CN109010431B - 一种低成本的丹参提取液制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种绿色环保的丹参提取液制备方法，其在丹参提取液制备过程中，在一次醇沉、二次醇沉结束后，通过单效浓缩器加热蒸发，使得乙醇以气体形态被回收，回收乙醇进入精馏塔进行精馏，检验合格的精馏乙醇循环利用于丹参提取液的醇沉，最高循环次数可达四次，在降低丹参液制备成本的同时还实现了资源的循环利用，是一种绿色环保且高能效的方法。

Description

一种低成本的丹参提取液制备方法
技术领域
本发明属于中药制备技术领域，具体地说是一种丹参提取液的制备方法。
背景技术
心脑血管疾病，典型的包括冠心病、心绞痛、心肌梗塞、脑梗塞、脑痴呆和脑出血，是一种严重威胁人类尤其是中老年人健康的常见病。根据《中国心血管病报告2017》的记载，中国心血管病患病率及死亡率仍处于上升阶段。推算心血管病现患人数2.9亿，其中脑卒中1300万，冠心病1100万，肺原性心脏病500万，心力衰竭450万，风湿性心脏病250万，先天性心脏病200万，高血压2.7亿。心血管病死亡占居民疾病死亡构成40％以上，居首位，高于肿瘤及其他疾病。
丹参(Salviaemiltiorrhizae)是唇形科植物丹参的干燥根和根茎，丹参素是其主要活性成分之一。丹参素是从丹参的水提取液中分离得到的，天然丹参素是右旋体，其化学名为D-(+)-β-(3，4-二羟基苯基乳酸)[D-(+)-β-(3，4-dihydoxy-phenylalanine]。现代药理学研究表明，丹参素具有扩张冠状动脉，控制血小板聚集、提高微循环等药理作用(上海第二医科大学学报，1990年，第10卷第3期：第208-211页；中西医结合杂志，1983年，第3卷第5期：第297-299页；中国药理学通报，2000年，第16卷第6期：第682-685页)。丹参素在心脑血管疾病治疗中的作用尤为突出，在临床上广泛应用于治疗心血管疾病，能够改善心功能、冠脉循环、抗凝血、改善微循环，从而治疗冠心病、心绞痛等缺血性心脏疾病(中国病理生理杂志，1989年，第5卷第2期：第65-69页)。丹参素起效快、生物利用度高，具有极高的临床价值。
川芎嗪，又称四甲基吡嗪(tetramethylpyrazine,TMP)，是从中药伞形科植物川芎中提取的生物碱，是川芎的有效成分。TMP因能够治疗缺血性脑卒中而被广泛的用于心脑血管治疗领域。其治疗机制有：①抗凝作用。TMP能明显抑制LPS诱导的PAI-1蛋白及其mRNA在内皮细胞的表达(Song,et al.，Chinese Medical J.113:136，2000)；TMP低剂量时可抑制磷脂肌醇的分解和TXA2形成，高剂量时则可通过结合糖蛋白IIb/IIIa抑制血小板聚集(Sheu,et.al.,Thromb Res.88:259,1997)。②TMP还可直接溶栓(Liu and Sylvester,Thromb Res.58:129,1990；Liu and Sylvester,Thromb Res.75:51,1994)。③TMP具有保护神经细胞的作用，可显著改善大鼠脑细胞缺血损伤，显著清楚人中性粒细胞产生的自由基(Hsiao,et al.,Planta Med.72:411-417,2006；Kao,et.al.,Neurochem Int.48:166，2006)。④TMP还作为钙通道阻滞剂，促进钾通道开发，从而抑制自由基生成，抑制炎症反应(Zhu,et al.，Eur.J.Pharmacol.510:187，2005)。
由于丹参素和川芎嗪均具有活血化瘀，溶栓促通的效果，两者具有协同效应，临床上将两者配伍使用用于治疗缺血性脑病、冠心病、心绞痛、心梗等疾病。发明人之前独立研制开发了一种治疗心脑血管疾病的丹参川芎嗪注射液，该药经较长时间的临床试用，能够有效治疗闭塞性脑血管疾病，如脑供血不全，脑血栓形成，脑栓塞及其他缺血性心血管疾病，如冠心病的胸闷、心绞痛、心肌梗死、缺血性中风、血栓闭塞性脉管炎等症。
制备丹参素和川芎嗪组合物的关键步骤之一是丹参素的提取。丹参素主要来源于植物药丹参，现有技术中，丹参素的提取方法有水煎法、乙醇回流法、超声波法、水提醇沉法等。
目前丹参提取主要采用水煎煮后醇沉提取的方法，CN1319550C采用石硫法处理，需要三次醇沉；CN101269115B采用二次醇沉的方法制备丹参浸出液，其需要煎煮三次，时间较长；CN1679778A也需要经过二次醇沉。因此，目前石硫法提取丹参提取液均需要使用大量的乙醇，使得制备产生的废液中含有大量的乙醇，目前是采用直接排放丢弃的方式，既造成环境负担，同时增加了制备的成本，因此如何将丹参制备时产生的废液进行处理是急需解决的技术问题。
附图说明
图1：丹参提取液制备工艺流程图。
发明内容
本发明通过分析丹参提取制备工艺流程，发现丹参提取过程中乙醇用量大，且乙醇容易回收利用的特点，从而将醇沉步骤使用的乙醇进行回收、处理、循环利用，从而提供一种成本较低，高效低耗，资源循环利用率高，适合连续生产，产品质量稳定的丹参提取液制备方法。
为了实现上述发明目的，本发明对丹参饮片进行水煮、石硫法处理，在一次醇沉和二次醇沉结束后，对乙醇进行回收、精馏，得到大于或等于95％精馏乙醇，并反复循环利用于醇沉步骤，最多可重复使用四次。
本发明还涉及丹参素-川芎嗪注射液及其制备方法，以及涉及丹参-川芎嗪注射液在制备预防或治疗心脑血管疾病药物中的用途。
具体实施方式
本发明解决的技术问题之一，是提供一种丹参提取液的制备方法，其特征在于将丹参提取使用的乙醇回收并在提取时被循环利用。
具体制备方法为：
(一)、提取。取丹参饮片加水煎煮两次。第一次：丹参饮片加8-12倍水煎煮提取1-3h；第二次：丹参饮片加6-10倍量水提取1-3h。而后将两次提取液过滤合并、浓缩。
作为优选方案之一，步骤(一)第一次提取采用10倍水煎煮提取2h；第二次提取采用8倍量水提取1.5h。所述浓缩采用双效浓缩器进行加热减压浓缩，浓缩至相对密度1.02～1.04。
(二)、预处理。将浓缩液置于预处理罐中冷却至常温，用20％的氢氧化钙悬液调pH值至11-12，搅拌，静置，再以硫酸溶液调pH值至5-6，静置后离心，取上清液浓缩；
作为优选方案之一，步骤(二)在搅拌下缓慢加入20％的氢氧化钙混悬液调pH值至11.0～12.0，继续搅拌30～40分钟，静置1小时。再搅拌缓慢加入20％的硫酸溶液调pH值至5.0～5.5，继续搅拌30～40分钟后，静置16小时以上，10000rpm/min离心后(按照液体体积选择离心时间，每300L液体离心1h)，上清液加热减压浓缩至相对密度1.15～1.20。
(三)、第一次醇沉。浓缩液加入1-3倍体积的乙醇，最终含醇量(60±5)％。搅拌、降温至室温，静置。而后将上清液转入另一醇沉罐中，降温至2～10℃，静置24小时以上；
作为优选方案之一，步骤(三)中，浓缩液转移至醇沉罐内，在搅拌下缓慢加入2倍体积的乙醇，使得含醇量达(60±1)％。继续搅拌20分钟。降温至约20℃，静置1小时。将上清液转入另一醇沉罐中，降温至约4℃，在罐内2～10℃保温静置24小时以上；
(四)、第一次醇沉乙醇回收。
(1)回收。步骤(三)的醇沉液通过单效浓缩器加热蒸发，乙醇以气体形态回收，与底部药液分离，冷却后得到回收的乙醇；
作为优选方案之一，收集步骤(三)第一次醇沉液的上清液，用滤纸板框过滤，收集滤液置单效浓缩器内，加热减压浓缩，乙醇以气态形式回收，与底部药液分离，冷却后得到浓度在80％左右的乙醇，药液被浓缩至相对密度1.15～1.18，放液，计量；
(2)精馏。开启输送泵将回收乙醇泵入回收塔，到2/3容积停止进料，关闭输送泵及进料阀门。
开始加热，控制蒸发室内蒸汽阀门表压为0.12MPa，当温度达到75～80℃时，控制蒸汽阀门表压为0.05～0.15MPa。运行50-70min后，打开回流取样阀门取样，检测乙醇浓度。
作为优选方案之一，蒸发室泵入的回收乙醇的量低于1/2容积时，需继续补加回收乙醇至2/3容积，加料后调节回流流量。
(3)收集。检测乙醇浓度达到95％以上时，开启回流计量阀，收集乙醇至精馏乙醇罐，若检测乙醇浓度低于95％，则关闭回流计量阀继续回流。
作为优选方案之一，控制回流流量为500～1500L/H，收集过程中每10～30分钟用酒精计检测精馏回收乙醇的浓度，如果乙醇浓度低于95％，则调大流量计，反之则调小。
(4)检验。对得到的精馏乙醇进行检验，检验合格的精馏乙醇继续用于步骤(三)。
检测标准：
相对密度：不大于0.8129，相当于含C2H6O不少于95.0％(ml/ml)
性状：无色澄清液体，微有臭味；易挥发，易燃烧，燃烧时显淡蓝色火焰；加热至78℃即沸腾。
残留检测：精馏乙醇内丹参素残留量不得过10ug/ml。
作为优选方案之一，检测标准依照《中国药典》2015，并增加3项检验项目：①丹参提取液有关物质(丹参素、丹参酮IIA、丹酚酸B)的鉴别；②钙离子的鉴别；③硫酸根的鉴别。
具体鉴别方法为：
丹参提取液有关物质鉴别：
取丹参对照药材加乙醇、超声处理、离心后，取上清液作为对照药材溶液。
再取丹参酮IIA对照品，丹酚酸B对照品，加乙醇制备成为含0.5mg和1.5mg的混合溶液，作为对照品溶液。
取精馏乙醇原液作为供试溶液，按照《薄层色谱法标准操作规程》试验进行操作，检测在精馏乙醇色谱和对照品色谱相应的位置上，是否显示相同颜色的斑点或荧光斑点，如不显色，则不含丹参有关物质，如显色，则含有丹参有关物质。
钙离子鉴别：取供试品溶液，加甲基红指示液2滴，用氨试液中和，再滴加盐酸至恰呈酸性，加草酸铵试液，如存在钙离子，则生成白色沉淀，沉淀不溶于醋酸，但可溶于稀盐酸。
硫酸根鉴别：取供试品溶液，滴加氯化钡试液，如存在硫酸根离子，则生成白色沉淀，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解。
(五)、第二次醇沉。浓缩液加入3-6倍体积的乙醇，最终含醇量(70±5)％。搅拌、降温至室温，静置。取上清液过滤，滤液通过单效浓缩器加热蒸发，乙醇以气体形态回收，药液被浓缩。
作为优选方案之一，步骤(五)中，浓缩液转移至醇沉罐内，在搅拌下缓慢加入4倍体积的乙醇，使得含醇量达(70±1)％。继续搅拌20分钟。降温至约20℃，静置1小时。取上清液过滤，滤液通过单效浓缩器加热蒸发，乙醇以气体形态回收，药液浓缩至相对密度1.10～1.15。
(六)、第二次醇沉乙醇回收，回收具体操作同步骤(四)。
(七)、水沉。将步骤(五)获得的浓缩药液转移入水沉罐内，底部浓缩液加入与投料量同体积的水，搅拌均匀，煮沸，搅拌冷却、静置。而后水沉液过滤，滤液减压浓缩，搅拌冷却，静置。
作为优选方案之一：将浓缩液转移入水沉罐内，在搅拌下缓慢加入药材投料重量1倍体积的注射用水，继续搅拌30分钟，加热煮沸30分钟。开启搅拌冷却降温，当温度降至约4℃时，关闭冷却。继续搅拌15分钟，在罐内2～10℃保温静置24小时以上；将水沉液用滤纸和滤膜板框过滤，收集滤液置单效外循环浓缩器内，加热减压浓缩，浓缩为相对密度1.02～1.06；将浓缩液打入沉淀罐内，搅拌冷却降温，温度降至约4℃时，关闭冷却，在罐内2～10℃保温静置24小时以上。
(八)、收膏。水沉液过滤，滤液先用10％盐酸调pH值至2.5-3.2，静置过滤后，再用10％氢氧化钠溶液调pH值至8.8～9.2，煮沸，冷却，用10％盐酸溶液调pH值5.0～6.0，加入活性炭处理、煮沸、过滤浓缩，即得丹参提取物。
作为优选方案之一，将静置后的水沉液用滤纸和滤膜板框过滤，收集滤液。用10％盐酸溶液调pH值至2.8～2.9，静置1小时后用滤纸和滤膜板框过滤，得滤液；用10％氢氧化钠溶液调pH值至9.1～9.2，煮沸60分钟，将滤液冷却至50～60℃，用10％盐酸溶液调pH值5.0～6.0；向滤液中加入此时溶液体积0.2％的针用活性炭，煮沸30分钟，将温度降至60℃，用滤纸和滤膜板框过滤，得丹参提取液膏液，相对密度1.02～1.06。
步骤(一)～(八)的丹参提取工艺流程如图1所示。
本发明解决的技术问题之二，是提供丹参提取液进一步制备丹参-川芎嗪注射液的方法。
采用上述方法制备的丹参提取液，按照丹参药材与川芎嗪原料药5-110：1的比例配制成为注射液。
作为优选技术方案之一，丹参提取液按照丹参药材与川芎嗪原料药10：1-100:1的比例配制；
作为优选技术方案之二，川芎嗪原料药选自磷酸川芎嗪或盐酸川芎嗪。
所述丹参-川芎嗪注射液按以下步骤配制：
Figure BDA0001801941120000091
将上述制备的丹参提取液，制成每ml含4g药材的澄明液体，调节pH值至5.0-6.0，作为备用药液。将盐酸川芎嗪、辅料和上述备用药液混合均匀按照丹参药材，加入注射用水，调节pH至3.5，制成1000ml，滤过，分装至安瓿瓶中，灭菌。
本发明解决的技术问题之三，是提供丹参提取液，以及丹参-川芎嗪注射液在制备心脑血管治疗药物中的用途。
本发明带来的有益技术效果：
1、乙醇循环利用，绿色、环保、节能。本发明在对丹参提取过程中两次醇沉使用的乙醇均进行回收、精馏，并再次循环利用于其回收前的醇沉步骤，不仅节约了能源、降低了成本，且经试验发现，经过4次回收的乙醇用于醇沉步骤后，其制备的丹参提取液仍旧符合药典的质量标准，即回收乙醇能连续4次循环使用于生产质量合格稳定的丹参提取物。该回收制备方法为丹参提取液的工业生产提供一种成本较低，连续生产，高效低耗，资源循环利用率高的处理方法。
2、增加改良除杂纯化步骤、提高活性成分比例。
(1)丹参提取液制备过程中，在水沉后改用活性炭替代超滤进行纯化除杂，并用0.22μm滤膜过滤除菌，增强了除杂和无菌效果；
(2)收膏时，采用盐酸处理进一步去除鞣酸，使用氢氧化钠将提取液中的丹酚酸B转化为活性成分丹参素钠，进一步提高了丹参提取液的品质。
实施例1丹参提取液的制备例1
1、提取：取丹参饮片800kg，加水提取2次，第一次加饮片量10倍水，常压下微沸提取2小时。第二次加饮片量8倍水，常压下微沸提取1.5小时。将药液抽入双效浓缩器内，70℃下加热减压浓缩，浓缩至相对密度1.02。
2、预处理：合并两次提取的提取液，在搅拌下缓慢加入20％的氢氧化钙悬液调pH值至11.5，继续搅拌35分钟，静置1小时。缓慢搅拌下以20％的硫酸溶液调pH值至5.3，继续搅拌40分钟，静置20小时，10000rpm/min离心2.7h，55℃条件下，对上清液加热减压浓缩至相对密度1.18。
3、第一次醇沉。浓缩液转移至醇沉罐内，在搅拌下缓慢加入约2倍体积的乙醇，使得含醇量达60％，继续搅拌20分钟。降温至20℃，静置1小时。将上清液转入另一醇沉罐中，搅拌下降温至约4℃，在罐内4℃左右保温静置24小时。
醇沉液用滤纸板框过滤，收集滤液置单效浓缩器内，加热减压浓缩，乙醇以气态形式回收，与底部药液分离，冷却后得到浓度在80％左右的乙醇，药液被浓缩至相对密度1.16；
4、第二次醇沉。收集步骤3的浓缩药液，抽入醇沉罐内，搅拌下缓慢加入乙醇，含醇量达70％(约浓缩液4倍体积)。加完乙醇后，继续搅拌20分钟。将药液温度降至约4℃时，关闭冷却，在罐内4℃左右保温静置24小时。
将第二次醇沉液用滤纸板框过滤，收集滤液置单效浓缩器内，加热减压浓缩回收乙醇，药液被浓缩至相对密度1.15。
5、水沉。将步骤4的浓缩液转移入水沉罐内，在搅拌下缓慢加入1倍投料量体积的注射用水(w/v)，继续搅拌30分钟，加热煮沸30分钟。降温至约4℃。继续搅拌15分钟，在罐内4℃保温静置24小时。将水沉液用滤纸和滤膜板框过滤，收集滤液置单效外循环浓缩器内，加热减压浓缩，浓缩至相对密度1.05；将浓缩液打入沉淀罐内，搅拌冷却降温至约4℃，在罐内4℃保温静置24小时。
6、收膏：将静置后的水沉液用滤纸和滤膜板框过滤，收集滤液。用10％盐酸溶液调pH值至2.8，静置1小时后用滤纸和滤膜板框过滤，得滤液；用10％氢氧化钠溶液，调pH值至9.1，煮沸60分钟，将滤液冷却至55℃，用10％盐酸溶液调pH值5.5；向滤液中加入此时溶液体积0.2％的针用活性炭，煮沸30分钟，将温度降至60℃，用滤纸和滤膜板框过滤，得膏液，其相对密度为1.05，制得丹参提取液。
实施例2丹参提取液的制备例2
1、提取：取丹参饮片800kg，加水提取2次，第一次加饮片量9倍水，常压下微沸提取2小时。第二次加饮片量10倍水，常压下微沸提取2小时。将药液抽入双效浓缩器内，75℃下加热减压浓缩，浓缩至相对密度1.03。
2、预处理：合并两次提取的提取液，在搅拌下缓慢加入20％的氢氧化钙悬液调pH值至11，继续搅拌40分钟，静置1小时。缓慢搅拌下以20％的硫酸溶液调pH值至5.0，继续搅拌30分钟，静置24小时，10000rpm/min离心2.7h，60℃条件下，对上清液加热减压浓缩至相对密度1.15。
3、第一次醇沉。浓缩液转移至醇沉罐内，在搅拌下缓慢加入约2倍体积的乙醇，使得含醇量达60％，继续搅拌20分钟。冷却降温至20℃，静置1小时。将上清液转入另一醇沉罐中，搅拌下冷却降温至约2℃，在罐内2℃左右保温静置28小时。
醇沉液用滤纸板框过滤，收集滤液置单效浓缩器内，加热减压浓缩，乙醇以气态形式回收，与底部药液分离，冷却后得到浓度在80％左右的乙醇，药液被浓缩至相对密度1.18；
4、第二次醇沉。收集步骤3的浓缩药液，抽入醇沉罐内，搅拌下缓慢加入乙醇，含醇量达70％(约浓缩液4倍体积)。加完乙醇后，继续搅拌20分钟。将药液温度降至约2℃，在罐内2℃左右保温静置24小时。
将第二次醇沉液用滤纸板框过滤，收集滤液置单效浓缩器内，加热减压浓缩回收乙醇，药液被浓缩至相对密度1.13。
5、水沉。将步骤4的浓缩液转移入水沉罐内，在搅拌下缓慢加入1倍投料量体积的注射用水(w/v)，继续搅拌30分钟，加热煮沸30分钟。搅拌降温至约4℃。继续搅拌15分钟，在罐内4℃保温静置24小时。将水沉液用滤纸和滤膜板框过滤，收集滤液置单效外循环浓缩器内，加热减压浓缩，浓缩至相对密度1.06；将浓缩液打入沉淀罐内，搅拌冷却降温至约4℃，在罐内4℃保温静置24小时。
6、收膏：将静置后的水沉液用滤纸和滤膜板框过滤，收集滤液。用10％盐酸溶液调pH值至2.9，静置1小时后用滤纸和滤膜板框过滤，得滤液；用10％氢氧化钠溶液，调pH值至9.2，煮沸60分钟，将滤液冷却至60℃，用10％盐酸溶液调pH值6；向滤液中加入此时溶液体积0.2％的针用活性炭，煮沸30分钟，将温度降至60℃，用滤纸和滤膜板框过滤，得膏液，此时的相对密度为1.03，制得丹参提取液。
实施例3丹参提取液的制备例3
1、提取：取丹参饮片800kg，加水提取2次，第一次加饮片量10倍水，常压下微沸提取2小时。第二次加饮片量8倍水，常压下微沸提取2小时。将药液抽入双效浓缩器内，80℃下加热减压浓缩，浓缩至相对密度1.04。
2、预处理：合并两次提取的提取液，在搅拌下缓慢加入20％的氢氧化钙悬液调pH值至12，继续搅拌30分钟，静置1小时。缓慢搅拌下以20％的硫酸溶液调pH值至5.5，继续搅拌30分钟，静置20小时，10000rpm/min离心2.7h，60℃条件下，对上清液加热减压浓缩至相对密度1.15。
3、第一次醇沉。浓缩液转移至醇沉罐内，在搅拌下缓慢加入2倍体积的乙醇，使得含醇量达61％，继续搅拌20分钟。冷却降温至20℃，静置1小时。将上清液转入另一醇沉罐中，搅拌冷却降温至约4℃，在罐内4℃左右保温静置24小时。
浓缩液用滤纸板框过滤，收集滤液置单效浓缩器内，加热减压浓缩，乙醇以气态形式回收，与底部药液分离，冷却后得到浓度在80％左右的乙醇，药液被浓缩至相对密度1.17；
4、第二次醇沉。收集步骤3的浓缩药液，抽入醇沉罐内，搅拌下缓慢加入乙醇，含醇量达71％(约浓缩液4倍体积)。加完乙醇后，继续搅拌20分钟。冷却药液至约4℃，在罐内4℃左右保温静置24小时。
将第二次醇沉液用滤纸板框过滤，收集滤液置单效浓缩器内，加热减压浓缩回收乙醇，药液被浓缩至相对密度1.12。
5、水沉。将步骤4的浓缩液转移入水沉罐内，在搅拌下缓慢加入1倍投料量体积的注射用水(w/v)，继续搅拌30分钟，加热煮沸30分钟。搅拌冷却降温至约4℃。继续搅拌15分钟，在罐内4℃保温静置27小时。将水沉液用滤纸和滤膜板框过滤，收集滤液置单效外循环浓缩器内，加热减压浓缩，浓缩至相对密度1.02；将浓缩液打入沉淀罐内，搅拌冷却降温至约4℃，在罐内4℃保温静置30小时。
6、收膏：将静置后的水沉液用滤纸和滤膜板框过滤，收集滤液。用10％盐酸溶液调pH值至2.8，静置1小时后用滤纸和滤膜板框过滤，得滤液；用10％氢氧化钠溶液，调pH值至9.1，煮沸60分钟，将滤液冷却至58℃，用10％盐酸溶液调pH值5.0；向滤液中加入此时溶液体积0.2％的针用活性炭，煮沸30分钟，将温度降至60℃，用滤纸和滤膜板框过滤，得膏液，相对密度1.02，制得丹参提取液。
实施例1-3制备获得的丹参提取液的提取情况见表1。
表1：实施例1-3丹参提取含量
Figure BDA0001801941120000151
Figure BDA0001801941120000161
经过步骤6的酸、碱去除蛋白、鞣酸等杂质，转化丹酚酸B为丹参素，并经活性炭及0.22μm膜处理，使得提取液以活性物质丹参素存在，且有效去除了蛋白、鞣酸、微生物、中药碎片等杂质，大大提高了丹参提取液的纯度和质量。
实施例4第一次醇沉工艺中乙醇的回收和精馏
1、回收。将实施例1步骤3的浓缩液用滤纸板框过滤，收集滤液置单效浓缩器内，加热减压浓缩，乙醇以气态形式回收，与底部药液分离，冷却后得到浓度在80％左右的乙醇。
2、精馏。回收的乙醇泵入回收塔，进料量为2/3容积时关闭输送泵及进料阀门，开始加热，控制蒸汽阀门表压0.12MPa，打开回收塔呼吸器阀进行排空，当塔顶温度达到75℃时，控制蒸汽阀门表压0.14MPa。运行65min后，打开回流取样阀门取样，检测乙醇浓度。
此时乙醇浓度大于95％，开启回收流量计阀，同时控制回流流量为1000L/H，收集乙醇至精馏乙醇罐，当回收塔温度升至98℃时，停止加热、将剩余残夜排掉处理。
3、检验。对步骤2得到的精馏乙醇进行检验，检验合格的精馏乙醇继续用于实施例1-3步骤3。
实施例5第二次醇沉工艺中乙醇的回收和精馏
第二次醇沉工艺乙醇的回收和精馏具体步骤同实施例4，即将实施例1步骤4中使用过的乙醇使用实施例4的方法进行回收精馏，经检验合格后，精馏乙醇继续用于实施例1-3步骤4。
实施例6回收精馏乙醇的检测
将实施例4-5制备的精馏乙醇按照药典(2015)的标准进行检测，并增加丹参提取相关物质、硫酸根和钙离子的检测。具体如下。
检测指标：
1、性状：无色澄清液体，微有臭味；易挥发，易燃烧，燃烧时显淡蓝色火焰；加热至78℃沸腾。
2、相对密度：合格产品相对不大于0.8129，相当于含C2H6O不少于95.0％(ml/ml)
3、残留检测：精馏乙醇内丹参提取液有关物质(包含丹参素、丹参酮IIA、丹酚酸B)的残留量不得过10ug/ml。
检测方法：
①丹参提取液有关物质(丹参素、丹参酮IIA、丹酚酸B)的检测。
取丹参对照药材1g，加乙醇5ml、超声处理15min、10000rpm/min离心10分钟，取上清液作为对照药材溶液。
再取丹参酮IIA对照品，丹酚酸B对照品，加乙醇制备成为含0.5mg和1.5mg的混合溶液，作为丹参酮IIA、丹酚酸B对照品溶液。
取精馏乙醇原液作为供试溶液，按照《薄层色谱法标准操作规程》试验进行操作，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条状，以三氯乙烷-甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(6:4:8:1:4)为展开剂，展开，展至约4cm，取出，晾干。再以石油醚/乙酸乙酯(4:1)为展开剂，展开，展至约8cm，取出，晾干，分别在日光及紫外光(365nm)下检视。供试品色谱中，与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，比较是否显出相同颜色的斑点或荧光斑点。
②钙离子的鉴别。
取精馏乙醇供试品溶液，加甲基红指示液2滴，用氨试液中和，再滴加盐酸至恰呈酸性，加草酸铵试液，不生成白色沉淀为合格。
③硫酸根鉴别。
取供试品溶液，滴加氯化钡试液，不生成白色沉淀为合格。
实施例4-5回收精制的乙醇的各项检测结果参见表2。
表2：精馏乙醇的检测结果
Figure BDA0001801941120000181
Figure BDA0001801941120000191
实施例7回收2-4次的精馏乙醇制备的丹参素提取液
使用实施例4-5的回收精制乙醇再次用于丹参提取醇沉步骤，制备丹参提取液，此时使用的为第一次回收的精制乙醇，获得的丹参提取液记为第一批次。依次类推，按照实施例1的方法，用第2-4次回收的精制乙醇制备了第二、三、四批次的丹参提取液。按照丹参提取液的国家标准对制品进行检测，检测结果如表3所示。
表3：制备的丹参提取液质量数据
Figure BDA0001801941120000192
Figure BDA0001801941120000201
通过以上数据表明，经回收精馏后的乙醇，质量符合《中国药典》(2015)的标准，无残留，未引入其它杂质，工艺具有可操作性。而且，由回收多达4次的精馏乙醇制备的丹参提取液的质量也符合丹参提取液的上市质量标准。
实施例8丹参川芎嗪注射液制备
按照国家《丹参川芎嗪注射液药品标准：WS-10001-(HD-1138)-2002-2017》所述方法制备丹参川芎嗪注射剂，配方如下：
Figure BDA0001801941120000202
制法：取实施例1-3制备的丹参提取液，制成每ml含4g药材的澄明液体，调节pH值至5.0-6.0，作为备用药液。将盐酸川芎嗪、辅料和上述备用药液混合均匀，加入注射用水，调节pH至3.5，制成1000ml，滤过，产品检验合格后灌装于5ml安瓿瓶中，115℃灭菌30分钟。所述辅料为甘油。

Claims (7)

1.一种丹参提取液的制备方法，包括以下步骤：(1)二次水煎提取；(2)预处理，包括将提取液先调至碱性，再调至酸性，离心，浓缩；(3)第一次醇沉，包括将浓缩液用乙醇沉淀，取上清液过滤，浓缩滤液，回收乙醇并进行精馏；(4)浓缩滤液进行二次醇沉，取上清液过滤，浓缩滤液，回收乙醇并进行精馏；(5)浓缩液进行水沉；(6)水沉液过滤后，经盐酸和氢氧化钠进一步除杂，过滤浓缩，即得丹参提取物；步骤(3)或第(4)步回收精馏的乙醇分别再次用于步骤(3)或第(4)步中；
步骤(2)预处理具体步骤为：在搅拌下缓慢加入20％的氢氧化钙混悬液调pH值至11.0～12.0，继续搅拌30～40分钟，静置1小时， 再搅拌缓慢加入20％的硫酸溶液调pH值至5.0～5.5，继续搅拌30～40分钟后，静置16小时以上，10000rpm/min离心1-4h，上清液加热减压浓缩至相对密度1.15～1.20；
所述的回收乙醇并进行精馏包括以下步骤：
A、回收：分别将第一次醇沉、第二次醇沉的醇沉液通过单效浓缩器加热蒸发，乙醇以气体形态回收，与底部药液分离，冷却后得到回收的乙醇；
B、精馏：回收乙醇进入回收塔蒸发室，开始加热，控制蒸发室内蒸汽阀门表压为0.12MPa，当温度达到75～80℃时，控制蒸发室内蒸汽阀门表压为0.05～0.15MPa，运行60min后，打开回流取样阀门取样，检测乙醇浓度；
C、收集：检测乙醇浓度达到95％以上时，开启回流计量阀，收集乙醇至精馏乙醇罐，若检测乙醇浓度低于95％，则关闭回流计量阀继续回流；
D、检验：对得到的精馏乙醇进行检验，检验合格的精馏乙醇循环用于醇沉步骤，其中第一次醇沉回收的乙醇循环用于第一次醇沉，第二次醇沉精馏乙醇循环用于第二次醇沉。
2.根据权利要求1所述的丹参提取液的制备方法，步骤(3)第一次醇沉具体步骤为：向浓缩液加入1-3倍体积的乙醇，最终含醇量(60±5)％，搅拌、降温至室温，静置，而后将上清液转入另一醇沉罐中，降温至2～10℃，静置24小时以上；
步骤(4)第二次醇沉具体步骤为：浓缩液加入3-6倍体积的乙醇，最终含醇量(70±5)％，搅拌、降温至室温，静置，取上清液过滤，滤液通过单效浓缩器加热蒸发，乙醇以气体形态回收，药液被浓缩。
3.根据权利要求2所述的丹参提取液的制备方法，步骤(3)第一次醇沉具体步骤为：将浓缩液转移至醇沉罐内，在搅拌下缓慢加入2倍体积的乙醇，使得含醇量达(60±1)％，继续搅拌20分钟，降温至约20℃，静置1小时，将上清液转入另一醇沉罐中，降温至约4℃，在罐内2～10℃保温静置24小时以上；
步骤(4)第二次醇沉具体步骤为：将浓缩液转移至醇沉罐内，在搅拌下缓慢加入4倍体积的乙醇，使得含醇量达(70±1)％，继续搅拌20分钟，降温至约20℃，静置1小时，取上清液过滤，滤液通过单效浓缩器加热蒸发，乙醇以气体形态回收，药液浓缩至相对密度1.10～1.15。
4.根据权利要求1所述的丹参提取液的制备方法，在步骤B中，蒸发室回收乙醇量低于1/2容积时继续补加回收乙醇至2/3容积。
5.根据权利要求1所述的丹参提取液的制备方法，控制步骤B的乙醇回流流量为500～1500L/H。
6.根据权利要求1所述的丹参提取液的制备方法，在步骤D中，检测标准在符合《中国药典》(2015)外，增加3项检验项目:(1)丹参素、丹参酮IIA、丹酚酸B；(2)钙离子鉴别；(3)硫酸根鉴别。
7.权利要求1-6任一项所述的丹参提取液的制备方法获得的丹参提取液。
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