CN108997417B - 一种从油茶饼粕中提取高纯卵磷脂的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种从油茶饼粕中提取高纯卵磷脂的方法，其特征在于采用以下步骤：A、取适量液体培养基配制菌种浓度为1.0×105‑1.0×106CFU/mL的菌悬液，所述菌种为康宁木霉，菌种保藏号为CICC 13006；发酵摇瓶中进行扩培，得康宁木霉发酵种子培养液；B、将油茶饼粕干燥、粉碎，得油茶饼粕粉末；将油茶饼粕粉末、蒸馏水、液体培养基投入发酵罐供氧发酵2‑3d，得油茶饼粕发酵液；C、将亚临界二氯甲烷与正己烷按特定比例混合作为萃取剂，将油茶饼粕发酵液与萃取剂按质量比2.0‑4.0：1.0加入到亚临界提取装置进行萃取，得油茶饼粕磷脂提取物；D、利用柱色谱分离纯化油茶饼粕磷脂提取物，得卵磷脂。本发明具有提取压力低、温度低，原料成本低，提取效率高，所得卵磷脂纯度高的有益效果。
Description
技术领域
本发明涉及天然植物提取技术领域，特别涉及一种从油茶饼粕中提取高纯卵磷脂的方法。
背景技术
卵磷脂是磷脂酰胆碱（PC）的俗称，作为最具代表性的磷脂成分，它具有保护肝脏、防止动脉硬化、促进婴儿脑部发育等诸多药理活性，应用于化妆品领域，则具有消除色斑、滋润柔软肌肤的作用，还可作为脂质体制备中活性成分的包裹材料。油茶（Camelliaoleifera Abel.）属山茶科山茶属植物，为多年生乔木或灌木，其油茶籽经榨油后得到大量副产品油茶饼粕，约占总含量65%，它含有丰富的蛋白质、糖类、磷脂、茶皂素、黄酮苷类活性成分，大部分被直接丢弃，造成油茶饼粕资源的巨大浪费。本发明以油茶饼粕为原料提取高纯度卵磷脂，降低成本，产品纯度能够满足化妆品领域应用需求的同时，还可以废物利用。
目前，磷脂的提取方法主要有溶剂提取和无溶剂提取两类。溶剂提取法耗费时间长、活性物质易被破坏，且卵磷脂纯度偏低，应用于化妆品脂质体的制备领域时存在乳化力不够，不能够很好地包裹活性成分，稳定性差等缺点。无溶剂提取法存在生产成本高、设备操作复杂等问题。
因此，寻求一种低成本、高效率、高纯度、对磷脂成分破坏性低的提取方法很有必要。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种从油茶饼粕中提取高纯度卵磷脂的方法，该方法具有原料成本低，卵磷脂的提取率高，所得卵磷脂纯度高的优点。
为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：一种从油茶饼粕中提取高纯卵磷脂的方法，其特征在于采用以下步骤：
A、 无菌条件下，取适量液体培养基配制菌种浓度为1.0×105-1.0×106CFU/mL的菌悬液，所述菌种为康宁木霉，菌种保藏号为CICC 13006，所述液体培养基为含8.0-12.0g/L果糖、6.0-10.0g/L麦麸、12.0-16.0g/L蛋白胨、0.1-0.3g/L尿素的MS液体培养基；取0.4-0.6mL菌悬液在PDA固体培养基表面划线，在25-30℃条件下培养3-5d；挑取分散较好的单菌落接种至含有液体培养基成分的发酵摇瓶中进行扩培，置于气浴恒温振荡器内，在25-30℃，250r/min条件下供氧培养5-7d，气浴恒温振荡器内的氧浓度为0.030-0.050mol/L，得康宁木霉发酵种子培养液；
B、将油茶饼粕在60℃真空干燥箱中烘干，然后粉碎至40-80目，得油茶饼粕粉末；按质量比1：20称取油茶饼粕粉末和蒸馏水投入到发酵罐中，然后注入适量液体培养基；称取油茶饼粕粉末质量8.0-15.0%的康宁木霉发酵种子培养液注入发酵罐；用乙酸调节发酵罐内液体pH值至3.5-5.5，在25-30℃条件下供氧发酵2-3d，氧浓度控制在0.030-0.050mol/L，发酵完成后真空干燥至水份含量为20%，得油茶饼粕发酵液；
C、将亚临界二氯甲烷与正己烷按照质量比3.0-5.0：1.0混合均匀作为萃取剂，将步骤B中所得油茶饼粕发酵液与所述萃取剂按质量比2.0-4.0：1.0加入到亚临界提取装置，设置提取温度为38-45℃，提取压力为0.8-1.2MPa，提取3-5次，单次提取时间20-40min，提取完成后，将提取液导入分离罐，然后减压蒸发残余萃取剂，蒸发温度为50-55℃，当分离罐中压力低于0.1MPa时，停止蒸发，得油茶饼粕磷脂提取物；
D、利用柱色谱分离纯化油茶饼粕磷脂提取物：色谱柱采用600×30mm玻璃柱，层析用硅胶先在120℃烘箱中活化30min后装入玻璃柱，按质量比1.0：10.0-15.0称取油茶饼粕磷脂提取物和甲醇，溶解后注入色谱柱，以甲醇为洗脱剂等度洗脱，滴速2.0mL/min，收集洗脱液；将所述洗脱液在50℃下真空干燥，然后用适量乙醚溶解，在2500rpm离心10min，收集上清液，50℃下真空干燥至恒重，得卵磷脂。
本发明所得卵磷脂利用薄层色谱（TLC）进行磷脂定性，硅胶板，展开剂氯仿-丙酮-甲醇-乙酸-水（体积比50:20:10:10:5）；利用高效液相色谱（HPLC）分析磷脂组成，以氯仿-甲醇-水（体积比70:20:10）作为流动相进行洗脱，流速1.0mL/min，进样量20μL，根据峰面积进行定量。经表征，本发明所得卵磷脂提取率为48.2～54.5%，纯度高于98.5%。
本发明中所用康宁木霉购于中国工业微生物菌种保藏管理中心，菌种编号：CICC13006；所用MS液体培养基为SIGMA公司生产，牌号M5519；所用PDA培养基购于杭州百思生物技术有限公司；所用气浴恒温振荡器购于江苏杰瑞尔电器有限公司，型号SHZ-82；本发明中所用油茶饼粕购于萍乡博新实业有限公司，自行粉碎至40-80目；所用真空干燥箱购于常州日翔干燥设备有限公司，型号SZG-350；所用发酵罐购于南京润泽生物工程设备有限公司，型号RZY-XGX；所用离心机购于张家港市宇佼机械有限公司，型号为PSF-1000；所用亚临界提取装置购于河南亚临界生物技术有限公司，型号为CBE-5L；所用薄层色谱仪购于天津天光光学仪器有限公司，型号SB-2；所用高效液相色谱分析仪购自安捷伦科技（中国）有限公司，型号为 Agilent 1260。
本发明首先利用康宁木霉对油茶饼粕进行微生物发酵，在发酵过程中康宁木霉产生纤维素酶、木聚糖酶及内切β葡聚糖酶，可以破坏油茶饼粕细胞壁的纤维结构，将其分解成小分子物质，减少提取传质阻力，使油茶饼粕细胞内部有效成分完全释放，为下一步提取创造有利条件，然后利用亚临界提取技术在较低温度及压力条件下提取出油茶饼粕卵磷脂粗产物，经进一步分离，去除残余萃取剂后，得油茶饼粕卵磷脂提取物，提取过程中对卵磷脂成分无任何破坏，最大限度的保护了其活性。
本发明利用特定质量比的亚临界二氯甲烷与正己烷作为萃取剂，在低温低压下对已发酵破壁的油茶饼粕进行亚临界提取，有利于油茶饼粕内卵磷脂的传质作用，使卵磷脂的提取效率大幅升高，二氯甲烷与正己烷的搭配使用，选择性强，提取率高，还可以有效提高产物纯度。
本发明提供了一种可批量提取油茶饼粕中高纯度卵磷脂的制备路线，利用特定的萃取剂，对经过微生物发酵破壁的廉价油茶饼粕进行低温低压提取，分离纯化后得到纯度高于98.5%、提取率高达48.2～54.5%的卵磷脂产物，解决了以往卵磷脂提取纯度不高、成本高昂的问题。本发明生产过程不引入有害溶剂，无大量废液产生，制备的卵磷脂质量稳定，可直接应用于化妆品脂质体制备。
本发明利用康宁木霉对油茶饼粕进行微生物发酵，使油茶饼粕完全破壁，内部有效成分完全释放，并以亚临界二氯甲烷与正己烷为萃取剂提取卵磷脂，将卵磷脂提取率提高至48.2～54.5%。利用亚临界提取技术，在低温低压条件下提取卵磷脂，对卵磷脂成分无任何破坏，最大限度的保护了其活性，且最终所得产物纯度高于98.5%。本发明以油茶饼粕为原料，提高了其利用价值，实现了资源综合利用，避免了资源浪费。
综上所述，本发明具有提取压力低、温度低，原料成本低，提取效率高，所得卵磷脂纯度高的有益效果。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步详细说明本发明，但本发明并不仅限于这些实施例。
实施例 1：
一种从油茶饼粕中提取高纯卵磷脂的方法，其特征在于采用以下步骤：
A、 无菌条件下，取适量液体培养基配制菌种浓度为1.0×106CFU/mL的菌悬液，所述菌种为康宁木霉，菌种保藏号为CICC 13006，所述液体培养基为含12.0g/L果糖、8.0g/L麦麸、16.0g/L蛋白胨、0.1g/L尿素的MS液体培养基；取0.5mL菌悬液在PDA固体培养基表面划线，在25℃条件下培养5d；挑取分散较好的单菌落接种至含有液体培养基成分的发酵摇瓶中进行扩培，置于气浴恒温振荡器内，在25℃，250r/min条件下供氧培养7d，气浴恒温振荡器内的氧浓度为0.050mol/L，得康宁木霉发酵种子培养液；
B、将油茶饼粕在60℃真空干燥箱中烘干，然后粉碎至40-80目，得油茶饼粕粉末；按质量比1：20称取油茶饼粕粉末2.0kg和蒸馏水40.0kg投入到发酵罐中，称取油茶饼粕粉末质量的10.0%的康宁木霉发酵种子培养液注入发酵罐，发酵罐中液体培养基成分含量同步骤A；用乙酸调节发酵罐内液体pH值至3.5，在25℃条件下供氧发酵3d，氧浓度控制在0.050mol/L，发酵完成后真空干燥至水份含量为20%，得油茶饼粕发酵液；
C、将亚临界二氯甲烷与正己烷按照质量比5.0：1.0混合均匀作为萃取剂，将步骤B中所得油茶饼粕发酵液与所述萃取剂按质量比3.0：1.0加入到亚临界提取装置，设置提取温度为38℃，提取压力为1.0MPa，提取3次，单次提取时间40min，提取完成后，将提取液导入分离罐，然后减压蒸发残余萃取剂，蒸发温度为50℃，当分离罐中压力低于0.1MPa时，停止蒸发，得油茶饼粕磷脂提取物；
D、利用柱色谱分离纯化油茶饼粕磷脂提取物：色谱柱采用600×30mm玻璃柱，层析用硅胶先在120℃烘箱中活化30min后装入玻璃柱，按质量比1.0：10.0称取油茶饼粕磷脂提取物和甲醇，溶解后注入色谱柱，以甲醇为洗脱剂等度洗脱，滴速2.0mL/min，收集洗脱液；将所述洗脱液在50℃下真空干燥，然后用适量乙醚溶解，在2500rpm离心10min，收集上清液，50℃下真空干燥至恒重，得卵磷脂。
经表征，本实施例所得卵磷脂提取率为54.5%，纯度为99.5%。
实施例 2：
一种从油茶饼粕中提取高纯卵磷脂的方法，其特征在于采用以下步骤：
A、 无菌条件下，取适量液体培养基配制菌种浓度为6.0×105CFU/mL的菌悬液，所述菌种为康宁木霉，菌种保藏号为CICC 13006，所述液体培养基为含8.0g/L果糖、10.0g/L麦麸、12.0g/L蛋白胨、0.3g/L尿素的MS液体培养基；取0.5mL菌悬液在PDA固体培养基表面划线，在27℃条件下培养3d；挑取分散较好的单菌落接种至含有液体培养基成分的发酵摇瓶中进行扩培，置于气浴恒温振荡器内，在27℃，250r/min条件下供氧培养5d，气浴恒温振荡器内的氧浓度为0.030mol/L，得康宁木霉发酵种子培养液；
B、将油茶饼粕在60℃真空干燥箱中烘干，然后粉碎至40-80目，得油茶饼粕粉末；按质量比1：20称取油茶饼粕粉末2.0kg和蒸馏水40.0kg投入到发酵罐中，称取油茶饼粕粉末质量的8.0%的康宁木霉发酵种子培养液注入发酵罐，发酵罐中液体培养基成分含量同步骤A；用乙酸调节发酵罐内液体pH值至4.2，在27℃条件下供氧发酵2d，氧浓度控制在0.030mol/L，发酵完成后真空干燥至水份含量为20%，得油茶饼粕发酵液；
C、将亚临界二氯甲烷与正己烷按照质量比3.0：1.0混合均匀作为萃取剂，将步骤B中所得油茶饼粕发酵液与所述萃取剂按质量比2.0：1.0加入到亚临界提取装置，设置提取温度为45℃，提取压力为0.8MPa，提取4次，单次提取时间20min，提取完成后，将提取液导入分离罐，然后减压蒸发残余萃取剂，蒸发温度为55℃，当分离罐中压力低于0.1MPa时，停止蒸发，得油茶饼粕磷脂提取物；
D、利用柱色谱分离纯化油茶饼粕磷脂提取物：色谱柱采用600×30mm玻璃柱，层析用硅胶先在120℃烘箱中活化30min后装入玻璃柱，按质量比1.0：12.0称取油茶饼粕磷脂提取物和甲醇，溶解后注入色谱柱，以甲醇为洗脱剂等度洗脱，滴速2.0mL/min，收集洗脱液；将所述洗脱液在50℃下真空干燥，然后用适量乙醚溶解，在2500rpm离心10min，收集上清液，50℃下真空干燥至恒重，得卵磷脂。
经表征，本实施例所得卵磷脂提取率为48.2%，纯度为98.8%。
实施例 3：
一种从油茶饼粕中提取高纯卵磷脂的方法，其特征在于采用以下步骤：
A、 无菌条件下，取适量液体培养基配制菌种浓度为1.0×105CFU/mL的菌悬液，所述菌种为康宁木霉，菌种保藏号为CICC 13006，所述液体培养基为含10.0g/L果糖、6.0g/L麦麸、14.0g/L蛋白胨、0.2g/L尿素的MS液体培养基；取0.6mL菌悬液在PDA固体培养基表面划线，在30℃条件下培养4d；挑取分散较好的单菌落接种至含有液体培养基成分的发酵摇瓶中进行扩培，置于气浴恒温振荡器内，在30℃，250r/min条件下供氧培养6d，气浴恒温振荡器内的氧浓度为0.030mol/L，得康宁木霉发酵种子培养液；
B、将油茶饼粕在60℃真空干燥箱中烘干，然后粉碎至40-80目，得油茶饼粕粉末；按质量比1：20称取油茶饼粕粉末2.0kg和蒸馏水40.0kg投入到发酵罐中，称取油茶饼粕粉末质量的15.0%的康宁木霉发酵种子培养液注入发酵罐，发酵罐中液体培养基成分含量同步骤A；用乙酸调节发酵罐内液体pH值至5.5，在30℃条件下供氧发酵3d，氧浓度控制在0.030mol/L，发酵完成后真空干燥至水份含量为20%，得油茶饼粕发酵液；
C、将亚临界二氯甲烷与正己烷按照质量比4.0：1.0混合均匀作为萃取剂，将步骤B中所得油茶饼粕发酵液与所述萃取剂按质量比4.0：1.0加入到亚临界提取装置，设置提取温度为42℃，提取压力为1.2MPa，提取5次，单次提取时间30min，提取完成后，将提取液导入分离罐，然后减压蒸发残余萃取剂，蒸发温度为52℃，当分离罐中压力低于0.1MPa时，停止蒸发，得油茶饼粕磷脂提取物；
D、利用柱色谱分离纯化油茶饼粕磷脂提取物：色谱柱采用600×30mm玻璃柱，层析用硅胶先在120℃烘箱中活化30min后装入玻璃柱，按质量比1.0：15.0称取油茶饼粕磷脂提取物和甲醇，溶解后注入色谱柱，以甲醇为洗脱剂等度洗脱，滴速2.0mL/min，收集洗脱液；将所述洗脱液在50℃下真空干燥，然后用适量乙醚溶解，在2500rpm离心10min，收集上清液，50℃下真空干燥至恒重，得卵磷脂。
经表征，本实施例所得卵磷脂提取率为52.7%，纯度为99.2%。
实施例 4：
一种从油茶饼粕中提取高纯卵磷脂的方法，其特征在于采用以下步骤：
A、 无菌条件下，取适量液体培养基配制菌种浓度为4.0×105CFU/mL的菌悬液，所述菌种为康宁木霉，菌种保藏号为CICC 13006，所述液体培养基为含11.0g/L果糖、9.0g/L麦麸、13.0g/L蛋白胨、0.25g/L尿素的MS液体培养基；取0.6mL菌悬液在PDA固体培养基表面划线，在28℃条件下培养4d；挑取分散较好的单菌落接种至含有液体培养基成分的发酵摇瓶中进行扩培，置于气浴恒温振荡器内，在28℃，250r/min条件下供氧培养5d，气浴恒温振荡器内的氧浓度为0.040mol/L，得康宁木霉发酵种子培养液；
B、将油茶饼粕在60℃真空干燥箱中烘干，然后粉碎至40-80目，得油茶饼粕粉末；按质量比1：20称取油茶饼粕粉末2.0kg和蒸馏水40.0kg投入到发酵罐中，称取油茶饼粕粉末质量的14.0%的康宁木霉发酵种子培养液注入发酵罐，发酵罐中液体培养基成分含量同步骤A；用乙酸调节发酵罐内液体pH值至5.0，在28℃条件下供氧发酵2d，氧浓度控制在0.040mol/L，发酵完成后真空干燥至水份含量为20%，得油茶饼粕发酵液；
C、将亚临界二氯甲烷与正己烷按照质量比3.5：1.0混合均匀作为萃取剂，将步骤B中所得油茶饼粕发酵液与所述萃取剂按质量比2.5：1.0加入到亚临界提取装置，设置提取温度为40℃，提取压力为1.0MPa，提取4次，单次提取时间25min，提取完成后，将提取液导入分离罐，然后减压蒸发残余萃取剂，蒸发温度为54℃，当分离罐中压力低于0.1MPa时，停止蒸发，得油茶饼粕磷脂提取物；
D、利用柱色谱分离纯化油茶饼粕磷脂提取物：色谱柱采用600×30mm玻璃柱，层析用硅胶先在120℃烘箱中活化30min后装入玻璃柱，按质量比1.0：14.0称取油茶饼粕磷脂提取物和甲醇，溶解后注入色谱柱，以甲醇为洗脱剂等度洗脱，滴速2.0mL/min，收集洗脱液；将所述洗脱液在50℃下真空干燥，然后用适量乙醚溶解，在2500rpm离心10min，收集上清液，50℃下真空干燥至恒重，得卵磷脂。
经表征，本实施例所得卵磷脂提取率为50.5%，纯度为99.0%。
实施例 5：
一种从油茶饼粕中提取高纯卵磷脂的方法，其特征在于采用以下步骤：
A、 无菌条件下，取适量液体培养基配制菌种浓度为8.0×105CFU/mL的菌悬液，所述菌种为康宁木霉，菌种保藏号为CICC 13006，所述液体培养基为含10.0g/L果糖、9.0g/L麦麸、15.0g/L蛋白胨、0.15g/L尿素的MS液体培养基；取0.4mL菌悬液在PDA固体培养基表面划线，在26℃条件下培养3d；挑取分散较好的单菌落接种至含有液体培养基成分的发酵摇瓶中进行扩培，置于气浴恒温振荡器内，在26℃，250r/min条件下供氧培养6d，气浴恒温振荡器内的氧浓度为0.050mol/L，得康宁木霉发酵种子培养液；
B、将油茶饼粕在60℃真空干燥箱中烘干，然后粉碎至40-80目，得油茶饼粕粉末；按质量比1：20称取油茶饼粕粉末2.0kg和蒸馏水40.0kg投入到发酵罐中，称取油茶饼粕粉末质量的12.0%的康宁木霉发酵种子培养液注入发酵罐，发酵罐中液体培养基成分含量同步骤A；用乙酸调节发酵罐内液体pH值至3.8，在26℃条件下供氧发酵3d，氧浓度控制在0.050mol/L，发酵完成后真空干燥至水份含量为20%，得油茶饼粕发酵液；
C、将亚临界二氯甲烷与正己烷按照质量比4.5：1.0混合均匀作为萃取剂，将步骤B中所得油茶饼粕发酵液与所述萃取剂按质量比3.5：1.0加入到亚临界提取装置，设置提取温度为44℃，提取压力为0.8MPa，提取5次，单次提取时间20min，提取完成后，将提取液导入分离罐，然后减压蒸发残余萃取剂，蒸发温度为53℃，当分离罐中压力低于0.1MPa时，停止蒸发，得油茶饼粕磷脂提取物；
D、利用柱色谱分离纯化油茶饼粕磷脂提取物：色谱柱采用600×30mm玻璃柱，层析用硅胶先在120℃烘箱中活化30min后装入玻璃柱，按质量比1.0：11.0称取油茶饼粕磷脂提取物和甲醇，溶解后注入色谱柱，以甲醇为洗脱剂等度洗脱，滴速2.0mL/min，收集洗脱液；将所述洗脱液在50℃下真空干燥，然后用适量乙醚溶解，在2500rpm离心10min，收集上清液，50℃下真空干燥至恒重，得卵磷脂。
经表征，本实施例所得卵磷脂提取率为53.6%，纯度为98.8%。
Claims (1)
1.一种从油茶饼粕中提取纯度高于98.5%的卵磷脂的方法，其特征在于采用以下步骤：
A、 无菌条件下，取适量液体培养基配制菌种浓度为1.0×105-1.0×106CFU/mL的菌悬液，所述菌种为康宁木霉，菌种保藏号为CICC 13006，所述液体培养基为含8.0-12.0g/L果糖、6.0-10.0g/L麦麸、12.0-16.0g/L蛋白胨、0.1-0.3g/L尿素的MS液体培养基；取0.4-0.6mL菌悬液在PDA固体培养基表面划线，在25-30℃条件下培养3-5d；挑取分散较好的单菌落接种至含有液体培养基成分的发酵摇瓶中进行扩培，置于气浴恒温振荡器内，在25-30℃，250r/min条件下供氧培养5-7d，气浴恒温振荡器内的氧浓度为0.030-0.050mol/L，得康宁木霉发酵种子培养液；
B、将油茶饼粕在60℃真空干燥箱中烘干，然后粉碎至40-80目，得油茶饼粕粉末；按质量比1：20称取油茶饼粕粉末和蒸馏水投入到发酵罐中，然后注入适量液体培养基；称取油茶饼粕粉末质量8.0-15.0%的康宁木霉发酵种子培养液注入发酵罐；用乙酸调节发酵罐内液体pH值至3.5-5.5，在25-30℃条件下供氧发酵2-3d，氧浓度控制在0.030-0.050mol/L，发酵完成后真空干燥至水份含量为20%，得油茶饼粕发酵液；
C、将亚临界二氯甲烷与正己烷按照质量比3.0-5.0：1.0混合均匀作为萃取剂，将步骤B中所得油茶饼粕发酵液与所述萃取剂按质量比2.0-4.0：1.0加入到亚临界提取装置，设置提取温度为38-45℃，提取压力为0.8-1.2MPa，提取3-5次，单次提取时间20-40min，提取完成后，将提取液导入分离罐，然后减压蒸发残余萃取剂，蒸发温度为50-55℃，当分离罐中压力低于0.1MPa时，停止蒸发，得油茶饼粕磷脂提取物；
D、利用柱色谱分离纯化油茶饼粕磷脂提取物：色谱柱采用600×30mm玻璃柱，层析用硅胶先在120℃烘箱中活化30min后装入玻璃柱，按质量比1.0：10.0-15.0称取油茶饼粕磷脂提取物和甲醇，溶解后注入色谱柱，以甲醇为洗脱剂等度洗脱，滴速2.0mL/min，收集洗脱液；将所述洗脱液在50℃下真空干燥，然后用适量乙醚溶解，在2500rpm离心10min，收集上清液，50℃下真空干燥至恒重，得纯度高于98.5%的卵磷脂。
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| CN102863469A (zh) * | 2012-09-10 | 2013-01-09 | 江苏大学 | 一种高纯度蛋黄卵磷脂的制备方法 |
| CN103355513A (zh) * | 2012-04-10 | 2013-10-23 | 陈培生 | 利用生物的,物理的综合技术,开发积杆畜牧业的肉鹅养殖专用无粮饲料的生产方法 |
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| US4814111A (en) * | 1984-02-13 | 1989-03-21 | Air Products And Chemicals, Inc. | Process for purification of phospholipids |
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| 油茶产业发展现状、存在问题及对策—以凤山县为例;韦正陆 等;《广西农学报》;20170228;第32卷(第1期);第68-70页 * |
| 纤维素分解菌对提高大豆蛋白溶出率作用研究;马永强 等;《食品科技》;20010320(第2期);第25-29页 * |
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