CN1089653A - 雷怕霉素衍生物 - Google Patents

Abstract

本发明提供了雷怕霉素衍生物和其生产方法，含 它们的药物组合物及作为抗真菌剂、肿瘤细胞生长抑 制剂和免疫调节剂的用途。

Description

本发明涉及一种新的化合物和其衍生物，其生产方法，含有它们药物组合物和作抗真菌剂，肿瘤生长抑制剂和作为免疫抑制剂的用途。本发明还涉及具有ATCC55367区别特征的生物学纯净的微生物的培养物。

雷怕霉素是一种能在含水营养培养基中由培养生产微生物来生产的天然存在的大环三烯抗菌素。雷怕霉素首先是作为链霉菌属吸水菌（Strept-omyce  hygrocopicus）提取物而分离出来的，据英国专利文献（1436447）报导该霉素有抗真菌活性。随后Martel  R.R.等人暗示（Can  J.Phy  siol.pharmacol.55，48-51;1977）雷怕霉素可作为免疫抑制剂。目前需要更多的此类试剂。

本发明提供了一种新的天然存在的雷怕霉素衍生物，即16-降-雷怕霉素及其衍生物。业已发现16-降-雷怕霉素具有适宜的抗真菌活性，也具有免疫抑制性质。预计具有抑制肿瘤生长的活性。

本发明涉及16-降-雷怕霉素及其衍生物。本发明还提供了一种包括培养生产16-降-雷怕霉素的微生物和随后从其中分离出16-降-雷怕霉素或其衍生物的生产16-降-雷怕霉素的方法。本发明还涉及用此方法生产的化合物。

本发明还涉及具有ATCC55367区别特征的微生物和其活性突变体的生物学纯净的培养物。

本发明也提供了一种包含有效，无毒量的16-降-雷怕霉素或其衍生物和其药学上可接受的载体或稀释剂的药物组合物。

本发明还提供了一种包括对由于真菌感染需要给药的动物或人使用有效、无毒、抗真菌量的16-降-雷怕霉素或其衍生物的治疗方法。此外，本发明还涉及一种包括对需要进行免疫调节的动物或人使用有效、无毒、免疫调节的16-降-雷怕霉素或其衍生物的进行免疫调节方法。本发明还提供一种包括对16-降-雷怕霉素或其衍生物敏感的肿瘤细胞的生长进行抑制的动物或人使用有效、无毒、肿瘤细胞生长抑制量的16-降-雷怕霉素或其衍生物进行抑制其生长的方法。

16-降-雷怕霉素据认为具有下述结构：

本发明的化合物具有下述特性;

Ⅰ）表观分子量为899（Electrospray  lonization（Esi）质谱仪测）;和

Ⅱ）同所提出的结构相吻合的H  NMR光谱。

16-降-雷怕霉素可通过培养生产微生物和从此培养基中回收 16-降-雷怕霉素或其衍生物来获得。这里的术语“培养”（和其衍生的）含义是在可吸收的碳、氮、硫、无机盐源存在下微生物进行的需氧生长。可在固形和半固形营养培养基或在营养物溶解或悬浮于其中的液形培养基中进行此种需氧生长。培养可在需氧表面或浸没培养进行此种培养。此营养培养基可由复合培养物组成或由化学物质组成。

业已发现适用于本发明的培养方法的微生物有如能合成16-降-雷怕霉素的链霉菌属（Streptomyces）菌株。根据布达佩斯条约的规定，此生长微生物1992年10月15日寄存于美国典型微生物培养收集中心（American  Type  Culture  Collection）（商记为ATCC）（12301  parklawn  Drive  rockville  maryland  20852  USA）编号为55367。

业已发现从自然界分离出来的并也为突变体的ATCC  55367能生产16-降-雷怕霉素。本发明还涉及具有ATCC55367和其突变体相同特性的微生物的生物学纯净的培养物。

术语“突变体”包括从ATCC55367得到的，自发产生的或通过使用外源试剂无论本发明的试剂或其他试剂产生的能生产16-降-雷怕霉素的任何突变体。H.I  Adler在“Techniques  for  the  Development  of  Microorganism  in  Radiation  and  Radioisotopes  for  lndustrial  Microorganism′，proceedings  of  Symposium，vienna  1973  page  241，International  Atomic  Eergy  Authority中概述了包括生产所说突变体的生产突变体菌株的方法，它们是如;

（Ⅰ）电离辐射（如x-射线和g-射线），紫外线和光敏剂（如8-甲氧呋豆素）亚硝酸、羟胺、嘧啶碱类似物（如5-溴尿嘧啶）、 吖啶、烷基化剂（如芥子气、甲磺酸乙酯、过氧化氢、酚类、甲醛、热，和

（Ⅱ）基因技术，包括如重组、转化、转导、溶源化、溶源转变、原生质体融合和选择自发突变的技术。

溶养ATCC55367的发酵培养基适宜包括可吸收的碳和可吸收的氮源。酵母膏大豆粉、和蛋白质水解物则是适宜的氮源例子，而葡萄糖和麦芽汁则是适宜的碳源例子。

培养适宜在28℃左右进行，为使所需产物有最好的产率，适宜在开始发酵后到7天时（优选3-4天左右）收获培养物。本发明也涉及由此方法制得的产品。

然后从所说培养基中分离所需产物或其衍生物，处理并用惯常方法对此类化合物进行纯化。此分离和纯化步骤可方便地在冷却到室温后进行（例如4-40℃方便地在20-35℃下进行）。

所要化合物可容易地用例行方法进行鉴定，如试验其抗真菌活性和/或用光电二极管分析仪监测H.P，I.C滞留时间，或用硅胶薄层色谱（TLC）测定R_F值

适宜的情况是，所说分离工艺就包括HPLC（高效液相色谱）分离步骤，优选该步骤为最后的一步。可用甲醇的水溶液或缓冲乙腈水溶液进行洗脱。

16-降-雷怕霉素和其衍生物可为晶形或非晶形的，如为晶形的，可以是或不是水合物或溶剂化物。

16-降-雷怕霉素衍生物优选药学上可接受的衍生物，衍生物可为如带药学上可接受抗衡离子的盐。

所提供的本发明的化合物适宜为基本纯形式的，例如，至少50% 纯的，适宜至少为60%纯的，至少75%纯的是有益的，优选至少85%纯的，更优选至少95%纯的，最优选至少98%纯的，所有百分数均为按重量计的。根据本发明的不纯的或纯度较低形的化合物可如用于制备适宜于药用的更纯形的同一化合物或相关的化合物（如相应的衍生物）。

本发明还涉及包含药学上可接受的载体或稀释剂及有效量的一种或多种本发明的化合物的药物组合物。

本发明的化合物可用由有效治疗量的本发明的化合物（活性成分）和标准化的药物载体或稀释剂进行混合按惯常方法制备的惯常剂形来给药。所说方法如混合，造粒，压片或把所说成分溶解为适宜于所需的制剂。

所用药物载体可为如固形或液形的。固形载体的分子有乳糖。石膏粉，蔗糖，滑石，明胶，琼脂，果糖，阿拉伯胶，硬脂酸镁，硬脂酸等。液形载体的例子有如糖浆，花生油，橄榄油，水等。同样，所说载体或稀释剂可有如本领域内公知的延时材料，可单独用如甘油-硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯或同石蜡，乙基纤维素，羟丙基甲基纤维素，甲基丙烯酸酯等混合起来使用。

可使用多种药物形式，如用固形载体，可制片剂，粉形或丸形或锭形或糖锭形，这时则放于硬明胶囊中，固形载体的量其变化范围大，但优选25mg-1g左右。如为液形载体，制剂可为糖浆剂、乳剂、软明胶囊剂，存于安瓿瓶或小瓶中的无菌可注射剂或悬浮剂或非水液形悬浮剂。

为了制得稳定的水溶性剂形，可将药学上接受的本发明的化合物的盐溶解在有机或无机酸水溶液中，如0.3M的琥珀酸或优选柠檬 酸溶液中。或将酸性衍生物溶解在适宜的碱性溶液中。如不能得到可溶性盐形式的，则可将本发明的化合物溶解在适宜的助溶剂或其混合物中。这种适宜的助溶剂的例子（并不是限于这些助溶剂）有如醇、丙二醇、聚乙二醇300、多乙氧基醚和甘油等，其浓度为总体积的0-60%。

实验指出，本发明的化合物适宜于对人或其他动物的病原真菌的生长进行预防或抑制。因此，本发明包括一种所需要的对人或其他动物病原真菌的生长进行抑制的方法，该法包括对这种人或动物使用有效，无毒量的本发明的化合物。

术语“病原真菌”意为能在人或动物中引起疾病的真菌。这些病原菌的例子有如白色念珠菌或其他念珠菌属石膏样小孢子菌，发癣菌，须疱菌，曲霉属和孢子丝菌属。这样，本发明的化合物可用于治疗其他微生物中如念珠菌株菌属（Candida），发癣菌属（Trichophyton），石膏样小孢子属（Microsporum）或表皮癣菌属（Epidermophyton）在人中引起的局部真菌感染或用于治疗白色念珠菌（Cardida  albicans）（如真菌性口炎和阴道念珠菌病）引起的粘膜感染。本发明的化合物也可用于治疗如白色念珠菌（Candida  albicans）新型隐珠菌（Cryptococcus  neosormans）.烟曲霉（Aspergillus  fumigatus）.球孢子菌属（Coccidoides）.Paracocciciodes，组织胞浆菌属（Histoplasma）或芽生菌属（Blastomyces  Spp）引起的系统真菌感染，也可用于治疗足分支菌病（Cumycotic  mycetoma），组织胞浆菌属着色真菌病和pbycomycosis病。用公知的标准实验和下面将予介绍的酵母分析来证明或表明本发明的化合物能抑制病原真菌的生长。

本领域的普通技术人员能通过例行实验来确定抑制病原真菌生长 的本发明化合物的有效或无毒的剂量。一般而言，有效剂量为0.05-100mg/公斤体重/每天。

实验表明，本发明的化合物也适宜用于免疫调节，即抑制人或动物免疫体系。因此，本发明还涉及对需要进行免疫调节的人或动物进行免疫调节预防或治疗的方法，该法包括对这样的人或其他动物施用有效或无毒量的本发明的化合物。

本发明化合物诱发免疫调节的能力可用于此目的标准实验来说明，如混合淋巴细胞反应实验或通过摄入thimidine测定抑制T细胞增殖的实验。

本发明的化合物用于诱发免疫抑制的事实表明事实上这些化合物可用于治疗或预防移植器官（如肾、心脏、肺、骨髓、皮肤、角膜等）的排异性;治疗或预防自动免疫疾病，发炎，增殖或高增殖疾病;预防或治疗皮肤表现的免疫居间疾病（如风湿病样关节炎、狼疮红斑、系统狼疮红斑、桥本氏甲状腺炎、多发性硬化、重症肌无力、1型糖尿病、眼色素层炎、肾变病综合症、牛皮癣、特应性皮炎、接触性皮炎和湿疹性皮炎、皮脂溢性皮炎、扁平苔癣、Pemplugns、大疱天疱疮、大疱性表皮松解、Uritcaris、干皮病、结节性脉管炎、红斑、皮嗜曙红细胞增多、斑形脱发等）;治疗可逆梗塞导气管痰病、肠炎和变应性（如腹腔痰病、直肠炎、嗜曙红细胞增多胃肠炎、肥大细胞病、Chrohn氏疫病和溃疡性结肠炎）和食品有关的变应性（如偏头疼（migrane）、鼻炎和湿疹）及多发性骨髓病。高度免疫球蛋白E、乙型肝炎抗原慢性活动性肝炎、地中海病毒族热、格雷天斯氏病、自动免疫血渗性贫血和原发胆汁性肝硬变。

对于诱发免疫抑制来说，本发明的有效、无毒用量是本领域技术 人员通过例行实验能够确定的。一般而言，有效剂量范围为0.05-100mg左右/公斤体重/每天。

本发明的化合物也可适用于需要对其肿瘤细胞（对本发明的化合物敏感的）的生长进行抑制的人或动物。具体讲，本发明的化合物能用于减少对本发明化合物敏感的肿瘤细胞的大小，抑制其生长和/或延长动物或人存活的时间。因此，本发明也提供了一种需要对人或动物的肿瘤细胞（对本发明化合物敏感的）的生长进行抑制的方法，该方法包括给这些动物或人施用有效量的，无毒的本发明的化合物。本领域的技术人员能通过惯常实验确定治疗致癌肿瘤目的有效，无毒量的本发明的化合物，一般而言，本发明的有效剂量约为0.05-100mg/公斤体重/每天。

可根据上述治疗方法对人或其他动物施用足以能对其进行治疗或预防量的本发明的化合物，可用按将本发明化合物和药学上可接受的载体或稀释剂按公知技术进行混合制得的惯常剂形对人或其他动物施用本发明的化合物。本领域的普通技术人员知道药学上可接受的载体或稀释剂的形式或性状是由将与其混合的活性成分的量，给药途径和其他众所周知的参数决定的。

本发明化合物的给药途径可以是口服、不经胃肠给药，吸入或局部给药。术语不经胃肠给药有如静脉内给药、肌内给药、皮下给药、直肠给药、阴道或腹腔内给药。一般优选皮下给药和肌内给药的不经胃肠给药形式。

在用本发明的化合物对病原真菌生长进行预防或治疗性抑制时，对免抑制进行预防或治疗性诱发时对致癌肿瘤进行治疗时，每天如经非胃肠和口服给药的剂量制度一般为维0.05-100（优选约 0.5-10）mg/公斤体重/每天。

本发明的化合物可通过吸入给药。所说“吸入”意为鼻内和口吸入给药。可用惯常技术制备这种给药的适宜剂形，如气雾剂或经计量的剂量吸入器。所使用的本发明化合物的优选剂量一般为10-100mg。

本发明的化合物也可局部给药。术语局部给药意为非系统给药，它包括如将本发明的化合物从外部施于表皮，颊腔和该化合物滴于耳、眼和鼻，且此化合物不经这些局部大量进入血流。系统给药意为口服、静脉内的、腹腔内和肌内给药。经局部给药对病原生长进行预防或治疗性抑制或诱发免疫抑制所需的本发明的化合物（下称为活性成分）的量当然取决于选择的化合物，要予治疗的病的性质和严重程度及所治疗的动物，且最后由内科医生决定。本发明化合物的适宜剂量范围为约1-100mg/公斤体重/天。

虽然将予给药的活性成分可单独作为原化学药剂来使用，但优选其作为药物制剂来使用。对于局部给药来说，在所说配方中的活性成分含量为0.001-10%（w/w），如1-2%（w/w），虽然可含10%之多，但优选不超过5%（优选0.1-1%）（w/w）。

对于兽医和人医用来说，本发明的局部给药制剂包括活性成分和一种或多种可接受的载体及任意的任何其他治疗成分。所说载体是在与制剂中的其他成分量可相容的和对其受体无有害的意义上“可接受的”。

适宜于局部给药的配方包括能经皮肤渗透到需要治疗的焦点的液形或半液形制剂，如搽剂、洗剂、软膏剂或膏剂及适宜于对眼、耳、鼻给药的滴剂。

根据本发明的滴剂可包括无菌水或油液剂或悬浮剂，可将所说活 性成分溶于适宜的杀菌或杀真菌剂和/或其他适宜防腐剂及优选包括适宜表面的活性剂的适宜水溶液中来制备。然后将所得溶液经过滤澄清，转移到密封的且于高压下或维持于90-100℃消毒半小时的适宜容器内。或对此溶液进行过滤消毒或用无菌技术将其转移到所说容器内。适宜于用在滴剂中的杀菌剂和杀真菌剂的例子有如硝酸苯基汞或乙酸苯基汞（0.002%）洁尔灭（0.01%）和醋酸洗必太（0.01%）。用于制备此油液的适宜溶剂有甘油，经稀释的乙醇和丙二醇。

本发明的洗剂包括适用于皮肤或眼的洗剂。用于眼的洗剂可包括任选含有杀菌剂的无菌水溶液。用类似于制备滴剂的方法来制备。用于皮肤的洗剂或搽剂也可包括加速干燥剂和冷却皮肤剂，如乙醇或丙酮和/或润湿剂如甘油或蓖麻油或花生油等油类物质。

根据本发明的乳剂、软膏剂或膏剂为活性成分外用的半固形制剂。可借助于适宜的机械将细分散的或粉末形，单独或于溶液中或悬浮于水或非水液体中的活性成分同油脂或非油脂基料进行混合来制备这些剂形。这些基料可包括如硬、软、液体石蜡一类的烃、甘油、蜂蜡、金属皂;胶浆;天然油如杏仁油、谷物油、花生油、蓖麻油或橄榄油羊毛脂或其衍生物或硬脂酸或油酸等脂肪酸及丙二醇或大凝胶（macrogls）。此制剂可包括任何适宜的表面活性剂，如阴离子、阳离子或非离子表面活性剂，如脱水山梨糖酯或聚氧乙烯衍生物。也可包括天然树胶、纤维素衍生物或有机硅胶的悬浮剂和其他成分（如羊毛酯）。

可以预计，当本发明的化合物在上述剂量范围给药时，没有不可接受的毒性效果。然而，本领域的技术人员知道，本发明化合物单剂 的最佳量和时间间隔将取决于要予治疗的病的性质和程度，其形式，给药途径和部位及治疗的具体动物，此最佳值可用惯常技术来确定。本领域的技术人员也知道，利用惯常的疗程确定方法来确定最佳疗程，即规定天数的每一天给的本发明化合物的剂量数。

不言而喻，本领域的普通技术人员能利用上面的叙述来对本发明作最充分的利用，因此，下述实施例仅仅是用于进一步说明本发明，而不对本发明的范围进行限定。

实施例

下述实施例是用于说明本发明的。

A.制备16-降-雷怕霉素

实施例1

制备琼脂斜面培养基：将用10ml斜面培养基制备的琼脂斜面（右旋糖10g/L;糊精40g/L;酵母膏5g/L;NZ A型胺（Shefield）2g/L;大豆胨20g/L;CaCO₃1g/L;琼脂18g/L;用的去离子水）同约0.1ml冷冻培养原种进行接种，在28℃下培育5-10天。制备种子培养物：将含500ml种子培养量（葡萄糖5g/L;糊精40g/L;大豆胨20g/L;酵母膏5g/L;NZ A型胺2g/L;CaCO₃1g/L;用去离子水配制）2升Ehrlenmyer烧瓶用从琼脂斜面刮的细胞进行接种，28℃培育，在250转/分下用旋转摇动器（1英寸幅度）进行搅拌，使此种子在此条件下维持72小时。接种和保养生产培养物：用300-500ml种子培养物对含10升的无菌生产培养基（葡萄糖2g/L;麦芽汁10g/L;酵母膏10g/L;用去离子水制备的）的15升发酵器进行接种。使此培养物维持在28℃。300- 400转/分搅拌、5L空气/分，反压0.5巴条件下。初始PH6.8-7.0，不予控制。

收获步骤：于约5000xg条件下离心发酵肉汤40分钟，分离并除去悬浮剂和细胞以进行纯化。

实施例2

制备琼脂斜面培养物：将约0.1ml冷冻培养物原种对由10ml琼脂培养基制备的琼脂斜面（右旋糖10g/L;糊精40g/L;酵母膏5g/L;NZ A型胺（Shefield）2g/L;大豆胨20g/L;CaCO₃1g/L;琼脂18g/L;用去离子水制备的）进行接种，28℃培养5-10天。制备种子培养物：用从一种琼脂斜面刮的细胞对含500ml种子培养基的2L Ehrlenmyer烧瓶进行接种。每一烧瓶在28℃下培养。在250转/分下用旋转摇动器（1英寸幅度）进行搅拌。使此种子在此条件下维持72小时。接种和保养生产培养物：用500-1500种子培养物对含100L无菌生产培养液（葡萄糖2g/L;麦芽汁10g/L;酵母膏10g/L;用无离子水配制的）150L发酵器进行接种。将此培养物维持在下述条件下：28℃，200转/分搅拌、75升空气/分，反压0.5巴，初始PH为6.8-7.0并不予控制。

收获步骤：于约5000xg下离心发酵肉汤45分钟。分离并除去悬浮剂和细胞以纯化。

分离步骤：于5000xg条件下，分批对收获的全部肉汤（100L）进行离心45分钟。用Diaion  HP-20（Mitsubishi  Chemical  Industries）柱（4L）对澄清的肉汤进行纯化。经4L水洗涤后，用8L丙酮对柱进行洗脱。减压下对洗脱物进行浓缩并相 继用乙酸乙酯和二氯甲烷进行提取。对乙酸乙酯和二氯甲烷提取物进行减压蒸发，合并得油状残余物，再用硅胶柱进行分离（250mlE·Merck，硅胶60 70-230目，德国产）（在80∶20乙烷-丙酮中）。随后用阶梯的乙烷和丙酮（80∶20;60∶40;40∶60和0∶100）溶液进行洗脱。对乙烷-丙酮洗脱液（40∶60）进行减压浓缩得粗残余物，把此物溶解在甲醇中并注入逆向柱（E.Merck，Lobar Lichroprep，40-63μm，25x310mm），于8ml/分流速下用阶梯的甲醇水（60%-100%）进行洗脱。在280nm处进行检测。按HPLC分析，光电二极管检测器，Altex Ultrasphere ODS柱（4.6x250mm，Beckman USA）在1ml/分流速下，用移动相（60∶40乙腈-乙酸胺缓冲液，0.05M，PH6.5）收集活性部分。收集含16-降-雷怕霉素的部分并蒸发至无水得粗残余物。用逆相半制备性HPLC（Altex Uitrasphere ODS柱，10x250mm，Beckman，USA），在4ml/分流速下对此粗残余物进一步纯化，用阶梯的50-60%乙腈的0.05M乙酸铵缓冲溶液（PH6.5）洗脱，合并含16-降-雷怕霉素的部分，用逆相C₁₈Seppak柱（Waters Associates，USA）进行脱盐。最后用制备性TLC（E.Merck硅胶60，德国产），70∶15∶15环己烷-异丙醇-二氯甲烷作洗脱液进行纯化得6mg，16-降-雷怕霉素。

B.16-降-雷怕霉素表征

NMR（CDCl₃，360MHz）：δ6.41（dd，J＝14.6，10.4Hz，1H），6.32（dd，J＝14.6，10.0Hz，1H），6.16（dd，J＝14.9，10.0Hz，1H），5.99（d，J＝10.4Hz，1H），5.51（dd，J＝14.9，9.1Hz，1H），5.45（s，1H），5.39（d，J＝10.0Hz，1H），5.12（ddd，J＝7.0，5.7，3.0Hz，1H），4.62（dd，J＝8.2，4.6Hz，1H），4.17（d，J＝7.0Hz，1H），3.84-3.88（m，1H），3.78（dd，J＝10.3，10.3Hz，1H），3.63（d，J＝7.3Hz，1H），3.54-3.60（m，1H），3.56（d，J＝10.0，5.5Hz，1H）3.40（s，3H），3.37（s，3H），3.34-3.41（m，2H），3.12（s，3H），2.93（ddd，J＝10.9，8.5，4.2Hz，1H），2.79-2.86（m，1H），2.79（dd，J＝170.2，7.0Hz，1H），2.68（dd，J＝17.0，5.7Hz，1H），2.21-2.32（m，1H），1.88-2.18（m，4H），1.77（d，0.95Hz，3H），1.64（s，3H），1.49-1.83（m，11H），0.63-1.45（m，4H），1.11（d，J＝6.7Hz，3H），1.05（d，J＝6.6Hz，3H），1.02（d，J＝6.7Hz，3H），0.93（d，J＝6.0Hz，3H），0.89（d，J＝6.2Hz，3H）.质谱（ESI⁺/NH₄OAc）m/z922（M+Na⁺），917（M+NH4⁺），UV（MeOH）λmax267，277，289nm.

用Altex  Ultrasphere  ODS柱（4.6x250mm，Beckman，USA）流速1ml/分下，用流动相60∶40乙腈-0.05M乙酸铵缓冲溶液（PH6.5）对雷怕霉素和16-降-雷怕霉素进行逆相HPLC对比，在280nm处进行测定，得滞留时间分别为16.3和24.5分。

C.生物活性实施例

用下述分析方法对本发明化合物的抗真菌和免疫抑制活性进行了分析。

对抗真菌活性分析

在完全琼脂培养基（YPD）上涂覆对数生长的酵母生物体（酿酒酵母）。把溶解于适宜水或有机溶剂中的化合物置于在琼脂中所压的小井中。

把涂层培养48小时，测定抑制带。对抑制带小区同药物浓度对数进行回归分析的测定化合物的效价。

对免疫抑制活性进行有丝分裂分析

在RPMI中，用10%牛犊血清，在5×10⁶/ml下确定BDF1雄性小鼠脾细胞。把100毫升份的此悬浮液（5×10⁵细胞）分配于96-小井圆底微滴板（Linbro Flow Laboratories）内。加入伴刀豆球蛋白A（5mg/ml）作为促细胞分裂刺激物，用RPMI把微滴井内的最终体积调到200ml。于37℃下，5%CO₂气氛中培养细胞培养物72小时，在72小时培养的最后18小时中，用0.5m Ci 3H-胸腺嘧啶脱氧核苷（比放射性2.00Ci/摩尔）进行脉冲调节。用自动多种样品收集器收获细胞，用Beckman液体闪烁计数器测定细胞的放射性。所得结果是用重复器四次测定的平均值来表示的。培养72小时后，用锥虫蓝排阻测定细胞生存性。在适宜稀释度下把欲试验的化合物加到微滴板上，然后再加细胞。

16-降-雷怕霉素表明对酿酒酵母为2ng/ml的IC₁₂，在有丝分裂中IC₅₀为6nm。此LC₁₂为产生12mm抑制带的抗真菌扩散分析所得的浓度。这些结果指出16-降-雷霉素既有抗真菌活性，又有免疫调节活性。

虽然上面的说明和实施例充分说明了本发明和其优选实施例方案，但本发明并不是限于特定公开的这些实施方案，本发明包括本发明权利要求书所限定的各实施方案。

Claims (12)

1、一种下式代表的化合物或其衍生物：

2、一种具有ATCC55367或其突变体区别特征的微生物的生物学纯净的培养物。

3、一种包括有效、无毒量的权利要求1的化合物及惰性，药学上可接受的载体或稀释剂的药物组合物。

4、权利要求3的组合物，其中所说组合物为适宜不经胃肠给药的剂形。

5、权利要求3的组合物，其中所说组合物为适宜经口服给药的剂形。

6、一种对人或动物的真菌感染进行治疗的方法，该方法包括对这种动物或人给有效，无毒，抗真菌量的权利要求1的化合物。

7、权利要求6的方法，其中所说化合物的使用量为0.1-100mg/公斤体重。

8、一种对需要进行免疫调节的人或动物进行免疫调节的方法，其中包括给这样的人或动物给药有效、无毒、免疫调节量的权利要求1的化合物。

9、权利要求8的方法，其中所说化合物的给药量为0.1-100mg/公斤体重。

10、一种抑制人或动物体内对权利要求1的化合物敏感的肿瘤细胞生长的方法，该方法包括对这样的人或动物投用有效、无毒、肿瘤细胞生长抑制量的权利要求1的化合物。

11、权利要求10的方法，其中所说的投用化合物的量为0.1-100mg/公斤体重。

12、一种生产权利要求1化合物的方法，该方法包括培养生产权利要求1化合物的微生物，随后从培养物中分离这种化合物。