CN109072260A - 乳酸镁发酵方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及从碳源生产乳酸镁的发酵方法，包括以下步骤：‑在发酵反应器中提供包含可发酵碳源的发酵培养基，‑在碱性镁盐存在下通过产生乳酸的微生物发酵该发酵培养基，以产生包含乳酸镁的发酵液，和‑从含乳酸镁的发酵液中回收固体乳酸镁，其中，在该发酵方法的至少40％的操作时间内，基于发酵液总量，发酵液中固体乳酸镁的浓度以固体乳酸镁晶体计算保持在5‑40体积％的范围内。本发明的方法允许以高生产率稳定操作，并具有有效的产物分离。

Description

乳酸镁发酵方法

本发明涉及通过发酵生产乳酸镁。

乳酸镁有许多应用，其中一种是作为乳酸的原料。乳酸可用于许多应用，例如食品的保存和可生物降解的聚合物的制备。在这些应用中的一些应用中，起始乳酸的质量是最重要的。例如，在丙交酯和聚乳酸的生产中，希望以具有高立体化学纯度的乳酸开始。此外，起始乳酸中杂质的存在可能导致乳酸不希望的外消旋化，从而导致较低质量的丙交酯和聚乳酸产物。

对高质量产品的需求不断增加以及需要实现与商品市场相容的生产成本，使得能够降低生产乳酸的原料成本而同时不影响质量至关重要。

通常通过微生物发酵碳水化合物来生产乳酸。为了将反应培养基的pH保持在微生物生长良好的值，通常在发酵期间加入碱性盐，以补偿由乳酸形成引起的pH降低。这导致形成乳酸盐。当使用碱性镁盐时，例如，镁的(氢)氧化物或碳酸盐，将形成乳酸镁。

本领域已知形成乳酸镁的发酵方法，也表示为乳酸镁发酵。

例如，NL288829描述了用于生产乳酸的连续发酵方法，其中在发酵方法中加入镁盐或锌盐，以形成从发酵培养基中除去的不溶性乳酸镁或乳酸锌。

US2010/0323416也描述了一种形成羧酸的发酵方法，其中添加了镁盐。

WO2013160352描述了用于生产乳酸镁以及许多其他产品的发酵方法。该方法包括固体产物去除步骤，其包括水力旋流器和固/液分离步骤。

Yong Wang et al.,Efficient magnesium lactate production with in situproduct removal by crystallization,BioResource Technology,Vol.198,26-September 2015,pp.658-663描述了在发酵期间除去乳酸镁的乳酸镁发酵。这表明在发酵期间除去固体产物应该在乳酸镁浓度为140g/l的条件下进行。乳酸镁浓度为140g/l对应于42℃下5体积％的晶体浓度。在该文献的图3中，发酵期间发酵中的产物浓度保持在70和150g/l之间(启动时间段为25小时，然后达到70g/l的值)。当晶体形成开始于110g/l的浓度时，这意味着对于发酵的大部分，根本不存在固体晶体，或者仅低浓度存在。

为了实现允许在不损害产品质量的情况下降低成本的乳酸源的目标，本领域需要这样的乳酸镁发酵方法，其允许以高生产率稳定操作，并具有有效的产物分离。本发明提供了这样的方法。

本发明涉及从碳源生产乳酸镁的发酵方法，包括以下步骤：

-在发酵反应器中提供包含可发酵碳源的发酵培养基，

-在碱性镁盐存在下通过产生乳酸的微生物发酵该发酵培养基，以产生包含乳酸镁的发酵液，和

-从含乳酸镁的发酵液(fermentation broth)中回收固体乳酸镁，

其中，在该发酵方法的至少40％的操作时间内，基于发酵液总量，发酵液中固体乳酸镁的浓度以固体乳酸镁晶体计算保持在5-40体积％的范围内。

已经发现，通过确保发酵液中固体乳酸镁的浓度在至少40％的操作时间内保持在5-40体积％的范围内，获得了一种结合高效的产品分离性能和高产率的方法。高效的产品分离性能转化为良好的工艺稳定性，同时也转化为高产品质量，因为它可以很好地分离乳酸镁和污染物。

更具体地，已经发现，当在该方法的大部分期间固体乳酸镁的浓度太高时，该方法的生产率降低。不希望受理论束缚，据信这可能是由于乳酸镁发酵产物的存在以某种方式影响发酵方法，例如通过影响系统中的水活性，和/或通过某种方式影响微生物。这与传统观点相反，传统观点认为固体发酵产物不影响发酵。

另一方面，已经发现，如果在该方法的大部分期间乳酸镁浓度太低，则从发酵液中分离固体乳酸镁更加困难。

优选发酵液中固体乳酸镁的浓度为至少10体积％，因为已经发现较高浓度的固体乳酸镁导致产品具有改进的性质，包括改善的过滤性能，这使产品更容易洗涤。可优选的是，发酵液中固体乳酸镁的浓度在操作时间的规定部分期间在10-35体积％的范围内，特别是在10-30体积％的范围内，一些实施方案在为10-25体积％的范围内。可更优选的是，发酵液中固体乳酸镁在操作时间的规定部分期间在15-40体积％的范围内，特别是在10-35体积％的范围内，更特别是在15-30体积％的范围内，一些实施方案的范围为15-25体积％。在一些实施方案中，可优选的是，发酵液中固体乳酸镁的浓度在操作时间的规定部分期间在20-40体积％的范围内，特别是在20-35体积％的范围内，更特别是在20-30体积％的范围内，一些实施方案的范围为20-25体积％。

发酵液中固体乳酸镁的浓度按照以下步骤测定：使用Eppendorf管从发酵液中取出1ml均质样品。将样品以1300rpm离心2分钟。目测确定固体层的体积百分比。

该固体层包含固体乳酸镁和生物质。为了补偿生物质的量，可以通过本领域已知的方法单独测定生物质的量，例如，通过用KOH调节至pH8的0.5NEDTA溶液稀释至5体积％，来测定已从中除去晶体的发酵液样品在600nm处的光密度，并将其与标准生物质溶液的OD600nm进行比较。

然后可以通过从上述离心步骤中获得的百分比中减去生物质的体积百分比来确定固体乳酸镁的体积百分比。

发酵方法的操作时间的起点是这样的时间点，其中已经将所有培养基组分提供给反应器，发酵培养基已经达到发酵条件例如选择的pH和温度，并且已经将微生物提供给反应器。在该时间点，所有条件都已满足发酵开始的要求。

发酵方法的操作时间的终点是产物形成基本上停止的时间点，即当产物以g/l.h表示时，产物低于该方法期间生产最大值(g/l.h)的10％。这通常是碳源耗尽的时候。

根据本发明的方法的总操作时间可在宽范围内变化。对于商业化操作，合适的最小操作时间是10小时。如果操作时间低于该值，则乳酸镁浓度在规定范围内的时间段(以小时为单位)将很短，以至于难以实现有意义的商业化生产。可优选的是，本发明的方法的总操作时间为至少24小时，特别是至少48小时。最大小时数并不是严格的。如本文其他地方所述，对于连续方法，总操作时间原则上可以是不确定的。可以将2年的值作为一般最大值。

在整个操作时间内，发酵液中固体乳酸镁的浓度通常不在规定的体积％范围内。例如，在发酵开始时，培养基中可不存在乳酸镁。在启动发酵时，形成乳酸镁，其将首先处于溶解状态。在形成更多乳酸镁时，发酵培养基将被乳酸镁饱和，并开始形成固体乳酸镁晶体。然后需要一些时间才能达到10体积％的值。

另一方面，在接近发酵结束时，当停止提供碳源时，可能期望在不进一步除去产物的情况下进行发酵，这可能导致发酵液中固体乳酸镁浓度变得高于40体积％。此外，特别是当产品去除是间歇性的时，可能是该方法期间在某些时间点固体乳酸镁的浓度达到40体积％以上的值。

因此，固体乳酸镁浓度保持在上述范围内的操作时间的百分比取决于上述启动阶段和结束阶段所占用的时间量，其与这样的启动和结束阶段之间的时间段相关。因此，操作时间越长，固体乳酸镁浓度在规定范围内的操作时间百分比可以越高。

优选的是，在发酵方法的至少60％的操作时间期间，发酵液中固体乳酸镁的浓度保持在规定的范围内，优选在至少70％的操作时间期间，更优选在至少80％的操作时间期间，在某些情况下在至少90％的操作时间期间。

本发明的方法可以是分批方法、补料分批方法或连续方法。

在一个实施方案中，本发明的发酵方法是分批方法。在本说明书中，分批方法定义为这样的方法，其中在反应开始时将碳源提供给发酵反应器，并且在该方法期间不提供(大部分)碳源。

在一个实施方案中，本发明的发酵方法是补料分批方法。在本说明书中，补料分批方法是这样的方法，其中在反应开始时和反应期间给发酵反应器提供至少碳源，该方法具有预定的终点，超过该终点，由于例如杂质的积累而不能继续发酵。

在一个实施方案中，本发明的发酵方法是连续发酵方法。在本说明书的上下文中，连续发酵方法是这样的方法，其中在反应开始时和反应期间给发酵反应器提供至少碳源，其中该方法不具有预定的终点。总之，发酵培养基的总体积保持或多或少地恒定。这意味着，鉴于在发酵期间添加碳源导致发酵培养基的体积增加，在发酵期间将除去内容物，在这种情况下内容物以固体乳酸镁的形式，任选地是与一些液体发酵培养基组合。原则上，连续发酵可以无限期运行，尽管它将在某个时间点停止进行单元维护。分批发酵、补料分批发酵和连续发酵的概念是本领域技术人员已知的。

常规而言，在分批发酵和补料分批发酵中，发酵一直继续直至碳源耗尽至发酵停止的程度。发酵液中乳酸镁的浓度由碳源的量决定，并且可以增加至非常高的值，例如，以发酵液的总量计算的50体积％的量级。由于乳酸镁以固体形式存在，因此可以获得这些非常高的浓度。

然而，在本发明中，该方法将以这样的方式进行，即从发酵液中适当回收固体乳酸镁，使得在操作时间的特定部分期间固体乳酸镁的浓度保持在规定的范围内。

在本发明的一个实施方案中，发酵方法是连续发酵方法。在连续发酵方法中，在发酵方法中添加碳源和其他化合物，使得该方法原则上可以无限期地运行。在连续发酵方法中，将会发生间歇性产物去除，以确保反应容器中有足够的空间用于继续发酵。在文献中，例如在NL288829中描述的乳酸镁发酵中，没有提供关于其中进行产物去除的发酵液中的乳酸镁的浓度信息。相比之下，在本发明中，已经发现，与预期相反，通过在操作时间的特定部分期间将固体乳酸镁浓度保持在特定范围内，获得的发酵方法具有显示出良好分离性质的产物和高体积生产率。连续发酵的使用是本发明的优选实施方案，特别是其中在至少70％的操作时间期间，更优选在至少80％的操作时间期间，又更优选在至少90％的操作时间期间，固体乳酸镁的浓度保持在规定的范围内。

发酵液中固体乳酸镁的浓度是通过从中回收固体乳酸镁进行调节的。

通常在该方法期间进行固体乳酸镁的回收。它可以以本领域已知的方式进行，例如，通过从发酵反应器中取出包含固体乳酸镁的发酵液，并从发酵液中除去固体乳酸镁的步骤。从发酵液中除去固体乳酸镁可以通过本领域已知的方法进行，例如通过过滤、离心、倾析或其组合。

在一个实施方案中，已经除去固体乳酸镁的发酵液部分或全部再循环到发酵反应器中。这有利于将发酵液的生物质返还到发酵反应器。

乳酸镁的除去可以以间歇的方式在不连续的步骤中进行，但也可以连续的方式进行。连续的乳酸镁去除被认为是优选的，因为它允许精确控制发酵液中存在的乳酸镁的量。它还可以有效地整合到连续发酵方法中，这是本发明的优选实施方案。

通常，如果进行其中从反应器中取出包含固体乳酸镁的发酵液的步骤，则在单个步骤中取出的发酵液的体积为反应器中存在的发酵培养基的至多40体积％。更高百分比将使得难以将固体乳酸镁的浓度保持在指定范围内。如果在单个步骤中取出的发酵液的体积为反应器中存在的发酵培养基的至多30体积％，特别是至多20体积％，更特别是至多10体积％，则可是优选的。

本发明的方法还包括以下步骤：在发酵反应器中提供包含可发酵碳源的发酵培养基，和在碱性镁盐存在下通过产生乳酸的微生物发酵发酵培养基以提供包含乳酸镁的发酵液。这些步骤通常为本领域技术人员所知。它们将在下面阐明以用于背景目的。

在本发明的方法中，在发酵反应器中提供包含可发酵碳源的发酵培养基。如本文所用的术语“可发酵碳源”是指能够由产生乳酸的微生物发酵的碳水化合物。可发酵碳源的实例是C5糖、C6糖，其低聚物(例如二聚体C12糖)和/或其聚合物，但也有化合物如甘油。C5糖和C6糖分别是指具有5和6个碳原子的糖，而C12糖是指具有12个碳原子的糖(例如二糖)。具体微生物能够发酵的可发酵碳源的类型可以变化，并且通常取决于所使用的产生乳酸的微生物。可通过产生乳酸的微生物发酵的常见糖的实例可包括C5糖，例如阿拉伯糖、木糖和核糖；C6糖，如葡萄糖、果糖、半乳糖、鼠李糖和甘露糖；和C12糖，如蔗糖、麦芽糖和异麦芽糖。基于本领域技术人员的公知常识，选择碳源和微生物的合适组合在本领域技术人员的能力范围内。

反应介质中碳源的浓度将取决于碳源的性质、微生物的性质和进一步的发酵条件。在此选择合适的浓度在本领域技术人员的能力范围内。

可以通过将额外的营养物与碳源和水组合来提供发酵培养基。额外的营养物可以任何顺序和以固体形式、作为溶液或悬浮液(例如在水中)加入。

用于发酵以制备乳酸或乳酸盐的合适营养物是本领域已知的。额外的营养物可以选自例如矿物盐(例如矿物氮，磷酸盐，硫和微量元素，例如锌，镁，钙，锰，钾，钠，硼，铁，钴，铜，钼，镍，铝的来源物等)和有机氮源(例如酵母自溶物和水解产物，植物蛋白水解产物，动物蛋白水解产物和来自浸泡小麦或玉米的可溶性副产物)中的至少一种。这种有机氮源通常以例如游离氨基酸，寡肽，肽，维生素和痕量酶辅因子的形式提供氮。这些有机氮源还可以单独添加和/或以纯形式添加。

在接种之前，可以将发酵培养基的pH调节至适于用所选微生物发酵的pH。通常，可以将pH调节至约2.0至约8.0，特别是约4.0至约7.5。根据发酵培养基的初始pH，可以通过添加碱(例如碱性镁盐)或酸(例如H2SO4)来调节pH。发酵培养基在碱性镁盐存在下通过产生乳酸的微生物发酵以产生含有乳酸镁的发酵液。通常通过在合适的温度下将发酵培养基与微生物一起培养一段合适的时间来进行发酵。

在发酵期间，乳酸镁将以固体形式沉淀。是否发生乳酸镁的沉淀将取决于发酵培养基中可发酵碳水化合物的浓度、发酵温度、发酵培养基的其他成分的浓度、乳酸镁浓度和添加的碱性镁盐的稀释系数。

合适的产乳酸微生物是本领域已知的并且可以包括细菌、真菌和酵母，并且可以选自微生物，所述微生物是(a)同型乳酸乳酸生产者或(b)产生乳酸的异型发酵微生物。可以对微生物进行基因工程改造以产生或过量产生乳酸。这样的微生物的实例包括但不限于以下属：乳杆菌属(Lactobacillus)、明串珠菌属(Leuconostoc)、片球菌属(Pediococcus)、乳球菌属(Lactococcus)、链球菌属(Streptococcus)、气球菌属(Aerococcus)、肉食杆菌属(Carnobacterium)、肠球菌(Enterococcus)、酒球菌属(Oenococcus)、芽孢乳杆菌属(Sporolactobacillus)、四联球菌属(Tetragenococcus)、漫游球菌属(Vagococcus)、魏斯氏菌属(Weissella)、芽孢杆菌属(Bacillus)(包括凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、Bacillus smithii、Bacillus thermolactis和热噬淀粉芽孢杆菌(Bacillus thermoamylovorans))、土芽孢杆菌属(Geobacillus)(包括嗜热脂肪土芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus)和Geobacillusthermoglucosidans)、热解纤维素果汁杆菌属(Caldicellulosiruptor)(包括Caldicellulosiruptor saccharolyticus)、梭菌属(Clostridium)(包括热纤维梭菌(Clostridium thermocellum))、热厌氧杆菌属(Thermoanaerobacterium)(包括Thermoanaerobacterium saccharolyticum)、Thermoanaerobacter和Escherichia (包括大肠杆菌)的细菌种，和来自以下属酵母属(Saccharomyces)(包括酿酒酵母(Saccharomyescerevisiae))、克鲁维酵母菌属(Kluyveromyces)(包括乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyceslactis)和马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus))、伊萨酵母属(Issatchenkia)(包括东方伊萨酵母(Issatchenkia orientalis))、毕赤酵母属(Pichia)(包括树干毕赤酵母(Pichia stipitis))、假丝酵母属(Candida)(包括Candida boidinii、Candidamagnolia、Candida methanosorbosa、Candida sonorensis和产朊假丝酵母(Candidautilis))和根霉属(Rhizopus)(包括少根根霉(Rhizopus arrhizus)、Rhizopusmicrospores和米根霉(Rhizopus oryzae))的真菌和酵母种。

特别感兴趣的细菌属是乳杆菌、芽孢杆菌(包括凝结芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、Bacillus smithii、Bacillus thermolactis和热噬淀粉芽孢杆菌)、土芽孢杆菌属(包括嗜热脂肪土芽孢杆菌和Geobacillus thermoglucosidans)和埃希氏菌(包括大肠杆菌)。

另外或可替代地，优选的细菌种是在约6至约8的pH范围内显示出最佳生长的细菌种。

培养温度可取决于所用的微生物。例如，可以通过分析在不同温度条件下的发酵微生物的活性来确定要使用的最佳温度。通常，温度可以在约20至约80℃的范围内，特别是在约25至约70℃的范围内，更特别地在约30至约60℃的范围内。

添加到发酵培养基中的碱性镁盐用于中和在发酵期间由微生物分泌出的乳酸，产生乳酸镁盐。根据该过程中使用的微生物，pH降至临界值以下可能破坏微生物的代谢过程并使发酵过程停止。在发酵期间通常可以将pH调节至约2.0至约8.0，特别是约4.0至约7.5。调节pH可以通过控制发酵培养基的pH并在必要时加入适量的碱来进行。碱性镁盐可以选自例如MgO、Mg(0H)2、MgC03和Mg(HC03)2中的至少一种。碱性镁盐可含有少量其他阳离子。

通过本发明的方法获得的乳酸镁可以根据需要进行处理。它可以以本领域已知的方式进行中间纯化步骤，例如通过重结晶，得到纯化的乳酸镁。

乳酸镁可以例如转化为乳酸。这可以通过各种方法完成，包括离子交换方法，例如通过使用离子交换柱或电渗析，或使用强无机酸(例如硫酸，HCl或HNO3)酸化，以在水性介质中提供乳酸和镁盐的混合物。随后可以将该混合物进行乳酸/镁盐分离步骤，从而形成乳酸和单独的镁盐。

分离步骤可以通过本领域已知的方法进行。在镁盐为固体形式的情况下，例如在酸化步骤中使用硫酸的情况下，乳酸/镁盐分离步骤可以是固/液分离步骤的形式，其中除去固体镁盐，导致形成乳酸水溶液。

当镁盐作为溶解盐存在于混合物中时，例如在其中在酸化步骤中使用HCl的氯化镁的情况下，从镁盐溶液中分离乳酸可以例如通过使用与盐水溶液不混溶的有机萃取剂从盐溶液中萃取乳酸。然后可以通过例如蒸发除去溶剂，或通过用水从萃取剂中萃取乳酸，从萃取剂中回收乳酸，从而形成乳酸水溶液。

乳酸水溶液可以通过本领域已知的方法纯化，例如通过用活性炭处理。可以通过除去水来浓缩它们。可以例如通过蒸馏纯化乳酸，得到纯化的乳酸。如果需要，可以使乳酸结晶，形成固体结晶乳酸。还可以通过除去水使其进行低聚步骤，以形成乳酸低聚物。

通过本发明的方法获得的乳酸可以转化为丙交酯。丙交酯或乳酸本身可以转化为聚乳酸。

用于处理乳酸镁、将其转化为乳酸、进一步处理乳酸以及制备丙交酯和聚乳酸的各种方法是常规的，无需进一步说明。

通过以下实施例进一步说明本发明，但不限于此。

实施例1

如下进行进行本发明的乳酸镁发酵。将作为碳源的蔗糖与其他营养物和水一起带入发酵反应器中以形成发酵培养基。使发酵培养基达到发酵条件，包括设定的pH和温度。用能够制造乳酸的微生物接种培养基。在发酵期间，监测发酵培养基的pH，并通过加入氢氧化镁浆液保持在所选值。将蔗糖作为底物连续加入发酵培养基中。

以这样的方式定期除去固体乳酸镁，使得整个方法中的固体乳酸镁浓度在10-40体积％的范围内，并且在约50％的操作时间的固体乳酸镁浓度在约15-30体积％的范围内。这通过每4-10小时从反应器底部除去晶体浆液，从中除去固体乳酸镁，并将液体流出物循环回反应器中来实现。

发现在发酵开始时使用本发明的方法50小时的时间段(10次产物去除)导致高的平均生产率，其表示为每升每小时乳酸镁的克数。

通过过滤将本发明的方法中获得的乳酸镁与晶体浆料分离。所得滤饼的水分含量为26-32重量％。这表明乳酸镁的过滤性质使得可以进行有效的产物分离。当固体乳酸镁浓度低于5体积％太长时，将获得具有高得多的水分含量的滤饼，这使得产物分离更加困难。

Claims (15)

1.从碳源生产乳酸镁的发酵方法，包括以下步骤：

-在发酵反应器中提供包含可发酵碳源的发酵培养基，

-在碱性镁盐存在下通过产生乳酸的微生物发酵该发酵培养基，以提供包含乳酸镁的发酵液，和

-从含乳酸镁的发酵液中回收固体乳酸镁，

其中，在该发酵方法的至少40％的操作时间内，基于发酵液总量，发酵液中固体乳酸镁的浓度以固体乳酸镁晶体计算保持在5-40体积％的范围内。

2.根据权利要求1的方法，其中发酵液中固体乳酸镁的浓度在操作时间的规定部分期间在5-35体积％的范围内，特别是在10-30体积％的范围内，一些实施方案在10-25体积％的范围内。

3.根据权利要求1的方法，其中发酵液中固体乳酸镁的浓度在操作时间的规定部分期间在15-40体积％的范围内，特别是在15-35体积％的范围内，更特别是在15-30体积％的范围内，一些实施方案在为15-25体积％的范围内。

4.根据权利要求1的方法，其中发酵液中固体乳酸镁的浓度在操作时间的规定部分期间在20-40体积％的范围内，特别是在20-35体积％的范围内，更特别是在20-30体积％的范围内，一些实施方案在为20-25体积％的范围内。

5.根据前述任一项权利要求的方法，其中在发酵方法的至少60％的操作时间期间，发酵液中固体乳酸镁的浓度保持在规定的范围内，优选在至少70％的操作时间期间，更优选在至少80％的操作时间期间，在某些情况下在至少90％的操作时间期间。

6.根据前述任一项权利要求的方法，其中所述方法是分批方法、补料分批方法或连续方法。

7.根据权利要求6的方法，其中所述方法是连续方法，其中在至少70％的操作时间期间，优选在至少80％的操作时间期间，优选在至少90％的操作时间期间，固体乳酸镁的浓度保持在规定的范围内。

8.根据前述任一项权利要求的方法，其中从发酵液中回收乳酸镁的步骤包括从发酵反应器中取出含有固体乳酸镁的发酵液，并从所述发酵液中除去固体乳酸镁的步骤。

9.根据权利要求8的方法，其中将已除去固体乳酸镁的发酵液再循环到发酵反应器中。

10.根据前述任一项权利要求的方法，其中从发酵液中回收乳酸镁的步骤以间歇的方式在不连续的步骤中进行。

11.根据权利要求1-9中任一项的方法，其中从发酵液中回收乳酸镁的步骤以连续的方式进行。

12.根据权利要求1-5中任一项的方法，其中所述发酵方法是连续发酵方法，并且其中从发酵液中回收乳酸镁的步骤以连续方式进行，其中在至少70％的操作时间期间，优选在至少80％的操作时间期间，优选在至少90％的操作时间期间，固体乳酸镁的浓度优选保持在规定的范围内。

13.根据前述任一项权利要求的方法，其中将乳酸镁进行纯化步骤，例如重结晶步骤，得到纯化的乳酸镁。

14.根据前述任一项权利要求的方法，其中将乳酸镁转化为乳酸，例如，通过离子交换方法或通过酸化，酸化之后进行分离步骤以从酸化步骤中形成的镁盐中分离乳酸，例如，导致产生水性乳酸溶液，其可任选地经历一个或多个纯化步骤或浓缩步骤。

15.根据权利要求14的方法，其中对乳酸进行一个或多个纯化步骤，例如蒸馏步骤，导致形成纯化的乳酸，结晶步骤，导致形成作为固体结晶物质的乳酸，或低聚步骤，导致形成乳酸低聚物，或转化为丙交酯，或直接或通过丙交酯转化为聚乳酸。