50值。化合物13和卡非佐米(Carfilzomib)对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L活性抑制的IC50比值(IC50化合物13/IC50卡非佐米)分别是0.24和0.34。
在小鼠血液溶解产物中化合物13对20S蛋白酶体的抑制作用可通过实施例2中所提供的分析方法完成。当化合物13浓度为1μM时，CT-L活性＞80％被抑制，T-L活性＞60％被抑制，PGPH活性＞40％被抑制。
在体内化合物13对蛋白酶体活性抑制作用可通过实施例3中所提供的方法进行评估。当注射剂量为2mg/kg时，化合物13能同时抑制小鼠血液中＞40％的CT-L，T-L和PGPH活性。
化合物13的合成
流程19
合成化合物1059。将化合物1055(6mmol)和CDI(6.6mmol)混合的DCM溶液室温下搅拌2小时，未经纯化得到粗品化合物1059。
合成化合物1060。于0℃下往化合物1059(6mmol)和三乙胺(18mmol)的二氯甲烷溶液中加入二甲胺盐酸盐(12mmol)，室温下搅拌3小时，浓缩产物过柱纯化得到化合物1060。
流程20
合成树脂1061。向树脂1011(1.6mmol)中加入DCE(30毫升)、化合物1038(2.8mmol)、DIEA(6.3mmol)、HOBT(3.2mmol)和BOP(3.2mmol)，将混合物充分搅拌。过滤，用DCE、二甲基甲酰胺、异丙醇和乙醚冲洗，然后空气干燥24小时得到产品树脂1061。
合成化合物1062。化合物1062与化合物1013的制备过程相同。
合成化合物13。向化合物1062(0.20mmol)的二氯甲烷溶液中，加入DEPBT(0.26mmol)和DIEA(0.60mmol)。0℃下搅拌2小时，然后加入化合物1005(0.26mmol)，室温下搅拌过夜，浓缩纯化得到化合物13。化合物13核磁共振数据:
1HNMR(400MHz,CDCl3):δ0.76-0.89(m,12H),1.22-1.60(m,9H),1.85-1.97(m,1H),2.00-2.10(m,1H),2.56-2.62(m,2H),2.83(d,J＝4.8Hz,1H),2.91(d,J＝6.8Hz,6H),2.98-3.07(m,1H),3.09-3.13(m,1H),3.27(d,J＝4.8Hz,1H),3.70(s,2H),4.15-4.27(m,2H),4.45-4.52(m,1H),4.58-4.68(m,1H),5.33(s,2H),6.46(d,J＝6.4Hz,1H),6.51(d,J＝7.6Hz,1H),6.73(d,J＝8.0Hz,1H),7.15-7.30(m,11H).低分辨质谱:分子式C43H58N6O8S,分子量计算值818.4,测量值(M+H+)819.3。
实施例16：化合物20，结构，蛋白酶体活性抑制性能，离体蛋白酶体活性抑制性能，体内蛋白酶体活性抑制性能，以及合成方法
化合物20结构式如下
化合物20对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体活性的抑制作用通过实施例1中所提供的酶活性抑制测定方法完成。下面表格列出了化合物20对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性抑制的IC50值。化合物20和卡非佐米(Carfilzomib)对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L活性抑制的IC50比值(IC50化合物20/IC50卡非佐米)分别是0.17和0.18。
在小鼠血液溶解产物中化合物20对20S蛋白酶体的抑制作用可通过实施例2中所提供的分析方法完成。当化合物20浓度为5μM时，CT-L活性＞80％被抑制，T-L活性＞50％被抑制，PGPH活性＞40％被抑制。
在体内化合物20对蛋白酶体活性抑制作用可通过实施例3中所提供的方法进行评估。当注射剂量为4mg/kg时，化合物20能同时抑制小鼠血液中＞40％的CT-L，T-L和PGPH活性。
化合物20的合成
流程21
合成化合物1064。向化合物1001(70.1mmol)，化合物1063(69.8mmol)和HATU(69.8mmol)的DMF溶液中加入DIEA(24ml，然后室温搅拌过夜，反应物浓缩，得到的产物用水稀释，乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到的产物进行过柱纯化，得到化合物1064。
合成化合物1065。向化合物1064的二氯甲烷中加入TFA的二氯甲烷溶液(40ml)，然后搅拌3小时，反应混合物用水稀释，用二氯甲烷萃取，合并的二氯甲烷相用水冲洗，无水硫酸钠干燥，浓缩后得到白色固体化合物1065。
合成化合物1066。向化合物1065(25.7mmol)，Boc-HFE-OH(25.7
mmol)，HATU(9.8g,25.7mmol)的DMF溶液中加入DIEA(9.5mL)，然后室温搅拌过夜，反应混合物用水稀释，乙酸乙酯萃取，合并的有机相用硫酸镁干燥，浓缩，通过快速色谱纯化，得到白色固体化合物1066。
合成化合物1067。将化合物1066(3.6mmol)的甲醇/THF(10：10ml)溶液冷却至0℃，加入LiOH.H2O(10.8mmol),然后室温搅拌3小时。反应混合物慢慢滴加，酸化至pH＜6，乙酸乙酯萃取，合并的有机相用水冲洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得到无色油状物化合物1067。
合成化合物1068。向化合物1067(3.1mmol)，化合物1005(3.5mmol)，HATU(3.2mmol)的DMF溶液中加入DIEA(0.5mL)，然后室温搅拌过夜，反应混合物用水稀释，乙酸乙酯萃取，合并的有机相用硫酸镁干燥，浓缩，通过快速色谱纯化，得到白色固体化合物1068。
合成化合物1069。向化合物1068(4.3mmol)的二氯甲烷溶液中加入TFA(10ml)，室温下搅拌4小时，反应混合物浓缩未作进一步纯化得到棕色油状化合物1069(500mg)。
流程22
合成化合物20。向化合物1069(0.15mmol)，化合物1070(0.2mmol)，HATU(0.16mmol)的DMF溶液中加入DIEA(0.1mL)，然后室温搅拌过夜，反应混合物用水稀释，二氯甲烷萃取，合并的有机相用硫酸镁干燥，浓缩，得到的产物用快速色谱法纯化，得到白色固体化合物20。化合物20核磁共振数据:1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ0.79-0.88(m,12H),1.28-1.39(m,7H),1.51-1.53(m,2H),1.99-2.03(t,2H),2.50-2.58(m,2H),2.71-2.77(m,1H),2.93-2.97(m,2H),3.10-3.12(d,J＝5.2Hz,1H),4.32-4.42(m,2H),4.52-4.59(m,2H),7.04-7.26(m,10H),8.01-8.03(d,J＝8Hz,1H),8.22-8.24(d,J＝7.6Hz,2H),8.76-8.80(m,2H),8.90-8.91(d,J＝2.4Hz,1H),9.19-9.20(d,J＝1.6Hz,1H).低分辨质谱:分子式C39H50N6O6,分子量计算值698.4,测量值(M+H+)699.4。
实施例17：对比试验：化合物21，结构，蛋白酶体活性抑制性能，以及合成方法
化合物21结构式如下所示
化合物21对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体活性的抑制作用通过实施例1中所提供的酶活性抑制测定方法完成。下面表格列出了化合物21对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性抑制的IC50值。化合物21和卡非佐米(Carfilzomib)对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L活性抑制的IC50比值(IC50化合物21/IC50Carfilzomib)分别是23和39。化合物21对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的T-L活性抑制的IC50值分别高达181μM和39.7μM。化合物21对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的PGPH活性抑制的IC50值也高，分别为4.41μM和12.3μM。化合物21对蛋白酶体活性的抑制作用是欠佳的。当R1基团变成时，化合物对20S蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性的抑制作用大幅降低，不能同时抑制20S蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性，这使得化合物不利于期望的治疗效果。这表明，本申请中提供的R1基团能够同时抑制20S蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性是意想不到的。
化合物21的合成
流程23
合成化合物1073。向化合物1071(27.7mmol)的THF溶液中，0℃下加入TEA(27.7mmol)。再加入化合物1072(27.7mmol)，室温下搅拌5小时，过滤，浓缩，纯化得到黄色油状化合物1073。
合成化合物1074。向化合物1073(0.38mmol)的THF溶液中加入LiOH.H2O(0.58mmol),然后室温搅拌过夜。反应混合物浓缩，得到的产物慢慢滴加，酸化至pH＜6，二氯甲烷萃取，合并的有机相用水冲洗，无水硫酸钠干燥，浓缩纯化得到无色油状物化合物1074。
合成化合物1075。向化合物1074(0.50mmol)，化合物1069(0.50mmol),HATU(0.55mmol)的DMF溶液中加入DIEA(0.2mL)，然后室温搅拌过夜，反应混合物浓缩，得到的产物用水稀释，水溶液用二氯甲烷萃取，有机相用硫酸镁干燥，浓缩，得到的产物纯化，得到白色固体化合物1075。
合成化合物21。向化合物1075(0.08mmol)的THF溶液中加入水和10％pd/C，室温氢气保护下搅拌2小时，过滤，滤液用碳酸钠处理，过滤得到得到白色固体化合物21。化合物21核磁共振数据:1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ0.72-0.86(m,12H),1.06-1.11(m,1H),1.21-1.49(m,7H),1.66-1.89(t,1H),1.90-1.97(m,2H),2.49-2.67(m,2H),2.90-2.94(m,3H),2.98-3.19(m,1H),4.10-4.46(m,6H),7.06-7.35(m,10H),8.10-8.11(d,1H),8.46(s,1H),8.78-8.79(t,1H),9.04-9.05(t,1H).低分辨质谱:分子式C36H49N4Na2O10P,分子量计算值774.3,测量值(M+H+)775.3。
实施例18：化合物25，结构，蛋白酶体活性抑制性能，离体蛋白酶体活性抑制性能，体内蛋白酶体活性抑制性能，以及合成方法
化合物25结构式如下:
化合物25对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体活性的抑制作用通过实施例1中所提供的酶活性抑制测定方法完成。下面表格列出了化合物25对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性抑制的IC50值。化合物25和卡非佐米(Carfilzomib)对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L活性抑制的IC50比值(IC50化合物25/IC50卡非佐米)分别是0.26和0.30。
在小鼠血液溶解产物中化合物25对20S蛋白酶体的抑制作用可通过实施例2中所提供的分析方法完成。当化合物25浓度为1μM时，CT-L活性＞80％被抑制，T-L活性＞60％被抑制，PGPH活性＞40％被抑制。
在体内化合物25对蛋白酶体活性抑制作用可通过实施例3中所提供的方法进行评估。当注射剂量为2mg/kg时，化合物25能同时抑制小鼠血液中＞40％的CT-L，T-L和PGPH活性。
化合物25的合成
流程24
合成化合物25。向化合物1069(0.33mmol)，化合物1076(0.35mmol)，BOP(0.35mmol)的DMF溶液中加入TEA(0.2mL)，然后室温搅拌过夜，反应混合物浓缩，得到的产物用水稀释，二氯甲烷萃取，有机相用硫酸镁干燥，浓缩除去挥发分，通过快速色谱纯化，得到白色固体化合物25。化合物25核磁共振数据:1HNMR 400MHz,DMSO-d6):δ0.71-0.87(m,12H),1.23-1.52(m,7H),1.58-1.63(m,2H),1.85-1.95(m,2H),2.44-2.60(m,2H),2.63-2.76(m,1H),2.95-2.98(t,2H),3.08-3.11(t,1H),4.22-4.35(m,3H),4.52-4.53(d,J＝4Hz,1H),7.08-7.30(m,10H),7.46-7.49(d,J＝12.4Hz,2H),7.77(s,1H),7.85-7.96(m,2H),8.18-8.22(t,2H).低分辨质谱:分子式C38H50N6O6S,分子量计算值718.4,测量值(M+H+)719.4。
实施例19：化合物27，结构，蛋白酶体活性抑制性能，离体蛋白酶体活性抑制性能，体内蛋白酶体活性抑制性能，以及合成方法
化合物27结构式如下
化合物27对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体活性的抑制作用通过实施例1中所提供的酶活性抑制测定方法完成。下面表格列出了化合物27对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性抑制的IC50值。化合物27和卡非佐米(Carfilzomib)对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L活性抑制的IC50比值(IC50化合物27/IC50卡非佐米)分别是0.37和0.40.
在小鼠血液溶解产物中化合物27对20S蛋白酶体的抑制作用可通过实施例2中所提供的分析方法完成。当化合物27浓度为5μM时，CT-L活性＞80％被抑制，T-L活性＞60％被抑制，PGPH活性＞40％被抑制。
在体内化合物27对蛋白酶体活性抑制作用可通过实施例3中所提供的方法进行评估。当注射剂量为4mg/kg时，化合物27能同时抑制小鼠血液中＞40％的CT-L，T-L和PGPH活性。
化合物27的合成
流程25
合成化合物1078。将甲酸钠(7.05mmol)溶于2.15ml的甲酸中，再加入化合物1077(8.54mmol)，室温下搅拌4小时，过滤。滤液中加入2.92ml乙酸酐，室温下搅拌4小时。蒸干溶剂，剩余的产物高真空下蒸馏得到N-甲酰肌氨酸乙酯。叔丁醇钾(6.14mmol)悬浮于二乙醚中并冷至0℃。N-甲酰肌氨酸乙酯(6.2mmol)和甲酸甲酯(4.32mmol)溶于5ml二乙醚，并滴加至上述叔丁醇钾二乙醚溶液中，滴加时间为30分钟，滴完后搅拌1小时。过滤固体产物，溶于水中，加入1.8ml浓盐酸，蒸气浴中加热30分钟，冷却，调pH＝5。加入5.95mmol氨腈，加热至100℃保持1小时。冷却，过滤得到化合物1078。
合成化合物1079。将化合物1078(0.52mmol)溶于THF，加入碳酸二叔丁酯酐(1.29mmol)和4-DMAP(1.03mmol)，室温下搅拌过夜。乙酸乙酯萃取，有机相浓缩纯化得到化合物1079。
合成化合物1080。将化合物1079(0.43mmol)溶于THF与水的混合物(10ml THF：水＝2：1)中，然后加入LiOH.H2O(4.3mmol)，搅拌4小时，蒸干，调pH＝5。乙酸乙酯萃取，将得到的产物蒸干，得到化合物1080。
合成化合物1081。将化合物1080(0.33mmol)，化合物1069(0.34mmol)，HATU(0.37mmol)的DMF溶液中加入DIEA(0.2mL)，然后室温搅拌过夜，反应混合物浓缩，得到的产物用水稀释，水溶液用二氯甲烷萃取，有机相用硫酸镁干燥，浓缩，得到的产物纯化，得到白色固体化合物1081。
合成化合物27。向化合物1081(0.1mmol)的二氯甲烷溶液中加入TFA(0.2ml)，室温下搅拌3小时，浓缩反应液，通过快速色谱纯纯化，得到白色固体化合物27。化合物27核磁共振数据:1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ0.77-0.87(m,12H),1.23-1.39(m,7H),1.46-1.68(m,2H),1.88-1.94(m,2H),2.49-2.50(t,1H),2.72-2.76(t,2H),2.94-2.99(m,2H),3.10-3.11(d,J＝5.2Hz,1H),3.5(s,3H),4.23-4.36(m,3H),4.52-4.53(d,J＝4.8Hz,1H),5.82(s,2H),7.08-7.33(m,11H),7.82-7.89(m,3H),8.17-8.19(d,J＝8Hz,1H).低分辨质谱:分子式C39H53N7O6,分子量计算值715.4,测量值(M+H+)716.5。
实施例20：化合物28，结构，蛋白酶体活性抑制性能，离体蛋白酶体活性抑制性能，体内蛋白酶体活性抑制性能，以及合成方法
化合物28结构式如下:
化合物28对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体活性的抑制作用通过实施例1中所提供的酶活性抑制测定方法完成。下面表格列出了化合物28对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L，T-L和PGPH活性抑制的IC50值。化合物28和卡非佐米(Carfilzomib)对20S结构蛋白酶体和20S免疫蛋白酶体的CT-L活性抑制的IC50比值(IC50化合物28/IC50卡非佐米)分别是0.16和0.15。
在小鼠血液溶解产物中化合物28对20S蛋白酶体的抑制作用可通过实施例2中所提供的分析方法完成。当化合物28浓度为0.2μM时，CT-L活性96.1％被抑制，T-L活性57.8％被抑制，PGPH活性36.0％被抑制。当化合物28浓度为1μM时，CT-L活性98.4％被抑制，T-L活性73.5％被抑制，PGPH活性48.2％被抑制。当化合物28浓度为5μM时，CT-L活性100％被抑制，T-L活性83.2％被抑制，PGPH活性64.9％被抑制。
在体内化合物28对蛋白酶体活性抑制作用可通过实施例3中所提供的方法进行评估。当注射剂量为4mg/kg时，化合物28能同时抑制小鼠血液中97.5％的CT-L活性，72.1％的T-L活性,和68.4％的PGPH活性。
化合物28的合成
流程26
合成化合物28向化合物1082(0.19mmol)，化合物1069(0.17mmol)，HATU(0.18mmol)的DMF溶液中加入DIEA(0.1mL)，然后室温搅拌过夜，反应混合物浓缩，得到的产物用水稀释，水溶液用二氯甲烷萃取，有机相用硫酸镁干燥，浓缩反应液，通过快速色谱纯纯化，得到白色固体化合物28。化合物28核磁共振数据:1NMR(400MHz,DMSO-d6):δ0.73-0.87(m,12H),1.19-1.40(m,7H),1.39-1.50(m,1H),1.52-1.63(m,1H),1.73-1.76(m,1H),1.84-1.88(m,1H),2.33-2.44(m,2H),2.56-2.76(m,1H),2.93-3.22(m,5H),4.22-4.36(m,3H),4.51-4.53(t,1H),6.25(s,1H),6.88(s,2H),7.06-7.29(m,10H),7.88-7.90(d,J＝8.4Hz,1H),7.97-7.99(d,J＝8Hz,1H),8.13-8.15(d,J＝8Hz,1H),8.20-8.22(d,J＝7.2Hz,1H).低分辨质谱:分子式C39H52N6O6S,分子量计算值732.4,测量值(M+H+)733.4。
Claims (7)
1.如下所示的化合物、及其对映体、非对映体、互变异构体、和药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于，所述化合物为化合物8或25：
2.一种药物组合物，包括权利要求1中的任一化合物和药学上可接受的载体。
3.如权利要求1所述的化合物、及其对映体、非对映体、互变异构体和药学上可接受的盐或溶剂化物在制备用于特异性抑制20S蛋白酶体的催化活性的药物中的用途。
4.如权利要求3所述的用途，其中所述20S蛋白酶体的CT-L活性、T-L活性和PGPH活性都被同时抑制。
5.如权利要求1所述的化合物、及其对映体、非对映体、互变异构体和药学上可接受的盐或溶剂化物在制备用于治疗与蛋白酶体相关疾病的药物中的用途。
6.如权利要求1所述的化合物、及其对映体、非对映体、互变异构体和药学上可接受的盐或溶剂化物在制备用于治疗与20S蛋白酶体相关的疾病的药物中的用途。
7.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述20S蛋白酶体相关的疾病选自下组：癌症、神经中毒/退行性疾病、阿尔兹海默症、缺血性疾病、炎症、免疫相关的疾病、HIV感染、器官移植排斥、感染性休克、抗原呈递抑制、病毒基因表达减少、寄生虫感染、酸中毒相关的疾病、黄斑变性、肺部疾病、肌肉萎缩症、纤维化疾病、骨骼或毛发生长疾病。
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