CN109007491A - 一种金银花草本植物饮料及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明是属于食品饮料领域，具体公开了一种金银花草本植物饮料，所述饮料由以下重量份的原料制成：金银花1~10份，山银花1~30份，菊花1~10份，蒲公英1~10份。利用本发明制成的饮料，金银花配以山银花、菊花和蒲公英，不仅具有清热解毒、降火生津、疏解肝郁之保健功效，而且还具有抑菌、抗病毒、抗炎、解热、调节免疫等药用功效。
Description
技术领域
本发明是属于食品饮料领域，涉及一种金银花草本植物饮料及其制备方法。
背景技术
金银花(Loniceta japonica Thunb)，别名：金银藤、双宝花、金童玉女花，忍冬科多年生半常绿缠绕性木质藤本植物忍冬的花蕾和初开的花，半常绿灌木。其主要药物成份是木犀草素、肌醇及皂贰，鞣质等，味甘性寒，归肺、心、胃经。功能与主治：清热解毒，疏散风热。用于痈肿疔疮，喉痹，丹毒，热毒血痢，风热感冒，温热发病。属于传统的中药材，亦是人们钟情的草本茶饮之一。
山银花(Lonicera macranthoideD Hand.～Mazz.)，别名：山花、南银花、山金银花、土忍冬、土银花等，是忍冬科植物灰毡毛忍冬、红腺忍冬、华南忍冬或黄褐毛忍冬的干燥花蕾或带初开的花。性味归经：甘，寒。归肺，心、胃经。具有清热解毒，疏散风热的功效。用于痈肿疗疮，喉痹，丹毒，热毒血痢，风热感冒，温热发病。
菊花(ChryDanthemum morifolium Ramat.)，多年生菊科草本植物，其花瓣呈舌状或筒状。甘、苦，微寒。归肺、肝经。具有散风清热，平肝明目，清热解毒的功效，用于风热感冒，头痛眩晕，目赤肿痛，眼目昏花，疮痈肿毒。
蒲公英(Taraxacum mongolicum Hand.～Mazz.)，肝菊科多年生草本植物，别名黄花地丁、婆婆丁、华花郎等。性味归经：苦甘，寒，功能主治：清热解毒，消肿散结，利尿通淋。用于疔疮肿毒，乳痈，瘰疬，目赤，咽痈，肺痈，肠痈，湿热黄疸，热淋涩痛。
在现有技术中，申请号201310090238.3，名为一种由金银花、菊花、芍药花制成的饮料的发明专利公开了一种具有清热、祛火、抗疲劳作用的饮料。该饮料采用如下重量份的原料制成：金银花1～10、菊花1～8、芍药花1～8。
申请号201510130947.9，名为一种金银花保健饮料及其制备方法的发明专利公开了一种金银花保健饮料及其制备方法，以金银花、甘草、葛根、芦根、白茅根、枸杞子为原料，药膳同源，众药合用，能达到清热解毒、润肠通便、抗疲劳、抗衰老、助消化的功效。
申请号200810060968.8，名为一种金银花草本植物茶及饮料的专利公开了金银花草本植物茶由各原料按下述重量份制成：金银花5～40份，淡竹叶5～25份，白茅根5～25份，芦根4～25份，栀子2～20份，甘草2～20份，菊花1～15份。
申请号为：201510851237.5，名为：一种具有利胆利尿功效的火龙果果味饮料及其生产方法。本发明的水果味饮料采用由蒲公英、金银花、菊花提取的中药固体颗粒，和火龙果果肉、蜂蜜按照比例混合制成。其中各材料的质量组成比为：中药固体颗粒10～20，火龙果果肉15～25，蜂蜜20～30。具有清热解毒、利胆利尿的治疗功效，有效率93％以上。
申请号:201410061374.4,名为：一种金英花三味果醋饮料，本专利公开了选用金银花40％，蒲公英30％，野菊花30％，添加金珠果汁20％，苹果汁20％，沙果汁20％，猕猴桃果汁20％，番茄汁20％。
申请号:201710748796.2,名为：花茶饮料制备方法，公开了一种双花(菊花、金银花)饮料，金银花、山银花两者至少之一25-30份，以及18-26份的菊花。
现市场上有各种以中草药为原料制造的植物饮料，综合总结了与金银花配伍的中药有：淡竹叶、白茅根、芦根、甘草、枸杞、薄荷、竹叶、泽泻、夏枯草等等，但目前为止，尚未出现以金银花配以山银花、菊花、蒲公英制备的草本植物饮料。
发明内容
本发明的目的之一就是要提供一种不仅具有清热解毒、降火生津、疏解肝郁之保健功效，而且还具有抑菌、抗病毒等药用功效的草本植物饮料。
本发明的目的之二就是要提供该草本植物饮料的制备方法。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
一种金银花草本植物饮料，所述饮料由以下重量份的原料制成：金银花1～10份，山银花1～30份，菊花1～10份，蒲公英1～10份。
进一步，所述饮料由以下重量份的原料制成：金银花1～10份，山银花5～30份，菊花1～10份，蒲公英1～6份。
进一步，所述饮料由以下重量份的原料制成：金银花2份，山银花10份，菊花1份，蒲公英1份。
进一步，所述饮料由以下重量份的原料制成：金银花1份，山银花5份，菊花8份，蒲公英1份。
进一步，所述饮料由以下重量份的原料制成：金银花10份，山银花30份，菊花4份，蒲公英6份。
进一步，所述饮料由以下重量份的原料制成：金银花7份，山银花15份，菊花10份，蒲公英3份。
为了更高地提高上述饮品的效果，发明人对金银花本草饮料中的四味原料药材的配比关系进行了研究，试图找到更适合的原料配比关系，以维持药效更优，口感更好。在此基础上，本发明人意外发现，在上述四种药品中，山银花与蒲公英在此方中存在独特的关联性，优选山银花与蒲公英的重量配比为5-10:1。其不仅具有清热解毒、降火生津、疏解肝郁之保健功效，而且还具有抑菌、抗病毒、抗炎、解热、调节免疫等药用功效。
进一步，本发明还提供了一种上述饮料的方法制备：
(1)金银花汁的制备：金银花投入到多功能提取罐中，加入金银花重量份5～20倍量的水，浸泡20～60min，加热至50～60℃，在-0.01Mpa～-0.04Mpa条件下减压蒸馏，蒸馏1～3次，每次蒸馏30～180min，收集金银花重量1.2～1.8倍的蒸馏液，备用；蒸馏后的金银花残渣加水至金银花重量的5～30倍，微沸煎煮30～180min，煎煮1～2次，提取液冷却至室温，过滤，滤液备用，合并金银花蒸馏液和提取液得金银花汁，备用；
(2)山银花汁的制备：山银花加入10～100倍量水浸泡20～120min，在50～100℃下浸提20～90min，提取液冷却至室温，过滤，得山银花汁，备用；
(3)菊花汁的制备：菊花加入10～100倍量水浸泡20～120min，在50～100℃下浸提20～90min，提取液冷却至室温，过滤，得菊花汁，备用；
(4)蒲公英汁的制备：蒲公英加入10～100倍量水浸泡20～120min，在50～100℃下浸提20～90min，提取液冷却至室温，过滤，得蒲公英汁，备用；
(5)调配：将矫味剂、稳定剂加水溶解过滤，然后与金银花汁、山银花汁、菊花汁、蒲公英汁在60～90℃下混合，搅拌均匀；
(6)过滤、灌封：将调配好的饮料在60～90℃下趁热过滤，趁热灌封；
(7)灭菌、冷却，即得金银花草本植物饮料。
优选的，所述的山银花采用微波提取，在50-100℃，微波功率为400-700w的条件下进行微波提取，提取时间为：2-6min。
具体的，该饮料采用如下优选方法制备：
(1)金银花汁的制备：金银花投入到多功能提取罐中，加入金银花重量份10倍量的水，浸泡60min，加热至60℃，在-0.01Mpa～-0.04Mpa条件下减压蒸馏，蒸馏2次，每次蒸馏120min，收集金银花重量1.6倍的蒸馏液，备用；蒸馏后的金银花残渣继续加水至金银花重量的20倍，微沸煎煮120min，煎煮1次，提取液冷却至室温，过滤，滤液备用，合并金银花蒸馏液和提取液得金银花汁，备用；
(2)山银花汁的制备：山银花加入50倍量水浸泡60min，在85℃下浸提60min，提取液冷却至室温，过滤，得山银花汁，备用；
(3)菊花汁的制备：菊花加入50倍量水浸泡60min，在90℃下浸提40min，提取液冷却至室温，过滤，得菊花汁，备用；
(4)蒲公英汁的制备：蒲公英加入50倍量水浸泡60min，在90℃下浸提40min，提取液冷却至室温，过滤，得蒲公英汁，备用；
(5)调配：将蔗糖、山梨酸钾加水溶解过滤，然后与金银花汁、山银花汁、菊花汁、蒲公英汁在80℃下混合，搅拌均匀；
(6)过滤、灌封：将调配好的饮料在80℃下趁热过滤，趁热灌封；
(7)灭菌、冷却，即得金银花草本植物饮料。
本发明还提供了一种草本植物可吸果冻，每100g可吸果冻按重量百分比计由以下原料制得：权利要求1-7中任一项所述金银花、山银花、菊花、蒲公英原料的浓缩液3-8g，氯化钾0.01-0.05g，刺槐豆胶0.03-0.06g，结冷胶0.1-0.2g，黄原胶0.02-0.08g，异构化糖0.005-0.02g，香料0.05-0.3g，剩余组分为水。
具体的，所述果冻采用如下方法制备：
1.金银花、山银花、菊花、蒲公英原料的浓缩液的制备
(1)金银花投入到多功能提取罐中，加入金银花重量份5-20倍量的水，浸泡20-60min，加热至50-60℃，-0.01Mpa--0.04Mpa条件下减压蒸馏，蒸馏1-3次，每次蒸馏30-180min，收集金银花重量1.2-1.8倍的蒸馏液，备用；蒸馏后的金银花残渣加水至金银花重量的5-30倍，微沸煎煮30-180min，煎煮1-2次，提取液冷却至室温，过滤，滤液备用，合并金银花蒸馏液和提取液得金银花汁，备用；(2)山银花加入50倍量水在85℃下浸提60min，提取液冷却至室温，过滤，得山银花汁，备用；(3)菊花加入50倍量水在90℃下浸提40min，提取液冷却至室温，过滤，得菊花汁，备用；(4)蒲公英加入50倍量水在90℃下浸提40min，提取液冷却至室温，过滤，得蒲公英汁，备用；(5)将金银花汁、山银花汁、菊花汁、蒲公英汁在60-90℃混合，搅匀，过滤，浓缩到原来体积的1/5，备用。
2.果冻制备：
1)凝胶剂的制备
(1)取质量分数0.4-0.6％的氯化钾溶液80-120ml，向其加入220-270mg的刺槐豆胶和1.3-1.9g的结冷胶，边搅拌边加水90-120ml至溶液呈胶体状；
(2)向步骤(1)所得的胶体状溶液中加入15-25ml水稀释并搅拌呈胶体状，然后再加入220-270mg的黄原胶，边搅拌边加水20-40ml至溶液再次呈胶体状，即得凝胶剂，所得凝胶剂常温放置备用；
2)可吸果冻的制备
(1)向调制罐中加入360-400ml水，然后加入160-190g的异构化糖，搅拌的同时将罐内溶液加热至40-55℃，然后再加入步骤(1)制备的凝胶剂；搅拌至凝胶剂均匀分散于溶液中；(2)向调制罐中加入45-60℃的温水100-140ml,再加入中药浓缩液，搅拌至所添加物质完全溶解于溶液中并分散均匀；用45-60℃温水将调制罐内粘稠状溶液定容至1000ml，并搅拌均匀即得金银花可吸果冻。
本发明的有益效果：
(1)本发明的草本植物饮料，以金银花、山银花、菊花和蒲公英为原料，不仅具有清热解毒、降火生津、疏解肝郁之保健功效，而且还具有抑菌、抗病毒、抗炎、解热、调节免疫等药用功效。
(2)本发明中金银花药材首先采用水蒸气蒸馏法提取挥发油成份，药渣继续用煎煮工艺水提取，保留了大部分金银花的功效成份，具有很好的药用保健作用。
(3)充分利用了金银花、山银花植物资源，技术工艺易于掌握，生产方法便于机械化、规范化、标准化和规模化生产。
通过如下实验研究验证本发明的技术效果：
实验例1：对大鼠运动性疲劳症状和行为学观察
1实验材料
1.1动物
DPF级雄性DD大鼠180只，180～220g，自由饮水进食，室内温度22℃～25℃，相对湿度40％～50％，空气流通，光照时间12h。
1.2实验样品与试剂
实验样品：
D1：金银花提取液：金银花70Kg投入到多功能提取罐中，加入金银花重量份10倍量的水，浸泡60min，加热至60℃，在-0.01Mpa～-0.04Mpa条件下减压蒸馏，蒸馏2次，每次蒸馏120min，收集金银花重量1.6倍的蒸馏液，备用；蒸馏后的金银花残渣加水至金银花重量的20倍，微沸煎煮120min，煎煮1次，提取液冷却至室温，过滤，滤液备用，合并金银花蒸馏液和提取液得金银花汁；
D2：山银花提取液：山银花70Kg加入50倍量水浸泡60min，在85℃下浸提60min，提取液冷却至室温，过滤，得山银花汁；
D3：菊花提取液：菊花70Kg加入50倍量水浸泡60min，在90℃下浸提40min，提取液冷却至室温，过滤，得菊花汁；
D4：蒲公英提取液：蒲公英70Kg加入50倍量水浸泡60min，在90℃下浸提40min，提取液冷却至室温，过滤，得蒲公英汁；
D5：金银花、山银花、菊花组合提取液：(1)金银花10Kg投入到多功能提取罐中，加入金银花重量份10倍量的水，浸泡40min，加热至60℃，在-0.01Mpa～-0.04Mpa条件下减压蒸馏，蒸馏2次，每次蒸馏110min，收集金银花重量1.6倍的蒸馏液，备用；蒸馏后的金银花残渣加水至金银花重量的18倍，微沸煎煮100min，煎煮1次，提取液冷却至室温，过滤，滤液备用，合并金银花蒸馏液和提取液，得金银花汁；备用；(2)山银花40Kg加入60倍量水浸泡50min，在85℃下浸提70min，提取液冷却至室温，过滤，得山银花汁，备用；(3)菊花20Kg加入50倍量水浸泡60min，在90℃下浸提40min，提取液冷却至室温，过滤，得菊花汁；(4)将金银花汁、山银花汁、菊花汁混合，即组合提取液D5；
D6：金银花、菊花、蒲公英组合提取液：(1)金银花30Kg投入到多功能提取罐中，加入金银花重量份10倍量的水，浸泡60min，加热至60℃，在-0.01Mpa～-0.04Mpa条件下减压蒸馏，蒸馏2次，每次蒸馏120min，收集金银花重量1.6倍的蒸馏液，备用；蒸馏后的金银花残渣加水至金银花重量的20倍，微沸煎煮120min，煎煮1次，提取液冷却至室温，过滤，滤液备用，合并金银花蒸馏液和提取液得金银花汁；备用；(2)菊花20Kg加入50倍量水浸泡60min，在90℃下浸提40min，提取液冷却至室温，过滤，得菊花汁；备用；(3)蒲公英20Kg加入50倍量水浸泡60min，在90℃下浸提40min，提取液冷却至室温，过滤，得蒲公英汁；(4)将金银花汁、菊花汁、蒲公英汁混合，即得组合提取液D6；
D7：金银花、山银花、蒲公英组合提取液：(1)金银花25Kg投入到多功能提取罐中，加入金银花重量份8倍量的水，浸泡30min，加热至60℃，在-0.01Mpa～-0.04Mpa条件下减压蒸馏，蒸馏2次，每次蒸馏90min，收集金银花重量1.6倍的蒸馏液，备用；蒸馏后的金银花残渣加水至金银花重量的15倍，微沸煎煮120min，煎煮1次，提取液冷却至室温，过滤，滤液备用，合并金银花蒸馏液和提取液得金银花汁；备用；(2)山银花40Kg加入60倍量水浸泡50min，在85℃下浸提70min，提取液冷却至室温，过滤，得山银花汁，备用；(3)蒲公英5Kg加入50倍量水浸泡60min，在90℃下浸提50min，提取液冷却至室温，过滤，得蒲公英汁；备用；(4)将金银花汁、山银花汁、蒲公英汁混合，即得组合提取液D7；
D8：山银花、菊花、蒲公英组合提取液：(1)山银花40Kg加入50倍量水浸泡60min，在85℃下浸提80min，提取液冷却至室温，过滤，得山银花汁，备用；(2)菊花10Kg加入50倍量水浸泡60min，在85℃下浸提60min，提取液冷却至室温，过滤，得菊花汁；备用；(3)蒲公英10Kg加入50倍量水浸泡60min，在90℃下浸提50min，提取液冷却至室温，过滤，得蒲公英汁；备用；(4)将山银花汁、菊花汁、蒲公英汁混合，即得组合提取液D8；
D9：本发明实施例1饮料：采用实施例1的配方与制法制备；
D10：本发明实施例2饮料：采用实施例2的配方与制法制备；
D11：本发明实施例3饮料：采用实施例3的配方与制法制备；
D12：本发明实施例4饮料：采用实施例4的配方与制法制备；
D13(对比组)：以201310090238.3实施例1的方式制备饮料；
D14(对比组)：以201510851237.5实施例1的方式制备饮料；
D15(对比组)：以201410061374.4实施例1的方式制备饮料；
D16(对比组)：以201710748796.2实施例1的方式制备饮料；
2实验方法
2.1动物分组与干预
动物适应性饲养一周后，随机均分成正常照组、模型组、金银花提取液组D1，山银花提取液组D2，菊花提取液组D3，蒲公英提取液组D4，组合提取液组D5，组合提取液组D6，组合提取液组D7，组合提取液组D8，实施例1饮料组D9，实施例2饮料组D10，实施例3饮料组D11，实施例4饮料组D12，以及D13，D14，D15,D16,共16组，剔除不愿跑步和针灸的大鼠后，每组10只，每天灌喂给药一次，灌胃1小时后，除正常对照外所有各组大鼠均进行跑台运动，每天一次，速度和时间按照表1所示的实验方案，连续14天，复制运动性疲劳大鼠模型。灌胃剂量为25ml/kg，每天一次。
表1大鼠运动疲劳模型训练方案(m/min×min)
| 星期一 | 星期二 | 星期三 | 星期四 | 星期五 | 星期六 | 星期日 | |
| 第一周 | 15×40 | 15×40 | 15×40 | 15×40 | 15×40 | 15×40 | 15×40 |
| 第二周 | 15×40 | 15×40 | 15×40 | 15×40 | 15×40 | 15×40 | 15×40 |
3实验结果
实验和造模初始，各组大鼠的饮水量、进食量、体重、大鼠粪便及皮毛色泽和症状
等均无明显差异。随着造模时间和不同干预手段的实施。各组出现了不同的表现。
空白对照组：皮毛光泽，精神状态良好。活动自如，反应敏捷，抓取时抵抗适中。无超常反应。排尿正常，大便色黄不干，两眼有神，眼裂正常，尾部颜色为粉红，唇、舌、爪甲色泽正常。
模型组动物组：饮食、饮水量略有减少；皮毛色泽晦暗发黄失去光泽，先有干结，
大便稀溏，色淡无臭味；小便发黄，同时频数增加，唇色发暗。按照表2的分级表，在实验的中后期根据统计，30％的大鼠达到了易激惹程度的II级，10％达到了III级。
表2动物易激惹程度分级表
实施例1饮料组D9，实施例2饮料组D10，实施例3饮料组D11，实施例4饮料组D12：此四组大鼠较模型组比，饮食、饮水量基本正常，毛色略有光泽，大便色淡无臭味，未发现大鼠达到易激惹程度的I级及以上。
金银花提取液组D1，山银花提取液组D2，菊花提取液组D3，蒲公英提取液组D4：大鼠表现与模型组大鼠类似，大便稀溏的出现时间早于模型组，但是毛发和口唇的色泽略好于模型组。30％的大鼠达到了易激惹程度的I级分级，10％大鼠达到了易激惹程度的II级,未发现大鼠达到了易激惹程度的III级。
组合提取液组D5，组合提取液组D6，组合提取液组D7，组合提取液组D8：大鼠表现与模型组大鼠类似，大便稀塘的出现时间早于模型组，但是毛发和口唇的色泽略好于模型组。20％的大鼠达到了易激惹程度的I级分级，未发现大鼠达到了易激惹程度的II级和III级。
D13，D14，D15，D16：大鼠皮毛色泽晦暗发黄失去光泽，大便稀塘的出现时间早于模型组，但是毛发和口唇的色泽略好于模型组。20％的大鼠达到了易激惹程度的I级分级，未发现大鼠达到了易激惹程度的II级和III级。
4.结论与讨论
模型大鼠表现出的饮食饮水量减少，大便稀溏，色淡无臭味，皮毛发黄干枯无光泽属于脾胃虚弱的症状，同时又存在小便黄，精神烦躁，容易激惹等实证的表现。这与对运动性疲劳有可能属于虚实夹杂证的推断是一致的，而本发明饮料组的大鼠，饮食、饮水量基本正常，无一只大鼠达到易激惹程度的I级及以上。说明本发明饮料具有一定的“祛火”，抗疲劳的作用。
实验例2：抑菌作用的研究
1.实验材料
1.1供试菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌均系我所微生物实验室保存菌种。
1.2培养基
细菌用营养琼脂：蛋白胨10g,牛肉膏3g,NaCl 5g,琼脂15g,葡萄糖5g，水1000ml，pH值7.2。培养基均在0.1MPa，121.3℃,灭菌20min。
1.3青霉素的配制
青霉素溶液配制：取4ml无菌水，用无菌注射器注入80×104μmol/min的青霉素，然后配制成100μmol/min的青霉素。
1.4实验样品实验样品：
选用实验例1中提取液D1-D16。
2.实验方法
2.1菌悬液制备
将上述供试菌种用适宜的斜面活化后，以无菌水制成含菌数约为108个/ml菌悬液。
2.2各实验样品提取液对供试菌的抑菌作用
取直径6mm的滤纸片放入各实验样品的提取液中浸泡4h，取出置于真空干燥箱中灭菌干燥，将各种供试菌悬液取0.2ml注入无菌培养皿内,再倒入15ml琼脂培养基，混匀后冷却成含菌平板，然后用无菌镊子夹取含提取液的滤纸片贴在含菌平板上，每皿贴6片,每菌作3次重复，细菌培养箱中36℃培养24h，测量滤纸片周围抑菌圈直径大小，比较抑菌效果。
2.3青霉素抑菌效果实验
将滤纸片放入以上青霉素中浸泡4h。取出真空干燥，放入接种了金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌的培养皿中，然后进行培养，实验操作方法同上，测定滤纸片周围抑菌圈大小。
3.实验结果
各提取液对供试细菌都有明显的抑菌作用,其中对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑制作用较强，对枯草杆菌抑制作用次之，抑菌圈直径(mm)数据(见表3)
表3抑菌效果
| 样品 | 大肠杆菌 | 枯草杆菌 | 金黄色葡萄球菌 |
| D1 | 11.3 | 10.1 | 12.6 |
| D2 | 11.0 | 9.8 | 12.2 |
| D3 | 10.8 | 8.9 | 11.9 |
| D4 | 11.2 | 8.7 | 11.5 |
| D5 | 13.4 | 10.8 | 14.0 |
| D6 | 13.8 | 10.1 | 13.2 |
| D7 | 12.9 | 9.6 | 13.3 |
| D8 | 13.6 | 9.2 | 13.2 |
| D9 | 15.8 | 12.0 | 15.0 |
| D10 | 13.9 | 10.5 | 13.9 |
| D11 | 14.7 | 10.6 | 14.5 |
| D12 | 14.9 | 11.6 | 14.8 |
| D13 | 13.5 | 10.5 | 13.0 |
| D14 | 12.9 | 10.9 | 13.4 |
| D15 | 13.5 | 9.8 | 13.5 |
| D16 | 13.0 | 9.8 | 13.8 |
| 青霉素 | 14.8 | --- | 15.5 |
4.实验结果
实施例1饮料组D9，实施例2饮料组D10，实施例3饮料组D11，实施例4饮料组D12均具有抗菌作用，尤其对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌作用更强，对枯草杆菌抑菌作用次之，与100μmol/min的青霉素抑菌作用相当，以实施例工艺提取的提取液抑菌作用有明显提高。
实验例3：体外抗病毒实验研究
1.实验材料
1.1病毒毒种及宿主细胞
甲型H1N1流感病毒，:狗肾小管上皮细胞(MDCK)，为流感病毒甲型宿主细胞株。
1.2试剂及配制方法
RPMI-1640细胞维持液：取RPMI-1640干粉1袋加三蒸水1000ml混匀，加入2gNaHCO2，使其完全溶解，0.22μm滤膜过滤除菌，分装于500ml青瓶中，置4℃冰箱中，备用。
10％1640细胞培养液:1640细胞维持液加入450ml小牛血清50ml、双抗5ml，混勾，置4℃冰箱，备用。
双抗：取100wU链霉素溶于5ml蒸馏水中，弃1ml；将80wU青霉素溶于76ml蒸馏水中，与余4ml链霉素相混匀，0.22μm滤膜过滤除菌，每瓶2ml分装于小青瓶，于置-20℃冰箱备用。
PBD：(pH7.4的磷酸盐缓冲液)取NaCl 8g、Na2HPO4 2.9g、KCl 0.2g、K2HPO4 0.2g加三蒸水至1000ml，溶解，0.22μm滤膜过滤除菌，分装于500ml青瓶中，
置4℃°冰箱备用。
0.25％胰酶：称取胰酶2.5g用1000mlPBD溶解，0.22μm滤膜过滤除菌，分装于小青瓶，每瓶2ml，置-20℃冰箱备用。
0.1％中性红染料：取NaCl 4.5g溶于500ml蒸馏水，配成0.9％的生理盐水，再加入中性红染料0.5g，混匀既得。
脱色剂：配制0.1mol/L的Na2HPO4溶液与无水乙醇按1：1混勾，即得。
2.实验方法
2.1实验样品
选用实验例1中提取液D1-D16：用0.22μm滤膜过滤，存于小青瓶中，放于-40℃冰箱备用。
2.2流感病毒的扩增
2.2.1细胞的复苏及培养
将液氮罐中MDCK的冻存管取出，立即投入37℃～40℃温水中迅速晃动，至冻存液完全溶解(尽量在一分钟内完成)；将冻存管1000r/min离心5min，取出，在超净工作台内打开，弃冻存液；加入10％1640细胞培养液适量，将下层沉淀细胞吹打混匀，转移到培养瓶内，补加10％1640细胞培养液至12ml，在37℃、5％CO2恒温培养箱培养。待细胞长成单层后，按1:2传代，继续培养，隔天进行传代。
2.2.2流感病毒的扩增
将甲型H1N1流感病毒毒种1ml与0.25％胰酶混匀20μl，放于37℃、5％CO2恒温培养箱内作用1h，接种于己经长成单层的MDCK细胞上，再在恒温培养箱内作用1h后，加1640维持液12ml置37℃、5％CO2病毒培养箱中培养，并设细胞对照，逐日观察。待细胞出现90％以上的病变时，取出，反复冻融3次，吹打离心(1000r/min，5min)取上清液定量分装于小青瓶中，胶布封口，放于-80℃冰箱冻存备用。
2.3流感病毒毒力的测定
将甲型H1N1流感病毒用1640维持液做10倍比系列稀释不同浓度，纵向重复2孔，依次接种于己长成单层的MDCK细胞的96孔板中，同时设细胞对照。37℃、5％CO2病毒培养箱中培养，倒置显微镜下逐日观察，连续观察5d，将板孔内液体吸弃，加1％中
性红50μl置37℃染色1h，弃染液，用洗液将多余染料充分洗漆，加脱色液100μl，室温脱色10min，用酶标仪在540nm波长测定OD值。根据Reed-Muench公式计算病毒液的半数感染浓度(TCID50)：
细胞存活率＝(各组OD值-空白对照OD值)/(正常细胞OD值-空白对照OD值)…(1)
细胞病变率＝1-细胞存活率…(2)
细胞比距＝(高于50％病变率-50％)/(高于50％病变率-低于50％病变率)…(3)
TCID50＝Antilg(lg高于50％CPE百分率病毒稀释度+比距×稀释因子对数…(4)
2.4药物对细胞毒性测定
将各供试金银花样品用1640维持液按二倍比稀释10个浓度梯度，依次接种于己经长成单层的MDCK细胞的96孔板中，并设2个复孔及细胞对照孔；37℃、5％CO2培养箱中培养，逐日观察细胞病变，连续观察5d，确定药物的最大无毒浓度。细胞出现病变者判为药物毒性，中性红染色，用酶标仪在540nm波长测定OD值，应用公式Reed-Muench计算药物半数中毒浓度(TC50)。
TC50＝[Antilog(log高于50％CPE百分率病毒稀释度+比距)]×C…(5)
注：C为第一孔的药物终浓度
2.5抗流感病毒实验
将各金银花供试样品用1640细胞维持液从原浓度开始分别作二倍比系列稀释共10个稀释度，依次每孔加入50μl横向接种于已长成单层MDCK细胞的96板孔中，每孔再加入100TCID50的流感病毒50μl(流感病毒先与0.25％的胰酶20μl/ml作用1h)，同时设利巴韦林阳性对照组、病毒对照组及细胞对照组，并设2个复孔。37℃、5％CO2培养箱中培养，逐日观察细胞病变，待病毒对照出现90％以上的病变时，力1％中性红染色，并用酶标仪在540nm波长测定OD值。应用Reed-Muench方法计算药物半数有效浓度(EC50)和治疗指数(TI)。
EC50＝[Antilog(log高于50％CPE百分率病毒稀释度-比距)]×C…(6)
治疗指数(TI)＝半数毒性浓度(TC50)/半数有效浓度(EC50)…(7)
3.结果
3.1流感病毒毒力测定结果
通过测得的CPE百分率，应用Reed-Muench法计算得到的流感病毒甲型TCID50为10-2.27。
3.2药物对细胞毒性实验测定结果
应用Reed-Muench法计算各金银花提取液半数中毒浓度(TC50)为：其中，
D1-D4提取液，TC50＝8.31mg/ml～22.54mg/ml；
D5-D8提取液，TC50＝9.24mg/ml～25.10mg/ml；
D9-D12提取液，TC50＝10.31mg/ml～28.95mg/ml；
D13-D16提取液，TC50＝9.44mg/ml～26.91mg/ml
利巴韦林为：TC50＝13.15mg/ml；
3.3抗流感病毒的作用
D1-D4提取液，EC50＝0.320mg/ml～2.842mg/ml，TI＝7.93～25.97
D5-D8提取液，EC50＝0.310mg/ml～2.718mg/ml，TI＝9.23～29.80；
D9-D12提取液，EC50＝0.260mg/ml～2.018mg/ml，TI＝14.35～39.65；
D13-D16提取液，EC50＝0.298mg/ml～2.818mg/ml，TI＝9.55～31.68；
利巴韦林注射液：EC50＝0.785mg/ml，TI＝16.75。
结果表明：本实施例制备的中药饮品较其他对比例而言，具有更优的抗流感病毒的作用。
具体实施方式：
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有付出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
一、配方
(1)原料：金银花10kg，山银花50kg，菊花5kg，蒲公英5kg
(2)辅料：白砂糖2kg，山梨酸钾0.01kg。
二、制备方法
(1)金银花汁的制备：金银花投入到多功能提取罐中，加入金银花重量份10倍量的水，浸泡60min，加热至60℃，在-0.01Mpa～-0.04Mpa条件下减压蒸馏，蒸馏2次，每次蒸馏120min，收集金银花重量1.6倍的蒸馏液，备用；蒸馏后的金银花残渣加水至金银花重量的20倍，微沸煎煮120min，煎煮1次，提取液冷却至室温，过滤，滤液备用合并金银花蒸馏液和提取液得金银花汁，备用；
(2)山银花汁的制备：山银花加入50倍量水浸泡60min，在85℃微波功率为400-700w的条件下进行微波提取，提取时间为：2-6min，提取液冷却至室温，过滤，得山银花汁，备用；
(3)菊花汁的制备：菊花加入50倍量水浸泡60min，在90℃下浸提40min，提取液冷却至室温，过滤，得菊花汁，备用；
(4)蒲公英汁的制备：蒲公英加入50倍量水浸泡60min，在90℃下浸提40min，提取液冷却至室温，过滤，得蒲公英汁，备用；
(5)调配：将白砂糖、山梨酸钾加水溶解过滤，然后与金银花汁、山银花汁、菊花汁、蒲公英汁在80℃下混合，搅拌均匀；
(6)过滤、灌封：将调配好的饮料在80℃下趁热过滤，趁热灌封；
(7)灭菌、冷却、检验：将灌封后的饮料高温灭菌，温度为130℃，时间为10秒，冷却，即得金银花草本植物饮料。
实施例2：
一、配方
(1)原料：金银花5kg，山银花25kg，菊花40kg，蒲公英5kg
(2)辅料：蔗糖2kg，山梨酸0.01kg。
二、制备方法
(1)金银花汁的制备：金银花投入到多功能提取罐中，加入金银花重量份20倍量的水，浸泡30min，加热至50℃，在-0.01Mpa～-0.04Mpa条件下减压蒸馏，蒸馏2次，每次蒸馏180min，收集金银花重量1.8倍的蒸馏液，备用；蒸馏后的金银花残渣加水至金银花重量的20倍，微沸煎煮100min，煎煮1次，提取液冷却至室温，过滤，滤液备用合并金银花蒸馏液和提取液得金银花汁，备用；
(2)山银花汁的制备：山银花加入40倍量水浸泡40min，在75℃下浸提30min，提取液冷却至室温，过滤，得山银花汁，备用；
(3)菊花汁的制备：菊花加入40倍量水浸泡60min，在70℃下浸提50min，提取液冷却至室温，过滤，得菊花汁，备用；
(4)蒲公英汁的制备：蒲公英加入50倍量水浸泡40min，在85℃下浸提60min，提取液冷却至室温，过滤，得蒲公英汁，备用；
(5)调配：将蔗糖、山梨酸加水溶解过滤，然后与金银花汁、山银花汁、菊花汁、蒲公英汁在90℃下混合，搅拌均匀；
(6)过滤、灌封：将调配好的饮料在90℃下趁热过滤，趁热灌封；
(7)灭菌、冷却、检验：将灌封后的饮料高温灭菌，温度为130℃，时间为10秒，冷却，即得金银花草本植物饮料。
实施例3：
一、配方
(1)原料：金银花15kg，山银花45kg，菊花6kg，蒲公英9kg
(2)辅料：白砂糖2kg，山梨酸钾0.01kg。
二、制备方法
(1)金银花汁的制备：金银花投入到多功能提取罐中，加入金银花重量份15倍量的水，浸泡20min，加热至60℃，在～0.01Mpa～0.04Mpa条件下减压蒸馏，蒸馏2次，每次蒸馏1000min，收集金银花重量1.8倍的蒸馏液，备用；蒸馏后的金银花残渣加水至金银花重量的25倍，微沸煎煮100min，煎煮1次，提取液冷却至室温，过滤，滤液备用，合并金银花蒸馏液和提取液得金银花汁，备用；
(2)山银花汁的制备：山银花加入80倍量水浸泡30min，在80℃下浸提50min，提取液冷却至室温，过滤，得山银花汁，备用；
(3)菊花汁的制备：菊花加入80倍量水浸泡30min，在85℃下浸提30min，提取液冷却至室温，过滤，得菊花汁，备用；
(4)蒲公英汁的制备：蒲公英加入80倍量水浸泡30min，在85℃下浸提30min，提取液冷却至室温，过滤，得蒲公英汁，备用；
(5)调配：将白砂糖、山梨酸钾加水溶解过滤，然后与金银花汁、山银花汁、菊花汁、蒲公英汁在75℃下混合，搅拌均匀；
(6)过滤、灌封：将调配好的饮料在75℃下趁热过滤，趁热灌封；
(7)灭菌、冷却、检验：将灌封后的饮料高温灭菌，温度为135℃，时间为8秒，冷却，即得金银花草本植物饮料。
实施例4：
一、配方
(1)原料：金银花14kg，山银花30kg，菊花20kg，蒲公英6kg
(2)辅料：白砂糖2kg，山梨酸钾0.01kg。
二、制备方法
(1)金银花汁的制备：金银花投入到多功能提取罐中，加入金银花重量份15倍量的水，浸泡60min，加热至55℃，在-0.01Mpa～-0.04Mpa条件下减压蒸馏，蒸馏2次，每次蒸馏80min，收集金银花重量1.6倍的蒸馏液，备用；蒸馏后的金银花残渣加水至金银花重量的30倍，微沸煎煮90min，煎煮2次，提取液冷却至室温，过滤，滤液备用，合并金银花蒸馏液和提取液得金银花汁，备用；
(2)山银花汁的制备：山银花加入20倍量水浸泡120min，在90℃下浸提60min，提取液冷却至室温，过滤，得山银花汁，备用；
(3)菊花汁的制备：菊花加入20倍量水浸泡120min，在95℃下浸提40min，提取液冷却至室温，过滤，得菊花汁，备用；
(4)蒲公英汁的制备：蒲公英加入80倍量水浸泡120min，在95℃下浸提40min，提取液冷却至室温，过滤，得蒲公英汁，备用；
(5)调配：将白砂糖、山梨酸钾加水溶解过滤，然后与金银花汁、山银花汁、菊花汁、蒲公英汁在85℃下混合，搅拌均匀；
(6)过滤、灌封：将调配好的饮料在85℃下趁热过滤，趁热灌封；
(7)灭菌、冷却、检验：将灌封后的饮料高温灭菌，温度为135℃，时间为15秒，冷却，即得金银花草本植物饮料。
实施例5：
一、配方
每100g可吸果冻按重量百分比计由以下原料制得：
(1)原料：金银花、山银花、菊花、蒲公英原料的浓缩液3-8g
(2)辅料：氯化钾10-50mg、刺槐豆胶30-60mg、结冷胶100-200mg、黄原胶20-80mg，异构化糖5-20g，香料50-300mg，剩余组分为水。
二、制备工艺：
1.金银花、山银花、菊花、蒲公英原料的浓缩液的制备
(1)金银花汁的制备：金银花投入到多功能提取罐中，加入金银花重量份8倍量的水，浸泡90min，加热至60℃，在-0.01Mpa～-0.04Mpa条件下减压蒸馏，蒸馏2次，每次蒸馏60min，收集金银花重量1.4倍的蒸馏液，备用；蒸馏后的金银花残渣加水至金银花重量的10倍，微沸煎煮60min，煎煮2次，提取液冷却至室温，过滤，滤液备用，合并金银花蒸馏液和提取液得金银花汁，备用；
(2)山银花汁的制备：山银花加入20倍量水浸泡120min，在90℃下浸提60min，提取液冷却至室温，过滤，得山银花汁，备用；
(3)菊花汁的制备：菊花加入20倍量水浸泡120min，在95℃下浸提40min，提取液冷却至室温，过滤，得菊花汁，备用；
(4)蒲公英汁的制备：蒲公英加入80倍量水浸泡120min，在95℃下浸提40min，提取液冷却至室温，过滤，得蒲公英汁，备用；
(5)将金银花汁、山银花汁、菊花汁、蒲公英汁在60-90℃混合，搅匀，过滤，得中药提取液，提取液浓缩到原来体积的1/5，备用，即得中药浓缩液。
三、果冻制备：
1)凝胶剂的制备
(1)取质量分数0.5％的氯化钾溶液100ml，向其加入250mg的刺槐豆胶和1.6g的结冷胶，边搅拌边加水100ml至溶液呈胶体状；
(2)向步骤(1)所得的胶体状溶液中加入20ml水稀释并搅拌呈胶体状，然后再加入250mg的黄原胶，边搅拌边加水30ml至溶液再次呈胶体状，即得凝胶剂，所得凝胶剂常温放置备用；
2)可吸果冻饮料的制备
(1)向调制罐中加入360ml水，然后加入180g的异构化糖，搅拌的同时将罐内溶液加热至50℃，然后再加入步骤(1)制备的凝胶剂；搅拌至凝胶剂均匀分散于溶液中；
(2)向调制罐中加入50℃的温水120ml,再加入中药浓缩液，搅拌至所添加物质完全溶解于溶液中并分散均匀；用50℃温水将调制罐内粘稠状溶液定容至1000ml，并搅拌均匀即得金银花可吸果冻。
应当理解的是，本发明的上述具体实施方式仅仅用于示例性说明或解释本发明的原理，而不构成对本发明的限制。因此，在不偏离本发明的精神和范围的情况下所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。此外，本发明所附权利要求旨在涵盖落入所附权利要求范围和边界、或者这种范围和边界的等同形式内的全部变化和修改例。
Claims (10)
1.一种金银花草本植物饮料，其特征在于：所述饮料由以下重量份的原料制成：金银花1~10份，山银花1~30份，菊花1~10份，蒲公英1~10份。
2.如权利要求1所述的饮料，其特征在于，所述饮料由以下重量份的原料制成：金银花1~10份，山银花5~30份，菊花1~10份，蒲公英1~6份。
3.如权利要求1所述的饮料，其特征在于，所述饮料由以下重量份的原料制成：金银花2份，山银花10份，菊花1份，蒲公英1份。
4.如权利要求1所述的饮料，其特征在于，所述饮料由以下重量份的原料制成：金银花1份，山银花5份，菊花8份，蒲公英1份。
5.如权利要求1所述的饮料，其特征在于，所述饮料由以下重量份的原料制成：金银花10份，山银花30份，菊花4份，蒲公英6份。
6.如权利要求1所述的饮料，其特征在于，所述饮料由以下重量份的原料制成：金银花7份，山银花15份，菊花10份，蒲公英3份。
7. 如权利要求 1～6所述的饮料，其特征在于，所述饮料采用如下方法制备 ：
(1) 金银花汁的制备：金银花投入到多功能提取罐中，加入金银花重量份5~20倍量的水，浸泡20~60min，加热至50~60℃，在-0.01Mpa~-0.04Mpa条件下减压蒸馏，蒸馏1~3次，每次蒸馏30~180min，收集金银花重量1.2~1.8倍的蒸馏液，备用；蒸馏后的金银花残渣加水至金银花重量的5~30倍，微沸煎煮30~180min，煎煮1~2次，提取液冷却至室温，过滤，滤液备用，合并金银花蒸馏液和提取液得金银花汁，备用；
(2) 山银花汁的制备：山银花加入10～100倍量水浸泡20~120min，在50～100℃下浸提20～90min，提取液冷却至室温，过滤，得山银花汁，备用；
(3) 菊花汁的制备：菊花加入10～100倍量水浸泡20~120min，在50～100℃下浸提 20～90min，提取液冷却至室温，过滤，得菊花汁，备用；
(4) 蒲公英汁的制备：蒲公英加入10～100倍量水浸泡20~120min，在50～100℃下浸提20～90min，提取液冷却至室温，过滤，得蒲公英汁，备用；
(5) 调配：将矫味剂、稳定剂加水溶解过滤，然后与金银花汁、山银花汁、菊花汁、蒲公英汁在 60～90℃下混合，搅拌均匀；
(6) 过滤、灌封：将调配好的饮料在60～90℃下趁热过滤，趁热灌封；
(7) 灭菌、冷却，即得金银花草本植物饮料。
8. 如权利要求7所述的饮料，其特征在于，所述饮料采用如下优选方法制备 ：
(1) 金银花汁的制备：金银花投入到多功能提取罐中，加入金银花重量份10倍量的水，浸泡60min，加热至60℃，在-0.01Mpa~-0.04Mpa条件下减压蒸馏，蒸馏2次，每次蒸馏120min，收集金银花重量1.6倍的蒸馏液，备用；蒸馏后的金银花残渣继续加水至金银花重量的20倍，微沸煎煮120min，煎煮1次，提取液冷却至室温，过滤，滤液备用，合并金银花蒸馏液和提取液得金银花汁，备用；
(2) 山银花汁的制备：山银花加入50倍量水浸泡60min，在85℃下浸提 60min，提取液冷却至室温，过滤，得山银花汁，备用；
(3) 菊花汁的制备：菊花加入50倍量水浸泡60min，在90℃下浸提 40min，提取液冷却至室温，过滤，得菊花汁，备用；
(4) 蒲公英汁的制备：蒲公英加入50倍量水浸泡60min，在90℃下浸提40min，提取液冷却至室温，过滤，得蒲公英汁，备用；
(5) 调配：将蔗糖、山梨酸钾加水溶解过滤，然后与金银花汁、山银花汁、菊花汁、蒲公英汁在 80℃下混合，搅拌均匀；
(6) 过滤、灌封：将调配好的饮料在 80℃下趁热过滤，趁热灌封；
(7) 灭菌、冷却，即得金银花草本植物饮料。
9.一种草本植物可吸果冻，其特征在于，每100g可吸果冻按重量百分比计由以下原料制得：如权利要求1-7中任一项所述草本植物饮料，其中金银花、山银花、菊花、蒲公英原料的浓缩液 3-8g，氯化钾0.01-0.05g，刺槐豆胶0.03-0.06g，结冷胶 0.1-0.2g，黄原胶0.02-0.08g，异构化糖0.005-0.02g，香料0.05-0.3g，剩余组分为水。
10.如权利要要求9所述的果冻，其特征在于，所述果冻采用如下方法制备 ：
金银花、山银花、菊花、蒲公英原料的浓缩液的制备
（1）金银花投入到多功能提取罐中，加入金银花重量份5-20倍量的水，浸泡20-60min，加热至50-60℃，-0.01Mpa--0.04Mpa条件下减压蒸馏，蒸馏1-3次，每次蒸馏30-180min，收集金银花重量1.2-1.8倍的蒸馏液，备用；蒸馏后的金银花残渣加水至金银花重量的5-30倍，微沸煎煮30-180min，煎煮1-2次，提取液冷却至室温，过滤，滤液备用，合并金银花蒸馏液和提取液得金银花汁，备用；（2）山银花加入50 倍量水在 85℃下浸提60min，提取液冷却至室温，过滤，得山银花汁，备用；(3) 菊花加入 50倍量水在 90℃下浸提 40min，提取液冷却至室温，过滤，得菊花汁 ，备用；(4)蒲公英加入50倍量水在90℃下浸提40min，提取液冷却至室温，过滤，得蒲公英汁，备用；(5)将金银花汁、山银花汁、菊花汁、蒲公英汁在 60-90℃混合，搅匀，过滤，浓缩到原来体积的1/5，备用；
2.果冻制备：
1）凝胶剂的制备
(1) 取质量分数 0.4-0.6％的氯化钾溶液80-120ml，向其加入220-270mg 的刺槐豆胶和 1.3-1.9g 的结冷胶，边搅拌边加水90-120ml 至溶液呈胶体状；
(2) 向步骤 (1) 所得的胶体状溶液中加入 15-25ml 水稀释并搅拌呈胶体状，然后再加入220-270mg 的黄原胶，边搅拌边加水 20-40ml 至溶液再次呈胶体状，即得凝胶剂，所得凝胶剂常温放置备用；
2）可吸果冻的制备
(1)向调制罐中加入360-400ml水，然后加入160-190g的异构化糖，搅拌的同时将罐内溶液加热至 40-55℃，然后再加入步骤 (1) 制备的凝胶剂；搅拌至凝胶剂均匀分散于溶液中；(2) 向调制罐中加入45-60℃的温水100-140ml, 再加入中药浓缩液，搅拌至所添加物质完全溶解于溶液中并分散均匀；用45-60℃温水将调制罐内粘稠状溶液定容至1000ml，并搅拌均匀即得金银花可吸果冻。
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