CN109022540A - 快速检测转基因产品的试纸条 - Google Patents

快速检测转基因产品的试纸条 Download PDF

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杨海侠
刘亚
赵久然
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Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences
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Abstract

本发明公开了一种快速检测转基因产品的试纸条，其顺次包括：样品垫、金标结合垫、硝酸纤维素膜检测区和吸水垫；金标结合垫上涂有胶体金标记的地高辛抗体；硝酸纤维素膜检测区设置有检测线和质控线；所述检测线通过在硝酸纤维素膜检测区上包被链亲和素形成；所述质控线通过在硝酸纤维素膜检测区上包被羊抗鼠IgG形成；待检测产品的反应产物被滴到样品垫上后通过毛细管作用，向着吸水垫的方向层析。

Description

快速检测转基因产品的试纸条
技术领域
本发明属于核酸检测技术领域，具体地涉及一种快速检测转基因产品的试纸条。
背景技术
一般转基因检测分为核酸水平检测和蛋白水平检测。
蛋白水平检测(现有胶体金蛋白试纸技术)检测便捷，但是由于有些转基因样品蛋白未能表达，且蛋白容易降解，因此有可能待测样品内蛋白表未达或者待测样品储存条件造成降解，所以造成假阴性结果(阳性未检出)。蛋白试纸条方法具有快速、简便、经济的优点，无需任何特殊仪器设备，但由于其检测灵敏度较低、适用范围窄，主要适用于转基因植物的大田和原材料的快速初筛。
PCR方法是基于基因水平的检测，可检出存在于样品基因组内的待测基因而不受基因表达情况的影响。但是PCR方法对实验设施和条件要求较高，且比较费时。目前普通PCR检测方法是我国转基因植物检测的核心技术，但该方法对实验条件要求较高，对实验区要求具有前PCR区、样品制备区、核酸提取纯化区、PCR体系配置区、PCR反应区、电泳分析区等功能区，需要生物安全柜、高压灭菌锅、组织粉碎机、恒温水浴锅、高速冷冻离心机、核酸定量检测仪器、生物安全柜、PCR扩增仪、涡旋混合仪、电泳系统、凝胶成像系统等。
发明内容
鉴于上述问题，本发明旨在提出一种析快速检测转基因产品的试纸条，其仅需使用较少设备就能快速地以PCR方法进行转基因产品检测。
本发明的快速检测转基因产品的试纸条，其顺次包括：样品垫、金标结合垫、硝酸纤维素膜检测区和吸水垫；
金标结合垫上涂有胶体金标记的地高辛抗体；
硝酸纤维素膜检测区设置有检测线和质控线；所述检测线通过在硝酸纤维素膜检测区上包被链亲和素形成；所述质控线通过在硝酸纤维素膜检测区上包被羊抗鼠IgG形成；
待检测产品的反应产物被滴到样品垫上后通过毛细管作用，向着吸水垫的方向层析。
优选地，所述试纸条设置有外壳，所述外壳在对应于样品垫的位置形成有凹孔；所述外壳在对应于检测线和质控线的位置形成有观察窗。
优选地，所述凹孔形成为喇叭口状。
优选地，所述待检测的样本经过如下步骤后形成反应产物：
步骤1)样本处理：取30mg待测粉状物样本，加500μl ddH2O，使用移液枪多次吹吸混匀，静置5min得到待测样本备用；
步骤2)DNA一管法提取步骤：取5μl核酸释放剂，加入PCR反应管中；取所述待测样本5μl加入对应的PCR反应管中，并用移液器在管底吹打混匀10次；每个PCR反应管中加30μl无菌石蜡油；将PCR反应管放置在PCR仪中进行裂解，得到裂解样品；
步骤3)试样PCR反应：在PCR反应管中依次加入反应试剂、混匀，加入到所述裂解样品中；将PCR反应管放到离心机上，500g-1000g离心10s，然后取出PCR反应管，放入PCR仪中进行扩增得到反应产物。
优选地，所述步骤2)中的裂解程序为将样品置于95℃反应10min后，再置于4℃冷却5min。
优选地，所述步骤3)中的PCR反应体系总体积为35μl，其中：ddH2O为27.4μl，10×PCR Buffer为5μl，du dNTP混合液为1μl；10μmol/L上游引物为0.3μl，10μmol/L下游引物为0.3μl，Taq DNA聚合酶为1μl；
其中10×PCR Buffer含有0.1％体积的DMSO、3～5％体积的BSA、1％～2％体积的PEG-6000、100mmol/L KCl、1mmol/L MgCl2、50mmol/L pH＝8.0Tris-HCl。
优选地，所述上游引物序列为地高辛标记；所述下游引物序列为生物素标记。
优选地，所述步骤3)中的PCR扩增程序如下：50℃反应2分钟后升温到95℃反应5分钟，然后进入32次循环，每次循环中在95℃反应15sec，然后在60℃反应45sec。
优选地，所述核酸释放剂含有120～200mM/L的KCl、1％～5％体积的Triton X-100、5～10mg/ml的蛋白酶K、5-10μM/ml甘氨酸、10mM/ml的NaOH。
优选地，在所述外壳上对应于所述凹孔形成有装有超纯水的水囊，水囊破后，超纯水滴入样品垫，以加快层析。
通过常规PCR扩增技术与PCR胶体金层析技术相结合，可以快速简便对转基因样品进行检测，结果可以通过直接肉眼观察胶体金卡条显色状况进行判别，结果易于判别分析。
附图说明
图1为本发明的PCR扩增产物核酸层析快速检测阳性结果示意图；
图2为本发明的PCR扩增产物核酸层析快速检测阴性结果示意图；
图3为快速检测转基因产品的试纸条层析示意图；
图4为Npt引物胶体金检测结果；释放剂为120mM/L的KCl、3％体积的Triton X-100、7.5mg/ml的蛋白酶K、7.5μM/ml甘氨酸、10mM/ml的NaOH；10×PCR Buffer含有0.1％体积的DMSO、3％体积的BSA、1％体积的PEG-6000、100mmol/L KCl、1mmol/L MgCl2、50mmol/LpH＝8.0Tris-HCl。
图5为Pmi引物胶体金检测结果；释放剂为160mM/L的KCl、3％体积的Triton X-100、7.5mg/ml的蛋白酶K、7.5μM/ml甘氨酸、10mM/ml的NaOH；10×PCR Buffer含有0.1％体积的DMSO、4％体积的BSA、1％体积的PEG-6000、100mmol/L KCl、1mmol/L MgCl2、50mmol/LpH＝8.0Tris-HCl。
图6为T-CaMV35S引物胶体金检测结果；释放剂为200mM/L的KCl、3％体积的TritonX-100、7.5mg/ml的蛋白酶K、7.5μM/ml甘氨酸、10mM/ml的NaOH；10×PCR Buffer含有0.1％体积的DMSO、5％体积的BSA、1％体积的PEG-6000、100mmol/L KCl、1mmol/L MgCl2、50mmol/L pH＝8.0Tris-HCl。
图7为NOS引物胶体金检测结果；释放剂为160mM/L的KCl、1％体积的Triton X-100、7.5mg/ml的蛋白酶K、7.5μM/ml甘氨酸、10mM/ml的NaOH；10×PCR Buffer含有0.1％体积的DMSO、4％体积的BSA、2％体积的PEG-6000、100mmol/L KCl、1mmol/L MgCl2、50mmol/LpH＝8.0Tris-HCl。
图8为Mir604核酸Pmi胶体金检测结果；释放剂为160mM/L的KCl、5％体积的TritonX-100、7.5mg/ml的蛋白酶K、7.5μM/ml甘氨酸、10mM/ml的NaOH；10×PCR Buffer含有0.1％体积的DMSO、4％体积的BSA、2％体积的PEG-6000、100mmol/L KCl、1mmol/L MgCl2、50mmol/L pH＝8.0Tris-HCl。
图9为Bt11核酸Bt F3/R3胶体金检测结果；释放剂为160mM/L的KCl、3％体积的Triton X-100、5mg/ml的蛋白酶K、7.5μM/ml甘氨酸、10mM/ml的NaOH；10×PCR Buffer含有0.1％体积的DMSO、4％体积的BSA、2％体积的PEG-6000、100mmol/L KCl、1mmol/L MgCl2、50mmol/L pH＝8.0Tris-HCl。
图10为Bt11核酸Bt-Cry F/R胶体金检测结果；释放剂为160mM/L的KCl、3％体积的Triton X-100、10mg/ml的蛋白酶K、7.5μM/ml甘氨酸、10mM/ml的NaOH；10×PCR Buffer含有0.1％体积的DMSO、4％体积的BSA、2％体积的PEG-6000、100mmol/L KCl、1mmol/L MgCl2、50mmol/L pH＝8.0Tris-HCl。
图11为Mir604核酸Bt F3/R3胶体金检测结果；释放剂为160mM/L的KCl、3％体积的Triton X-100、7.5mg/ml的蛋白酶K、5μM/ml甘氨酸、10mM/ml的NaOH；10×PCR Buffer含有0.1％体积的DMSO、4％体积的BSA、2％体积的PEG-6000、100mmol/L KCl、1mmol/L MgCl2、50mmol/L pH＝8.0Tris-HCl。
图12为Mir604核酸Bt-Cry F/R胶体金检测结果；释放剂为160mM/L的KCl、3％体积的Triton X-100、7.5mg/ml的蛋白酶K、10μM/ml甘氨酸、10mM/ml的NaOH；10×PCR Buffer含有0.1％体积的DMSO、4％体积的BSA、2％体积的PEG-6000、100mmol/L KCl、1mmol/L MgCl2、50mmol/L pH＝8.0Tris-HCl。
图13为Bar引物胶体金检测结果；释放剂为160mM/L的KCl、3％体积的Triton X-100、7.5mg/ml的蛋白酶K、7.5μM/ml甘氨酸、10mM/ml的NaOH；10×PCR Buffer含有0.1％体积的DMSO、4％体积的BSA、2％体积的PEG-6000、100mmol/L KCl、1mmol/L MgCl2、50mmol/LpH＝8.0Tris-HCl。
图14、15为Bt11核酸Pat胶体金检测结果；释放剂为160mM/L的KCl、3％体积的Triton X-100、7.5mg/ml的蛋白酶K、7.5μM/ml甘氨酸、10mM/ml的NaOH；10×PCR Buffer含有0.1％体积的DMSO、4％体积的BSA、2％体积的PEG-6000、100mmol/L KCl、1mmol/L MgCl2、50mmol/L pH＝8.0Tris-HCl。
图16为cp4-epsps引物胶体金检测结果；释放剂为160mM/L的KCl、3％体积的Triton X-100、7.5mg/ml的蛋白酶K、7.5μM/ml甘氨酸、10mM/ml的NaOH；10×PCR Buffer含有0.1％体积的DMSO、4％体积的BSA、2％体积的PEG-6000、100mmol/L KCl、1mmol/L MgCl2、50mmol/L pH＝8.0Tris-HCl。
图17为ZSSⅡB引物胶体金检测结果；释放剂为160mM/L的KCl、3％体积的TritonX-100、7.5mg/ml的蛋白酶K、7.5μM/ml甘氨酸、10mM/ml的NaOH；10×PCR Buffer含有0.1％体积的DMSO、4％体积的BSA、2％体积的PEG-6000、100mmol/L KCl、1mmol/L MgCl2、50mmol/L pH＝8.0Tris-HCl。
图18为Zein引物胶体金检测结果；释放剂为160mM/L的KCl、3％体积的Triton X-100、7.5mg/ml的蛋白酶K、7.5μM/ml甘氨酸、10mM/ml的NaOH；10×PCR Buffer含有0.1％体积的DMSO、4％体积的BSA、2％体积的PEG-6000、100mmol/L KCl、1mmol/L MgCl2、50mmol/LpH＝8.0Tris-HCl。
图19为水稻SPS基因检测结果；释放剂为160mM/L的KCl、3％体积的Triton X-100、7.5mg/ml的蛋白酶K、7.5μM/ml甘氨酸、10mM/ml的NaOH；10×PCR Buffer含有0.1％体积的DMSO、4％体积的BSA、2％体积的PEG-6000、100mmol/L KCl、1mmol/L MgCl2、50mmol/L pH＝8.0Tris-HCl。
图20为大豆GMLE基因Buffer-100-15-3胶体金检测结果；释放剂为160mM/L的KCl、3％体积的Triton X-100、7.5mg/ml的蛋白酶K、7.5μM/ml甘氨酸、10mM/ml的NaOH；10×PCRBuffer含有0.1％体积的DMSO、4％体积的BSA、2％体积的PEG-6000、100mmol/L KCl、1mmol/L MgCl2、50mmol/L pH＝8.0Tris-HCl。
具体实施方式
下面，结合附图对本发明的快速检测转基因产品的试纸条进行详细说明。
本发明的快速检测转基因产品的试纸条，其顺次包括：样品垫、金标结合垫、硝酸纤维素膜检测区和吸水垫；
金标结合垫上涂有胶体金标记的地高辛抗体；
硝酸纤维素膜检测区设置有检测线和质控线；所述检测线通过在硝酸纤维素膜检测区上包被链亲和素形成；所述质控线通过在硝酸纤维素膜检测区上包被羊抗鼠IgG形成；
待检测产品的反应产物被滴到样品垫上后通过毛细管作用，向着吸水垫的方向层析。
一个实施例中，所述试纸条设置有外壳，所述外壳在对应于样品垫的位置形成有凹孔；所述外壳在对应于检测线和质控线的位置形成有观察窗。
一个实施例中，所述凹孔形成为喇叭口状。
一个实施例中，在所述外壳上对应于所述凹孔形成有装有超纯水的水囊，水囊破后，超纯水滴入样品垫，以加快层析。
本发明中带待检测的产品的处理包括：
步骤1)样本处理：取30mg转基因种子粉状物样本，加500μl ddH2O，使用移液枪多次吹吸混匀，静置5min备用。
步骤2)DNA一管法提取步骤：取5μl核酸释放剂，加入PCR反应管中；取待测样本5μl加入对应的PCR反应管中，并用移液器在管底吹打混匀10次；每管加30μl无菌石蜡油；将PCR反应管放置在PCR仪中进行裂解。裂解程序95℃10分钟；4℃5分钟。
微量核酸释放剂含有120～200mM/L的KCl、1％～5％体积的Triton X-100、5～10mg/ml的蛋白酶K、5-10μM/ml甘氨酸、10mM/ml的NaOH。。
在一管法检测中，甘氨酸可以保证核酸稳定，有利于核酸释放。其中5-10μM/ml甘氨酸的添加是发明人在实验过程中意外的发现，之前没有文献报道有向相关用途试剂中添加这一组分。
步骤3)试样PCR反应：在PCR反应管中依次加入反应试剂、混匀，加入到步骤2)裂解样品中。将PCR管放到离心机上，500g-1000g离心10s，然后取出PCR管，放入PCR仪中进行扩增，PCR反应程序为：50度2分钟；95度5分钟；[95度15秒，60度45秒-32循环]。
所述步骤3)中的PCR反应体系总体积为35μl，反应体系如下：
表1反应体系
试剂 体积(μl)
ddH2O 27.4
10×PCR Buffer 5
du dNTP混合液 1
10μmol/L上游引物 0.3
10μmol/L下游引物 0.3
Taq DNA聚合酶 1
总体积 35
10X PCR buffer含有0.1％DMSO、3～5％BSA、1％～2％PEG-6000、100mmol/L KCl、1mmol/L MgCl2、50mmol/L pH＝8.0Tris-HCl。
PEG-6000是作为PCR反应的增效剂。由于一管式检测属于DNA裂解粗提，因此本身特异性会很低。发明人创造性地使用添加甘氨酸的核酸释放剂，从而保证核酸的稳定。但是如果由此直接进行PCR会造成核酸稳定性较高扩增效率低非特异较多。因此发明人配套地在PCR试剂中添加PEG-6000用以降低非特异性，机制是在DNA的水溶液中通过脱水作用，导致DNA结构不稳定，从而功能性的降低DNA的熔点及解链温度，提高扩增效率。
步骤4)PCR产物胶体金检测：将PCR反应管从PCR仪中取出，取反应产物35μl加入胶体金检测卡，等5-10min观察显色状况(期间根据胶体金卡层析情况，可以加入少量超纯水加快层析)，根据显色卡读取各样品显色级别。
阳性结果：胶体金检测T线和C线出现肉眼可见显色。表明样品含有转基因成分，结果表述为“样品检检出转基因成分，检测结果为阳性”(图1可见)。
阳性结果：胶体金检测T线未出现肉眼可见显色；C线出现肉眼可见显色。表明样品不含有转基因成分，结果表述为“样品检未检出转基因成分，检测结果为阴性”(图2可见)
图3为快速检测转基因产品的试纸条层析示意图。图中样品垫为11，金标结合垫为12，硝酸纤维素膜为13，胶体金检测线为14，质控线为15；吸水垫为16。
试剂与材料
1)释放剂(120～200mM/L的KCl、1％～5％体积的Triton X-100、5～10mg/ml的蛋白酶K、5-10μM/ml甘氨酸、10mM/ml的NaOH。)。
2)石蜡油
3)du dNTP混合液：将浓度为10mmol/L的dATP、dUTP、dGTP、dCTP四种脱氧核糖核苷酸溶液等体积混合。
4)10×PCR buffer
5)Taq DNA聚合酶
6)引物
7)ddH2O
8)DNA提取试剂盒
9)胶体金检测试纸条
10)转基因实验样本
仪器和设备
1)分析天平
2)PCR扩增仪
3)恒温金属浴
4)小型离心机
5)旋窝振荡仪
6)其他相关仪器和设备
操作步骤
1)样本处理：取30mg转基因种子粉状物样本，加500μl ddH2O，使用移液枪多次吹吸混匀，静置5min备用。
2)DNA一管法提取步骤
2.1)取5μl核酸释放剂，加入PCR反应管中；
2.2)取待测样本5μl加入对应的PCR反应管中，并用移液器在管底吹打混匀10次；
2.3)每管加30μl无菌石蜡油；
2.4)将PCR反应管放置在PCR仪中进行反应，反应温度及时间设定如下：
表2反应温度及时间
温度 时间
95℃ 10分钟
4℃ 5分钟
PCR方法
1)试样PCR反应
在PCR反应管中按表1依次加入反应试剂、混匀，加入到裂解样品中。将PCR管放到离心机上，500g-1000g离心10s，然后取出PCR管，放入PCR仪中。
反应体系如表1。
2)PCR反应程序
50度2分钟；95度5分钟；[95度15秒，60度45秒-32循环]。
3)PCR产物胶体金检测
将PCR反应管从PCR仪中取出，取反应产物35μl加入胶体金检测卡，等5-10min观察显色状况(期间根据胶体金卡层析情况，可以加入少量超纯水加快层析)，根据显色卡读取各样品显色级别。
结果分析与表述
1)样品检测结果分析和表述
2)标记基因×××胶体金检测出现肉眼可见显色。表明样品检测出标记基因×××，结果表述为“样品检测出标记基因×××，检测结果为阳性”。
3)标记基因×××胶体金检测结果未出现肉眼可见显色。表明样品未检测出标记基因×××，结果表述为“样品未检测出标记基因×××，检测结果为阴性”。
各标记基因检测结果：
由图4可知，Npt引物检测阳性样本核酸检测良好，出现两条红色条带，其他样本无显色，检测结果良好；
由图5可知，Pmi引物检测阳性样本核酸检测良好，出现两条红色条带，其他样本无显色，检测结果良好；
由图6可知，T-CaMV35S引物阳性样本核酸检测良好，出现两条红色条带，其他样本无检出，检测结果良好；
由图7-8可知，NOS基因检测阳性玉米粉样本，出现两条红色条带，空白和阴性样本无检出，检测结果良好；
由图9-12可知，Cry1Ab/1Ac基因检测阳性玉米粉样本，出现两条红色条带，空白和阴性样本无检出，检测结果良好；
由图13可知，Bar基因检测阳性玉米粉样本结果良好，出现两条红色条带；其他样本无显色，检测结果良好；
由图14、15可知，Pat基因检测，阳性核酸及玉米粉样本有检出，出现两条红色条带，其他样本无检出，检测结果良好；
由图16可知，CP4-EPSPS基因检测阳性玉米粉样本，出现两条红色条带,其他样本无检出，检测结果良好；
由图17、18可知，ZSSⅡB基因检测玉米粉样本结果良好，出现两条红色条带，空白样本无显色；Zein基因检测玉米粉样本结果良好，出现两条红色条带，空白样本无显色；
由图19可知，水稻SPS基因检测水稻样本，出现两条红色条带，空白样本无显色，检测结果良好；
由图20可知，大豆内源基因检测大豆样本，出现两条红色条带，空白样本无显色，检测结果良好。
本发明主要具有以下几个方便的优势：
操作简便，本发明采用一步法获取样本核酸，结合常规PCR与核酸层析技术，可以对样本进行快速检测。
灵敏度高，PCR能在模板DNA纯度很低的情况下进行扩增，很少受培养介质和生物学物质的影响，纯化步骤可以忽略，核酸层析可以检测微量PCR扩增产物。
检测时间短，仅需8-10min；结果肉眼可见且判定标准统一，阳性结果，T线和C线均显色；阴性结果，只有C线显色。
安全性该技术不需要用到特殊试剂，避开凝胶电泳中EB等污染物，对操作者和试验环境都是安全无害的。
需要说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的范围。

Claims (10)

1.一种快速检测转基因产品的试纸条，其顺次包括：样品垫、金标结合垫、硝酸纤维素膜检测区和吸水垫；
金标结合垫上涂有胶体金标记的地高辛抗体；
硝酸纤维素膜检测区设置有检测线和质控线；所述检测线通过在硝酸纤维素膜检测区上包被链亲和素形成；所述质控线通过在硝酸纤维素膜检测区上包被羊抗鼠IgG形成；
待检测产品的反应产物被滴到样品垫上后通过毛细管作用，向着吸水垫的方向层析。
2.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于：
所述试纸条设置有外壳，所述外壳在对应于样品垫的位置形成有凹孔；所述外壳在对应于检测线和质控线的位置形成有观察窗。
3.如权利要求2所述的试纸条，其特征在于：
所述凹孔形成为喇叭口状。
4.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于：
所述待检测的样本经过如下步骤后形成反应产物：
步骤1)样本处理：取30mg待测粉状物样本，加500μl ddH2O，使用移液枪多次吹吸混匀，静置5min得到待测样本备用；
步骤2)DNA一管法提取步骤：取5μl核酸释放剂，加入PCR反应管中；取所述待测样本5μl加入对应的PCR反应管中，并用移液器在管底吹打混匀10次；每个PCR反应管中加30μl无菌石蜡油；将PCR反应管放置在PCR仪中进行裂解，得到裂解样品；
步骤3)试样PCR反应：在PCR反应管中依次加入反应试剂、混匀，加入到所述裂解样品中；将PCR反应管放到离心机上，500g-1000g离心10s，然后取出PCR反应管，放入PCR仪中进行扩增得到反应产物。
5.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于：
所述步骤2)中的裂解程序为将样品置于95℃反应10min后，再置于4℃冷却5min。
6.如权利要求4所述的试纸条，其特征在于：
所述步骤3)中的PCR反应体系总体积为35μl，其中：ddH2O为27.4μl，10×PCR Buffer为5μl，du dNTP混合液为1μl；10μmol/L上游引物为0.3μl，10μmol/L下游引物为0.3μl，TaqDNA聚合酶为1μl；
其中10×PCR Buffer含有0.1％体积的DMSO、3～5％体积的BSA、1％～2％体积的PEG-6000、100mmol/L KCl、1mmol/L MgCl2、50mmol/L pH＝8.0Tris-HCl。
7.如权利要求4所述的试纸条，其特征在于：所述上游引物序列为地高辛标记；所述下游引物序列为生物素标记。
8.如权利要求4所述的试纸条，其特征在于：
所述步骤3)中的PCR扩增程序如下：50℃反应2分钟后升温到95℃反应5分钟，然后进入32次循环，每次循环中在95℃反应15sec，然后在60℃反应45sec。
9.如权利要求4所述的试纸条，其特征在于：
所述核酸释放剂含有120～200mM/L的KCl、1％～5％体积的Triton X-100、5～10mg/ml的蛋白酶K、5-10μM/ml甘氨酸、10mM/ml的NaOH。
10.如权利要求2所述的试纸条，其特征在于：
在所述外壳上对应于所述凹孔形成有装有超纯水的水囊，水囊破后，超纯水滴入样品垫，以加快层析。
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