CN109022579A - 染色体1p/19q杂合性缺失的检测方法、试剂盒及引物组 - Google Patents

染色体1p/19q杂合性缺失的检测方法、试剂盒及引物组 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种染色体1p/19q杂合性缺失的检测方法、试剂盒及引物组。该检测方法基于MassArray质谱平台进行，通过对脑胶质瘤染色体1p/19q多区域上选定多个SNP位点，并通过对多个SNP位点进行筛选、引物扩增等步骤，最终通过MassArray质谱平台进行检测分析获得染色体1p/19q缺失情况。根据本发明的一种染色体1p/19q杂合性缺失的检测方法、试剂盒及引物组，操作简单、耗时短、准确性高、价格便宜，适于在临床中推广。

Description

染色体1p/19q杂合性缺失的检测方法、试剂盒及引物组
技术领域
本发明属于医疗检测技术领域，具体涉及一种染色体1p/19q杂合性缺失的检测方法、试剂盒及引物组。
背景技术
脑胶质瘤是最常见的原发性脑肿瘤，发病率为(5～8)/(1x106)，5年病死率仅次于胰腺癌和肺癌，是一种高病死率的恶性肿瘤。虽然目前治疗手段已有了长足的进步，但是患者的中位生存期仍小于15个月，这一疾病在我国造成了巨大的社会经济及家庭负担。近年来，脑胶质瘤的分子病理研究取得了重大进展，已发现了一系列有助于脑胶质瘤临床诊断和预后判断的分子标志物，例如IDH1/2基因突变，1p/19q杂合性缺失突变(loss ofheterozygosity，LOH)，MGMT启动子甲基化等。染色体1p/19q杂合性缺失是指细胞中一条1号染色体短臂或/和一条19号染色体长臂发生缺失。目前认为1p/19q杂合性缺失是少突胶质细胞瘤的分子特征，是其诊断性分子标志物。通常对疑似少突胶质细胞瘤或混合性少突星形细胞瘤均应进行1p/19q杂合性缺失的检测，从而协助组织学的诊断。1p/19q杂合性缺失可以帮助区分混合性少突星形细胞瘤更倾向于少突还是星形，这对于治疗选择有一定的意义。存在1p/19q杂合性缺失的少突胶质细胞瘤生长速度较慢，并对化疗敏感。目前治疗指南对少突胶质细胞瘤均推荐检测1p/19q杂合性缺失的状态。
对于脑胶质瘤的1p/19q杂合性缺失突变，临床上常用的检测方法主要有荧光原位杂交(FISH)、基于杂合性缺失分析的聚合酶链式反应(PCR-LOH)、阵列比较基因组杂交(CGH)。《中国脑胶质分子诊疗指南》推荐FISH作为检测1p/19q杂合性缺失的方法，虽然FISH技术可通过荧光信号直观地显示1p/19q的缺失状态，但是探针结合区域的局限性使得小范围的缺失可能检测不出，而且FISH实验操作比较复杂，对操作和结果分析人员的经验要求非常高，检测周期长、配套仪器和试剂价格昂贵。PCR-LOH对1p和19q上的多个微卫星区域进行扩增后，需通过变性聚丙烯酰胺电泳或变性高效液相色谱等方法来检测扩增产物，整个实验流程操作复杂、容易发生污染、结果分析掺杂因素多，不利于临床使用。CGH需使用进口的基因芯片，配套的仪器和试剂耗材成本较高。因此，目前对于胶质细胞瘤的1p/19q杂合性缺失突变检测，缺乏一种操作简单、耗时短、准确性高、价格便宜的检测方法。
发明内容
因此，本发明要解决的技术问题在于提供一种染色体1p/19q杂合性缺失的检测方法、试剂盒及引物组，该方法基于MassArray质谱平台对脑胶质瘤染色体1p/19q杂合性缺失进行检测，操作简单、耗时短、准确性高、价格便宜，适于在临床中推广。
为了解决上述问题，本发明提供一种染色体1p/19q杂合性缺失的检测方法，基于MassArray质谱平台进行，其通过检测1号染色体短臂1p的第一区域及具有19号染色体长臂19q的第二区域的SNP位点完成。
具体的，包括以下步骤：
a.获取脑胶质瘤具有1号染色体短臂1p的第一区域及具有19号染色体长臂19q的第二区域；
b.针对所述第一区域筛选M个SNP位点，针对所述第二区域筛选N个SNP位点；
c.再次分别筛选所述M个SNP位点及N个SNP位点，分别获得M1个有效SNP位点及N1个有效SNP位点；
d.针对所述M1个有效SNP位点及N1个有效SNP位点设计最优引物体系，所述最优引物体系包括扩增引物及单碱基延伸引物；
e.采用所述扩增引物与待测DNA样品进行PCR扩增反应，获得目标SNP位点的PCR产物；
f.采用碱性磷酸酶消除上述PCR产物中剩余的dNTP，获得消化后的产物；
g.采用单碱基延伸引物将所述消化后的产物进行单碱基延伸反应，获得延伸产物；
h.采用脱盐树脂纯化所述延伸产物；
i.基于MassArray质谱对所述延伸产物进行检测分析，获得染色体1p/19q缺失情况。
优选地，所述扩增引物包括PCR上游引物、PCR下游引物，所述PCR上游引物与所述PCR下游引物分别依次对应，且与所述M1个有效SNP位点及N1个有效SNP位点分别依次对应；所述单碱基延伸引物与所述M1个有效SNP位点及N1个有效SNP位点分别依次对应。
优选地，将(M1+N1)个有效SNP位点分为K组，将所述d步骤中的扩增引物、单碱基延伸序列与所述(M1+N1)个有效SNP位点对应分为K组，将所述K组中每个所述有效SNP位点对应的PCR上游引物及PCR下游引物等摩尔混合，获得扩增引物混合液，K组扩增引物混合液的最终工作浓度为0.5μM。
优选地，所述M与N之和共计为146，所述M1为23，所述N1为12，所述K为3，针对1号染色体短臂(1p)的23个有效位点分别为rs2038366，rs59317557，rs3737577，rs10875362，rs2031958，rs859104，rs933032，rs2455638，rs212961，rs79887225，rs586057，rs624971，rs16866144，rs1329113，rs11247639，rs4970520，rs2473287，rs7512426，rs809972，rs797257，rs4908744，rs6426368，rs9426469，针对19号染色体长臂(19q)的12个有效位点分别为rs67421541，rs12611404，rs10407280，rs4803502，rs1674139，rs6070，rs1807277，rs1457093，rs8108384，rs11666952，rs36624，rs437229；其中rs933032，rs4970520，rs1329113，rs586057，rs624971，rs2038366，rs8108384，rs6426368，rs1457093，rs7512426，rs67421541，rs36624，rs79887225为第一组，rs797257，rs2031958，rs16866144，rs10407280，rs12611404，rs10875362，rs212961，rs437229，rs2473287，rs1674139，rs859104，rs11666952，rs11247639，rs4908744，rs9426469，rs4803502为第二组，rs3737577，rs6070，rs809972，rs1807277，rs2455638，rs59317557为第三组。
优选地，所述扩增引物包括PCR上游引物及PCR下游引物，其中，所述PCR上游引物序分别如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.35所示；所述PCR下游引物序列分别如SEQ ID NO.36至SEQ ID NO.70所示；所述单碱基延伸引物序列分别如SEQ ID NO.71至SEQ ID NO.105所示。
优选地，所述c步骤中再次筛选所述M个SNP位点及N个SNP位点，通过引物测试实验进行，淘汰检测失败的SNP位点及检测成功但最小等位基因频率MAF＜0.3的SNP位点，获得所述M1个有效SNP位点及N1个有效SNP位点。
优选地，所述i步骤中，MassArray质谱对所述延伸产物进行检测分析，通过对肿瘤样品和正常样品杂合位点的峰面积变化进行分析，通过计算式(N2/N1)/(N2/N1+T2/T1)的计算所得值A的大小进行染色体1p/19q是否存在缺失情况确认，式中，N2/N1为血液基因组DNA检测两杂合峰面积比，T2/T1为肿瘤组织基因组DNA检测两个杂合峰面积比，当所述A＜0.3或者A＞0.7时则有杂合缺失，当所述0.3≤A≤0.7时则没有发生杂合缺失。
本发明还提供一种用于脑胶质瘤检测的试剂盒，所述试剂盒包括检测染色体1p/19q的杂合性缺失的针对1号染色体短臂1p的SNP位点rs2038366，rs59317557，rs3737577，rs10875362，rs2031958，rs859104，rs933032，rs2455638，rs212961，rs79887225，rs586057，rs624971，rs16866144，rs1329113，rs11247639，rs4970520，rs2473287，rs7512426，rs809972，rs797257，rs4908744，rs6426368和rs9426469的扩增引物和单碱基延伸引物；以及针对19号染色体长臂19q的12个有效位点：rs67421541，rs12611404，rs10407280，rs4803502，rs1674139，rs6070，rs1807277，rs1457093，rs8108384，rs11666952，rs36624和rs437229的扩增引物和单碱基延伸引物。
优选地，所述扩增引物包括PCR上游引物及PCR下游引物，其中，所述PCR上游引物序列分别如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.35所示；所述PCR下游引物序列分别如SEQ ID NO.36至SEQ ID NO.70所示；所述单碱基延伸引物序列分别如SEQ ID NO.71至SEQ ID NO.105所示。
本发明还提供一种引物组，包括扩增引物和单碱基延伸引物，所述扩增引物包括PCR上游引物及PCR下游引物，所述PCR上游引物序列分别如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.35所示；所述PCR下游引物序列分别如SEQ ID NO.36至SEQ ID NO.70所示；所述单碱基延伸引物序列分别如SEQ ID NO.71至SEQ ID NO.105所示。
本发明还提供一种所述引物组用于制备检测脑胶质瘤的试剂盒的应用。
本发明提供的一种染色体1p/19q杂合性缺失的检测方法、试剂盒及引物组，无需采用现有技术中FISH、PCR-LOH、CGH等较为复杂或者成本较高的方法即可以对胶质细胞瘤的1p/19q杂合性缺失突变进行检测，由于该方法基于MassArray质谱平台进行，在1p和19q多区域上设定多个SNP位点，既可以共同分析1p和19q联合缺失的情况，又可以分析1p或19q单独缺失的情况，同时还可以分析1p或19q上的单独区域的缺失情况，能在基因水平上更精确的对临床样品定位1p和19q的缺失机制，更有助于临床样品的诊断及后续临床治疗方法的建立；操作简单，结果判读方便，不需要专业的专家进行解读，也不需要生物信息学分析；价格低廉，仅需要少量的孔即可完成多个SNP位点检测，成本比其它的SNP分型技术，如芯片法、荧光定量PCR等，要少至少一半以上；通量高，一天可操作8张芯片，每张芯片可检测64份样品，即一天可检测512份样品；准确性高，可达99.7％；特别适用于中国人，适于在临床中的推广。
附图说明
图1为FISH结果为阳性(即有1p/19q杂合性缺失)的19号正常样品SNP位点为rs6070的质谱峰图；
图2为FISH结果为阳性(即有1p/19q杂合性缺失)的19号肿瘤样品SNP位点为rs6070的质谱峰图；
图3为FISH结果为阳性(即有1p/19q杂合性缺失)的19号正常样品SNP位点为rs586057的质谱峰图；
图4为FISH结果为阳性(即有1p/19q杂合性缺失)的19号肿瘤样品SNP位点为rs586057的质谱峰图；
图5为FISH结果为阳性(即有1p/19q杂合性缺失)的19号正常样品SNP位点为rs624971的质谱峰图；
图6为FISH结果为阳性(即有1p/19q杂合性缺失)的19号肿瘤样品SNP位点为rs624971的质谱峰图；
图7为FISH结果为阳性(即有1p/19q杂合性缺失)的19号正常样品SNP位点为rs12611404的质谱峰图；
图8为FISH结果为阳性(即有1p/19q杂合性缺失)的19号肿瘤样品SNP位点为rs12611404的质谱峰图；
图9为FISH结果为阴性(即无1p/19q杂合性缺失)的32号正常样品SNP位点为rs1807277的质谱峰图；
图10为FISH结果为阴性(即无1p/19q杂合性缺失)的32号肿瘤样品SNP位点为rs1807277的质谱峰图；
图11为FISH结果为阴性(即无1p/19q杂合性缺失)的32号正常样品SNP位点为rs203836的质谱峰图；
图12为FISH结果为阴性(即无1p/19q杂合性缺失)的32号肿瘤样品SNP位点为rs203836的质谱峰图；
图13为FISH结果为阴性(即无1p/19q杂合性缺失)的32号正常样品SNP位点为rs3737577的质谱峰图；
图14为FISH结果为阴性(即无1p/19q杂合性缺失)的32号肿瘤样品SNP位点为rs3737577的质谱峰图；
图15为FISH结果为阴性(即无1p/19q杂合性缺失)的32号正常样品SNP位点为rs67421541的质谱峰图；
图16为FISH结果为阴性(即无1p/19q杂合性缺失)的32号肿瘤样品SNP位点为rs67421541的质谱峰图。
具体实施方式
结合图1至16所示，根据本发明的实施例，提供一种基于MassArray质谱平台的染色体1p/19q杂合性缺失的检测方法。
以下结合具体实例进行阐述。
实施例1.1p/19q有意义检测SNP位点和引物的筛选优化
筛选出用于检测中国人的脑胶质瘤染色体1p/19q杂合性缺失的SNP位点，这些SNP位覆盖于1p和19q染色体的多个区域(如上述的第一区域、第二区域)，在中国人群中，最小等位基因频率即不常见的等位基因发生频率，MAF值≥0.3。
首先，基于理论分析，在染色体1p和19q上初筛了146个SNP位点(也即M+N＝146)，随后，对103例中国人的血液基因组样品进行检测，最终确认能够用于后续检测及分析的35个有效位点(也即M1+N1＝35)，其中染色体1p上筛选了23个SNP位点(M1)，染色体19q上筛选了12个SNP位点(N1)，位点信息如下表1所示。
表1、染色体1p和19q上筛选的SNP位点
针对上述初筛的35个SNP位点进行扩增引物和单碱基延伸引物的优化设计，针对相同SNP位点设计多套引物，并分到3个(对应上述的K)组里(与各SNP位点的对应关系见下表)，然后对103例中国人血液基因组样品进行引物测试实验，每次测试检测失败的位点再进行调整参数设计，检测成功但MAF值＜0.3的SNP位点淘汰，共进行5轮测试，最终确定针对35个SNP位点的最优引物体系，其特异性好，灵敏度高，具体引物序列如下表2所示。
表2、PCR扩增引物序列
单碱基延伸引物序列如下表3：
表3、单碱基延伸引物序列
由上表可知，扩增引物被分为3组，各组中所含的SNP位点的PCR上游引物与PCR下游引物等摩尔混合，得到相应的扩增引物混合液，每组扩增引物混合液的最终工作浓度为0.5μM，同时将单碱基延伸引物也按相应的SNP位点分为3组。
以待测样本DNA为模板，采用本发明所述试剂盒进行检测。每个样品需要检测一份肿瘤样品和一份正常样品，利用上述的扩增引物分别进行PCR扩增反应，获得目标位点的PCR产物。
用碱性磷酸酶消除上述PCR产物中剩余的dNTP，获得消化后的产物；用单碱基延伸引物将所述消化后的产物进行单碱基延伸反应，获得延伸产物；之后采用脱盐树脂纯化所述延伸产物。
最后采用MassArray质谱对所述延伸产物进行检测，通过对肿瘤样品和正常样品杂合位点的峰面积变化进行分析，并通过计算式(N2/N1)/(N2/N1+T2/T1)的计算所得值A的大小进行染色体1p/19q是否存在缺失情况确认，当所述A＜0.3或者A＞0.7则有杂合缺失，当所述0.3≤A≤0.7则没有发生杂合缺失。经验证试验确认上述体系的科学有效性，制备成相应检测试剂盒，备用。
实施例2.利用本发明试剂盒对6例临床样本进行检测
采用本发明制备的试剂盒，对6例中国人脑胶质瘤样品进行检测，每例样品均有一份肿瘤FFPE样品和一份正常FFPE样品。其中4例为FISH检测结果为有1p/19q杂合缺失，2例FISH检测结果为无1p/19q缺失，具体操作步骤如下。
1)样品提取：提取上述6组，共计12份样品的基因组DNA，提取试剂盒为QIAamp DNAFFPE Tissue Kit(Qiagen)，将基因组DNA浓度调整至20ng/μL。每份样品各转移3份到384孔板的3个孔里，每份转2μL。
2)PCR扩增：按下面表4进行体系配制，将配制好的体系加入到上述转好样品的384孔里，每个孔3μL。
表4、PCR反应体系：
3)碱性磷酸酶处理：按下面表5进行体系配制，将配制好的体系加入到上述扩增完的PCR产物里，每个孔2μL。
表5、碱性磷酸酶溶液体系
4)单碱基延伸：按下面表6进行体系配制，将配制好的体系加入到上述消化好的产物里，每个孔2μL。
表6、单碱基延伸溶液体系
5)树脂纯化：将上述反应完成的384孔板每孔加16μL RNase-free Water，再加入6mg的阳离子交换树脂，将产物中的阳离子去除。
6)质谱实验：将上述纯化好的产物通过MassArray质谱系统进行质谱检测。检测结果使用Typer4.0软件进行分析，将正常样品检测结果为杂合分型的SNP位点用于结果分析。
质谱检测结果：通过对6例中国人的脑胶质瘤样品的检测并计算，结果如下表7所示。4例FISH结果为阳性的样品19号、21号、29号、34号。2例FISH结果为阴性的样品27号、32号。每个样品在1p和19q染色体上均至少有1个SNP位点是杂合，并且所有纳入计算的SNP位点结果值均符合要求范围。即FISH结果为阳性的样品，质谱检测并计算得到的结果均＜0.3，或＞0.7。FISH结果为阴性的样品，质谱检测并计算得到的结果均在0.3～0.7的范围内。6例样品1p/19q的结果，质谱方法检测与FISH结果一致。
表7、针对临床样本的Massarray检测结果
上表中，“/”表示该正常样品的该位点结果为纯合子，不用于结果分析。
图1至图8是19号FISH结果为阳性(即有1p/19q杂合性缺失)的部分SNP位点的质谱峰图，图9至图16是32号FISH结果为阴性(即无1p/19q杂合性缺失)的部分SNP位点的质谱峰图。
由以上结果可知，本发明设计的检测位点能有效覆盖等检测的染色体1p/19q的检测需求，且计算方案能有效的对1p/19q缺失情况进行评价，与目前的检测1p/19q FISH方法的一致率为100％，能够应用于中国人临床脑胶质瘤分子标记1p/19q的缺失检测，适于广泛推广使用。
本领域的技术人员容易理解的是，在不冲突的前提下，上述各有利方式可以自由地组合、叠加。
以上仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。

Claims (12)

1.一种染色体1p/19q杂合性缺失的检测方法，基于MassArray质谱平台进行，其特征在于，通过检测1号染色体短臂1p的第一区域及具有19号染色体长臂19q的第二区域的SNP位点完成。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
a.获取脑胶质瘤具有1号染色体短臂1p的第一区域及具有19号染色体长臂19q的第二区域；
b.针对所述第一区域筛选M个SNP位点，针对所述第二区域筛选N个SNP位点；
c.再次分别筛选所述M个SNP位点及N个SNP位点，分别获得M1个有效SNP位点及N1个有效SNP位点；
d.针对所述M1个有效SNP位点及N1个有效SNP位点设计最优引物体系，所述最优引物体系包括扩增引物及单碱基延伸引物；
e.采用所述扩增引物与待测DNA样品进行PCR扩增反应，获得目标SNP位点的PCR产物；
f.采用碱性磷酸酶消除上述PCR产物中剩余的dNTP，获得消化后的产物；
g.采用单碱基延伸引物将所述消化后的产物进行单碱基延伸反应，获得延伸产物；
h.采用脱盐树脂纯化所述延伸产物；
i.基于MassArray质谱对所述延伸产物进行检测分析，获得染色体1p/19q缺失情况。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述扩增引物包括PCR上游引物、PCR下游引物，所述PCR上游引物与所述PCR下游引物分别依次对应，且与所述M1个有效SNP位点及N1个有效SNP位点分别依次对应；所述单碱基延伸引物与所述M1个有效SNP位点及N1个有效SNP位点分别依次对应。
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，将(M1+N1)个有效SNP位点分为K组，将所述d步骤中的扩增引物、单碱基延伸引物与所述(MI+N1)个有效SNP位点对应分为K组，将所述K组中每个所述有效SNP位点对应的PCR上游引物及PCR下游引物等摩尔混合，获得扩增引物混合液，K组扩增引物混合液的最终工作浓度为0.5μM。
5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述M与N之和共计为146，所述M1为23，所述N1为12，所述K为3，针对1号染色体短臂1p的23个有效位点分别为rs2038366，rs59317557，rs3737577，rs10875362，rs2031958，rs859104，rs933032，rs2455638，rs212961，rs79887225，rs586057，rs624971，rs16866144，rs1329113，rs11247639，rs4970520，rs2473287，rs7512426，rs809972，rs797257，rs4908744，rs6426368，rs9426469，针对19号染色体长臂19q的12个有效位点分别为rs67421541，rs12611404，rs10407280，rs4803502，rs1674139，rs6070，rs1807277，rs1457093，rs8108384，rs11666952，rs36624，rs437229；其中rs933032，rs4970520，rs1329113，rs586057，rs624971，rs2038366，rs8108384，rs6426368，rs1457093，rs7512426，rs67421541，rs36624，rs79887225为第一组，rs797257，rs2031958，rs16866144，rs10407280，rs12611404，rs10875362，rs212961，rs437229，rs2473287，rs1674139，rs859104，rs11666952，rs11247639，rs4908744，rs9426469，rs4803502为第二组，rs3737577，rs6070，rs809972，rs1807277，rs2455638，rs59317557为第三组。
6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述PCR上游引物序列分别如SEQ IDNO.1至SEQ ID NO.35所示；所述PCR下游引物序列分别如SEQ ID NO.36至SEQ ID NO.70所示；所述单碱基延伸引物序列分别如SEQ ID NO.71至SEQ ID NO.105所示。
7.根据权利要求1-6任一所述的检测方法，其特征在于，所述c步骤中再次筛选所述M个SNP位点及N个SNP位点，通过引物测试实验进行，检测失败的SNP位点，进行多轮引物序列优化，淘汰检测成功但最小等位基因频率MAF＜0.3的SNP位点，获得所述M1个有效SNP位点及N1个有效SNP位点。
8.根据权利要求1-6任一所述的检测方法，其特征在于，所述i步骤中，MassArray质谱对所述延伸产物进行检测分析，通过对肿瘤样品和正常样品杂合位点的峰面积变化进行分析，通过计算式(N2/N1)/(N2/N1+T2/T1)的计算所得值A的大小进行染色体1p/19q是否存在缺失情况确认，式中，N2/N1为血液基因组DNA检测两杂合峰面积比，T2/T1为肿瘤组织基因组DNA检测两个杂合峰面积比，当所述A＜0.3或者A＞0.7时则有杂合缺失，当所述0.3≤A≤0.7时则没有发生杂合缺失。
9.一种用于脑胶质瘤检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测染色体1p/19q的杂合性缺失的针对1号染色体短臂1p的SNP位点rs2038366，rs59317557，rs3737577，rs10875362，rs2031958，rs859104，rs933032，rs2455638，rs212961，rs79887225，rs586057，rs624971，rs16866144，rs1329113，rs11247039，rs4970520，rs2473287，rs7512426，rs809972，rs797257，rs4908744，rs6426368和rs9426469的扩增引物和单碱基延伸引物；以及针对19号染色体长臂19q的12个有效位点：rs67421541，rs12611404，rs10407280，rs4803502，rs1674139，rs6070，rs1807277，rs1457093，rs8108384，rs11666952，rs36624和rs437229的扩增引物和单碱基单碱基延伸引物。
10.权利要求9所述的脑胶质瘤检测试剂盒，其特征在于，所述扩增引物包括PCR上游引物及PCR下游引物，其中，所述PCR上游引物序列分别如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.35所示；所述PCR下游引物序列分别如SEQ ID NO.36至SEQ ID NO.70所示；所述单碱基延伸引物序列分别如SEQ ID NO.71至SEQ ID NO.105所示。
11.一种引物组，其特征在于，包括扩增引物和单碱基延伸引物，所述扩增引物包括PCR上游引物及PCR下游引物，所述PCR上游引物序列分别如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.35所示；所述PCR下游引物序列分别如SEQ ID NO.36至SEQ ID NO.70；所述单碱基延伸引物序列分别如SEQ ID NO.71至SEQ ID NO.105所示。
12.权利要求11所述的引物组在用于制备检测脑胶质瘤的试剂盒中的应用。
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