CN108982787A - 一种用于检测肉类中三聚氰胺的方法 - Google Patents

一种用于检测肉类中三聚氰胺的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种用于检测肉类中三聚氰胺的方法，具体属于添加剂测定领域，该方法包括如下步骤：三聚氰胺的定性检测。将待测的肉类样品匀浆，得到浆液。在得到的浆液中加入提取剂，振荡处理20～30min，得到固液混合物，经冷冻离心处理，过滤，得到提取液。提取液中加入蛋白沉淀剂和除脂剂，净化反应完成后，经冷冻离心处理，过滤，得到纯化液。纯化液经旋蒸至干，得到残渣。在得到的残渣溶解在亚硝酸和乙酸混合溶液中，在低温条件下反应40～60min，得到重氮盐溶液。将得到的重氮盐溶液升温，根据重氮盐溶液中有气泡产生时，判断肉类样品中是否含有三聚氰胺。本发明具有操作简单以及检测周期短的优点。

Description

一种用于检测肉类中三聚氰胺的方法
技术领域
本发明属于检测领域，具体为一种用于检测肉类中三聚氰胺的方法。
背景技术
在2008年9月，多数国内知名品牌奶粉发现被三聚氰胺污染。国家立刻采取相应措施，在2008年10月初出台了原料乳和乳制品中三聚氰胺检测国家标准。对于食品和饲料中三聚氰胺检测研究主要集中于近年，一些不法分子利用现行蛋白含量分析的漏洞，为了提高饲料和食品检出中蛋白质的含量而向其中恶意添三聚氰胺，对社会造成了恶劣的影响。
现有技术中用于测定三聚氰胺的分析方法主要为高效液相色谱法、液相色谱质谱法和液相色谱—串联质谱法，其中以高效液相色谱法的使用最为普遍。然而，上述用于测定三聚氰胺的分析方法存在如下缺点：上述分析检测的过程较为复杂，对实验室条件的要求较高。并且，上述实验步骤较为繁琐，导致整个检测周期过长，不利于短时间内对多个样本进行检测。
发明内容
本发明提供了一种用于检测肉类中三聚氰胺的方法，该方法具有操作简单以及检测周期短的优点。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案:
一种用于检测肉类中三聚氰胺的方法，该方法包括如下步骤：
(1)三聚氰胺的定性检测
(1.1)将待测的肉类样品匀浆，得到浆液；
(1.2)在得到的浆液中加入提取剂，振荡处理20～30min，得到固液混合物，经冷冻离心处理，过滤，得到提取液；
(1.3)在提取液中加入蛋白沉淀剂和除脂剂，净化反应完成后，经冷冻离心处理，过滤，得到纯化液；
(1.4)所述纯化液经旋蒸至干，得到残渣；
(1.5)在所述得到的残渣溶解在亚硝酸和乙酸混合溶液中，在3～6℃的低温条件下，反应40～60min，得到重氮盐溶液；
(1.6)将得到的重氮盐溶液升温至25～36℃时，恒温反应10～15min：
a、当重氮盐溶液中有气泡产生时，表明肉类样品中含有三聚氰胺；
b、当重氮盐溶液中无气泡生成时，表明肉类样品中不含有三聚氰胺。
作为优选，在步骤(1.6)中，重氮盐溶液升温至25～36℃时，处于a种情况时，还包括如下步骤：
(1.7)另取一重氮盐溶液样本，向其所在的反应容器中竖直倒置加入仅一端开口的柱状导管，并缓慢加热升温至25～36℃；
所述柱状导管的外周壁设有刻度；反应容器的外周壁设有刻度；上述反应过程均在反应容器的密闭空腔中进行；
记录得到反应容器内液面的高度为H1，反应容器内的温度为T1；
(1.8)反应结束后，记录得到柱状导管内的液面高度为H2，反应容器内的温度为T2，反应容器内的压强为P2，并计算柱状导管内的液面高度与反应容器内液面高度的高度差，得到：
h＝H2-H1；
(1.9)打开反应容器，待气体完全释放后，采用液体密度计量取得到反应容器内液体的密度，记为ρ，并计算得到此时液体内部压强的P1；
P1＝ρ液g h＝P2，
(2.0)记反应容器的液体未升温反应时的气体体积为V1，反应完成后的反应容器内气体体积为V2，则：
V2＝(P2*T1)/(P1*T2*V1)；
(2.1)计算反应容器内反应前后，气体体积差V，
V＝V2-V1；
(2.2)计算得到生成氮气的质量m，
m＝ρ氮气*V；
(2.3)计算得到样本中三聚氰胺的质量M；
当0≤M≤2.5mg/kg时，样本的检测结果为合格；
当M＞2.5mg/kg时，样本的检测结果为不合格。
作为优选，该方法还包括定量检测步骤，该步骤为：
S01、上述得到的残渣加入缓冲溶液复溶后，分别先后加入衍生化试剂与内标溶液，振荡反应完成后，加入反应终止剂，反应终止，并定容至1ml，得到可上机分析的待检测物。
作为优选，缓冲溶液是0.1mol/L三乙胺-碳酸缓冲溶液。
作为优选，在步骤S01中，衍生化试剂是0.6mg/L的氰基硼氢化钠溶液，内标溶液是DCDO或D13CDO。
作为优选，在步骤S01中，反应终止剂是氨水。
作为优选，在步骤(1.2)中，提取剂为A+B的混合液，A选自乙醇、甲醇和乙腈中的至少一种，B选自三氯乙酸溶液、高氯酸溶液、甲酸溶液、乙酸溶液和乙腈的混合液、盐酸溶液和硫酸溶液中的至少一种。
作为优选，在步骤(1.3)中，蛋白沉淀剂选自乙腈、丙酮、乙酸锌溶液、乙酸铅溶液、亚铁氰化钾溶液和硫酸铵溶液中的至少一种。
作为优选，在步骤(1.3)中，除脂剂选自乙腈、二氯甲烷、正己烷以及C18中的至少一种。
作为优选，在步骤(1.6)中，重氮盐溶液升温的温度为32℃。
本发明的有益效果为：
在本发明中，肉类样品经提取剂的提取，以析出其内部含有的三聚氰胺、脂类以及蛋白质等组分。并且提取液经除脂和除蛋白处理，净化后得到纯化液。纯化液为三聚氰胺和提取剂的混合物，其中含有的少量杂质可忽略。纯化液被旋蒸至干且加入亚硝酸和乙酸的混合溶液进行重氮化反应，进而得到重氮盐溶液。实验人员通过对该重氮盐溶液进行加温处理，即可使其分解，从而析出氮气。实验人员即可通过观察重氮盐溶液中是否产生气泡来判断肉类样品中是否含有三聚氰胺。通过上述方法对样本中的溶液进行定性检测，可加快实验人员对肉类样本质量的筛选，使得检测效率更高。
具体实施方式
实施例1
本实施例提供一种技术方案：
一种用于检测肉类中三聚氰胺的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1.1)将待测的肉类样品匀浆，得到浆液。
(1.2)在得到的浆液中加入提取剂，振荡处理20～30min，得到固液混合物，经冷冻离心处理，过滤，得到提取液。
(1.3)在提取液中加入蛋白沉淀剂和除脂剂，净化反应完成后，经冷冻离心处理，过滤，得到纯化液。除去蛋白质和脂肪可进一步对提取液进行净化。
(1.4)所述纯化液经旋蒸至干，得到残渣。通过该步骤可对纯化液中的三聚氰胺进行富集，使得定性检测的现象更加明显。
(1.5)在所述得到的残渣溶解在亚硝酸和乙酸混合溶液中，在3～6℃的低温条件下，反应40～60min，得到重氮盐溶液。
上述步骤的反应原理示意如下：
(1.6)将得到的重氮盐溶液升温至32℃时，恒温反应15min时，由于上述当重氮盐溶液不稳定，在加热过程重氮盐容易分解，产生氮气。此时，实验人员可观察到重氮盐溶液中有气泡产生，则可定性地表明肉类样品中含有三聚氰胺。
(1.7)当肉类样本中含有三聚氰胺时，为了进一步探究其含量是否超标，我们进行如下步骤。另取一重氮盐溶液样本，向其所在的反应容器中竖直倒置加入仅一端开口的柱状导管，并缓慢加热升温至32℃。
所述柱状导管的外周壁设有刻度；反应容器的外周壁设有刻度；上述反应过程均在反应容器的密闭空腔中进行。
记录得到反应容器内液面的高度为H1，反应容器内的温度为T1。
(1.8)反应结束后，记录得到柱状导管内的液面高度为H2，反应容器内的温度为T2，反应容器内的压强为P2，并计算柱状导管内的液面高度与反应容器内液面高度的高度差，得到：
h＝H2-H1；
(1.9)打开反应容器，待气体完全释放后，采用液体密度计量取得到反应容器内液体的密度，记为ρ，并计算得到此时液体内部压强的P1。由于反应容器内部，整个体系处于平衡状态，因此，其内部的压强与液体内部压强的P1是相同的。
即：P1＝ρ液g h＝P2。
(2.0)记反应容器的液体未升温反应时的气体体积为V1，反应完成后的反应容器内气体体积为V2，则根据理想气体状态方程可知：
V2＝(P2*T1)/(P1*T2*V1)。
(2.1)计算反应容器内反应前后，气体体积差V，
V＝V2-V1；
(2.2)计算得到生成氮气的质量m，
m＝ρ氮气*V；
(2.3)由于生成的氮气的物质的量和参与反应的三聚氰胺的物质的量之比为1:1，因此可计算得到样本中三聚氰胺的质量M，M＝(m/28)*126(g)。
当0≤M≤2.5mg/kg时，样本的检测结果为合格。
当M＞2.5mg/kg时，样本的检测结果为不合格。
在一定的误差范围内，上述定性实验可辅助实验人员快速判断肉类样品中三聚氰胺的含量是否超标。并且，实验人员可采用多次实验的方式，得出上述定性检测方法的误差系数，从而使得采用本方法检测得到的三聚氰胺的含量更加准确。
实施例2
本实施例在实施例1的基础上做进一步阐述：
当实施例1中得到的结果为：M＞2.5mg/kg时，样本的检测结果为不合格。则需要进行如下步骤：
将实施例1中步骤(1.4)得到的残渣加入0.1mol/L三乙胺-碳酸复溶后，分别先后加入0.6mg/L的氰基硼氢化钠溶液与DCDO溶液，振荡反应完成后，加入氨水，则反应终止，并定容至1ml，可得到可上机分析的待检测物。
本实施例通过上机分析可定量检测得到三聚氰胺在肉类样本中的含量，为肉类样本是否的三聚氰胺的含量是否合格提供依据。
实施例3
本实施例按照实施例1所提供的方法对肉类样本中所含的三聚氰胺的进行定性检测实验，并阐述区别于实施例1的另一种检测现象，具体如下：
一种用于检测肉类中三聚氰胺的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1.1)将待测的肉类样品匀浆，得到浆液。
(1.2)在得到的浆液中加入提取剂，振荡处理20～30min，得到固液混合物，经冷冻离心处理，过滤，得到提取液。
(1.3)在提取液中加入蛋白沉淀剂和除脂剂，净化反应完成后，经冷冻离心处理，过滤，得到纯化液。除去蛋白质和脂肪可进一步对提取液进行净化。
(1.4)所述纯化液经旋蒸至干，得到残渣。通过该步骤可对纯化液中的三聚氰胺进行富集，使得定性检测的现象更加明显。
(1.5)在所述得到的残渣溶解在亚硝酸和乙酸混合溶液中，在3～6℃的低温条件下，反应40～60min，得到重氮盐溶液。
上述步骤的反应原理示意如下：
(1.6)将得到的重氮盐溶液升温至32℃时，恒温反应15min时，重氮盐溶液中无气泡生成，表明肉类样品中不含有三聚氰胺，表明该批次的肉类样本是合格产品。
尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换,凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种用于检测肉类中三聚氰胺的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)三聚氰胺的定性检测
(1.1)将待测的肉类样品匀浆，得到浆液；
(1.2)在得到的浆液中加入提取剂，振荡处理20～30min，得到固液混合物，经冷冻离心处理，过滤，得到提取液；
(1.3)在提取液中加入蛋白沉淀剂和除脂剂，净化反应完成后，经冷冻离心处理，过滤，得到纯化液；
(1.4)所述纯化液经旋蒸至干，得到残渣；
(1.5)在所述得到的残渣溶解在亚硝酸和乙酸混合溶液中，在3～6℃的低温条件下，反应40～60min，得到重氮盐溶液；
(1.6)将得到的重氮盐溶液升温至25～36℃时，恒温反应10～15min：
a、当重氮盐溶液中有气泡产生时，表明肉类样品中含有三聚氰胺；
b、当重氮盐溶液中无气泡生成时，表明肉类样品中不含有三聚氰胺。
2.根据权利要求1所述的一种用于检测肉类中三聚氰胺的方法，其特征在于，在步骤(1.6)中，重氮盐溶液升温至25～36℃时，处于a种情况时，还包括如下步骤：
(1.7)另取一重氮盐溶液样本，向其所在的反应容器中竖直倒置加入仅一端开口的柱状导管，并缓慢加热升温至25～36℃；
所述柱状导管的外周壁设有刻度；反应容器的外周壁设有刻度；上述反应过程均在反应容器的密闭空腔中进行；
记录得到反应容器内液面的高度为H1，反应容器内的温度为T1；
(1.8)反应结束后，记录得到柱状导管内的液面高度为H2，反应容器内的温度为T2，反应容器内的压强为P2，并计算柱状导管内的液面高度与反应容器内液面高度的高度差，得到：
h＝H2-H1；
(1.9)打开反应容器，待气体完全释放后，采用液体密度计量取得到反应容器内液体的密度，记为ρ，并计算得到此时液体内部压强的P1；
P1＝ρ液g h＝P2，
(2.0)记反应容器的液体未升温反应时的气体体积为V1，反应完成后的反应容器内气体体积为V2，则：
V2＝(P2*T1)/(P1*T2*V1)；
(2.1)计算反应容器内反应前后，气体体积差V，
V＝V2-V1；
(2.2)计算得到生成氮气的质量m，
m＝ρ氮气*V；
(2.3)计算得到样本中三聚氰胺的质量M；
当0≤M≤2.5mg/kg时，样本的检测结果为合格；
当M＞2.5mg/kg时，样本的检测结果为不合格。
3.根据权利要求1或2任一所述的一种用于检测肉类中三聚氰胺的方法，其特征在于，还包括定量检测步骤，该步骤为：
S01、上述得到的残渣加入缓冲溶液复溶后，分别先后加入衍生化试剂与内标溶液，振荡反应完成后，加入反应终止剂，反应终止，并定容至1ml，得到可上机分析的待检测物。
4.根据权利要求3所述的一种用于检测肉类中三聚氰胺的方法，其特征在于，在步骤S01中，缓冲溶液是0.1mol/L三乙胺-碳酸缓冲溶液。
5.根据权利要求3所述的一种用于检测肉类中三聚氰胺的方法，其特征在于，在步骤S01中，衍生化试剂是0.6mg/L的氰基硼氢化钠溶液，内标溶液是DCDO或D13CDO。
6.根据权利要求3所述的一种用于检测肉类中三聚氰胺的方法，其特征在于，在步骤S01中，反应终止剂是氨水。
7.根据权利要求1所述的一种用于检测肉类中三聚氰胺的方法，其特征在于，在步骤(1.2)中，提取剂为A+B的混合液，A选自乙醇、甲醇和乙腈中的至少一种，B选自三氯乙酸溶液、高氯酸溶液、甲酸溶液、乙酸溶液和乙腈的混合液、盐酸溶液和硫酸溶液中的至少一种。
8.根据权利要求1所述的一种用于检测肉类中三聚氰胺的方法，其特征在于，在步骤(1.3)中，蛋白沉淀剂选自乙腈、丙酮、乙酸锌溶液、乙酸铅溶液、亚铁氰化钾溶液和硫酸铵溶液中的至少一种。
9.根据权利要求1所述的一种用于检测肉类中三聚氰胺的方法，其特征在于，在步骤(1.3)中，除脂剂选自乙腈、二氯甲烷、正己烷以及C18中的至少一种。
10.根据权利要求1所述的一种用于检测肉类中三聚氰胺的方法，其特征在于，在步骤(1.6)中，重氮盐溶液升温的温度为32℃。
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