CN109071659B - 人抗fgfr4抗体和索拉非尼的组合 - Google Patents

Abstract

本发明涉及与索拉非尼组合的抗FGF受体4(FGFR4)的抗体的医学用途，特别是用于预防或治疗与FGFR表达、过表达或活动过度有关的过度增殖性疾病。

Description

人抗FGFR4抗体和索拉非尼的组合

描述

本发明涉及抗FGF受体4(FGFR4)的抗体与索拉非尼联合用于预防或治疗过度增殖性疾病，特别是癌症的医学用途。

在过去的几十年中，癌症化学疗法一直是主要的医学进步之一。然而，常规化疗通常不能在快速分裂的正常细胞和肿瘤细胞之间有效区分，因此导致几种毒副作用。相反，近年来引入的靶向疗法针对癌症特异性分子和信号传导途径。因此，靶向疗法对肿瘤细胞具有高度特异性，提供更宽的治疗窗口且毒性更小。酪氨酸激酶是特别重要的靶标，因为它们在生长因子信号传导的调节中起重要作用。

成纤维细胞生长因子(FGF)为具有不同生物活性的生长因子家族，其成员涉及血管生成、伤口愈合、胚胎发育及各种内分泌信号传导途径。该人FGF家族包含18个成员，此18个成员为结构上相关的信号传导分子。它们通过与其同源受体(FGFR)(酪氨酸激酶受体一族)相互作用来发挥其生物活性。哺乳动物FGFR家族具有四个成员：FGFR1-4，其各由3个胞外免疫球蛋白型结构域(D1-D3)、一个单一跨膜结构域及一个胞内分裂酪氨酸激酶结构域组成。FGF主要与D2和D3结构域相互作用。各FGFR与FGF的特定子集结合。大多数FGF可结合数种不同的FGFR亚型，而其他FGF可特异活化一种受体或受体的一种同种型。

受体-配体相互作用导致受体二聚体化及自磷酸化，与膜相关蛋白及胞质型辅助蛋白形成复合体并起始数种信号传导级联反应。该FGFR-FGF信号传导系统通过调节细胞功能和过程，诸如生长、分化、迁移、形态发生和血管生成在发育和组织修复中具有重要作用。

FGFR4信号传导可被数种FGF活化，这些FGF还活化该FGFR家族的其他成员(Ornitz等人，1996，J.Biol.Chem.，1996，271：15292-7)，而FGF19特异于FGFR4(Xie等人，1999，Cytokine，11(10)：720-35)。活化FGFR4受体导致数种类型的细胞信号传导，包括开始在以FGF刺激FGFR4后的由磷酸化级联反应介导的信号传导途径。当配体结合FGFR4的胞外结构域时，受体二聚体化和后续的酪氨酸激酶残基磷酸化会通过诱导信号传导分子与受体结合而导致信号传导途径活化(Vainikka等人，1992，EMBO，11(12)：4273-4280，和1994，J.Biol.Chem.269：18320-18326)。例如，FGFR4与PLCγl缔合，并且当已观察到FGF刺激时，MAP激酶活化和DNA合成增加。与其他人FGF生长因子受体家族的成员进一步相互作用可能扩充FGFR4的信号传导潜力并且此方法不仅用于信号多样化，还用于放大信号(McKeehanW.L.and Kan M.，1994，Mol.Reprod.Dev.39：69-82)。85kDa丝氨酸激酶已被发现会负调节FGFR4的酪氨酸磷酸化，但其确切功能尚未阐明(Vainikka等人，1996，J.Biol.Chem.271：1270-1273)。FGFR4与NCAM缔合已证明可介导整合素依赖性黏附(Cavallaro等人，2001，Nat.Cell Biol.3：650-657)，此在肿瘤转移中可能具有决定性作用。

据报导，FGFR4具有数种细胞作用。该受体参与控制体外及体内的各种细胞的分化过程，诸如骨骼肌分化和再生、间质分化或成骨作用、或在出生后肝脏发育期间的肺泡形成。此外，FGFR4被描述成控制胆汁酸和胆固醇体内平衡且被认为参与控制肥胖。此外，FGFR4体外及体内控制胆汁生成和胆固醇生成之间的平衡。FGFR4还参与某些肿瘤现象，诸如肝细胞癌或结肠癌的发展，或乳腺纤维腺瘤细胞或乳癌上皮细胞增殖，诸如乳癌或结肠直肠癌细胞运动性。FGFR4的过度表达还被描述在某些胰脏癌细胞系中并且与恶性星形细胞瘤有关。

FGFR4涉及各种疾病因而使得此受体成为诊断及治疗应用的重要靶标。在此背景下，有效的策略为使用对抗FGFR4的抗体。特别地，干扰由FGFR4介导的信号传导的抗体是理想的。抗FGFR4抗体的实例描述于诸如下列文献中：国际申请WO 03/063893、WO 2012/138975、WO 2013/0183319及美国申请US 2011/0150903。Bumbaca等人(mAbs 3：4，1-11；2011)描述一种人源化的抗FGFR4抗体，其以高特异性结合FGF受体4。

最近，发现针对人FGFR4的氨基酸119-284之间的表位的抗体或其功能片段特别可用于治疗和诊断应用。这些抗体描述于国际申请PCT/EP2015/068440中，其公开内容通过引用并入本文。发现所述人抗体对于治疗和诊断应用特别有用。它们特异性结合FGFR4，优选不显示与其他FGF受体FGFR1-3b、c的交叉反应性。此外，抗体能够抑制配体与人FGFR4的结合。抗体在其结合特异性和生物活性方面显示出有利的性质，特别是在它们降低细胞生长和细胞迁移的能力、它们激活另外的抗肿瘤剂和/或使肿瘤细胞对治疗性治疗敏感的能力方面。然而，仍然需要用于治疗过度增殖性疾病特别是癌症的新的有效疗法。

索拉非尼是一种双重作用Raf激酶和VEGFR抑制剂，可抑制肿瘤细胞增殖和血管生成。尽管最初开发为Raf激酶抑制剂，但随后发现其抑制多种激酶受体，包括VEGFR、EGFR和PDGFR激酶(Wilhelm等人(2004)，Cancer Res 64：7099-7109，Strumberg等人。(2005)，JClin Oncol 23：965-972)。索拉非尼在四种不同的肿瘤类型中具有显著活性，包括肾、结肠、胰腺、肺和卵巢肿瘤。

在本发明中令人惊讶地发现，某些抗FGFR4抗体和索拉非尼的组合代表了一种新的和有希望的癌症治疗方法。组合治疗提供了附加的或甚至协同的抗癌活性，从而产生有益的临床效果。

因此，本发明的第一方面是(i)和(ii)的组合用于预防和/或治疗与FGFR4表达、过表达和/或活动过度相关的过度增殖性疾病：

(i)人抗FGFR4抗体或所述抗体的功能片段，和

(ii)索拉非尼或其药学上可接受的盐，

其中人抗FGFR4抗体或所述抗体的功能片段针对人FGFR4的氨基酸119-248之间的表位，优选氨基酸152-240之间，更优选氨基酸230和240之间的表位。

就本发明而言，术语“抗体”特指包含至少一个免疫球蛋白重链及至少一个免疫球蛋白轻链的分子。各重链和轻链可包含一个可变结构域和一个恒定结构域。抗原结合位点可从重链和轻链的可变结构域形成。可变区(还称为可变结构域)包含互补决定区(CDR)，例如CDR1、CDR2和CDR3区及邻接该CDR的框构区(FR)。本领域技术人员可容易理解术语“互补决定区”(参见，例如Harlow and Lane(eds.)，Antibodies：A Laboratory Manual，CSHLpress，Cold Spring Harbor，N.Y.，1988)并且其是指在抗体的可变结构域内主要与抗原接触并决定抗体的特异性的氨基酸区段。此区还称为高可变区。

术语“人抗体”包含完全人抗体或人源化抗体，其中完全人抗体为优选的。人抗体可从经基因工程改造的动物制备，例如包含异种免疫系统的动物或来自根据已知技术的抗体展示库。人抗体通常描述于van Dijk and van de Winkel(Curr.Opin.Pharmacol.5：368-74(2001))和Lonberg(Curr.Opin.Immunol.20：450-459(2008)中。人抗体可经由将免疫原施用至已被修改而能够在响应抗原攻击时制造完整人抗体或具有人可变区的完整抗体的转基因动物来制备。这样的动物通常含有全部或一部分的人免疫球蛋白基因座，这些人免疫球蛋白基因座可替代内源性免疫球蛋白基因座，或者存在于染色体外或被随机整合入动物的染色体中。在这样的转基因小鼠中，内源性免疫球蛋白基因座通常已被去活化。用于从转基因动物取得人抗体的方法的综述，参见，例如Lonberg，Nat.Biotech.23：1117-1125(2005)。来自由这样的动物产生的完整抗体的人可变区可进一步例如通过与不同的人恒定区组合来修改。

人抗体还可通过基于杂交瘤的方法制造。用于制造人单克隆抗体的人骨髓瘤和小鼠-人异源骨髓瘤细胞系已有描述(参见，例如Kozbor J.Immunol.133：3001(1984)；Brodeur等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications，pp.51-63)。经由人B细胞杂交瘤技术产生的人抗体还描述于Li et al，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA103：3557-3562(2006)中。

人抗体还可通过噬菌体展示法产生(参见，例如US 6,248,516、US 5,403,484、US5,969,108、US 5,885,793、US 6,696,248、US 5,849,500)。用于从抗体库选择人抗体的技术为本领域所已知。(参见，例如Carmen，S.等人，Briefings in Functional Genomics andProteomics(2002)，1(2)，p.189-203；及Siriwardena，D.等人，Ophthalmology(2002)109(3)，p.427-431)。例如，可使用噬菌体展示法，其涉及使人抗体可变区以单链抗体(scFv)的形式表达在噬菌体表面上并选择结合抗原的噬菌体(Nature(1991)，352，(6336)，p.624-628，Journal of Molecular Biology(1992)，227，(2)，p.381-388，和NatureBiotechnology(2005)，23，(9)，p.1105-1116)。同样地，还可使用另一噬菌体展示法，其涉及使人抗体Fab(抗原结合片段)表达在噬菌体的表面上并选择结合抗原的噬菌体(WO 97/08320和WO 01/05950)。可分析基于抗原结合所选择的噬菌体的基因，从而测定编码结合该抗原的人抗体可变区的DNA序列。当结合该抗原的scFv或Fab的DNA序列已清楚后，从其提取CDR序列并可制备具有该序列的表达载体，再引入至合适的宿主中，接着表达基因以获得人抗体(WO 92/01047、WO 92/20791、WO 93/06213、WO 93/11236、WO 93/19172、WO 95/01438、WO 95/15388、Annu.Rev.Immunol(1994)12，p.433-455及Nature Biotechnology(2005)23(9)，p.1105-1116)。

人抗体还可通过分离选自人衍生的噬菌体展示库的Fv克隆可变结构域序列来生成。然后，可将这样的可变结构域序列与期望的人恒定结构域组合。用于从抗体库选择人抗体的技术为本领域所已知。

人源化抗体可根据已知技术经由将单克隆抗体人源化来制备。通常，将非人抗体人源化以降低对人的免疫原性，但同时保留该亲代非人抗体的特异性和亲和力。人源化抗体及制造其的方法综述于例如Alamagro and Fransson，Front.Biosci.13：1619-1633(2008)中。

本发明还包含人抗体的功能片段，例如上述抗体的部分，其包含至少一个抗原结合位点。如本文所用的术语“功能片段”与“抗原结合片段”具有相同的含义。抗体功能片段的实例包括Fab片段、Fab’片段，F(ab’)₂片段，Fv片段，双抗体或单链抗体分子及其他片段，只要其展现出所需的结合人FGFR4的能力。关于某些抗体片段的综述可参见Hudson等人，Nat.Met.9：129-134(2003)。

双抗体为具有两个抗原结合位点(可能为二价或双特异性的)的抗体片段。参见，例如Hudson等人，(2003)。单链抗体为包含重链可变结构域的全部或部分或轻链可变结构域的全部或部分的抗体片段。抗体片段可通过各种技术制备，包括，但不限于蛋白水解分解完整抗体和如本文所描述的通过重组宿主(例如大肠杆菌或噬菌体)制造。

在某些实施方案中，如本文提供所使用的抗体为多特异性抗体，例如双特异性抗体。多特异性抗体为对至少二个不同位点具有结合特异性的单克隆抗体。

在某些实施方案中，该结合特异性之一是针对FGFR4，而另一结合特异性是针对任何其他抗原。

在某些实施方案中，双特异性抗体可结合FGFR4的两个不同的抗原决定部位。双特异性抗体还可用于将细胞毒性剂定位在表达FGFR4的细胞。双特异性抗体可制备成全长抗体或抗体片段的形式。

用于制造多特异性抗体的技术包括但不限于重组共同表达具有不同特异性的两个免疫球蛋白重链-轻链对和“杵臼”结构(knob in hole)基因工程。多特异性抗体还可通过下述方法制造：用于制造抗体Fc-异二聚体分子的基因工程静电转向效应；交联两种或多种抗体或片段；使用亮氨酸拉链来制造双特异性抗体；使用用于制造双特异性抗体的“双抗体”技术及使用单链Fv并如所描述的制备三特异性抗体。本文还包括具有三个或更多个功能性抗原结合位点的经基因工程制造的抗体，包括“章鱼抗体(octopus antibody)”。

在某些实施方案中，本文所提供的抗体的氨基酸序列变体可列入考虑，只要其展现出所需的结合人FGFR4的能力。例如，提高抗体的结合亲和力及/或其他生物学性能可能是理想的。抗体的氨基酸序列变体可通过在编码该抗体的核苷酸序列中引入适当的修改或通过肽合成来制备。这样的修改包括，例如从抗体的氨基酸序列删除残基和/或插入残基和/或取代残基。可制造任何组合的缺失、插入和替代以获得最终的构建体，前提是该最终构建体拥有所需的特性，例如结合抗原。待缺失、插入和/或取代的氨基酸残基的数量通常为10或更少，优选5或更少，更优选3或更少，最优选1或2。

抗体的术语“结合(bind或binding)”意指至少暂时与靶抗原(即，人FGFR4及其含有表位的片段)相互作用或缔合。

在某些实施方案中，如本文提供所使用的抗体的解离常数(Kd)为≦1μM、≦100nM、≦10nM、≦1nM、≦0.1nM、≦0.01nM或≦0.001nM(例如10^-8M或更小，例如从10^-8M至10^-13M，例如10^-9M至10¹³M)。在一个实施方案中，通过经放射标记的抗原结合测定(放射免疫测定，RIA)来测量Kd值，该测定用感兴趣的抗体的Fab形式及其抗原进行。

根据另一个实施方案，Kd使用表面等离子体共振测定利用经固定的抗原测量。根据本发明的优选实施方案，该抗体是针对如本文所描述的人FGFR4的表位的人单克隆抗体。

用于本发明的抗体或其功能片段针对人FGFR4的氨基酸119-284之间的表位。表位优选位于人FGFR4的Ig样结构域2中。在国际申请PCT/EP2015/068440中更详细地描述了该抗体，其公开内容通过引用并入本文。特别优选的是针对人FGFR4的氨基酸152-240之间，更优选氨基酸230-240之间的表位的人抗体。表位可以是构象或顺序表位。优选地，根据本发明使用的抗体与人FGFR4的氨基酸152-240之间、更优选人FGFR4的氨基酸230和240之间的顺序表位结合。根据一个特别优选的实施方案，用于本发明的抗体针对包含氨基酸序列RYNY、基本上由其组成或由其组成的表位，优选序列表位。

用于本发明的抗体可以是各种免疫球蛋白(Ig)类型，例如IgA-，IgD-，IgE-，IgG-或IgM-型，优选IgG-或IgM-型，包括但不包括限于IgG1-，IgG2-，IgG3-IgG4-，IgG1和IgG2-型。在一个优选的实施方案中，抗体是IgG1型。

在本发明的某些实施方案中，该抗体可包含如下述的特定的重链互补决定区CDRH1、CDRH2和/或CDRH3。

在一个实施方案中，该人抗体包含具有如SEQ ID NO：1至6的任一序列中所示的氨基酸序列或与其具有1个或2个氨基酸差异的氨基酸序列的重链互补决定区1(CDRH1)。

在进一步的实施方案中，该抗体包含具有如SEQ ID NO：7至12的任一序列中所示的氨基酸序列或与其具有1个或2个氨基酸差异的氨基酸序列的重链互补决定区2(CDRH2)。

在进一步的实施方案中，该抗体包含具有如SEQ ID NO：3至20的任一序列中所示的氨基酸序列或与其具有1个或2个氨基酸差异的氨基酸序列的重链互补决定区3(CDRH3)。

根据本发明的抗体还可包含特定的轻链互补决定区CDRL1、CDRL2和/或CDRL3。

因此，在一个实施方案中，该抗体包含具有如SEQ ID NO：21至23和68的任一序列中所示的氨基酸序列或与其具有1个或2个氨基酸差异的氨基酸序列的轻链互补决定区1(CDRL1)。

在进一步的实施方案中，该抗体包含具有如SEQ ID NO：24至27的任一序列中所示的氨基酸序列或与其具有1个或2个氨基酸差异的氨基酸序列的轻链互补决定区2(CDRL2)。

在进一步的实施方案中，该抗体包含具有如SEQ ID NO：28至35的任一序列中所示的氨基酸序列或与其具有1个或2个氨基酸差异的氨基酸序列的轻链互补决定区3(CDRL3)。

优选地，抗体可在一个重链内包含特定的CDR组合(即，CDRH1、CDRH2和CDRH3的组合)。

因此，在一个优选的实施方案中，该抗体包含含有互补决定区CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链，其中CDRH1是选自如SEQ ID NO：1至6中所示的序列或与其具有1个或2个氨基酸差异的氨基酸序列，CDRH2是选自如SEQ ID NO：7至12中所示的序列或与其具有1个或2个氨基酸差异的氨基酸序列，且CDRH3是选自如SEQ ID NO：13至20中所示的序列或与其具有1个或2个氨基酸差异的氨基酸序列。

最优选地，根据本发明使用的抗体包含含有三个CDR的重链，其中CDRH1、CDRH2和CDRH3的组合选自表1中所示的那些。应理解的是，表1中的每一行代表CDRH1、CDRH2和CDRH3的一种特定组合。

表1

根据本发明，更优选地，该抗体在一个轻链内包含CDR的特定组合(即CDRL1、CDRL2和CDRL3的特定组合)。

因此，在一个优选的实施方案中，该抗体包含含有互补决定区CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链，其中CDRL1具有如SEQ ID NO：21至23和68的任一序列中所示的氨基酸序列或与其具有1个或2个氨基酸差异的氨基酸序列，CDRL2具有如SEQ ID NO：24至27的任一序列中所示的氨基酸序列或与其具有1个或2个氨基酸差异的氨基酸序列，且CDRL3具有如SEQID NO：28至35的任一序列中所示的氨基酸序列或与其具有1个或2个氨基酸差异的氨基酸序列。

最优选地，根据本发明使用的抗体包含含有三个CDR的轻链，其中CDRL1、CDRL2和CDRL3的组合选自表2中所示的那些。应

理解的是，表2中的每一行代表CDRL1、CDRL2和CDRL3的一种特定组合。

表2

如上述，抗体的互补决定区(CDR)可邻接框架区。含有三个CDR的抗体的重链或轻链含有例如四个框架区。

此外，本发明还包含那些能与特征为上述重链和/或轻链CDR的特定抗体识别同一人FGFR4上的表位的抗体。那些抗体的功能性片段也在本发明的范围内。为了测定该抗体所识别的FGFR4上的表位，可使用源自人FGFR4的胞外结构域的氨基酸序列的以化学方法制备的蛋白序列衍生的短肽阵列来定位并鉴别抗体的表位(Reinicke W.，MethodsMol.Biol.2004，248：443-63)。标示本发明的抗体所结合的FGFR4胞外结构域中的表位位置的另一种方法包括Snaps/SELDI(Wang等人，Int.J.Cancer，2001，June 15；92(6)：871-6)或者可进行诸如Antibodies，A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory，EdHarlow and David Lane(1988)中所描述的常规交叉阻断测定。

根据特别优选的实施方案，根据本发明使用的人抗体包含含有至少一个选自由下列所组成的群组的CDR的重链：

(a)如SEQ ID NO：1至6中所示的CDRH1，或与其具有1个或2个氨基酸差异的CDRH1序列，

(b)如SEQ ID NO：7至12中所示的CDRH2，或与其具有1个或2个氨基酸差异的CDRH2序列，和

(c)如SEQ ID NO：13至20中所示的CDRH3，或与其具有1个或2个氨基酸差异的CDRH3序列，

和/或包含至少一个选自由下列所组成的群组的CDR的轻链

(d)如SEQ ID NO：21至23或68中所示的CDRL1，或与其具有1个或2个氨基酸差异的CDRL1序列，

(e)如SEQ ID NO：24至27中所示的CDRL2，或与其具有1个或2个氨基酸差异的CDRL2序列，和

(f)如SEQ ID NO：28至35中所示的CDRL3，或与其具有1个或2个氨基酸差异的CDRL3序列。

在本发明的一个优选的实施方案中，该人抗体包含如SEQ ID NO：52至59的任一序列或与这样的序列有1个或2个氨基酸相异的序列中所示的重链可变区(VH)。此外，优选地，本发明的人抗体包含如SEQ ID NO：60至67的任一序列或与这样的序列有1个或2个氨基酸相异的序列中所示的轻链可变区(VL)。特别优选的人抗体为包含如SEQ ID NO：52至59的任一序列中所示的重链可变区和如SEQ ID NO：60至67的任一序列中所示的轻链可变区的抗体。

特别优选的是人抗体(U4-1)，其包含含有如SEQ ID NO：1中所示的CDRH1、如SEQID NO：7中所示的CDRH2和如SEQ ID NO：13中所示的CDRH3的重链且包含含有如SEQ ID NO：21中所示的CDRL1、如SEQ ID NO：24中所示的CDRL2和如SEQ ID NO：28中所示的CDRL3的轻链。本发明还包含其中一个或多个CDR有1个或2个氨基酸差异的人抗体或识别人FGFR4上的相同表位的抗体。在一个特别优选的实施方案中，该人抗体包含根据SEQ ID NO：52的重链可变区和根据SEQ ID NO：60的轻链可变区。本发明还包含其中该重链和/或轻链可变区的序列与SEQ ID NO：52和60中所示的序列相差1个或2个氨基酸的人抗体。

特别优选的是人抗体(U4-2)，其包含含有如SEQ ID NO：2中所示的CDRH1、如SEQID NO：7中所示的CDRH2和如SEQ ID NO：14中所示的CDRH3的重链并包含含有如SEQ ID NO：22中所示的CDRL1、如SEQ ID NO：24中所示的CDRL2和如SEQ ID NO：29中所示的CDRL3的轻链。本发明还包含其中一个或多个CDR有1个或2个氨基酸差异的人抗体或识别在人FGFR4上的相同表位的抗体。在一个特别优选的实施方案中，该人抗体包含根据SEQ ID NO：53的重链可变区和根据SEQ ID NO：61的轻链可变区。本发明还包含其中该重链和/或轻链的可变区的序列与SEQ ID NO：53和61中所示的序列相差1个或2个氨基酸的人抗体。

特别优选的是人抗体(U4-3)，其包含含有如SEQ ID NO：3中所示的CDRH1、如SEQID NO：8中所示的CDRH2和如SEQ ID NO：15中所示的CDRH3的重链并包含含有如SEQ ID NO：23中所示的CDRL1、如SEQ ID NO：25中所示的CDRL2和如SEQ ID NO：30中所示的CDRL3的轻链。本发明还包含其中一个或多个CDR有1个或2个氨基酸差异的人抗体或识别在人FGFR4上的相同表位的抗体。在一个特别优选的实施方案中，该人抗体包含根据SEQ ID NO：54的重链可变区和根据SEQ ID NO：62的轻链可变区。本发明还包含其中该重链和/或轻链的可变区的序列与SEQ ID NO：54和62中所示的序列相差1个或2个氨基酸的人抗体。

特别优选的是人抗体(U4-4)，其包含含有如SEQ ID NO：4中所示的CDRH1、如SEQID NO：9中所示的CDRH2和如SEQ ID NO：16中所示的CDRH3的重链并包含含有如SEQ ID NO：22中所示的CDRL1、如SEQ ID NO：24中所示的CDRL2和如SEQ ID NO：31中所示的CDRL3的轻链。本发明还包含其中一个或多个CDR有1个或2个氨基酸差异的人抗体或识别在人FGFR4上的相同表位的抗体。在一个特别优选的实施方案中，该人抗体包含根据SEQ ID NO：55的重链可变区和根据SEQ ID NO：63的轻链可变区。本发明还包含其中该重链和/或轻链的可变区的序列与SEQ ID NO：55和63中所示的序列相差1个或2个氨基酸的人抗体。

特别优选的是人抗体(U4-5)，其包含含有如SEQ ID NO：5中所示的CDRH1、如SEQID NO：10中所示的CDRH2和如SEQ ID NO：17中所示的CDRH3的重链并包含含有如SEQ IDNO：22中所示的CDRL1、如SEQ ID NO：24中所示的CDRL2和如SEQ ID NO：32中所示的CDRL3的轻链。本发明还包含其中一个或多个CDR有1个或2个氨基酸差异的人抗体或识别在人FGFR4上的相同表位的抗体。在一个特别优选的实施方案中，该人抗体包含根据SEQ ID NO：56的重链可变区和根据SEQ ID NO：64的轻链可变区。本发明还包含其中该重链和/或轻链的可变区的序列与SEQ ID NO：56和64中所示的序列相差1个或2个氨基酸的人抗体。

特别优选的是人抗体(U4-6)，其包含含有如SEQ ID NO：6中所示的CDRH1、如SEQID NO：12中所示的CDRH2和如SEQ ID NO：19中所示的CDRH3的重链并包含含有如SEQ IDNO：22中所示的CDRL1、如SEQ ID NO：26中所示的CDRL2和如SEQ ID NO：34中所示的CDRL3的轻链。本发明还包含其中一个或多个CDR有1个或2个氨基酸差异的人抗体或识别在人FGFR4上的相同表位的抗体。在一个特别优选的实施方案中，该人抗体包含根据SEQ ID NO：58的重链可变区和根据SEQ ID NO：66的轻链可变区。本发明还包含其中该重链和/或轻链的可变区的序列与SEQ ID NO：58和66中所示的序列相差1个或2个氨基酸的人抗体。

特别优选的是人抗体(U4-7)，其包含含有如SEQ ID NO：3中所示的CDRH1、如SEQID NO：7中所示的CDRH2和如SEQ ID NO：20中所示的CDRH3的重链并包含含有如SEQ ID NO：68中所示的CDRL1、如SEQ ID NO：27中所示的CDRL2和如SEQ ID NO：35中所示的CDRL3的轻链。本发明还包含其中一个或多个CDR有1个或2个氨基酸差异的人抗体或识别在人FGFR4上的相同表位的抗体。在一个特别优选的实施方案中，该人抗体包含根据SEQ ID NO：59的重链可变区和根据SEQ ID NO：67的轻链可变区。本发明还包含其中该重链和/或轻链的可变区的序列与SEQ ID NO：59和67中所示的序列相差1个或2个氨基酸的人抗体。

特别优选的是人抗体(U4-8)，其包含含有如SEQ ID NO：4中所示的CDRH1、如SEQID NO：11中所示的CDRH2和如SEQ ID NO：18中所示的CDRH3的重链并包含含有如SEQ IDNO：22中所示的CDRL1、如SEQ ID NO：24中所示的CDRL2和如SEQ ID NO：33中所示的CDRL3的轻链。本发明还包含其中一个或多个CDR有1个或2个氨基酸差异的人抗体或识别在人FGFR4上的相同表位的抗体。在一个特别优选的实施方案中，该人抗体包含根据SEQ ID NO：57的重链可变区和根据SEQ ID NO：65的轻链可变区。本发明还包含其中该重链和/或轻链的可变区的序列与SEQ ID NO：57和65中所示的序列相差1个或2个氨基酸的人抗体。

还为优选的的有人抗体(U4-9)，其包含含有如SEQ ID NO：3中所示的CDRH1、如SEQID NO：8中所示的CDRH2和如SEQ ID NO：15中所示的CDRH3的重链并包含含有如SEQ ID NO：68中所示的CDRL1、如SEQ ID NO：27中所示的CDRL2和如SEQ ID NO：35中所示的CDRL3的轻链。本发明还包含其中一个或多个CDR有1个或2个氨基酸差异的人抗体或识别在人FGFR4上的相同表位的抗体。在一个特别优选的实施方案中，该人抗体包含根据SEQ ID NO：54的重链可变区和根据SEQ ID NO：67的轻链可变区。优选地，抗体U4-9包含抗体U4-3所特有的重链及抗体U4-7所特有的轻链。在申请PCT/EP2015/068440所提供的实验中，抗体U4-9证明对FGFR4的亲和力比U4-3更高。

在某些实施方案中，用于本发明的抗体或其功能片段包括抗体或其功能片段，其与U4-1、U4-2、U4-3、U4-4、U4-5、U4-6、U4-7、U4-8或U4-9重链或轻链可变区的可变区具有实质同一性。术语“实质同一性”是指两个氨基酸序列具有至少80％的序列同一性，优选至少90％，更优选至少95％的序列同一性，最优选至少99％的序列同一性。两个氨基酸序列之间的同一性可以使用Blast算法2.2.2版确定(Altschul，Stephen F.，Thomas L.Madden，Alejandro A.Schaffer，Jinghui Zhang，Zheng Zhang，Webb Miller和David J.Lipman(1997)，“Gapped BLAST和PSI-BLAST：a new generation of protein database searchprograms”，Nucleic Acids Res.25：3389-3402)，使用默认参数。Blast算法也可以通过访问网站www.ncbi.nlm.nih.gov/blast在互联网上使用。

在某些实施方案中，用于本发明的抗体或其功能片段包括与U4-1、U4-2、U4-3、U4-4、U4-5、U4-6、U4-7、U4-8或U4-9竞争结合FGFR4的抗体或其功能片段。

用于本发明的抗体可以例如从在共同未决申请PCT/EP2015/068440中更详细地描述的包含如SEQ ID NO：36-43和SEQ ID NO：44-51中任一个所示的核酸序列的核酸分子获得。

如上述，本发明的抗FGFR4抗体在其结合特异性和生物活性方面，尤其是其识别人抗FGFR4的表位以减少细胞生长和细胞迁移的能力方面、其活化其他抗肿瘤剂和/或使肿瘤细胞对治疗性处理敏感化的能力方面显示出有利的特性。本发明的抗体U4-1至U4-9具有内源性抗肿瘤活性。其特异结合FGFR4且优选地，显示出不与其他FGF受体FGFR1-3b、c交叉反应。

根据本发明使用的抗体可与异源基团例如效应子基团偶联。这样的抗体缀合物特别适合用于治疗应用。术语“效应子基团”可指细胞毒性基团，诸如放射性同位素或放射性核素、毒素、治疗基团或本领域中已知的另一效应子基团。其中该抗体与治疗基团偶联的缀合物，所谓的抗体-药物缀合物(ADC)是特别优选的。或者，抗体可与标记基团偶联。这样的抗体缀合物特别适合用于诊断应用。如本文所使用的术语“标记基团”是指可检测的标记，例如经放射标记的氨基酸或生物素部分、荧光标记物、酶或本领域已知的任何其他类型标记。抗体或抗体片段连接放射性同位素可例如对肿瘤治疗提供益处。不像化疗及其他形式的癌症治疗，放射免疫疗法或施用放射性同位素-抗体组合物可靶向癌细胞，并且对周围正常健康组织的损害最小。

本发明的另一个实施方案为如上文所定义地使用的组合，其中将抗体融合至白介素-2(IL-2)。白介素2为由T辅助细胞制造的15kDa细胞因子，其刺激细胞毒性T淋巴细胞及NK细胞。IL-2已在临床上用于治疗黑色素瘤及肾细胞癌，以刺激癌症患者的免疫系统。实现在肿瘤中的长时间的IL-2高剂量可诱导持久的抗肿瘤反应而导致排斥原本可能致命的肿瘤。本发明中已发现将IL-2纳入包含如上文所述的抗体的融合蛋白中，但同时保持其活性是可能。因此，其中抗体融合至IL-2的融合蛋白适合作为递送系统，其可保留抗原结合特异性并拥有IL-2的完全活性。

根据本发明，上述抗体与索拉非尼或其药学上可接受的盐组合使用。

术语“索拉非尼”是指小分子抑制剂4-[4-[[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]氨基甲酰基氨基]苯氧基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺。索拉非尼及其制备尤其描述于WO 00/42012和WO03/068228中。应理解，索拉非尼的药学上可接受的盐以及常用的前药也在本发明的范围内。

索拉非尼的药学上可接受的盐是例如有机或无机酸加成盐。合适的无机酸包括但不限于卤酸(如盐酸和氢溴酸)、硫酸或磷酸。合适的有机酸包括但不限于羧酸，膦酸，磺酸或氨基磺酸，其实例包括乙酸，丙酸，辛酸，癸酸，三氟乙酸，十二烷酸，乙醇酸，乳酸，2-或3-羟基丁酸，γ-氨基丁酸(GABA)，葡萄糖酸，葡萄糖单羧酸，苯甲酸，水杨酸，苯乙酸和扁桃酸，富马酸，琥珀酸，己二酸，庚二酸，辛二酸，壬二酸，苹果酸，酒石酸，柠檬酸，葡萄糖酸，半乳糖二酸，氨基酸(如谷氨酸，天冬氨酸，N-甲基甘氨酸，乙酰氨基乙酸，N-乙酰基天冬酰胺或N-乙酰半胱氨酸)，丙酮酸，乙酰乙酸，甲磺酸，三氟甲烷磺酸，4-甲苯磺酸，苯磺酸，1-萘磺酸，2-萘磺酸，磷酸丝氨酸和2-或3-甘油磷酸。

此外，药学上可接受的盐包括无机碱的酸式盐，例如含有碱性阳离子(例如，Li⁺Na⁺或K⁺)的盐，碱土金属阳离子(例如，Mg⁺²，Ca⁺²或Ba⁺²)，铵阳离子，以及有机碱的酸式盐，包括脂族和芳族取代的铵，和季铵阳离子，如由三乙胺、N,N-二乙胺、N,N-二环己胺、赖氨酸、吡啶、N,N-二甲基氨基吡啶(DMAP)、1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(DABCO)、1,5-二氮杂双环[4.3.0]酮-5-烯(DBN)和1,8-二氮杂双环[5.4.0]-7-十一烯(DBU)的质子化或全烷基化引起的那些。

前药的形成在本领域中是公知的，以增强母体化合物的性质；这些性质包括溶解度、吸收、生物稳定性和释放时间(参见Ansel等人编辑的“Pharmaceutical Dosage Formand Drug Delivery Systems”(Sixth Edition)，Williams&Wilkins出版，第27-29页，(1995)，在此引入作为参考)。索拉非尼的常用前药被设计用于利用主要的药物生物转化反应，并且也被认为是在本发明的范围内。主要的药物生物转化反应包括N-脱烷基化，O-脱烷基化，脂肪族羟基化，芳香羟基化，N-氧化，S-氧化，脱氨，水解反应，葡糖醛酸化，硫酸化和乙酰化(参见Goodman和Gilman的The Pharmacological Basis of Therapeutics(第九版)，Molinoff等编辑，McGraw-Hill出版，第11-13页，(1996)，在此引入作为参考)。

在优选的实施方案中，使用索拉非尼的甲苯磺酸盐。索拉非尼及其甲苯磺酸盐的可扩展合成公开于Organic Process Research and Development(2002)，Vol.6，Issue#6，777-781和WO 03/068228，其通过引用并入本文。

如上定义的抗FGFR4抗体与索拉非尼或其药学上可接受的盐的组合的有用性优于单独使用任一种药剂的效果的常规知识所预期的。例如，与通过单独施用抗体或索拉非尼所产生的抗肿瘤功效相比，抗体U4-3与索拉非尼的组合疗法产生至少加性的抗肿瘤功效。通常，与施用单一药剂相比，使用上述定义的抗FGFR4抗体与raf激酶抑制剂索拉非尼组合将用于产生更好的减少肿瘤生长或甚至消除肿瘤的功效，施用较少量的所施用的药剂，提供在患者中具有良好耐受性的化学治疗，具有更大剂量的单一化学疗法和某些其他组合疗法导致的较少有害的药理学并发症，提供哺乳动物尤其是人的更广泛的不同癌症类型的治疗，在治疗患者中提供更高的反应率，与标准化学疗法相比在治疗的患者中提供更长的存活时间，提供更长的肿瘤进展时间，和/或与其他癌症药物组合产生拮抗作用的已知情况相比，产率功效和耐受性结果至少与单独使用的那些药剂同样好。

根据本发明，(i)人抗FGFR4抗体或所述抗体的功能片段和(ii)索拉非尼或其药学上可接受的盐的组合用于预防和/或治疗与FGFR4表达、过度表达和/或活动过度相关的过度增殖性疾病。特别地，本发明的组合用于治疗癌症，包括但不限于结肠癌，结肠直肠癌，前列腺癌，白血病，黑素瘤，肝细胞癌(HCC)，肾细胞癌(RCC)，头颈癌，胶质瘤，肺癌，胰腺癌，卵巢癌和乳腺癌。使用本发明的抗体可以预防和/或治疗的疾病的实例详述如下。

对于根据本发明的组合，人抗FGFR4抗体和/或索拉非尼可以作为常用药物制剂提供，或更优选作为单独的药物制剂提供，各自任选地包括药学上可接受的载体。

术语“载体”包括那些在使用的剂量和浓度下，对接触到它们的细胞或哺乳动物无毒性的试剂，例如稀释剂、稳定剂、佐剂或其他类型的赋形剂。医药上可接受的载体的实例为本领域所周知且包括磷酸盐缓冲的生理盐水溶液、水、乳液、诸如油/水乳液、各种类型的润湿剂、无菌溶液等。通常，医药上可接受的载体为可用于递送药物，尤其是用于递送抗体分子的水性pH缓冲溶液。该医药组合物可通过众所周知的常规方法配制，即通过将活性剂与载体和任选其他经常被掺入该制剂中的试剂混合来配制。例如，该组合物可被配制成冻干制剂、水溶液、分散液或固体制剂的形式。

合适的组合物的施用可通过不同方法实现，例如通过静脉内、腹膜内、皮下、肌肉内、局部、皮内、鼻内或支气管内施用。组合物还可直接施用至靶位点，例如通过生物弹射(biolistic)递送至外部或内部靶位点(如大脑)。该剂量方案将由主治医生及临床因素决定。

在一个优选的实施方案中，可以通过口服递送或通过静脉内注射或输注向患者施用包含抗FGFR4抗体和/或索拉非尼或其药学上可接受的盐的组合物。

在另一个优选的实施方案中，包含抗FGFR4抗体和/或索拉非尼或其药学上可接受的盐的组合物可以以片剂、液体、局部凝胶、吸入剂或持续释放组合物形式施用至患者。

抗FGFR4抗体可以与索拉非尼或其药学上可接受的盐同时施用至患者，在相同的制剂中或更通常在分开的制剂中，并且通常使用不同的施用途径。也可以按任何顺序依次进行施用。

在一个优选的实施方案中，抗FGFR4抗体或所述抗体的功能片段可以与索拉非尼或其药学上可接受的盐串联施用，其中抗FGFR4抗体或所述抗体的功能片段可以每天一次或多次施用至患者多达连续28天，其中在同一总时间内同时或间歇施用索拉非尼或其药学上可接受的盐。

本发明的组合也可以在体内例如在患者体内形成。含有上述定义的抗FGFR4抗体和/或索拉非尼或其药学上可接受的盐的药物制剂可以以剂量单位制剂口服、皮肤、胃肠外、注射、吸入或喷雾、舌下、直肠或阴道施用。术语“注射施用”包括静脉内、关节内、肌肉内、皮下和肠胃外注射，以及输注技术的使用。皮肤施用可包括局部应用或透皮施用。一种或多种化合物可以与一种或多种无毒的药学上可接受的载体结合存在，并且如果需要，可以存在其他活性成分。

用于口服使用的组合物可根据本领域已知的用于制备药物组合物的任何合适方法制备。这些组合物可含有一种或多种选自稀释剂、甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂的试剂，以提供可口的制剂。片剂含有活性成分与适合制备片剂的无毒的药学上可接受的赋形剂的混合物。这些赋形剂可以是，例如，惰性稀释剂，如碳酸钙，碳酸钠，乳糖，磷酸钙或磷酸钠，制粒和崩解剂，例如玉米淀粉，或海藻酸；和粘合剂，例如硬脂酸镁，硬脂酸或滑石。片剂可以是未包衣的，或者可以通过已知技术包衣，以延迟在胃肠道中的崩解和吸附，从而在较长时间内提供持续作用。例如，可以使用延时材料，例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。这些化合物也可以以固体、快速释放的形式制备。

口服使用的制剂也可以作为硬明胶胶囊提供，其中活性成分与惰性固体稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合，或作为软明胶胶囊，其中活性成分与水或油介质例如花生油、液体石蜡或橄榄油混合。

也可以使用含有与适于制备水性悬浮液的赋形剂混合的活性物质的水性悬浮液。这样的赋形剂是悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠，甲基纤维素，羟丙基甲基纤维素，海藻酸钠，聚乙烯吡咯烷酮，黄蓍胶和阿拉伯树胶；分散剂或润湿剂可以是天然存在的磷脂，例如卵磷脂，或环氧烷烃与脂肪酸的缩合产物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物，例如十七烷基氧基乙醇，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物，例如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物，例如聚乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。水性悬浮液还可含有一种或多种防腐剂，例如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯，一种或多种着色剂，一种或多种调味剂，和一种或多种甜味剂，例如蔗糖或糖精。

适于通过加入水制备水性悬浮液的可分散粉末和颗粒提供活性成分与分散剂或润湿剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂的混合物。合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂的例子如上所述。还可以存在另外的赋形剂，例如甜味剂、调味剂和着色剂。

该化合物也可以是非水性液体制剂的形式，例如，油性悬浮液可以通过将活性成分悬浮在聚乙二醇、植物油(例如花生油，橄榄油，芝麻油或花生油)或矿物油(例如液体石蜡)中来配制。油性悬浮液可含有增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可加入如上所述的甜味剂和调味剂以提供可口的口服制剂。这些组合物可以通过加入抗氧化剂如抗坏血酸来保存。

用于本发明的药物组合物也可以是水包油乳液的形式。油相可以是植物油，例如橄榄油或花生油，或矿物油，例如液体石蜡或这些的混合物。合适的乳化剂可以是天然存在的树胶，例如阿拉伯树胶或黄蓍胶，天然存在的磷脂，例如大豆，卵磷脂，以及衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯，例如脱水山梨糖醇单油酸酯，以及所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物，例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。乳液还可含有甜味剂和调味剂。

糖浆和酏剂可以用甜味剂例如甘油、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖配制。此类制剂还可含有缓和剂、防腐剂、调味剂和着色剂。

该化合物也可以栓剂的形式施用，用于直肠或阴道施用。这些组合物可以通过将药物与合适的无刺激性赋形剂混合来制备，所述赋形剂在常温下是固体但在直肠温度或阴道温度下是液体，因此在直肠或阴道中融化以释放药物。这些材料包括可可脂和聚乙二醇。本发明化合物还可以使用本领域技术人员已知的方法透皮施用(参见，例如：Chien；“Transdermal Controlled Systemic Medications”；Marcel Dekker，Inc.；1987.Lipp等人，WO94/04157)。例如，索拉非尼或其药学上可接受的盐在任选含有渗透增强剂的合适挥发性溶剂中的溶液或悬浮液可以与本领域技术人员已知的其他添加剂例如基质材料和杀菌剂组合。灭菌后，可以按照已知的方法将所得混合物配制成剂型。此外，在用乳化剂和水处理时，可以将索拉非尼或其药学上可接受的盐的溶液或悬浮液配制成洗剂或药膏。用于加工透皮递送系统的合适溶剂是本领域技术人员已知的，包括二甲基亚砜，低级醇如乙醇或异丙醇，低级酮如丙酮，低级羧酸酯如乙酸乙酯，极性醚如四氢呋喃，低级烃如己烷，环己烷或苯，或卤代烃如二氯甲烷，氯仿，三氯三氟乙烷或三氯氟乙烷。合适的溶剂还可包括选自低级醇、低级酮、低级羧酸酯、极性醚、低级烃、卤代烃的一种或多种物质的混合物。

用于透皮递送系统的合适的渗透增强材料是本领域技术人员已知的，并且包括，例如，单羟基或多羟基醇，例如乙醇、丙二醇或苄醇，饱和或不饱和脂肪醇，例如月桂醇或鲸蜡醇，饱和或不饱和脂肪酸，如硬脂酸，含有多达24个碳的饱和或不饱和脂肪酸酯，如乙酸己酸、月桂酸、肉豆蔻酸、硬脂酸或棕榈酸的甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基或单甘油酯，或具有至多24个碳的饱和或不饱和二羧酸的二酯，例如己二酸二异丙酯，己二酸二异丁酯，癸二酸二异丙酯，马来酸二异丙酯或富马酸二异丙酯。另外的渗透增强材料包括磷脂酰衍生物如卵磷脂或脑磷脂，萜烯，酰胺，酮，脲及其衍生物，和醚如二甲基异山梨醇和二乙二醇单乙醚。合适的渗透增强制剂还可包括选自单羟基或多羟基醇、饱和或不饱和C8-C18脂肪醇、饱和或不饱和Cg-Cig脂肪酸、含有多达24个碳的饱和或不饱和脂肪酸酯、总共最多24个碳的饱和或不饱和羧酸的二酯、磷脂酰衍生物、萜烯、酰胺、酮、脲及其衍生物和醚的一种或多种物质的混合物。用于透皮递送系统的合适粘合材料是本领域技术人员已知的，包括聚丙烯酸酯，硅氧烷，聚氨酯，嵌段聚合物，苯乙烯-丁二烯共聚物，以及天然和合成橡胶。纤维素醚、衍生的聚乙烯和硅酸盐也可用作基质组分。可加入其它添加剂，如粘性树脂或油，以增加基质的粘度。

本发明还包括用于治疗与FGFR4表达、过表达和/或活动过度有关的过度增殖性疾病特别是哺乳动物癌症的试剂盒。所述试剂盒可包含单一药物制剂，其含有有效剂量的抗FGFR4抗体或所述抗体的功能片段和有效剂量的索拉非尼或其药学上可接受的盐。或者，试剂盒可以在分开的制剂中包含有效剂量的抗FGFR4抗体或所述抗体的功能片段和有效剂量的索拉非尼或其药学上可接受的盐。该试剂盒还可以包括如何将化合物施用至需要治疗的患者的说明书。该试剂盒可用于治疗如下文更详细描述的与FGFR4表达、过表达和/或活动过度相关的不同过度增殖性疾病。该试剂盒特别适用于治疗癌症，包括但不限于结肠癌，结肠直肠癌，前列腺癌，白血病，黑色素瘤，肝细胞癌(HCC)，肾细胞癌(RCC)，头颈癌，胶质瘤，肺癌，胰腺癌癌症，卵巢癌和乳腺癌。

本领域技术人员将理解，本发明的组合的特定施用方法将取决于多种因素，所有这些因素在施用治疗剂时都是常规考虑的因素。然而，还应理解，任何给定患者的具体剂量水平将取决于多种因素，包括所用特定化合物的活性，患者的年龄，患者的体重，患者的一般健康，患者的性别，患者的饮食，施用时间，施用途径，排泄速率，药物组合以及接受治疗的病症的严重程度。本领域技术人员将进一步理解，给予给定数天的抗FGFR4抗体和索拉非尼或其药学上可接受的盐的最佳治疗过程即治疗方式和每日给药次数可由本领域技术人员使用常规治疗试验来确定。

根据待治疗病症的类型和严重程度，可将约1μg/kg至15mg/kg活性成分施用至有需要的患者，例如，通过一次或多次单独施用或通过连续输注。根据上述因素，典型的每日剂量可以为约1μg/kg至约100mg/kg。对于数天或更长时间的重复施用，取决于待治疗的病症，持续治疗直至发生所需的疾病或症状抑制。组合物可以通过任何合适的途径施用，例如通过亲本、皮下、鼻内、血管内、静脉内、动脉内或鞘内注射或输注。可以通过定期评估来监测进展情况。组合物可以局部或全身施用。例如，索拉非尼的有效剂量可以是但不限于每天两次服用400mg(2×200mg片剂)。

根据本发明的组合可以与其他活性剂一起施用。另外的活性剂可以单独施用或作为共同药物组合物的一部分施用。

根据优选的实施方案，本发明的组合治疗可包括施用其他药剂。其他活性剂的实例包括另外的抗肿瘤剂，小分子抑制剂，抗肿瘤剂或化学治疗剂。这种组合在例如抑制异常细胞生长方面是有效的。

目前本领域已知许多抗肿瘤剂。在一个实施方案中，抗肿瘤剂选自治疗性蛋白质，包括但不限于抗体或免疫调节蛋白质。

在另一个实施方案中，抗肿瘤剂选自小分子抑制剂或化学治疗剂，其由以下组成：有丝分裂抑制剂，激酶抑制剂，烷化剂，抗代谢物，嵌入抗体，生长因子抑制剂，细胞周期抑制剂，酶，拓扑异构酶抑制剂，组蛋白脱乙酰酶抑制剂，抗存活剂，生物反应调节剂，抗激素，例如抗雄激素和抗血管生成剂。

当然，上述另外的活性剂不仅可以在共同的药物组合物中与抗FGFR4抗体和/或索拉非尼一起施用，它们也可以分开施用。

在另外的实施方案中，本发明涉及治疗与FGFR4表达、过表达和/或活动过度相关的过度增殖性疾病的方法。

根据本发明，与FGFR4表达、过表达和/或活动过度相关的过度增殖性疾病包括例如癌症。可根据本发明预防和/或治疗的癌症可选自肝细胞癌(HCC)，乳腺癌，结肠癌，结肠直肠癌，白血病，横纹肌肉瘤，前列腺癌，卵巢癌，软组织肉瘤，黑色素瘤，头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，胰腺癌，肾细胞癌(RCC)，肺癌(例如肺腺癌)，神经胶质瘤和其他表达或过表达FGFR4的癌症以及肿瘤转移的形成。本发明的组合被证实在治疗肝细胞癌(HCC)、肾细胞癌(RCC)和甲状腺癌中特别有效。

通过以下附图和实施例更详细地解释本发明。

图例

图1显示了索拉非尼和抗体U4-3在治疗肝细胞癌(HCC)中的组合研究结果。

图2显示了Huh-7模型的分子分析。

实施例

实施例1：

Huh-7肝癌细胞的体内生长抑制

将人肝癌模型HuH-7(Japanese Collection of Research Bioresources，LotNr.：03282011)以每只动物5×10⁶个细胞(悬浮在100μl基质胶中)皮下(s.c)植入6周龄nu/nu无胸腺雌性小鼠(Charles River Laboratories，Japan)的右侧腹。

在HuH-7细胞悬液植入后12至15天在植入肿瘤达到平均肿瘤体积200mm³时进行用于治疗的组分配。用数字卡尺(Mitutoyo Corporation CD-15CX)测量并根据下式计算肿瘤体积：估计的肿瘤体积(mm³)＝1/2×长度×宽度²。每组随机分配10只小鼠。

作为单一治疗剂或共同施用的索拉非尼和FGFR4抑制剂U4-3的治疗在将动物组分配到研究实验组后立即开始。

对于作为单一治疗剂和共同施用的索拉非尼和U4-3的治疗，使用溶剂CremophorEL/乙醇95％/水(12.5：12.5：75)和PBS分别在每个施用时间点新鲜制备索拉非尼和U4-3的给药溶液。对于每个治疗组，将每种化合物的制剂溶液调节至适当浓度的活性化合物，最终给药体积为10ml/kg。

作为单一药剂疗法或与U4-3共同施用的索拉非尼每日口服施用(p.o)，剂量为10和30mg/kg，进行连续10天。

作为单一药剂疗法或与索拉非尼共同施用的U4-3以3、10和25mg/kg的剂量每周两次(2qW)腹膜内(i.p)施用10天的时间。体内观察期在最后一次施用作为单一治疗剂或共同施用的索拉非尼和U4-3后48-72小时终止。

图1A的数据的统计分析

图1B的数据的统计分析

分析项目	统计分析
		U4-3	25mg/kg
vs
		U4-3+索拉非尼	25/10mg/kg
		非配对t检验
P值	<0.0013
		平均值是否显著不同？(P<0.005)	是
单尾或双尾p值？	双尾
		分析项目	统计分析
索拉非尼	10mg/kg
		vs
U4-3+索拉非尼	25/10mg/kg
非配对t检验
		P值	<0.0001
平均值是否显著不同？(P<0.005)	是
		单尾或双尾p值？	双尾

图1C的数据的统计分析

使用最后一个测量日的肿瘤体积进行统计学分析，即每组中有10个值。使用GraphPad Prism Version 5.01用指定的两组进行未配对的双尾t-检验。为了显示组合治疗的结果与单一疗法治疗显著不同，认为对于每个体内研究进行的两个t检验必须产生P<0.05。

序列表

<110> 第一三共株式会社

第一三共欧洲有限公司

<120> 人抗FGFR4抗体和索拉非尼的组合

<130> 61474P WO

<150> EP 16 155 056.1

<151> 2016-02-10

<160> 68

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-1-VH CDRH1

<400> 1

Arg Asn Tyr Met Ser

1 5

<210> 2

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-2-VH CDRH1

<400> 2

Lys Ala Trp Met Ser

1 5

<210> 3

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-3-VH, U4-7-VH和U4-9-VH CDRH1

<400> 3

Asp Tyr Tyr Met Ser

1 5

<210> 4

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-4-VH和U4-8-VH CDRH1

<400> 4

Ser Asn Tyr Met Ser

1 5

<210> 5

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-5-VH CDRH1

<400> 5

Ser Asn Tyr Met Asn

1 5

<210> 6

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-6-VH CDRH1

<400> 6

Asp Tyr Tyr Met Asn

1 5

<210> 7

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-1-VH, U4-2-VH和U4-7-VH CDRH2

<400> 7

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 8

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-3-VH和U4-9-VH CDRH2

<400> 8

Thr Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 9

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-4-VH CDRH2

<400> 9

Leu Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 10

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-5-VH CDRH2

<400> 10

Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 11

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-8-VH CDRH2

<400> 11

Ser Ile Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 12

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-6-VH CDRH2

<400> 12

Ala Ile Gly Gly Ser Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 13

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-1-VH CDRH3

<400> 13

Val Thr Ser Pro Gly Ala Phe Asp Ile

1 5

<210> 14

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-2-VH CDRH3

<400> 14

Leu Tyr Ser Tyr Gly Asp Phe Asp His

1 5

<210> 15

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-3-VH和U4-9-VH CDRH3

<400> 15

Leu Thr Ala Tyr Gly His Val Asp Ser

1 5

<210> 16

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-4-VH CDRH3

<400> 16

Asn Thr Ala Gly Phe Gly Tyr Phe Asp Leu

1 5 10

<210> 17

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-5-VH CDRH3

<400> 17

Lys Ser Arg Asp Phe Trp Arg Gly Pro Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 18

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-8-VH CDRH3

<400> 18

Met Thr Val Phe Gly Ala Ala Thr Leu

1 5

<210> 19

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-6-VH CDRH3

<400> 19

Gly Gly Ser Tyr Phe Gly Tyr

1 5

<210> 20

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-7-VH CDRH3

<400> 20

Leu Ala Thr Tyr Gly Pro Phe Asp Asp

1 5

<210> 21

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-1-VL CDRL1

<400> 21

Ser Gly Gly Thr Ser Asn Ile Gly Thr Asn Thr Val Asn

1 5 10

<210> 22

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-2-VL, U4-4-VL, U4-5-VL, U4-6-VL和U4-8-VL CDRL1

<400> 22

Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Asn

1 5 10

<210> 23

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-3-VL CDRL1

<400> 23

Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Thr Asn Thr Val Asn

1 5 10

<210> 24

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-1-VL, U4-2-VL, U4-4-VL, U4-5-VL和U4-8-VL CDRL2

<400> 24

Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser

1 5

<210> 25

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-3-VL CDRL2

<400> 25

Arg Asn Tyr Gln Arg Pro Ser

1 5

<210> 26

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-6-VL CDRL2

<400> 26

Tyr Asp Asp Leu Leu Pro Ser

1 5

<210> 27

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-7-VL和U4-9-VL CDRL2

<400> 27

Arg Asn Asn Arg Arg Pro Ser

1 5

<210> 28

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-1-VL CDRL3

<400> 28

Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Tyr Val Val

1 5 10

<210> 29

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-2-VL CDRL3

<400> 29

Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Ala Val Val

1 5 10

<210> 30

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-3-VL CDRL3

<400> 30

Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Pro His Val Val

1 5 10

<210> 31

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-4-VL CDRL3

<400> 31

Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Leu Val Val

1 5 10

<210> 32

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-5-VL CDRL3

<400> 32

Ser Thr Trp Asp Asp Ser Leu Arg Gly Trp Val

1 5 10

<210> 33

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-8-VL CDRL3

<400> 33

Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Tyr Trp Val

1 5 10

<210> 34

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-6-VL CDRL3

<400> 34

Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Val

1 5 10

<210> 35

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-7-VL和U4-9-VL CDRL3

<400> 35

Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Pro Asn Val Val

1 5 10

<210> 36

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-1-VH

<400> 36

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agaaactaca tgagttgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180

gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac actgccgtgt attactgtgc gagagttacc 300

tcaccagggg cttttgatat ctggggccaa ggtaccctgg tcaccgtgag ctca 354

<210> 37

<211> 399

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-2-VH

<400> 37

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aaagcctgga tgagctgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180

gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac actgccgtgt attactgtgc gagattatac 300

agctatggtg actttgacca ctggggccaa ggtaccctgg tcaccgtgag ctcagcctcc 360

accaagggcc caagcgtctt ccccctggca ccctcctcc 399

<210> 38

<211> 399

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-3-VH和U4-9-VH

<400> 38

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgagctggat ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaact attagtggta gtggtggtag tacatactac 180

gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac actgccgtgt attactgtgc cagactcacc 300

gcctatggcc acgtagactc ctggggccaa ggtaccctgg tcaccgtgag ctcagcctcc 360

accaagggcc caagcgtctt ccccctggca ccctcctcc 399

<210> 39

<211> 402

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-4-VH

<400> 39

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agcaactaca tgagctgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcactt attagtggta gtggtggtag cacatactac 180

gcagactccg tgcagggccg cttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac actgccgtgt attactgtgc gagaaatacg 300

gctggttttg ggtacttcga tctctggggc caaggtaccc tggtcaccgt gagctcagcc 360

tccaccaagg gcccaagcgt cttccccctg gcaccctcct cc 402

<210> 40

<211> 408

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-5-VH

<400> 40

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agcaactaca tgaactgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactac 180

gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac actgccgtgt attactgtgt gacaaagtct 300

cgagattttt ggcggggtcc ctttgactac tggggccaag gtaccctggt caccgtgagc 360

tcagcctcca ccaagggccc aagcgtcttc cccctggcac cctcctcc 408

<210> 41

<211> 399

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-8-VH

<400> 41

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agcaactaca tgagctgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaagt attagtggta gtggtggtcg cacatactac 180

gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac actgccgtgt attactgtgc gagaatgacg 300

gtctttggag cggcaacgct ctggggccaa ggtaccctgg tcaccgtgag ctcagcctcc 360

accaagggcc caagcgtctt ccccctggca ccctcctcc 399

<210> 42

<211> 393

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-6-VH

<400> 42

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgaactgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg ggctggagtg ggtctcagct attggtggta gtggtgatag aacatactac 180

gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac actgccgtgt attactgtgc tctcggtggg 300

agctacttcg gctactgggg ccaaggtacc ctggtcaccg tgagctcagc ctccaccaag 360

ggcccaagcg tcttccccct ggcaccctcc tcc 393

<210> 43

<211> 399

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-7-VH

<400> 43

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgagctgggt ccgccaggct 120

cccgggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180

gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac actgccgtgt attactgtgc gaccctggcc 300

acctacggac catttgacga ctggggccaa ggtaccctgg tcaccgtgag ctcagcctcc 360

accaagggcc caagcgtctt ccccctggca ccctcctcc 399

<210> 44

<211> 345

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-1-VL

<400> 44

cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60

tcttgttctg gaggcacctc caacatcgga actaatactg taaactggta tcagcagctc 120

ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat aggaataatc agcggccctc aggggtccct 180

gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcatcctccc tggccatcag tgggctccgg 240

tccgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acagcctgaa tggtccctat 300

gtggtattcg gcggaggaac caagctgacg gtcctaggtc agcct 345

<210> 45

<211> 345

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-2-VL

<400> 45

cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60

tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agtaatactg taaactggta tcagcagctc 120

ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat cggaataatc agcggccctc aggggtccct 180

gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240

tccgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acagcctgaa tggtcccgct 300

gtggtattcg gcggaggaac caagctgacg gtcctaggtc agcct 345

<210> 46

<211> 345

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-3-VL

<400> 46

cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60

tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga actaatactg tgaactggta tcagcagctc 120

ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat aggaattatc agagaccctc aggggtccct 180

gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240

tccgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg atagcctgag tggtccacat 300

gtggtattcg gcggaggaac caagctgacg gtcctaggtc agcct 345

<210> 47

<211> 345

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-4-VL

<400> 47

cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60

tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agtaatactg taaactggta tcagcagctc 120

ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat aggaataatc agcggccctc aggggtccct 180

gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240

tccgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acagcctgaa tggtccccta 300

gtggtattcg gcggaggaac caagctgacg gtcctaggtc agcct 345

<210> 48

<211> 339

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-5-VL

<400> 48

cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60

tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agtaatactg taaactggta tcagcagctc 120

ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat aggaataatc agcggccctc aggggtccct 180

gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240

tccgaggatg aggctgatta ttactgttca acgtgggatg acagcctgag aggttgggtg 300

ttcggcggag gaaccaagct gacggtccta ggtcagcct 339

<210> 49

<211> 345

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-8-VL

<400> 49

cagtctgtgc tgactcagcc accctcagca tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60

tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agtaatactg taaactggta tcagcagctc 120

ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat aggaataatc agcggccctc aggggtccct 180

gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240

tccgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acagcctgaa tggtccctat 300

tgggtgttcg gcggaggaac caagctgacg gtcctaggtc agcct 345

<210> 50

<211> 339

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-6-VL

<400> 50

cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60

tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agtaatactg taaactggta tcagcagctc 120

ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat tatgatgatc tgctgccctc aggggtccct 180

gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240

tccgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acagcctgaa tggtccggtg 300

ttcggcggag gaaccaagct gacggtccta ggtcagcct 339

<210> 51

<211> 345

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-7-VL和U4-9-VL

<400> 51

cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60

tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agtaatactg tacactggta tcagcagctc 120

ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat agaaataatc ggcggccctc aggggtccct 180

gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240

tccgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acagcctgag tggtccgaat 300

gtggtattcg gcggaggaac caagctgacg gtcctaggtc agcct 345

<210> 52

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-1-VH

<400> 52

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Val Thr Ser Pro Gly Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 53

<211> 133

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-2-VH

<400> 53

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Ala

20 25 30

Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Tyr Ser Tyr Gly Asp Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser

130

<210> 54

<211> 133

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-3-VH和U4-9-VH

<400> 54

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Thr Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Thr Ala Tyr Gly His Val Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser

130

<210> 55

<211> 134

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-4-VH

<400> 55

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Leu Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asn Thr Ala Gly Phe Gly Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser

130

<210> 56

<211> 136

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-5-VH

<400> 56

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn

20 25 30

Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Thr Lys Ser Arg Asp Phe Trp Arg Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser

130 135

<210> 57

<211> 133

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-8-VH

<400> 57

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Met Thr Val Phe Gly Ala Ala Thr Leu Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser

130

<210> 58

<211> 131

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-6-VH

<400> 58

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Gly Gly Ser Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Leu Gly Gly Ser Tyr Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Ser Ser

130

<210> 59

<211> 133

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-7-VH

<400> 59

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Leu Ala Thr Tyr Gly Pro Phe Asp Asp Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser

130

<210> 60

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-1-VL

<400> 60

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Thr Ser Asn Ile Gly Thr Asn

20 25 30

Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ser Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Asn Gly Pro Tyr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

Gly Gln Pro

115

<210> 61

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-2-VL

<400> 61

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Asn Gly Pro Ala Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

Gly Gln Pro

115

<210> 62

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-3-VL

<400> 62

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Thr Asn

20 25 30

Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Arg Asn Tyr Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Ser Gly Pro His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

Gly Gln Pro

115

<210> 63

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-4-VL

<400> 63

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Asn Gly Pro Leu Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

Gly Gln Pro

115

<210> 64

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-5-VL

<400> 64

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Thr Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Arg Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln

100 105 110

Pro

<210> 65

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-8-VL

<400> 65

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Asn Gly Pro Tyr Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

Gly Gln Pro

115

<210> 66

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-6-VL

<400> 66

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Leu Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln

100 105 110

Pro

<210> 67

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-7-VL和U4-9-VL

<400> 67

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

Thr Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Arg Asn Asn Arg Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Ser Gly Pro Asn Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

Gly Gln Pro

115

<210> 68

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> U4-7和U4-9 CDRL1

<400> 68

Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val His

1 5 10

Claims (11)

1.用于治疗肝细胞癌的以下（i）和（ii）的组合：

（i）人抗FGFR4抗体或所述抗体的功能片段，和

（ii）索拉非尼或其药学上可接受的盐，

其中所述人抗FGFR4抗体或所述抗体的功能片段包含：

重链，所述重链包含：

（a）CDRH1，其由SEQ ID NO：3所示的序列构成，

（b）CDRH2，其由SEQ ID NO：8所示的序列构成，和

（c）CDRH3，其由SEQ ID NO：15所示的序列构成；及

轻链，所述轻链包含：

（d）CDRL1，其由SEQ ID NO：23所示的序列构成，

（e）CDRL2，其由SEQ ID NO：25所示的序列构成，和

（f）CDRL3，其由SEQ ID NO：30所示的序列构成。

2.权利要求1的组合，其中人抗FGFR4抗体或所述抗体的功能片段与FGFR4的Ig样结构域2结合。

3.权利要求1的组合，其中人抗FGFR4抗体或所述抗体的功能片段与包含氨基酸序列RYNY的顺序表位结合。

4.权利要求1的组合，其中人抗FGFR4抗体或所述抗体的功能片段包含：

SEQ ID NO: 54所示的重链可变区、及

SEQ ID NO: 62所示的轻链可变区。

5.权利要求1的组合，其中人抗FGFR4抗体或所述抗体的功能片段是Fab片段，Fab'片段，F（ab'）片段，Fv片段，双抗体或单链抗体分子。

6.权利要求1的组合，其中人抗FGFR4抗体或所述抗体的功能片段是IgG1-，IgG2-，IgG3-或IgG4-型。

7.权利要求1的组合，其中所述用途与化学疗法和/或放射疗法组合。

8.权利要求1的组合，其中所述人抗FGFR4抗体或所述抗体的功能片段与标记基团和/或效应子基团偶联。

9.权利要求1的组合，其中所述人抗FGFR4抗体或所述抗体的功能片段与治疗性基团偶联。

10.权利要求1的组合，其中所述人抗FGFR4抗体或所述抗体的功能片段与IL-2融合。

11.一种试剂盒，其包含：

（i）权利要求1～10中任一项所定义的人抗FGFR4抗体或所述抗体的功能片段、和

（ii）索拉非尼或其药学上可接受的盐。

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