JP6923165B2 - 乳酸の製造方法 - Google Patents
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Description
(i)糖を含む培地と、乳酸生産微生物とを含む、該乳酸生産微生物の生育に適したpHである初発pHの培養液を調製し、該微生物を培養する工程、
(ii)該初発pHより低いpH下で該乳酸生産微生物を培養する工程、および
(iii)該乳酸生産微生物の生育に適したpHにて該乳酸生産微生物を培養する工程であって、ここで該工程(iii)のpHが、該初発pHと同じまたは異なるpHである、工程
を含み、
ここで該工程(ii)は該工程(i)の前または後である。
(i)糖を含む培地と、乳酸生産微生物とを含み、かつ該乳酸生産微生物の生育に適したpHである初発pHを有する培養液を調製し、該微生物を培養する工程、
(ii)該初発pHより低いpH下で該乳酸生産微生物を培養する工程、および
(iii)該乳酸生産微生物の生育に適したpHにて該乳酸生産微生物を培養する工程。工程(ii)は、工程(i)の前または後であり得る。工程(iii)のpHは、工程(i)の初発pHと同じであり得、あるいは、用いる乳酸生産微生物が生育可能な範囲である限り、異なっていてもよい。
(1−1:発酵開始からの種々の時点におけるpH制御による乳酸発酵の影響)
破砕済みの玄米200gおよびCSL(日本澱粉工業株式会社製)10mLを蒸留水に溶解し、pHを5.5に合わせてから1L容量に調整し、発酵用培地を調製した。この発酵用培地1Lを3L容量の発酵槽(微生物用ファーメンター:EYELA社製)にて60℃で3時間加熱し、その後最終的に37℃で保温した。
カラム:GL−C610H−S(φ7.8×300mm)
温度:40℃
溶離液:3mM 過塩素酸水溶液
溶離液流量:0.5ml/分
反応液:BTB(ブロモチモールブルー)溶液
反応液流量:0.6ml/分
検出:VIS 440nm
続いて、菌体の糖消費速度が有意に向上するpH値の上限および該pHで菌体を浸漬する所要時間を調べた。まず中和を伴う乳酸発酵(pH5.5に制御)を行い、発酵開始(菌体添加)17時間後に6N塩酸(6M塩酸)を添加して強制的にpHを4.8まで減少させた。撹拌を継続しながら、このpH値に発酵液を一定時間(30分から3時間)維持した(すなわち該pHの発酵液に菌体を浸漬した)。その後、中和を再開して発酵液のpHを5.5に調整しながら144時間まで発酵を継続した。
本実施例では、菌株の種類がどのように影響を及ぼすかを調べるため、モデル糖液を用いた実験を行った。ここでは、ラクトバチルス・プランタルムldhL1::amyA株、ラクトバチルス・プランタルムΔldhL1::PxylAB-xpk1::tkt-Δxpk2::PxylAB株、およびラクトバチルス・カゼイについて調べた。
破砕済みの玄米200gを蒸留水に溶解し、1L容量に調整したものを3L容量の発酵槽(微生物用ファーメンター:EYELA社製)にて60℃で3時間加熱し、その後最終的に37℃で保温し、発酵用培地を得た。
破砕済みの玄米200gを蒸留水に溶解し、1L容量に調整したものを3L容量の発酵槽(微生物用ファーメンター:EYELA社製)にて60℃で3時間加熱し、その後最終的に37℃で保温し、発酵用培地を得た。
破砕済みの玄米200gを蒸留水に溶解し、1L容量に調整したものを3L容量の発酵槽(微生物用ファーメンター:EYELA社製)にて60℃で3時間加熱し、その後最終的に37℃で保温し、発酵用培地を得た。
広葉樹パルプ(粉末)15gおよびバーレックス(三和酒類株式会社製)6mLを蒸留水に溶解し、pHを5.5に合わせてから100mL容量に調整し、発酵用培地を調製した。この発酵用培地100mLを200mL容量の発酵槽(セパラブルフラスコ)に移して121℃、15分オートクレーブにて滅菌し、その後最終的に37℃で保温した。
Claims (8)
- 乳酸の光学純度を高める方法であって、
(i)糖を含む培地と、乳酸生産微生物とを含み、かつ該乳酸生産微生物の生育に適したpHである初発pHを有する培養液を調製し、該乳酸生産微生物を培養する工程、
(ii)該初発pHより低いpH下で該乳酸生産微生物を培養する工程、および
(iii)該乳酸生産微生物の生育に適したpHにて該乳酸生産微生物を培養する工程であって、ここで該工程(iii)のpHが、該初発pHと同じまたは異なるpHである、工程
を含み、
ここで該工程(i)〜(iii)において、該工程(ii)が、該工程(i)の前または後で行われ、
該乳酸生産微生物が、乳酸合成酵素遺伝子のうち、L−またはD−乳酸合成酵素遺伝子のいずれかのみを有するラクトバチルス・プランタルムである、
方法。 - 前記工程(i)、前記工程(ii)および前記工程(iii)をこの順に含み、
該工程(i)および該工程(ii)を通して、中和することなく前記乳酸生産微生物を培養し、そして該工程(iii)において、該乳酸生産微生物の生育に適したpHに調整しながら該乳酸生産微生物を培養する、請求項1に記載の方法。 - 前記工程(i)において、pHを前記初発pHに調整しながら前記乳酸生産微生物を培養し、前記工程(ii)において、中和することなく該乳酸生産微生物を培養し、そして前記工程(iii)において、該乳酸生産微生物の生育に適したpHにpHを調整しながら該乳酸生産微生物を培養する、請求項1に記載の方法。
- 前記乳酸生産微生物が、乳酸合成酵素遺伝子のうちD−乳酸合成酵素遺伝子のみを有するラクトバチルス・プランタルムである、請求項1から3のいずれかに記載の方法。
- 前記乳酸生産微生物が、ラクトバチルス・プランタルムldhL1::amyA株である、請求項1から4のいずれかに記載の方法。
- 前記乳酸生産微生物の生育に適したpHが、弱酸性から中性付近であり、そして前記初発pHより低いpHが、より酸性である、請求項1から5のいずれかに記載の方法。
- 前記培地が、糖化酵素をさらに含む、請求項1から6のいずれかに記載の方法。
- 前記工程(i)、工程(ii)および工程(iii)の1バッチの発酵終了後の発酵残渣が、次バッチに用いられる、請求項1から7のいずれかに記載の方法。
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