CN109055549B - Trerna1基因在预测、提高肝癌药物索拉菲尼敏感性中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物技术领域，特别是涉及医学诊断领域，更为具体的说是涉及TRERNA1基因在预测、提高肝癌药物索拉菲尼敏感性中的应用，可以通过对肝细胞肝癌预后预测和肝癌化疗耐药评估进行标记，并利用RNA原位杂交技术或者qPCR检测TRERNA1基因的表达水平，从而获得预测肝细胞肝癌预后和化疗耐药的情况，且TRERNA1基因的引入方式简单，整个预测评估简便易行，可行性高。

Description

TRERNA1基因在预测、提高肝癌药物索拉菲尼敏感性中的应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别是涉及医学诊断领域，更为具体的说是涉及TRERNA1基因在预测、提高肝细胞癌治疗药物索拉菲尼化疗敏感性中的应用。

背景技术

肝癌即肝脏恶性肿瘤，可分为原发性和继发性两大类。原发性肝脏恶性肿瘤起源于肝脏的上皮或间叶组织，前者称为原发性肝癌，是我国高发的，危害极大的恶性肿瘤；后者称为肉瘤，与原发性肝癌相比较较为少见。

原发性肝癌的病因及确切分子机制尚不完全清楚，目前认为其发病是多因素、多步骤的复杂过程，受环境和因此双重因素影响。流行病学及实验研究资料表明，乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)感染、黄曲霉素、饮水污染、酒精、肝硬化、性激素、亚硝胺类物质、微量元素等都与肝癌发病相关。

目前肝癌已经严重危害我国国民健康。但是到目前为止，尚未发现较好的靶向药物，同时由于肝癌是一个异质性很高的疾病，不同患者的病因不同，诊断和治疗的方法也存在差别。特别是基于不同的遗传基础，其化疗效果具有显著性差异。那么如何能够预先获知相关化疗药物对于特定患者的效果，哪些患者对于化疗药物具有抵抗，哪些患者对化疗药物不敏感，对于术后患者的治疗方案制定以及化疗药物的选择具有重要的意义。

但是，目前国内外尚没有这样的疗效预测手段和方法，这使得临床上术后治疗方案，特别是化疗治疗方案的准确性和有效性大大降低。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，针对肝细胞癌的化疗药物索拉菲尼提供一种可以预测其使用后化疗效果的方法，从而能够在治疗方案制定时通过该方法预测化疗效果，从而给出更加合理的治疗方案，合理应用化疗药物，避免无效化疗，提高有效治愈率。

为了解决上述的技术问题，本发明公开了TRERNA1基因在预测肝细胞癌治疗药物索拉菲尼化疗敏感性中的应用。当TRERNA1高表达时，细胞对索拉菲尼敏感度低；当TRERNA1低表达或者不表达时，细胞对索拉菲尼敏感度高。

这里所说的低表达是指阴性、假阳性和弱阳性；高表达是指阳性和强阳性。

由于肝细胞中TRERNA1基因的表达水平与索拉菲尼化疗药物的敏感性相关，也就是说，肝癌细胞TRERNA1基因的表达水平与索拉菲尼化疗药物的治疗效果有关。因此可以通过检测患者TRERNA1基因的表达水平，预测索拉菲尼化疗药物的有效性，从而指导临床肝细胞肝癌化疗用药，及时准确制定个性化的治疗方案，提高疗效。因此将TRERNA1基因检测应用于肝细胞肝癌预后判定与化疗耐药评估，可以精确地预测肝细胞肝癌预后，并且可以基于预测的预后有效地建立最佳的个体治疗方案，以显著减少由肝细胞肝癌引起的死亡。

优选的，TRERNA1基因的表达量通过对TRERNA1具有检测特异性的探针或PCR引物作为检测试剂检测。

并且进一步优选的，本发明中TRERNA1基因表达水平的测定方法为RNA原位杂交检测方法，其检测试剂由地高辛标记的具有TRERNA1检测特异性的探针、生物素化地高辛鼠抗，胃蛋白酶K和组化试剂盒DAB显色剂组成。

并且进一步的，本发明还公开了用于检测TRERNA1基因表达量的试剂盒，该试剂盒中包含有检测生物样品中检测TRERNA1表达量的试剂，用于该检测的生物样品为福尔马林固定和/或石蜡包埋的肝细胞肝癌组织。

更为优选的，在本发明中还公开了利用这一试剂盒进行索拉菲尼细胞敏感度预测，并制定治疗方案的方法包括以下步骤：

(a)检测生物样品中的TRERNA1表达量，

(b)根据(a)中检测到的TRERNA1表达量将结果分为低表达(或者为不表达)和高表达两种，(1)对于TRERNA1低表达或者不表达患者：索拉菲尼化疗时要密切随访病人，及时复查相应的肿瘤指征及TRERNA1的表达水平，合理调整化疗的剂量时间；(2)对于TRERNA1高表达患者：较不/低表达患者预后不好，对索拉非尼易耐药，故一旦发现控制效果不明显，应及时更换其他化疗药物，或者对其进行分子靶向治疗。

这里所说的低表达是指阴性、假阳性和弱阳性，高表达是指阳性和强阳性。

同时，本发明还公开了TRERNA1基因在提高肝细胞癌治疗药物索拉菲尼化疗敏感性中的应用，通过靶向抑制TRERNA1基因表达提高肝细胞癌治疗药物索拉菲尼化疗敏感性。

进一步优选的，通过抑制剂抑制TRERNA1基因在细胞中的表达，该抑制剂的作用靶点为TRERNA1基因。

采用本发明公开的技术方案后，可以通过对肝细胞肝癌预后预测和肝癌化疗耐药评估进行标记，并利用RNA原位杂交技术检测TRERNA1基因的表达水平，从而获得预测肝细胞肝癌预后和化疗耐药的情况，且TRERNA1基因的引入方式简单，整个预测评估简便易行，可行性高。

附图说明

图1为TRERNA1基因表达与HCC细胞索拉菲尼药物敏感性实验结果示意图。

具体实施方式

为了更好的理解本发明，下面我们结合具体的实施例和附图对本发明进行进一步的阐述，但值得注意的是本发明的实施不仅限于此。

本发明所用试剂和原料均市售可得或者可以按照文献方法制备。本发明实施例中未注明的具体条件的试验方法均按照常规条件，或者按照制造厂商所建议的条件。

实施例1TRERNA1表达量与索拉非尼耐药的CCK-8验证方法

培养肝癌患者肿瘤组织不同部位的肿瘤细胞，选择不同浓度索拉非尼药物进行试验。

1、在96孔板的各孔中分别配置100μl的患者肝癌组织细胞悬液。然后将培养板在培养箱预培养24小时(37℃，5％CO₂)。

2、向培养板的孔内分别加入10μl不同浓度的索拉非尼药物(浓度分别为1.25μM、2.5μM、5μM、10μM、20μM、40μM)。

3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如：6、12、24或48小时)我们分别对不同的孵育时间进行检测，发现孵育时间与最终结果之间没有关联性，因此，下面以孵育12小时为例进行说明。

4、将孵育后的培养板取出，分别向每个孔内加入10μl CCK-8(cell counting kit8)溶液。

5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

6、用酶标仪测定各孔内悬液在450nm处的吸光度。7、按照下式计算细胞活性：

细胞活力(cell viability)*(％)＝[A(加药)-A(空白)]/[A(0加药)-A(空白)]×100；

其中：A(加药)：具有细胞、CCK8溶液和药物溶液的孔的吸光度；

A(空白)：具有培养基和CCK8溶液而没有细胞的孔的吸光度；

A(0加药)：具有细胞、CCK8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度；

*细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力。

实验结果如图1所示。结果显示：抑制TreRNA1表达后，可以提高HCC(肝癌)细胞对于索拉菲尼药物的敏感性。与之相反，TRERNA1过表达后，可以降低HCC细胞对索拉菲尼药物的敏感性。

因此，实验结果表明TRERNA1的表达量变化与索拉非尼化疗药物的敏感性相关，可以作为一种标志性检测基因作为索拉非尼药物的化疗效果参考应用。

以上所述是本发明的具体实施方式。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。

Claims (1)

1.用于检测TRERNA1基因表达量的试剂盒，该试剂盒中包含有检测生物样品中TRERNA1表达量的探针、引物试剂，用于该检测的生物样品为福尔马林固定和/或石蜡包埋或冰冻切片、液氮保存的肝细胞癌组织。

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