CN109072190A

CN109072190A - 将jak1抑制剂作为有效成分包含的用于干细胞的增殖、分化促进或老化抑制的组成物

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Publication number: CN109072190A
Application number: CN201780028863.1A
Authority: CN
Inventors: 金昇厚; 金相润; 李香珠
Original assignee: University of Ulsan Foundation for Industry Cooperation
Current assignee: University of Ulsan Foundation for Industry Cooperation
Priority date: 2016-03-09
Filing date: 2017-03-09
Publication date: 2018-12-21
Also published as: KR20170105436A; EP3461887A4; KR101960592B1; WO2017155325A1; EP3461887A1; US20190183900A1

Abstract

本发明涉及一种将JAK1抑制剂作为有效成分而包含的用于干细胞的增殖、分化促进及老化抑制的组成物。本发明的处理JAK1抑制剂的干细胞或敲除JAK1的干细胞具有减少老化并增加干细胞的生存率的活性，因此具有能够作为用于干细胞的增殖、分化促进及老化抑制的组成物而使用的效果。并且，敲除JAK1的干细胞具有如下活性：将作为免疫原性相关蛋白质的HLA‑A或HLA‑B的表达抑制或减少，并将作为抑制T细胞活性的蛋白质的TGF‑b或HGF的表达促进或增加，因此在免疫疾病的预防或治疗可以有用地使用。

Description

将JAK1抑制剂作为有效成分包含的用于干细胞的增殖、分化促进或老化抑制的组成物

技术领域

本发明涉及一种将JAK1抑制剂作为有效成分包含的用于干细胞的增殖、分化促进及老化抑制的组成物。

背景技术

干细胞(stem cells)是由骨髓、脐带血、胎盘(或胎盘组织细胞)、脂肪(或脂肪组织细胞)等多样的生体细胞产生的具有多分化性质的干细胞。例如，从骨髓(bone marrow)产生的间质干细胞由于能够分化为脂肪组织、骨/软骨组织、肌肉组织的多分化性而为了作为细胞治疗剂的开发进行着多样的研究。另外，与其他人体初代培养细胞类似地，间质干细胞在体外(in vitro)培养时，由于与端粒缩短(telomere shortening)无关的老化(senescence)机制，已知使细胞的分裂急剧减少(Shibata,K.R.et al.Stem cells,25；2371-2382,2007)。

这种老化现象的机制目前还没有被明确地解释，但如下的现象被认为是其主要原因：由于长时间的体外培养引起的环境应力的堆积使作为Cdk抑制蛋白质的p16(INK4a)被表达并堆积，从而使负责细胞的生长的Cdk蛋白质的活性被抑制。在间质干细胞中，使被称为Bmi-1的肿瘤基因表达而阻碍p16的表达时，确认了细胞的老化被抑制(Zhang,X.etal.Biochemical and biophysical research communications 351；853-859,2006)。并且，有报告指出在培养中处理FGF-2而抑制p21(Cip1)、p53及p16(INK4a)的mRNA的表达时，G1时期的生长被停止的间质干细胞的生长停止被抑制(Ito,T.et al.,Biochemical andbiophysical research communications,359；108-114 2007)。并且，韩国公开专利第10-2009-0108141号中，公开了一种将编码WiPl蛋白质的基因转化到间质干细胞而抑制间质干细胞的老化的方法。

但是，由于Bmi-1本身为可能引起肿瘤的肿瘤基因(oncogene)(Haupt,Y.et al.,Oncogene,8；3161-3164,1993；Bruggeman,S.W.et al.Cancer cell 12；328-341 2007)，因此在将用Bmi-1和hTERT(telemorase catalytic subunit)处理的间质干细胞用作细胞治疗剂时，无法排除形成肿瘤的可能性。并且，在培养中处理FGF-2的方法需要在培养时持续地使用相对高价的FGF-2，因此会使成本上升，并且相比于由于FGF-2抑制老化，只是会期待临时性的细胞生长增大的效果，因此抑制老化方面存在限制。

并且，以往尝试了将多样的生体干细胞治疗剂用于治疗疾病，但是由于炎症性干细胞的老化，移植后干细胞的生存率存在问题，因此存在难以确保干细胞治疗效果的限制。

为了解决上述问题，在开发能够促进干细胞的增殖、分化并抑制老化而进一步增加治疗效果的利用干细胞的细胞治疗剂的过程中，确认了抑制JAK1的表达或活性的干细胞可以用作用于免疫疾病的优秀的细胞治疗剂，从而完成了本发明。

发明内容

技术问题

因此，本发明的目的在于提供一种用于干细胞的增殖、分化促进以及老化抑制的组成物。

并且，本发明的另一目的在于提供如下的促进干细胞的增殖及分化的方法，包括如下步骤：在干细胞中抑制JAK1(Janus kinase 1)的表达或活性。

并且，本发明的另一目的在于提供如下的抑制干细胞的老化的方法，包括如下步骤：在干细胞中处理JAK1(Janus kinase 1)抑制剂或敲除(knock-out)JAK1(Janus kinase1)。

并且，本发明的另一目的在于提供如下的细胞治疗用干细胞的制造方法包括如下步骤：在用于细胞移植的干细胞中处理JAK1(Janus kinase 1)抑制剂或敲除JAK1(Januskinase 1)。

并且，本发明的另一目的在于提供被处理所述JAK1抑制剂而使JAK1的表达或活性被抑制的干细胞或JAK1被敲除的干细胞，。

进而，本发明的另一目的在于提供如下的用于免疫疾病的预防或治疗的细胞治疗剂组成物，将抑制JA1K(Janus kinase 1)的表达或活性的干细胞作为有效成分而包含。

并且，本发明的另一目的在于提供包含JAK1抑制剂及干细胞的用于治疗免疫疾病的试剂或组成物。

并且，本发明的另一目的在于提供一种将JAK1抑制剂及干细胞向个体给药而治疗免疫疾病的方法。

技术方案

为了实现上述目的，本发明提供一种将JAK1(Janus kinase 1)抑制剂作为有效成分而包含的用于干细胞的增殖、分化促进或老化抑制的组成物。

在本发明的一实施例中，所述JAK1抑制剂可以选自由托法替尼、巴瑞克替尼、芦可替尼及Filgotinib组成的群中。

在本发明的一实施例中，所述JAK1抑制剂可以使作为免疫原性相关蛋白质的HLA-A或HLA-B的表达被抑制或减少，并使作为抑制T细胞活性的蛋白质的TGF-b或HGF的表达被促进或增加。

在本发明的一实施例中，所述JAK1抑制剂可以减少干细胞的老化，并增加干细胞的生存率。

并且，本发明提供如下促进干细胞的增殖及分化的方法，包括如下步骤：在干细胞中抑制JAK1的表达或活性。

在本发明的一实施例中，在抑制所述JAK1的表达或活性的步骤中，可以执行处理JAK1抑制剂或敲除干细胞内的JAK1基因的方法。

在本发明的一实施例中，所述JAK1抑制剂选自由托法替尼、巴瑞克替尼、芦可替尼及Filgotinib组成的群中。

并且，本发明提供如下的抑制干细胞的老化的方法，包括如下步骤：在干细胞中处理JAK1抑制剂或敲除JAK1。

并且，本发明的一实施例中，所述JAK1抑制剂可以选自托法替尼、巴瑞克替尼、芦可替尼及Filgotinib中。

并且，本发明中，敲除JAK1的方法可以利用CRISPR-Cas9基因剪刀系统，但不限于此。

并且，本发明提供一种在用于细胞移植的干细胞中处理JAK1(Janus kinase 1)抑制剂或敲除JAK1(Janus kinase 1)而具有下述特征的细胞治疗用干细胞的制造方法。

(a)减少干细胞的炎症性细胞老化；

(b)抑制干细胞的细胞生存率减少；

(c)增加干细胞的细胞增殖；

(d)增加干细胞的干细胞性(stemness)；

(e)减少干细胞的免疫原性；以及

(f)增加干细胞的免疫调节能力。

进而，本发明提供一种将通过上述的本发明的方法制造的干细胞作为有效成分包含的用于免疫疾病的预防或治疗的细胞治疗剂组成物。

本发明的一实施例中，所述免疫疾病可以从由移植物抗宿主病、自身免疫性疾病、类风湿性关节炎、狼疮病、白塞病及干燥综合症组成的群中选择。

并且，本发明提供一种包含JAK1抑制剂及干细胞的用于治疗免疫疾病的试剂或组成物。

并且，本发明提供一种将JAK1抑制剂及干细胞向个体给药而预防或治疗免疫疾病的方法。

有益效果

本发明的处理JAK1抑制剂的干细胞或敲除JAK1的干细胞具有减少老化并增加干细胞的生存率的活性，因此具有能够作为用于干细胞的增殖、分化促进及老化抑制的组成物而使用的效果。并且，敲除JAK1的干细胞具有如下活性：将作为免疫原性相关蛋白质的HLA-A或HLA-B的表达抑制或减少，并将作为抑制T细胞活性的蛋白质的TGF-b或HGF的表达促进或增加，因此在免疫疾病的预防或治疗可以有用地使用。

附图说明

图1是确认借助作为JAK1抑制剂的托法替尼处理的干细胞的炎症性老化抵抗性的结果。

图2是确认借助作为JAK1抑制剂的芦可替尼或Filgotinib处理的干细胞的炎症性老化抵抗性的结果。

图3是在JAK1敲除干细胞中确认炎症性老化抵抗性的结果。

最优实施方式

本发明提供一种将JAK1(Janus kinase 1)抑制剂作为有效成分包含的用于干细胞的增殖、分化促进或老化抑制的组成物。

JAK1(Janus kinase 1)基因具有以序列号1记载的核酸序列，所述JAK1蛋白质优选具有以序列号2记载的氨基酸序列，但不限于此。

在本发明中，JAK1(Janus kinase 1)抑制剂可以是从与JAK1基因的mRNA互补地结合的反义核苷酸、sgRNA(单导；single guide)、shRNA(短发夹RNA；small hairpin RNA)、siRNA(小干扰RNA；small interfering RNA)及核酶(ribozyme)构成的群中选择的一个以上，优选利用序列号为3的sgRNA抑制JAK1基因的表达的JAK1抑制剂。

并且，本发明的技术特征在于，在将JAK1敲除(knock-out)或进行JAK1抑制剂处理后的干细胞中具有促进干细胞的增殖、分化，并且抑制老化的效果。

更为具体地，为了确认随着作为JAK1抑制剂的托法替尼处理或JAK1敲除是否存在干细胞老化减少效果，利用作为代表性的细胞老化测量技术的SA-b-gal染色进行确认的结果为，在干细胞中借助poly IC诱导的炎症性细胞老化由于托法替尼处理或JAK1的敲除而明显减少了(参照图1A至图3A)。

根据本发明的一实施例，为了确认随着作为JAK1抑制剂的托法替尼处理或JAK1的敲除引起的移植以后干细胞的生存率减少的抑制效果，利用BrdU实验(BrdU assay)观察的结果为，在干细胞中利用poly IC诱导的细胞老化所引起的细胞生存率由于托法替尼处理或JAK1的敲除而减少的程度减小了(参照图1B及图3B)。

根据本发明的另一实施例，利用免疫印迹确认随着作为JAK1抑制剂的托法替尼、芦可替尼、Filgotinib处理或JAK1的敲除引起的、与干细胞的增殖、分化促进相关的蛋白质以及与干细胞性增加相关的蛋白质的表达的结果为，随着炎症性老化，伴随TLR3信号转导(signaling)相关的TLR3、IL6的增加，与老化(PCNA)、干细胞性(EZH2,BMI-1)、增殖(survivin,CyclinD1)相关的蛋白质表达的减少由于托法替尼、芦可替尼、Filgotinib处理、JAK1的敲除而减少的程度减小了(参照图1C、图2及图3C)。

根据本发明的另一实施例，利用实时定量荧光PCR确认随着作为JAK1抑制剂的托法替尼处理或JAK1的敲除引起的，与干细胞的增殖、分化促进相关的蛋白质以及与干细胞性增加相关的蛋白质的表达的结果为，随着炎症性老化，伴随TLR3信号转导(signaling)相关的TLR3、IL6的增加，与老化(PCNA)、干细胞性(EZH2,BMI-1)、增殖(survivin,CyclinD1)相关的蛋白质及mRNA的表达的减少由于托法替尼预处理或JAK1的敲除而减少的程度减小了(参照图1D)。

因此，本发明提供一种将JAK1(Janus kinase 1)抑制剂作为有效成分而包含的用于干细胞的增殖、分化促进或老化抑制的组成物。

本发明的‘干细胞’只要具有多分化性质就不受限，并且可以来自包含人类的哺乳动物，优选为来自由人类的公知的所有组织、细胞等生体细胞产生，例如，可以来自骨髓、脐带血、胎盘(或胎盘组织细胞)、脂肪(或脂肪组织细胞)等。优选地，所述干细胞可以是来自人类的骨髓、胎盘或脐带血的间质干细胞。

并且，本发明的JAK1(Janus kinase 1)抑制剂可以从由托法替尼(tofacitinib)、巴瑞克替尼(baricitinib)、芦可替尼(ruxolitinib)及Filgotinib组成的群中选择，虽然不限于此，但优选使用托法替尼、芦可替尼及Filgotinib。

本说明书中，“干细胞的老化”表示间质干细胞对抗从内部或外部接收的多种应力(例如，连续的继代培养及体外培养时的高浓度的氧气条件等)，而使细胞生长(cellgrowth)被停止或显著地变慢的现象，并包括与间质干细胞的端粒缩短(telomereshortening)无关的细胞生长停止或延迟。

并且，本发明提供一种包括抑制干细胞中JAK1(Janus kinase 1)的表达或活性的步骤的用于促进干细胞的增殖及分化的方法。

提供如下的抑制干细胞的老化的方法，根据上述本发明的促进干细胞的增殖及分化的方法包括在干细胞中处理JAK1(Janus kinase 1)抑制剂或敲除(knock-out)JAK1(Janus kinase 1)的步骤。

本发明提供一种包括在干细胞中处理JAK1(Janus kinase 1)抑制剂或敲除(knock-out)JAK1(Janus kinase 1)的步骤的抑制干细胞的老化的方法。

提供如下的抑制干细胞的老化的方法，根据上述本发明的抑制干细胞的老化的方法包括在干细胞中处理JAK1(Janus kinase 1)抑制剂或敲除(knock-out)JAK1(Januskinase 1)的步骤。

并且，本发明提供一种在用于细胞移植的干细胞中处理JAK1(Janus kinase 1)抑制剂或敲除(knock-out)JAK1(Janus kinase 1)而具有下述特征的细胞治疗用干细胞的制造方法。

(a)减少干细胞的炎症性细胞老化；

(b)抑制干细胞的细胞生存率减少；

(c)增加干细胞的细胞增殖；

(d)增加干细胞的干细胞性(stemness)；

(e)减少干细胞的免疫原性；以及

(f)增加干细胞的免疫调节能力。

并且，本发明中，为了在经过作为JAK1抑制剂的托法替尼处理或JAK1被敲除的干细胞中确认作为免疫原性相关蛋白质的HLA-A、HLA-B表达程度而执行FACS分析和定时定量荧光PCR并确认的结果为，作为免疫原性相关蛋白质的HLA-A、HLA-B随着poly IC处理而增加，并且这种增加由于托法替尼预处理或JAK1的敲除而增加的程度减小了(参照图1E及图3E)。

本发明的另一实施例中，为了在经过作为JAK1抑制剂的托法替尼处理或JAK1被敲除的干细胞中确认作为抑制T细胞活性的蛋白质的TGF-b、HGF表达程度而执行定时定量荧光PCR并确认的结果为，作为抑制T细胞活性的蛋白质的TGF-b、HGF随着poly IC处理而减少，并且这种减少由于托法替尼预处理或JAK1的敲除而减少的程度减小了(参照图1E及图3E)。

因此，通过上述结果可以确认，在JAK1被敲除的干细胞中，具有减少干细胞的免疫原性并增加免疫调节能力的效果。

因此，本发明的JAK1(Janus kinase 1)抑制剂被处理或被敲除(knock-out)的干细胞可以作为免疫疾病的预防或治疗用细胞治疗剂组成物而有用地使用。

并且，可以将本发明的JAK1抑制剂及干细胞同时给药于具有疾病的个体，并且所述干细胞可以是没有预处理JAK1抑制剂或未敲除JAK1的干细胞。

因此，本发明可以提供一种包括JAK1抑制剂以及干细胞的用于免疫疾病的预防或治疗的细胞治疗剂试剂或组成物。

本发明中，所述“免疫疾病”不限于此，但可以从由移植物抗宿主病、自身免疫性疾病、类风湿性关节炎、狼疮病、白塞病及干燥综合症组成的群中选择。

本发明的细胞治疗剂组成物的给药途径可以在能够到达目标组织的情况下通过任何普通的途径而给药。可以是非口服给药，例如腹腔内给药、静脉内给药、肌肉内给药、皮下给药、皮内给药，但不限于此。

所述组成物可以与细胞治疗中通常使用的药剂学载体一同以合适的形态制剂化。“药理学上可接受”表示在生理学上可接受并且向人类给药时，通常不产生胃肠障碍、眩晕等过敏反应或者与此类似的反应的组成物。药理学上可接受载体例如有水、适宜的油、食盐水、水性葡萄糖及乙二醇等非经口给药用载体等，并且还可以包括稳定剂及保存剂。适宜的稳定剂有亚硫酸氢钠、亚硫酸钠或抗坏血酸等抗氧化剂。适宜的保存剂有苯扎氯铵、对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯和氯丁醇。除此之外的药理学上可接受的载体可以参照以下文献中记载的内容(Remington's Pharmaceutical Sciences,19th ed.,MackPublishing Company,Easton,PA,1995)。

本发明的细胞治疗剂组成物可以为了疾病的治疗而包括治疗学上有效量的细胞治疗剂。

术语“治疗学上有效量(therapeutically effective amount)”表示由研究人员、兽医师、医师或其他临床上考虑到的在组织系统、动物或人类中诱导生物学或医学反应的有效成分或药学组成物的量，其表示诱导治疗的疾病或障碍的症状缓和的量。本发明的组成物中包含的细胞治疗剂根据所期望的效果而变化，这对于本领域的人员是明显的。因此，最优的细胞治疗剂含量可以由本领域从业人员容易地确定，并且可以根据疾病的种类、疾病的严重程度、组成物中含有的其他成分的含量、剂型的种类及患者的年龄、体重、普通健康状态、性别及饮食、给药时间、给药路径及组成物的分配率、治疗期间、同时使用的药物等多种因素调节。可以将上述要素全部考虑而包含没有副作用并以最小的量得到最大效果的量。例如，在本发明的组成物中，可以包含1×10⁴cell/kg至1×10⁸cell/kg的细胞治疗剂。

本发明还提供一种将用于制造免疫疾病的预防或治疗用药的细胞治疗剂作为有效成分而包含的组成物的用途。将所述细胞治疗剂作为有效成分而包含的本发明的组成物可以作为用于免疫疾病的预防或治疗用药品的制造的用途而使用。

并且，本发明提供一种包括将治疗学上有效量的细胞治疗剂对哺乳动物给药的步骤的免疫疾病的预防或治疗方法。并且，作为细胞治疗剂可以单独使用处理了JAK1抑制剂的干细胞或者敲除JAK1的干细胞，并且可以将干细胞与JAK1抑制剂一同同时给药。

在此使用的术语“哺乳动物”表示作为治疗、观察或实验对象的哺乳动物，优选表示人。

在本发明的治疗方法中，对于成人而言，在将本发明的细胞治疗剂组成物以1日1次乃至多次给药时，组成物中包含的细胞治疗剂的量优选为1×10⁴cell/kg至1×10⁸cell/kg。

在本发明的治疗方法中，将本发明的细胞治疗剂作为有效成分而包含的组成物可以通过直肠、静脉内、动脉内、腹腔内、肌肉内、胸骨内、经皮、局部、眼球内或皮内途径而以普通的方式给药。

具体实施方式

以下，通过实施例对本发明进行详细说明。但是，这些实施例是用于对本发明进行更具体的说明的，并且本发明的范围不限于这些实施例。

<实施例1>

确认随着作为JAK1抑制剂的托法替尼处理的对于炎症性老化的抵抗性

<1-1>确认随着托法替尼处理的干细胞老化减少

本发明人为了确认是否存在随着托法替尼处理引起的干细胞老化减少效果，利用作为代表性细胞老化测量技术的SA-b-gal染色进行了确认。

更为具体地，将干细胞接种(plating)在6孔板(2X 10⁴cell/well)后，1天后用poly IC(1ug/ml)进行了处理。托法替尼(1ug/ml)在poly IC处理的2小时之前进行了预处理。在poly IC处理2天后，利用衰老细胞组织化学染色试剂(senescence cellshistochemical staining kit；CS0030,Sigma)测量了老化程度。为此，首先用磷酸盐缓冲液(PBS)清洗2次后，用固定缓冲剂(fixation buffer；2％甲醛，0.2％戊二醛，7.04mMNa₂HPO₄，1.47mM KH₂PO₄,0.137M NaCl，以及2.68mM KCl)固定6分钟，然后用染色缓冲剂(6mM铁氰化钾，6mM亚铁氰化钾，1mg/ml磷酸盐缓冲剂中的X-gal溶液(pH6))在37℃下反应了24小时。通过显微镜观察而测量b-半乳糖苷酶-阳性细胞数量，用图表表示了细胞老化程度。

其结果，如图1A所示，在干细胞中被poly IC诱导的炎症性细胞老化由于托法替尼预处理而明显减少。

<1-2>确认随着托法替尼处理引起的移植后干细胞的生存率减少的抑制

发明人为了确认随着托法替尼处理引起的移植后干细胞的生存率减少的抑制效果而利用BrdU实验进行了观察。

更为具体地，将细胞接种(plating)在96孔板(1X 10³cell/well)后，1天后用polyIC(1ug/ml)进行了处理。托法替尼(1ug/ml)在poly IC处理的2小时之前进行了预处理。在poly IC处理2天后，利用BrdU cell proliferation ELISA(11647229001，Roche)测量了细胞生存率。为此，首先将BrdU标记溶液进行10ul/孔(well)处理而在37℃下反应了4小时。此后，将固定缓冲剂200ul/孔(well)处理30分钟而固定细胞，然后使anti BrdU-POD溶液100ul/well反应90分钟。此后，用基质溶液(substrate solution)100ul处理后，用酶联免疫吸附测定(ELISA)而测量了370nm的波长下的OD值，并用图表表示了细胞生存率。

其结果，如图1B所示，可以确认，干细胞中利用poly IC诱导的细胞老化引起的细胞生存率由于托法替尼预处理而减少的程度减小了。

<1-3>利用免疫印迹确认随着托法替尼处理引起的与干细胞增殖、分化促进相关的蛋白质及与干细胞性增加相关的蛋白质的表达

发明人利用免疫印迹确认了随着托法替尼处理引起的与干细胞增殖、分化促进相关的蛋白质及与干细胞性增加相关的蛋白质的表达。

更为具体地，将干细胞接种(plating)到10cm皿(3X 10⁵cell/皿)后，1天后用polyIC(1ug/ml)进行了处理。托法替尼(1ug/ml)在poly IC处理的2小时之前进行了预处理。在poly IC处理2天后，为了蛋白质表达分析而执行了免疫印迹。

为此，在细胞处理RIPA裂解缓冲剂(1％Np-40,0.5％脱氧胆酸钠，0.4％SDS，0.15MNacl，0.05M Tris-HCl(pH8)，Halt蛋白酶及磷酸酶抑制剂Cocktail(78440,ThermoScientific))处理而在冰中反应30分钟而提取(extraction)了细胞。将该细胞破碎液离心分离，然后仅收集上澄液而利用二喹啉甲酸蛋白质分析试剂(bicinchoninic acidprotein assay kit；23225，Thermo Scientific)进行了定量。将蛋白质提取液10ug用12％SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)分离后，转移(transfer)到了硝酸纤维膜(nitrocellulose membrane)。用封闭缓冲剂(blocking buffer)(0.1％Tween 20，tris盐缓冲溶液中的5％BSA)在RT反应1小时后，用一次抗体处理而在4度下连夜反应。使用的一次抗体为TLR3(#6961,Cell Signaling)、phospho-stat1(#7649,Cell signaling)、IL-6(ab6672,abcam)、p16(ab51243,abcam)、PCNA(610665,BD Bioscience)、EZH2(ab3748,abcam)、BMI1(39993,Active Motif)、cyclinD1(abcam,ab134175)、survivin(GTX100052,Genetex)及b-actin(A5441,Sigma)。用TBST溶液清洗3次后，使过氧化物酶标记的2次抗体在RT反应1小时，然后利用C-DiGit Blot Scanner(LI-COR)分析了蛋白质带。

其结果，可以确认随着炎症性老化，伴随TLR3信号转导相关TLR3、IL6的增加而使老化(PCNA)、干细胞性(EZH2，BMI-1)、增殖(survivin，CyclinD1)相关蛋白质及mRNA表达减少由于托法替尼预处理而减少的程度减小(参照图1C)。

<1-4>利用实时定量荧光PCR确认随着托法替尼处理引起的与干细胞增殖、分化促进相关的蛋白质及与干细胞性增加相关的蛋白质的表达

本发明人利用实时定量荧光PCR确认了随着托法替尼处理引起的与干细胞增殖、分化促进相关的蛋白质及与干细胞性增加相关的蛋白质的表达。

为此，首先在细胞中处理TRIzol试剂而溶解(lysis)了细胞，并用氯仿(chloroform)处理而分离了存在RNA的水溶液层。在分离的水溶液侧处理异丙醇(Isopropanol)而使RNA沉淀，然后进行离心分离而仅提取了RNA。将提取的RNA用nanodrop进行了定量。将2ug的RNA使用TOPscript cDNA合成试剂(RT200，Enzynomics)而合成为cDNAmixture后，用作用于实时定量荧光PCR的模板(template)。实时定量荧光PCR利用CFXConnect实时定量荧光PCR检测系统(Bio-rad)，并且使用的引物示于表1。利用比较阀值循环(2^-Ct)方法(comparative threshold cycles(2^-Ct)method)分析了相对的mRNA表达量。

[表1]本发明中使用的引物序列

根据如上所述的分析结果，可以确认随着炎症性老化，伴随着TLR3信号转导相关TRL3、IL6的增加而使老化(PCNA)、干细胞性(EZH2，BMI-1)、增殖(survivin，CyclinD1)相关蛋白质及mRNA的表达减少由于托法替尼预处理而减少的程度减小了(参照图1D)。

<1-5>确认随着托法替尼处理引起的免疫原性减少

本发明人为了确认随着托法替尼处理引起的作为免疫原性相关蛋白质的HLA-A、HLA-B表达程度，执行FACS分析和定时定量荧光PCR而进行了确认。

更为具体地，在干细胞中处理胰蛋白酶(trypsisn/EDTA)而分离为单细胞，并使Mouse Anti-Human HLA-ABC(555553,BD Biosciences)在RT反应1小时，然后洗涤3次，然后利用FACS calibur仪器(BD Biosciences)进行了分析。

其结果，可以确认，作为免疫原性相关蛋白质的HLA-A、HLA-B随着poly IC处理而增加，这种增加由于托法替尼预处理而增加的程度减小了(参照图1E)。

<1-6>确认随着托法替尼处理引起的免疫调节能力的增加

本发明人为了确认随着托法替尼处理引起的作为抑制T细胞活性的蛋白质的TGF-b、HGF表达程度而执行实时定量荧光PCR并进行了确认。

实时定量荧光PCR的具体实验方法如上述实施例。

其结果，可以确认，作为抑制T细胞活性的蛋白质的TGF-b、HGF由于在poly IC处理而减少，并且这种减少由于托法替尼预处理而减少的程度减小了(参照图1E)。

<1-7>利用免疫印迹确认随着芦可替尼或Filgotinib处理引起的与干细胞增殖、分化促进相关的蛋白质及与干细胞性增加相关的蛋白质的表达

用作为JAK1抑制剂的芦可替尼或Filgotinib(GLPG0634)而以与实施例1-3相同的方法利用免疫印迹确认了与干细胞增殖、分化促进相关的蛋白质及与干细胞性增加相关的蛋白质的表达

将该结果示于图2，其结果，与TLR3信号转导相关的TLR3及IL6随着炎症性老化而增加，由于所述JAK1抑制剂的处理，与干细胞性相关的EZH2、BMI-1、与增殖相关的Survivin及Cyclin D1蛋白质表达减少的程度减小了。

<实施例2>

在JAK1敲除的干细胞中确认炎症性老化抵抗性

<2-1>确认随着JAK1敲除引起的干细胞老化减少

本发明人为了制作JAK1敲除细胞而在plentiCRISPRv2载体克隆JAK1 gide RNA序列。此后，为了包装为慢病毒(lentivirus)，而将plentiCRISPR-JAK1、pMD2.G以及psPAX2质粒转染(transfection)到293T细胞。在转染3天后，将包含病毒的培养液处理于干细胞，感染(infection)了plentiCRISPR-JAK1 lentivirus。利用存在于plentiCRISPRv2载体的嘌呤霉素(puromycin)抵抗性基因而将嘌呤霉素选择(puromycin selection)执行2天，然后仅将存活的细胞培养。利用免疫印迹、测序确认了JAK1基因敲除(免疫印迹-参照图3C)。

为了确认由于借助如上所述地制作的JAK1敲除细胞而是否具有干细胞老化减少效果，利用作为代表性的细胞老化测定技术的SA-b-gal染色而进行了确认。具体的SA-b-gal染色方法如同所述实施例<1-1>的方法。

其结果，可以确认在干细胞中借助poly IC诱导的炎症性细胞老化由于JAK1敲除而明显减少(参照图3A)。

<2-2>确认随着JAK1敲除引起的移植后干细胞的生存率减少的抑制

本发明人为了确认随着JAK1敲除细胞处理的移植后干细胞的生存率减少的抑制效果，利用BrdU实验进行了观察，具体的BrdU实验方法如同上述实施例<1-2>的方法。

其结果，如图3B所示，在干细胞中用poly IC诱导的由细胞老化引起的细胞生存率由于JAK1敲除而减少的程度减小。

<2-3>利用免疫印迹确认随着JAK1敲除引起的与干细胞增殖、分化促进相关的蛋白质及与干细胞性增加相关的蛋白质的表达

本发明人利用免疫印迹确认了随着JAK1敲除细胞处理引起的与干细胞增殖、分化促进相关的蛋白质及与干细胞性增加相关的蛋白质的表达，且具体的免疫印迹方法如同上述实施例<1-3>的方法。

其结果，可以确认，随着炎症性老化，伴随TLR3信号转导相关TLR3、IL6的增加，使老化(PCNA)、干细胞性(EZH2，BMI-1)、增殖(survivin，CyclinD1)相关蛋白质及mRNA表达减少由于JAK1敲除而减少的程度减小(参照图3C)。

<2-4>利用实时定量荧光PCR确认随着JAK1敲除引起的与干细胞增殖、分化促进相关的蛋白质及与干细胞性增加相关的蛋白质的表达

本发明人利用实时定量荧光PCR确认了随着JAK1敲除细胞处理引起的与干细胞增殖、分化促进相关的蛋白质及与干细胞性增加相关的蛋白质的表达，且具体的实时定量荧光PCR方法如同上述实施例<1-4>的方法。

如上所述的分析结果，可以确认，随着炎症性老化，伴随TLR3信号转导相关TLR3、IL6的增加，使老化(PCNA)、干细胞性(EZH2，BMI-1)、增殖(survivin，CyclinD1)相关蛋白质及mRNA表达减少由于JAK1敲除而减少的程度减小(参照图3D)。

<2-5>确认随着JAK1敲除引起的免疫原性减少

本发明人为了确认随着JAK1敲除细胞处理的作为免疫原性相关蛋白质的HLA-A、HLA-B表达程度，执行FACS分析和定时定量荧光PCR而进行了确认，且具体的实验方法如同上述实施例<1-5>的方法。

其结果，可以确认，作为免疫原性相关蛋白质的HLA-A、HLA-B随着poly IC处理而增加，这种增加由于JAK1敲除而增加的程度减小(参照图1E)。

<2-6>确认随着JAK1敲除引起的免疫调节能力的增加

本发明人为了确认随着JAK1敲除细胞处理引起的作为抑制T细胞活性的蛋白质的TGF-b、HGF表达程度而执行实时定量荧光PCR而进行确认，且具体的实验方法如同上述实施例<1-6>。

其结果，可以确认，作为抑制T细胞活性的蛋白质的TGF-b、HGF由于在poly IC处理而减少，并且这种减少由于JAK1敲除而减少的程度减小(参照图3E)。

以上，以优选实施例为中心对本发明进行了说明。

应当理解，在本发明所属技术领域中具有基本知识的人员可以在不脱离本发明的本质特性的范围内以变形的形态实现。因此，公开的实施例应以说明性的观点进行考虑而不是以限定性的观点进行考虑。本发明的范围由权利要求书表示而非上述说明，与此相同的范围内的所有差异应被解释为被包含于本发明。

序列表

<110> 蔚山大学校产学协力团

<120> 将JAK1抑制剂作为有效成分包含的用于干细胞的增殖、分化促进或老化抑制的组成物

<130> PN1601-001

<160> 3

<170> PatentIn version 3.2

<210> 1

<211> 3426

<212> DNA

<213> JAK1 cDNA序列

<400> 1

atggctttct gtgctaaaat gaggagctcc aagaagactg aggtgaacct ggaggcccct 60

gagccagggg tggaagtgat cttctatctg tcggacaggg agcccctccg gctgggcagt 120

ggagagtaca cagcagagga actgtgcatc agggctgcac aggcatgccg tatctctcct 180

ctttgtcaca acctctttgc cctgtatgac gagaacacca agctctggta tgctccaaat 240

cgcaccatca ccgttgatga caagatgtcc ctccggctcc actaccggat gaggttctat 300

ttcaccaatt ggcatggaac caacgacaat gagcagtcag tgtggcgtca ttctccaaag 360

aagcagaaaa atggctacga gaaaaaaaag attccagatg caacccctct ccttgatgcc 420

agctcactgg agtatctgtt tgctcaggga cagtatgatt tggtgaaatg cctggctcct 480

attcgagacc ccaagaccga gcaggatgga catgatattg agaacgagtg tctagggatg 540

gctgtcctgg ccatctcaca ctatgccatg atgaagaaga tgcagttgcc agaactgccc 600

aaggacatca gctacaagcg atatattcca gaaacattga ataagtccat cagacagagg 660

aaccttctca ccaggatgcg gataaataat gttttcaagg atttcctaaa ggaatttaac 720

aacaagacca tttgtgacag cagcgtgtcc acgcatgacc tgaaggtgaa atacttggct 780

accttggaaa ctttgacaaa acattacggt gctgaaatat ttgagacttc catgttactg 840

atttcatcag aaaatgagat gaattggttt cattcgaatg acggtggaaa cgttctctac 900

tacgaagtga tggtgactgg gaatcttgga atccagtgga ggcataaacc aaatgttgtt 960

tctgttgaaa aggaaaaaaa taaactgaag cggaaaaaac tggaaaataa acacaagaag 1020

gatgaggaga aaaacaagat ccgggaagag tggaacaatt tttcttactt ccctgaaatc 1080

actcacattg taataaagga gtctgtggtc agcattaaca agcaggacaa caagaaaatg 1140

gaactgaagc tctcttccca cgaggaggcc ttgtcctttg tgtccctggt agatggctac 1200

ttccggctca cagcagatgc ccatcattac ctctgcaccg acgtggcccc cccgttgatc 1260

gtccacaaca tacagaatgg ctgtcatggt ccaatctgta cagaatacgc catcaataaa 1320

ttgcggcaag aaggaagcga ggaggggatg tccgtgctga ggtggagctg caccgacttt 1380

gacaacatcc tcatgaccgt cacctgcttt gagaagtctg agcaggtgca gggtgcccag 1440

aagcagttca agaactttca gatcgaggtg cagaagggcc gctacagtct gcacggttcg 1500

gaccgcagct tccccagctt gggagacctc atgagccacc tcaagaagca gatcctgcgc 1560

acggataaca tcagcttcat gctaaaacgc tgctgccagc ccaagccccg agaaatctcc 1620

aacctgctgg tggctactaa gaaagcccag gagtggcagc ccgtctaccc catgagccag 1680

ctgagtttcg atcggatcct caagaaggat ctggtgcagg gcgagcacct tgggagaggc 1740

acgagaacac acatctattc tgggaccctg atggattaca aggatgacga aggaacttct 1800

gaagagaaga agataaaagt gatcctcaaa gtcttagacc ccagccacag ggatatttcc 1860

ctggccttct tcgaggcagc cagcatgatt agacaggtct cccacaaaca catcgtgtac 1920

ctctatggcg tctgtgtccg cgacgtggag aatatcatgg tggaagagtt tgtggaaggg 1980

ggtcctctgg atctcttcat gcaccggaaa agcgatgtcc ttaccacacc atggaaattc 2040

aaagttgcca aacagctggc cagtgccctg agctacttgg aggataaaga cctggtccat 2100

ggaaatgtgt gtactaaaaa cctcctcctg gcccgtgagg gaatcgacag tgagtgtggc 2160

ccattcatca agctcagtga ccccggcatc cccattacgg tgctgtctag gcaagaatgc 2220

attgaacgaa tcccatggat tgctcctgag tgtgttgagg actccaagaa cctgtgtgtg 2280

gctgctgaca agtggagctt tggaaccacg ctctgggaaa tctgctacaa tggcgagatc 2340

cccttgaaag acaagacgct gattgagaaa gagagattct atgaaagccg gtgcaggcca 2400

gtgacaccat catgtaagga gctggctgac ctcatgaccc gctgcatgaa ctatgacccc 2460

aatcagaggc ctttcttccg agccatcatg agagacatta ataagcttga agagcagaat 2520

ccagatattg tttcagaaaa aaaaccagca actgaagtgg accccacaca ttttgaaaag 2580

cgcttcctaa agaggatccg tgacttggaa gagggacact ttgggaaggt tgagctctgc 2640

aggtatgacc ccgaagacaa tacaggggag caggtggctg ttaaatctct gaagcctgag 2700

agtggaggta accacatagc tgatctgaaa aaggaaatcg agatcttaag gaacctctat 2760

catgagaaca ttgtgaagta caaaggaatc tgcacagaag acggaggaaa tggtattaag 2820

ctcatcatgg aatttctgcc ttcgggaagc cttaaggaat atcttccaaa gaataagaac 2880

aaaataaacc tcaaacagca gctaaaatat gccgttcaga tttgtaaggg gatggactat 2940

ttgggttctc ggcaatacgt tcaccgggac ttggcagcaa gaaatgtcct tgttgagagt 3000

gaacaccaag tgaaaattgg agacttcggt ttaaccaaag caattgagac cgataaggag 3060

tattacaccg tcaaggatga ccgggacagc ccaaagtttg ggtatgctcc agaatgttta 3120

atgcaatcta aattttatat tgcctctgac gtctggtctt ttggagtcac tctgcatgag 3180

ctgctgactt actgtgattc agattctagt cccatggctt tgttcctgaa aatgataggc 3240

ccaacccatg gccagatgac agtcacaaga cttgtgaata cgttaaaaga aggaaaacgc 3300

ctgccgtgcc cacctaactg tccagatgag gtttatcagc ttatgagaaa atgctgggaa 3360

ttccaaccat ccaatcggac aagctttcag aaccttattg aaggatttga agcactttta 3420

aaataa 3426

<210> 2

<211> 1141

<212> PRT

<213> JAK1氨基酸序列

<400> 2

Met Ala Phe Cys Ala Lys Met Arg Ser Ser Lys Lys Thr Glu Val Asn

1 5 10 15

Leu Glu Ala Pro Glu Pro Gly Val Glu Val Ile Phe Tyr Leu Ser Asp

20 25 30

Arg Glu Pro Leu Arg Leu Gly Ser Gly Glu Tyr Thr Ala Glu Glu Leu

35 40 45

Cys Ile Arg Ala Ala Gln Ala Cys Arg Ile Ser Pro Leu Cys His Asn

50 55 60

Leu Phe Ala Leu Tyr Asp Glu Asn Thr Lys Leu Trp Tyr Ala Pro Asn

65 70 75 80

Arg Thr Ile Thr Val Asp Asp Lys Met Ser Leu Arg Leu His Tyr Arg

85 90 95

Met Arg Phe Tyr Phe Thr Asn Trp His Gly Thr Asn Asp Asn Glu Gln

100 105 110

Ser Val Trp Arg His Ser Pro Lys Lys Gln Lys Asn Gly Tyr Glu Lys

115 120 125

Lys Lys Ile Pro Asp Ala Thr Pro Leu Leu Asp Ala Ser Ser Leu Glu

130 135 140

Tyr Leu Phe Ala Gln Gly Gln Tyr Asp Leu Val Lys Cys Leu Ala Pro

145 150 155 160

Ile Arg Asp Pro Lys Thr Glu Gln Asp Gly His Asp Ile Glu Asn Glu

165 170 175

Cys Leu Gly Met Ala Val Leu Ala Ile Ser His Tyr Ala Met Met Lys

180 185 190

Lys Met Gln Leu Pro Glu Leu Pro Lys Asp Ile Ser Tyr Lys Arg Tyr

195 200 205

Ile Pro Glu Thr Leu Asn Lys Ser Ile Arg Gln Arg Asn Leu Leu Thr

210 215 220

Arg Met Arg Ile Asn Asn Val Phe Lys Asp Phe Leu Lys Glu Phe Asn

225 230 235 240

Asn Lys Thr Ile Cys Asp Ser Ser Val Ser Thr His Asp Leu Lys Val

245 250 255

Lys Tyr Leu Ala Thr Leu Glu Thr Leu Thr Lys His Tyr Gly Ala Glu

260 265 270

Ile Phe Glu Thr Ser Met Leu Leu Ile Ser Ser Glu Asn Glu Met Asn

275 280 285

Trp Phe His Ser Asn Asp Gly Gly Asn Val Leu Tyr Tyr Glu Val Met

290 295 300

Val Thr Gly Asn Leu Gly Ile Gln Trp Arg His Lys Pro Asn Val Val

305 310 315 320

Ser Val Glu Lys Glu Lys Asn Lys Leu Lys Arg Lys Lys Leu Glu Asn

325 330 335

Lys His Lys Lys Asp Glu Glu Lys Asn Lys Ile Arg Glu Glu Trp Asn

340 345 350

Asn Phe Ser Tyr Phe Pro Glu Ile Thr His Ile Val Ile Lys Glu Ser

355 360 365

Val Val Ser Ile Asn Lys Gln Asp Asn Lys Lys Met Glu Leu Lys Leu

370 375 380

Ser Ser His Glu Glu Ala Leu Ser Phe Val Ser Leu Val Asp Gly Tyr

385 390 395 400

Phe Arg Leu Thr Ala Asp Ala His His Tyr Leu Cys Thr Asp Val Ala

405 410 415

Pro Pro Leu Ile Val His Asn Ile Gln Asn Gly Cys His Gly Pro Ile

420 425 430

Cys Thr Glu Tyr Ala Ile Asn Lys Leu Arg Gln Glu Gly Ser Glu Glu

435 440 445

Gly Met Ser Val Leu Arg Trp Ser Cys Thr Asp Phe Asp Asn Ile Leu

450 455 460

Met Thr Val Thr Cys Phe Glu Lys Ser Glu Gln Val Gln Gly Ala Gln

465 470 475 480

Lys Gln Phe Lys Asn Phe Gln Ile Glu Val Gln Lys Gly Arg Tyr Ser

485 490 495

Leu His Gly Ser Asp Arg Ser Phe Pro Ser Leu Gly Asp Leu Met Ser

500 505 510

His Leu Lys Lys Gln Ile Leu Arg Thr Asp Asn Ile Ser Phe Met Leu

515 520 525

Lys Arg Cys Cys Gln Pro Lys Pro Arg Glu Ile Ser Asn Leu Leu Val

530 535 540

Ala Thr Lys Lys Ala Gln Glu Trp Gln Pro Val Tyr Pro Met Ser Gln

545 550 555 560

Leu Ser Phe Asp Arg Ile Leu Lys Lys Asp Leu Val Gln Gly Glu His

565 570 575

Leu Gly Arg Gly Thr Arg Thr His Ile Tyr Ser Gly Thr Leu Met Asp

580 585 590

Tyr Lys Asp Asp Glu Gly Thr Ser Glu Glu Lys Lys Ile Lys Val Ile

595 600 605

Leu Lys Val Leu Asp Pro Ser His Arg Asp Ile Ser Leu Ala Phe Phe

610 615 620

Glu Ala Ala Ser Met Ile Arg Gln Val Ser His Lys His Ile Val Tyr

625 630 635 640

Leu Tyr Gly Val Cys Val Arg Asp Val Glu Asn Ile Met Val Glu Glu

645 650 655

Phe Val Glu Gly Gly Pro Leu Asp Leu Phe Met His Arg Lys Ser Asp

660 665 670

Val Leu Thr Thr Pro Trp Lys Phe Lys Val Ala Lys Gln Leu Ala Ser

675 680 685

Ala Leu Ser Tyr Leu Glu Asp Lys Asp Leu Val His Gly Asn Val Cys

690 695 700

Thr Lys Asn Leu Leu Leu Ala Arg Glu Gly Ile Asp Ser Glu Cys Gly

705 710 715 720

Pro Phe Ile Lys Leu Ser Asp Pro Gly Ile Pro Ile Thr Val Leu Ser

725 730 735

Arg Gln Glu Cys Ile Glu Arg Ile Pro Trp Ile Ala Pro Glu Cys Val

740 745 750

Glu Asp Ser Lys Asn Leu Cys Val Ala Ala Asp Lys Trp Ser Phe Gly

755 760 765

Thr Thr Leu Trp Glu Ile Cys Tyr Asn Gly Glu Ile Pro Leu Lys Asp

770 775 780

Lys Thr Leu Ile Glu Lys Glu Arg Phe Tyr Glu Ser Arg Cys Arg Pro

785 790 795 800

Val Thr Pro Ser Cys Lys Glu Leu Ala Asp Leu Met Thr Arg Cys Met

805 810 815

Asn Tyr Asp Pro Asn Gln Arg Pro Phe Phe Arg Ala Ile Met Arg Asp

820 825 830

Ile Asn Lys Leu Glu Glu Gln Asn Pro Asp Ile Val Ser Glu Lys Lys

835 840 845

Pro Ala Thr Glu Val Asp Pro Thr His Phe Glu Lys Arg Phe Leu Lys

850 855 860

Arg Ile Arg Asp Leu Glu Glu Gly His Phe Gly Lys Val Glu Leu Cys

865 870 875 880

Arg Tyr Asp Pro Glu Asp Asn Thr Gly Glu Gln Val Ala Val Lys Ser

885 890 895

Leu Lys Pro Glu Ser Gly Gly Asn His Ile Ala Asp Leu Lys Lys Glu

900 905 910

Ile Glu Ile Leu Arg Asn Leu Tyr His Glu Asn Ile Val Lys Tyr Lys

915 920 925

Gly Ile Cys Thr Glu Asp Gly Gly Asn Gly Ile Lys Leu Ile Met Glu

930 935 940

Phe Leu Pro Ser Gly Ser Leu Lys Glu Tyr Leu Pro Lys Asn Lys Asn

945 950 955 960

Lys Ile Asn Leu Lys Gln Gln Leu Lys Tyr Ala Val Gln Ile Cys Lys

965 970 975

Gly Met Asp Tyr Leu Gly Ser Arg Gln Tyr Val His Arg Asp Leu Ala

980 985 990

Ala Arg Asn Val Leu Val Glu Ser Glu His Gln Val Lys Ile Gly Asp

995 1000 1005

Phe Gly Leu Thr Lys Ala Ile Glu Thr Asp Lys Glu Tyr Tyr Thr

1010 1015 1020

Val Lys Asp Asp Arg Asp Ser Pro Lys Phe Gly Tyr Ala Pro Glu

1025 1030 1035

Cys Leu Met Gln Ser Lys Phe Tyr Ile Ala Ser Asp Val Trp Ser

1040 1045 1050

Phe Gly Val Thr Leu His Glu Leu Leu Thr Tyr Cys Asp Ser Asp

1055 1060 1065

Ser Ser Pro Met Ala Leu Phe Leu Lys Met Ile Gly Pro Thr His

1070 1075 1080

Gly Gln Met Thr Val Thr Arg Leu Val Asn Thr Leu Lys Glu Gly

1085 1090 1095

Lys Arg Leu Pro Cys Pro Pro Asn Cys Pro Asp Glu Val Tyr Gln

1100 1105 1110

Leu Met Arg Lys Cys Trp Glu Phe Gln Pro Ser Asn Arg Thr Ser

1115 1120 1125

Phe Gln Asn Leu Ile Glu Gly Phe Glu Ala Leu Leu Lys

1130 1135 1140

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> JAK1 sgRNA序列

<400> 3

atgacgagaa caccaagctc 20

Claims

1.一种用于干细胞的增殖、分化促进或老化抑制的组成物，其特征在于，将JAK1抑制剂作为有效成分而包含。

2.如权利要求1所述的用于干细胞的增殖、分化促进或老化抑制的组成物，其特征在于，

所述JAK1抑制剂选自由托法替尼、巴瑞克替尼、芦可替尼及Filgotinib组成的群中。

3.如权利要求1所述的用于干细胞的增殖、分化促进或老化抑制的组成物，其特征在于，

所述JAK1抑制剂使作为免疫原性相关蛋白质的HLA-A或HLA-B的表达被抑制或减少，并使作为抑制T细胞活性的蛋白质的TGF-b或HGF的表达被促进或增加。

4.如权利要求1所述的用于干细胞的增殖、分化促进或老化抑制的组成物，其特征在于，

所述JAK1抑制剂减少干细胞的老化，并增加干细胞的生存率。

5.一种促进干细胞的增殖及分化的方法，其特征在于，包括如下步骤：

在干细胞中抑制JAK1的表达或活性。

6.如权利要求5所述的促进干细胞的增殖及分化的方法，其特征在于，

在抑制所述JAK1的表达或活性的步骤中，执行处理JAK1抑制剂或敲除干细胞内的JAK1基因的方法。

7.如权利要求6所述的促进干细胞的增殖及分化的方法，其特征在于，

8.一种抑制干细胞的老化的方法，其特征在于，包括如下步骤：

在干细胞中处理JAK1抑制剂或敲除JAK1。

9.如权利要求8所述的抑制干细胞的老化的方法，其特征在于，

10.一种细胞治疗用干细胞的制造方法，其特征在于，包括如下步骤：

在用于细胞移植的干细胞中处理JAK1抑制剂或敲除JAK1，

所述细胞治疗用干细胞具有如下特征：(a)减少干细胞的炎症性细胞老化；(b)抑制干细胞的细胞生存率减少；(c)增加干细胞的细胞增殖；(d)增加干细胞的干细胞性；(e)减少干细胞的免疫原性；以及(f)增加干细胞的免疫调节能力。

11.一种细胞治疗用干细胞，其特征在于，

在干细胞中处理JAK1抑制剂或被敲除JAK1而具有如下特征：(a)减少干细胞的炎症性细胞老化；(b)抑制干细胞的细胞生存率减少；(c)增加干细胞的细胞增殖；(d)增加干细胞的干细胞性；(e)减少干细胞的免疫原性；以及(f)增加干细胞的免疫调节能力。

12.一种用于免疫疾病的预防或治疗的细胞治疗剂组成物，其特征在于，

将权利要求11所述的干细胞作为有效成分而包含。

13.一种用于免疫疾病的预防或治疗的细胞治疗试剂，其特征在于，

包括JAK1抑制剂及干细胞。

14.一种用于免疫疾病的预防或治疗的细胞治疗剂组成物，其特征在于，

将JAK1抑制剂及干细胞作为有效成分而包含。

15.一种预防或治疗免疫疾病的方法，其特征在于，

将JAK1抑制剂及干细胞向个体给药。