CN108992473A - 一种提取银杏叶黄酮的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种提取银杏叶黄酮的方法，具体步骤如下：步骤一，原料处理；步骤二、乳酸菌发酵；步骤三，超微粉碎；步骤四，复合酶酶解；步骤五，闪式提取；步骤六，离心分离；步骤七，微滤；步骤八，干燥粉碎。本发明的方法采用乳酸菌防腐保存分解，以无毒无害无污染的乙醇作溶剂，采用酶法发酵和闪式提取法相结合的组合提取法，并采用膜滤技术纯化黄酮，具有简单易实现、提取速度快、效率高、不加热、成分稳定、纯度高和易于保存的技术优势，运输和保存成本低，可以提高企业的经济效益。

Description

一种提取银杏叶黄酮的方法
技术领域
本发明涉及中草药成分提取领域，具体是一种提取银杏叶黄酮的方法。
背景技术
随着科技的进步，越来越多的人们会将植物中的有效成分进行提取从而进行利用。
黄酮是广泛存在于天然植物花、叶、果、茎、根中的一大类基本母核为2-苯基色原酮类化合物，包括黄酮、黄烷醇、异黄酮、双氢黄酮、双氢黄酮醇、黄烷酮、花色寨、查耳酮、色原酮、芸香苷、橘皮苷、栎素、绿茶多酚、花色糖苷、花色苷酸等。黄酮广泛分布于银杏、黄芩、葛根、淫羊霍、黄山贡菊、藤茶、山楂、枳壳 槐花、蜂胶、覆盆子、勺药和槐花等植物中。其中，银杏的入药部位为干燥的银杏叶，含有20多种黄酮类成分、萜类、酚类及多种微量元素、维生素和氨基酸等，是提取黄酮的主要中草药之一。
黄酮种类繁多、功效显著，有效清热解毒、镇痛消肿、降血压、血脂、血糖和胆固醇、抗炎症，抗过敏，抑制细菌，抑制寄生虫，抑制病毒，防治肝病，防制血管疾病，防治血管栓塞，防治心脑血管疾病，抗肿瘤，抗化学毒物等。黄酮提取研究历史悠久，提取方法有煎煮法、回流提取法、浸渍法、蒸馏法、渗漉法、连续回流法、超临界萃取法、超声波提取法、微波萃取法等。这些方法各有优缺点，缺点包括成分提取选择性差、成分易破坏、受热长、效率低、成分易破坏、效率低、设备复杂、投资大、规模小等。
发明内容
本发明的目的在于提供一种提取银杏叶黄酮的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种提取银杏叶黄酮的方法，具体步骤如下：
步骤一，原料处理：将银杏叶清洗干净，除去杂质，得到清洗后的银杏叶；
步骤二、乳酸菌发酵：将乳酸菌与清洗后的银杏叶按质量比1:1000-1:10000的比例混匀，密封并且厌氧发酵20-30天；
步骤三，超微粉碎：将步骤二的产物在70℃干燥，然后加入气流粉碎机粉碎，过20-60目筛，制成超微粉，适合闪式提取液提取；
步骤四，复合酶酶解：分别按照超微粉重量的0.2%-0.5%和0.1%-0.3%添加纤维素酶和果胶酶，并加入超微粉重量10-20倍的质量分数为40%-75%的乙醇溶液，调节pH为4.2-4.6，在50℃酶解1.5-2.5h，得到酶解液，酶解可以破坏细胞壁，使细胞内的黄酮成分易于溶于乙醇溶液中；
步骤五，闪式提取：将步骤四的酶解液加入闪式提取仪，得到提取液，提取在室温进行，提取过程快速、安全、节能、高效、不破坏成分并且规模可调，易于技术推广和工业化水产；
步骤六，离心分离：将步骤五的提取液在4500-5100 r/min的转速下离心20 min，得到上清液；
步骤七，微滤：将上清液用超滤膜过滤，纯化，使提取的黄酮纯度大大提高，得到滤液；
步骤八，干燥粉碎：收集滤液并且真空冷冻干燥，在低温下使热敏性的物质不会发生变性或失活，减少挥发性成分损失，低温抑制微生物的生长和酶的作用，因此能保持原来的性状，粉碎后即得到成品。
作为本发明进一步的方案：步骤四中采用盐酸调节pH。
作为本发明进一步的方案：步骤三中超微粉的粒径为0.2-0.28mm。
作为本发明进一步的方案：步骤五中闪式提取仪的提取电压为20-80V，提取时间为2-10 min。
作为本发明进一步的方案：步骤七中超滤膜过滤为依次使用分子量10000-50000Da的超滤膜和100-500 Da的超滤膜过滤。
作为本发明进一步的方案：步骤八中真空冷冻干燥的温度为零下15-零下3℃。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明的方法采用乳酸菌防腐保存分解，以无毒无害无污染的乙醇作溶剂，采用酶法发酵和闪式提取法相结合的组合提取法，并采用膜滤技术纯化黄酮，具有简单易实现、提取速度快、效率高、不加热、成分稳定、纯度高和易于保存的技术优势，运输和保存成本低，可以提高企业的经济效益。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。
实施例1
一种提取银杏叶黄酮的方法，具体步骤如下：
步骤一，原料处理：将银杏叶清洗干净，除去杂质，得到清洗后的银杏叶；
步骤二、乳酸菌发酵：将乳酸菌与清洗后的银杏叶按质量比1:6000的比例混匀，密封并且厌氧发酵20天；
步骤三，超微粉碎：将步骤二的产物在70℃干燥，然后加入气流粉碎机粉碎，过60目筛，制成超微粉，适合闪式提取液提取；
步骤四，复合酶酶解：分别按照超微粉重量的0.4%和0.2%添加纤维素酶和果胶酶，并加入超微粉重量20倍的质量分数为70%的乙醇溶液，调节pH为4.2，在50℃酶解1.5h，得到酶解液，酶解可以破坏细胞壁，使细胞内的黄酮成分易于溶于乙醇溶液中；
步骤五，闪式提取：将步骤四的酶解液加入闪式提取仪，提取电压为50V，提取时间为8min，得到提取液，提取在室温进行，提取过程快速、安全、节能、高效、不破坏成分并且规模可调，易于技术推广和工业化水产；
步骤六，离心分离：将步骤五的提取液在4500 r/min的转速下离心20 min，得到上清液；
步骤七，微滤：将上清液用分子量30000 Da的超滤膜和300 Da的超滤膜过滤，纯化，使提取的黄酮纯度大大提高，得到滤液；
步骤八，干燥粉碎：收集滤液并且真空冷冻干燥，在低温下使热敏性的物质不会发生变性或失活，减少挥发性成分损失，低温抑制微生物的生长和酶的作用，因此能保持原来的性状，粉碎后即得到成品。
经芦丁标准品，分光光度计法测定，黄酮纯度（纯度=检测的黄酮重量/总黄酮提取物重量）达85.78%。
实施例2
一种提取银杏叶黄酮的方法，具体步骤如下：
步骤一，原料处理：将银杏叶清洗干净，除去杂质，得到清洗后的银杏叶；
步骤二、乳酸菌发酵：将乳酸菌与清洗后的银杏叶按质量比1:7000的比例混匀，密封并且厌氧发酵20天；
步骤三，超微粉碎：将步骤二的产物在70℃干燥，然后加入气流粉碎机粉碎，过40目筛，制成超微粉，适合闪式提取液提取；
步骤四，复合酶酶解：分别按照超微粉重量的0.2%%和0.3%添加纤维素酶和果胶酶，并加入超微粉重量10倍的质量分数为40%的乙醇溶液，调节pH为4.5，在50℃酶解2h，得到酶解液，酶解可以破坏细胞壁，使细胞内的黄酮成分易于溶于乙醇溶液中；
步骤五，闪式提取：将步骤四的酶解液加入闪式提取仪，提取电压为20V，提取时间为6min，得到提取液，提取在室温进行，提取过程快速、安全、节能、高效、不破坏成分并且规模可调，易于技术推广和工业化水产；
步骤六，离心分离：将步骤五的提取液在5000 r/min的转速下离心20 min，得到上清液；
步骤七，微滤：将上清液用分子量20000 Da的超滤膜和400 Da的超滤膜过滤，纯化，使提取的黄酮纯度大大提高，得到滤液；
步骤八，干燥粉碎：收集滤液并且真空冷冻干燥，在低温下使热敏性的物质不会发生变性或失活，减少挥发性成分损失，低温抑制微生物的生长和酶的作用，因此能保持原来的性状，粉碎后即得到成品。
经芦丁标准品，分光光度计法测定，黄酮纯度（纯度=检测的黄酮重量/总黄酮提取物重量）达85.19%。
实施例3
一种提取银杏叶黄酮的方法，具体步骤如下：
步骤一，原料处理：将银杏叶清洗干净，除去杂质，得到清洗后的银杏叶；
步骤二、乳酸菌发酵：将乳酸菌与清洗后的银杏叶按质量比1:9000的比例混匀，密封并且厌氧发酵30天；
步骤三，超微粉碎：将步骤二的产物在70℃干燥，然后加入气流粉碎机粉碎，过20目筛，制成超微粉，适合闪式提取液提取；
步骤四，复合酶酶解：分别按照超微粉重量的0.5%和0.3%添加纤维素酶和果胶酶，并加入超微粉重量15倍的质量分数为40%的乙醇溶液，调节pH为4.6，在50℃酶解2.5h，得到酶解液，酶解可以破坏细胞壁，使细胞内的黄酮成分易于溶于乙醇溶液中；
步骤五，闪式提取：将步骤四的酶解液加入闪式提取仪，提取电压为30V，提取时间为6min，得到提取液，提取在室温进行，提取过程快速、安全、节能、高效、不破坏成分并且规模可调，易于技术推广和工业化水产；
步骤六，离心分离：将步骤五的提取液在5100 r/min的转速下离心20 min，得到上清液；
步骤七，微滤：将上清液用分子量40000 Da的超滤膜和200 Da的超滤膜过滤，纯化，使提取的黄酮纯度大大提高，得到滤液；
步骤八，干燥粉碎：收集滤液并且在零下8℃真空冷冻干燥，在低温下使热敏性的物质不会发生变性或失活，减少挥发性成分损失，低温抑制微生物的生长和酶的作用，因此能保持原来的性状，粉碎后即得到成品。
经芦丁标准品，分光光度计法测定，黄酮纯度（纯度=检测的黄酮重量/总黄酮提取物重量）达86.43%。
银杏叶经超微粉碎和发酵酶解后，植物纤维分解，细胞破碎充分，营养物质分解为次小分子，有利于有效成分的释放；闪式提取技术不用加热，可以有效保护植物提取物中的热敏成分，使提取过程实现了快速、高效、充分、完全的要求，缩短了提取时间，降低了生产成本；微滤技术使黄酮提取的纯度得到提高，从而提高了黄酮的提取效率。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (6)

1.一种提取银杏叶黄酮的方法，其特征在于，具体步骤如下：
步骤一，原料处理：将银杏叶清洗干净，得到清洗后的银杏叶；
步骤二、乳酸菌发酵：将乳酸菌与清洗后的银杏叶按质量比1:1000-1:10000的比例混匀，密封并且厌氧发酵20-30天；
步骤三，超微粉碎：将步骤二的产物在70℃干燥，然后加入气流粉碎机粉碎，过20-60目筛，制成超微粉；
步骤四，复合酶酶解：分别按照超微粉重量的0.2%-0.5%和0.1%-0.3%添加纤维素酶和果胶酶，并加入超微粉重量10-20倍的质量分数为40%-75%的乙醇溶液，调节pH为4.2-4.6，在50℃酶解1.5-2.5h，得到酶解液；
步骤五，闪式提取：将步骤四的酶解液加入闪式提取仪，得到提取液；
步骤六，离心分离：将步骤五的提取液在4500-5100 r/min的转速下离心20 min，得到上清液；
步骤七，微滤：将上清液用超滤膜过滤，纯化，得到滤液；
步骤八，干燥粉碎：收集滤液并且真空冷冻干燥，粉碎后即得到成品。
2.根据权利要求1所述的提取银杏叶黄酮的方法，其特征在于，所述步骤四中采用盐酸调节pH。
3.根据权利要求1所述的提取银杏叶黄酮的方法，其特征在于，所述步骤三中超微粉的粒径为0.2-0.28mm。
4.根据权利要求1所述的提取银杏叶黄酮的方法，其特征在于，所述步骤五中闪式提取仪的提取电压为20-80V，提取时间为2-10 min。
5.根据权利要求1所述的提取银杏叶黄酮的方法，其特征在于，所述步骤七中超滤膜过滤为依次使用分子量10000-50000 Da的超滤膜和100-500 Da的超滤膜过滤。
6.根据权利要求1所述的提取银杏叶黄酮的方法，其特征在于，所述步骤八中真空冷冻干燥的温度为零下15-零下3℃。
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