CN108949788B - 番茄红素合成相关基因及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了番茄红素合成相关基因及其应用。本发明通过选取来源于大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、粘细菌、戈壁奇球菌的四种idi和dxs，分别克隆到表达载体，将其与含有合成番茄红素基因的pTrc99aEBI质粒共同在大肠杆菌中进行异源表达，来源于粘细菌的idi、dxs基因能够有效提高番茄红素产量；在此基础上将粘细菌idi、dxs基因进行密码子优化获得idi‑dxs基因，协同表达经过密码子优化的粘细菌idi‑dxs基因来进一步提高番茄红素的合成水平。本发明获得了新的基因资源，为进一步的代谢工程改造提供了思路。

Description

番茄红素合成相关基因及其应用

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及番茄红素合成相关基因及其应用。

背景技术

番茄红素是一类有40个碳原子的类胡萝卜素，其不仅具有很高的营养价值，而且具有保健功效，尤其是具有较高的抗氧化能力，能防治血管硬化、抗衰老及抑制癌细胞生长，在食品加工、医药保健、化妆品等行业用途十分广泛。目前，番茄红素的生产方法主要包括以下几种：a.天然产物提取获得，例如从胡萝卜、番茄等富含色素的植物中提取；b.利用化学法对番茄红素进行全合成；c.采用三孢布拉氏霉菌、杜氏盐藻、红法夫酵母等天然具有番茄红素合成能力的微生物进行发酵生产。但这三种方法都有相应的不足之处，如天然提取成本较高，化学合成会产生副产物，天然菌株产量较低，故应用基因工程将外源基因导入模式菌株，利用模式菌株繁殖快，产量高，遗传改造方便等特点制造番茄红素,是番茄红素生产的主要发展方向。和其他萜类化合物一样，番茄红素是以异戊烯焦磷酸(IPP)作为前体进行合成。在自然界，有两种途径合成IPP：MVA途径和MEP途径。

异戊烯基焦磷酸异构酶(isopentenyl diphosphate isomerase，IDI)和脱氧木酮糖磷酸合成酶(1-deoxyxylulose-5-phosphate synthase，DXS)是合成番茄红素等萜类化合物的关键催化酶，也是代谢工程对萜类化合物合成途径改造的最重要的靶点之一。IDI编码大肠杆菌代谢途径中的IPP异构化酶，能够促进IPP向DMAPP的转化，通过在大肠杆菌中过表达idi基因能够有效提高番茄红素产量。IDI在基因序列及反应机制上可以分为两类，但两类IDI在代谢改造中促进番茄红素合成的作用仍不清楚。DXS编码脱氧木酮糖磷酸合成酶，主要催化丙酮酸和三磷酸甘油醛之间的反应。idi、dxs基因在萜类化合物代谢途径中发挥着重要的作用，不同来源idi、dxs基因对工程菌株产番茄红素的作用也各不相同。目前工程菌株中强化idi、dxs基因的策略往往局限在大肠杆菌来源等自身不能生产番茄红素的少数候选基因，而许多产番茄红素菌株的idi、dxs基因并没有得到表征。

发明内容

本发明的目的是提供新的番茄红素合成相关基因及其在提高番茄红素产量中的应用。

本发明通过发掘、比较不同来源的idi、dxs基因，获得新的基因资源，将其与含有合成番茄红素基因的pTrc99aEBI质粒共同在大肠杆菌中进行异源表达，可以提高番茄红素产量；并协同表达经过密码子优化的粘细菌idi-dxs基因，番茄红素产量得到进一步提升，为下一步的代谢工程改造提供了新的思路。

因此，本发明的第一个目的是提供番茄红素合成相关基因，为ECidi基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；或BSidi基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；或MXidi基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；或IOidi基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；或ECdxs基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；或BSdxs基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；或MXdxs基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；或IOdxs基因，其核苷酸序列如SEQID NO.10所示；或idi-dxs基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示。

所述的番茄红素合成相关基因编码的蛋白也属于本发明的保护范围。

本发明还提供一种含有所述的番茄红素合成相关基因的重组表达载体。所述的表达载体，优选为pACYCDuet-1载体。

本发明还提供一种含有所述的番茄红素合成相关基因的基因工程菌。所述的基因工程菌，优选大肠杆菌BL21(DE3)。

优选，所述的基因工程菌还含有重组质粒pTrc99aEBI，其是将序列如SEQ ID NO.1所示的CrtEBI基因与载体pTrc99a连接构建的重组质粒。

本发明还提供所述的番茄红素合成相关基因在提高番茄红素产量中的应用。

本发明通过选取来源于大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、粘细菌(Myxococcus stipitatus)、戈壁奇球菌(Deinococcus gobiensis)的四种idi和dxs，分别克隆到表达载体，将其与含有合成番茄红素基因的pTrc99aEBI质粒共同在大肠杆菌中进行异源表达，并在此基础上将粘细菌idi、dxs基因进行密码子优化获得idi-dxs基因，协同表达经过密码子优化的粘细菌idi-dxs基因来进一步提高番茄红素的合成水平。

相较于大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等菌株，来源于粘细菌的idi、dxs基因对重组大肠杆菌合成番茄红素能力的促进效果具有更明显的作用。

来源于粘细菌的番茄红素合成关键酶基因idi、dxs对MEP途径的强化具有更明显的作用，粘细菌idi、dxs基因通过影响合成番茄红素相关基因的表达来调控番茄红素的合成水平。协同表达经过密码子优化的idi-dxs基因，番茄红素产量得到进一步提升。

与现有技术相比，本发明的优点是：

1.本发明通过实验证明大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、粘细菌、戈壁奇球菌idi、dxs基因对重组大肠杆菌合成番茄红素能力具有更明显的促进作用。

2.本发明大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、粘细菌、戈壁奇球菌idi、dxs基因通过调控MEP途径中IPP异构化酶和脱氧木酮糖磷酸合成酶的合成来提高菌株合成番茄红素的能力。

3.本发明通过协同表达经过密码子优化的粘细菌idi-dxs基因来进一步提高番茄红素产量。

本发明选用模式菌株大肠杆菌作为出发菌株，通过对不同来源idi、dxs基因进行筛选来提高番茄红素产量，证明了来源于粘细菌的idi、dxs基因优于代谢工程改造中常用的基因。目前还未见报道利用粘细菌来源基因优化MEP途径，提高番茄红素产量。这为后续代谢工程改造提供了新的基因资源。

附图说明

图1为番茄红素HPLC标准曲线。

图2为不同来源IDI、DXS PCR扩增产物核酸电泳图，其中M为marker，图A中1-8分别依次对应为ECidi、BSidi、MXidi、IOidi和ECdxs、BSdxs、MXdxs、IOdxs目的片段，图B中1为载体pACYCDuet-1片段，2为CrtEBI基因。

图3为过表达DXS或IDI重组大肠杆菌产番茄红素情况，其中A为实施1得到的成功转化质粒pTrc99aEBI的重组大肠杆菌，B为转化质粒pTrc99aEBI和pACMXDXS的重组大肠杆菌，C为转化质粒pTrc99aEBI和pACMXIDI的大肠杆菌。

图4为不同来源IDI对番茄红素产量的影响，其中C为对照(实施1得到的成功转化质粒pTrc99aEBI的重组大肠杆菌)，E.CIDI、B.SIDI、M.XIDI、I.OIDI表示过表达ECIDI、BSIDI、MXIDI、IOIDI的菌株，E.CIDI+、B.SIDI+、M.XIDI+、I.OIDI+表示在培养基中添加了诱导剂的过表达ECIDI、BSIDI、MXIDI、IOIDI的菌株。

图5为不同来源DXS对番茄红素产量的影响，其中C为对照(实施1得到的成功转化质粒pTrc99aEBI的重组大肠杆菌)，E.CDXS、B.SDXS、M.XDXS、I.ODXS表示过表达ECDXS、BSDXS、MXDXS、IODXS的菌株，E.CDXS+、B.SDXS+、M.XDXS+、I.ODXS+表示在培养基中添加了诱导剂的过表达ECDXS、BSDXS、MXDXS、IODXS的菌株。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例中所使用的菌株和质粒如表1所示：

表1使用的菌株和质粒

实施例1：番茄红素合成基因导入大肠杆菌得到重组大肠杆菌

1.重组质粒pTrc99aEBI的构建

根据大肠杆菌密码子的偏好性，将戈壁奇球菌基因组中含有合成番茄红素的CrtE、CrtB和CrtI基因进行密码子优化并添加合适的RBS位点，全基因合成CrtEBI基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

以实验室保存的pTrc99a空载体或合成的CrtEBI基因为模版，按照相应的配对引物，分别扩增得到载体pTrc99a及CrtEBI基因目的片段。PCR扩增条件为：95℃预变性5min；98℃变性10s、55℃退火15s、72℃延伸30s，共进行30个PCR循环；最后在72℃继续延伸10min。

PCR扩增体系为：

用于扩增载体pTrc99a的引物序列为：

pTrc99a-P1：AACGCAGAAGCGGTCTGATAAAACAGA

pTrc99a-P2：TTGTTTTCCTCCTTGTTAAATTGTTATCCGCTCA

用于扩增CrtEBI基因的引物序列为：

CrtEBI-P1：AAGAAGGAGATATACATATGCGTCCG

CrtEBI-P2：TTAGTCGTCAGCAGCAGCACCCAGC

将获得的目的基因与载体片段进行琼脂糖凝胶电泳，回收条带。使用CPEC方法将CrtEBI基因与载体pTrc99a进行连接构建重组质粒。连接体系为：目的基因与载体各2.5μL、Primer Star Max DNA polymerase 5μL。连接条件为：98℃预变性3min；98℃变性10s；55℃退火30s；72℃延伸1min后转化E.coli DH5α。在含100mg/L氨苄青霉素平板上进行筛选，待培养约12h后挑取单菌落进行菌落PCR验证。将验证正确的菌体进行培养，提取质粒，送上海美吉公司进行测序，经测序正确的重组质粒命名为pTrc99aEBI。

2.重组质粒的过表达及对番茄红素产量的影响

将的质粒pTrc99aEBI(含有番茄红素合成基因CrtEBI基因)转入E.coli BL21(DE3)中，同时以空pTrc99a转入E.coli BL21(DE3)作为对照。在含有100mg/L氨苄青霉素的LB平板上进行筛选，得到相应的重组大肠杆菌菌株。

挑取重组大肠杆菌单克隆在5mL含有相应抗生素的LB液体培养基中进行培养，待菌体长至OD值大约1后，转接至50mL含有相应抗生素的LB液体培养基中。待菌体OD值达到0.6到0.8时，用0.1mmol/L IPTG进行诱导，同时以未诱导的重组大肠杆菌培养基作为对照，约20h后检测番茄红素含量。

3.番茄红素标准曲线的建立

通过稀释番茄红素标准品母液，配制以下浓度番茄红素样品：18、16、14、12、6、4、2、1mg/L。根据相应浓度番茄红素样品对应的峰面积，可以得到其数学关系式为：Y＝0.0286X-0.1968，R²＝0.9972，其中Y为番茄红素浓度，X为峰面积。番茄红素标准曲线见图1。

4.番茄红素的提取与测定

番茄红素提取的具体操作：取3mL培养至一定时期的重组大肠杆菌培养液，5000r/min离心3min弃上清；用无菌水清洗两次，加3mL丙酮，于55℃水浴锅中萃取15min，5000r/min离心5min取上清即为番茄红素萃取液，保留上清以备检测。另外取9mL重组大肠杆菌培养液于8000r/min离心5min后弃上清，沉淀于70℃中烘干，然后计算菌体干重。

番茄红素含量的测定使用高效液相色谱仪(HPLC)。色谱柱：反相色谱柱C18；流动相为乙腈:甲醇:异丙醇(80:15:5，v:v:v)，流速1.2mL/min，检测波长为472nm，柱温40℃，进样量10μL。根据标准曲线计算番茄红素的产量。实验结果显示，成功转化质粒pTrc99aEBI的重组大肠杆菌番茄红素的含量达到3.58mg/g DCW(图3A)。

实施例2：不同来源异戊烯基焦磷酸异构酶(IDI)和脱氧木酮糖磷酸合成酶(DXS)对重组大肠杆菌番茄红素产量的影响

1.目的基因的克隆

以实验室保存的空pACYCDuet-1载体或大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、粘细菌(Myxococcus stipitatus)或戈壁奇球菌(Deinococcusgobiensis)基因组为模版，按照相应的配对引物，分别扩增得到载体pACYCDuet-1片段(其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，4008bp)，以及ECidi(其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，549bp)、BSidi(其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，1050bp)、MXidi(其核苷酸序列如SEQ IDNO.5所示，1059bp)、IOidi(其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，912bp)和ECdxs(其核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，1863bp)、BSdxs(其核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，1902bp)、MXdxs(其核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，1752bp)、IOdxs(其核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示，1845bp)目的片段；PCR扩增产物核酸电泳结果与各个基因的大小吻合，所得核酸电泳图如图2所示。

其中，pACYCDuet-1、E.C、B.S中idi、dxs基因的PCR扩增条件为：95℃预变性5min；98℃变性10s、55℃退火15s、72℃延伸30s，共进行30个PCR循环；最后在72℃继续延伸10min；

PCR扩增体系为：

M.X、I.O中idi、dxs基因使用扩增高GC基因的

HS DNA Polymerasewith GC Buffer进行扩增，PCR条件分别将退火温度改为60℃和68℃，其他均与E.C、B.S中idi、dxs基因的PCR扩增条件相同。

PCR扩增体系为：

用于扩增pACYCDuet-1片段的引物序列为：

pACYC-P1：TTAGTATATTAGTTAAGTATAAGAAGGAGATATA

pACYC-P2：GGTATATCTCCTTATTAAAGTTAAACAAAATTATTT

用于扩增ECidi片段的引物序列为：

E.CIDI-P1：AATAAGGAGATATACCATGCAAACGGAACACGTCATTTTATTGA

E.CIDI-P2：TTAACTAATATACTAATTATTTAAGCTGGGTAAATGCAGATAATCG

用于扩增BSidi片段的引物序列为：B.SIDI-P1：

TAATAAGGAGATATACCGTGACTCGAGCAGAACGAAAAAGACAACACAT；

B.SIDI-P2：TTAACTAATATACTAATTATCGCACACTATAGCTTGATGTATTGACCCC

用于扩增MXidi片段的引物序列为：

M.XIDI-P1：AATAAGGAGATATACCATGGTCGAGGACATCACAGCACGGC

M.XIDI-P2：TTAACTAATATACTAACTACAGCGCCGCCATCCAATCCTTCA

用于扩增IOidi片段的引物序列为：I.OIDI-P1：

AATAAGGAGATATACCGTGCCCTGGCCCTACCGGGCACTGCCGGAGCGCGACCT；

I.OIDI-P2：

TTAACTAATATACTAACTACGGCTGGCTGCCCCGGACTTCCTCCACGCCGCC

用于扩增ECdxs片段的引物序列为：

E.CDXS-P1：TTTAATAAGGAGATATACCATGAGTTTTGATATTGCCAAATACCCGACC

E.CDXS-P2：ATACTTAACTAATATACTAATTATGCCAGCCAGGCCTTGATTTT

用于扩增BSdxs片段的引物序列为：

B.SDXS-P1：TTTAATAAGGAGATATACCTTGGATCTTTTATCAATACAGGACCC

B.SDXS-P2：ATACTTAACTAATATACTAATCATGATCCAATTCCTTTGTGTGTC

用于扩增MXdxs片段的引物序列为：

M.XDXS-P1：TTTAATAAGGAGATATACCATGGCCGAGCTGCTGGCGCGTATCGC

M.XDXS-P2：ATACTTAACTAATATACTAATCACGGTCCCCTCCCCTCCAGCAACGC

用于扩增IOdxs片段的引物序列为：

I.ODXS-P1：TTTAATAAGGAGATATACCGTGGACAGCCCCGACGACCTCAAGCTGC

I.ODXS-P2：ATACTTAACTAATATACTAATCACACCCCGAGCGGCACGTCCACG

2.重组质粒的构建及表达

将扩增获得的目的基因与载体片段进行琼脂糖凝胶电泳，回收条带。使用CPEC方法分别将不同idi、dxs与pACYCDuet-1载体进行连接，构建重组质粒。连接体系为：目的基因与载体各2.5μL、Primer Star Max DNA polymerase 5μL。连接条件为：98℃预变性3min；98℃变性10s；55℃退火30s；72℃延伸1min后转化E.coli DH5α。在含34mg/L氯霉素的平板上进行筛选，待培养约12h后挑取单菌落进行菌落PCR验证。将验证正确的菌体进行培养，提取质粒，送上海美吉公司进行测序，经测序正确的重组质粒分别命名为pACECIDI、pACBSIDI、pACMXIDI、pACIOIDI；pACECDXS、pACBSDXS、pACMXDXS、pACIODXS。

分别将质粒pACECIDI、pACBSIDI、pACMXIDI、pACIOIDI、pACECDXS、pACBSDXS、pACMXDXS、pACIODXS与pTrc99aEBI质粒共同转入E.coli BL21(DE3)中，同时以空pACYCDuet-1质粒转入E.coli BL21(DE3)作为对照。在含有100mg/L氨苄青霉素和34mg/L氯霉素的LB平板上进行筛选，得到相应的重组E.coli BL21(DE3)菌株。

挑取单克隆在5mL含有相应抗生素的LB液体培养基中进行培养，待菌体长至OD值大约1后，转接至50mL含有相应抗生素的LB液体培养基中。待菌体OD值达到0.6到0.8时，用0.1mmol/L IPTG进行诱导，同时以未诱导的重组大肠杆菌培养基作为对比，约20h后检测番茄红素含量。

3.idi与dxs的协同表达

根据大肠杆菌密码子的偏好性，将粘细菌中的idi与dxs进行优化，并通过全基因合成得到idi-dxs基因(其核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示)。通过CPEC方法将idi-dxs基因与载体片段pACYC进行连接，获得质粒pACMYIDI-DXS。将质粒pACMYIDI-DXS与pTrc99aEBI质粒共同转入大肠杆菌BL21(DE3)中，得到相应的重组菌株。

4.番茄红素的提取与测定

番茄红素提取的具体操作：取3mL培养至一定时期的培养液，5000r/min离心3min弃上清；用无菌水清洗两次，加3mL丙酮，于55℃水浴锅中萃取15min，5000r/min离心5min取上清即为番茄红素萃取液，保留上清以备检测。另外取9mL培养液于8000r/min离心5min后弃上清，沉淀于70℃中烘干，然后计算菌体干重。

番茄红素含量的测定使用高效液相色谱仪(HPLC)。色谱柱：反相色谱柱C18；流动相为乙腈:甲醇:异丙醇(80:15:5，v:v:v)，流速1.2mL/min，检测波长为472nm，柱温40℃，进样量10μL。根据番茄红素标准曲线计算番茄红素的产量。

实验结果表明，在过表达不同来源idi、dxs基因后，重组菌株番茄红素产量得到了不同程度的提高，过表达粘细菌DXS或IDI的重组菌产番茄红素情况如图3所示；不同来源IDI对番茄红素产量的影响如图4所示；不同来源DXS对番茄红素产量的影响如图5所示。在重组菌株中，目的基因来源于大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、粘细菌的菌株番茄红素产量都有一定提升，添加诱导剂后番茄红素产量要明显高于未添加诱导剂的。

表达ECIDI、BSIDI、MXIDI、IOIDI的菌株番茄红素产量分别可以达到4.23、4.87、5.28、3.23mg/g DCW；添加诱导剂0.1mmol/L IPTG后的对应菌株番茄红素产量依次分别达到6.55、8.24、10.86、3.70mg/g DCW，其中最高的M.XIDI比没有转化IDI的对照菌株(实施例1的转化质粒pTrc99aEBI的重组大肠杆菌)产量(3.58mg/g DCW)提高了约2.0倍。

表达ECDXS、BSDXS、MXDXS、IODXS的菌株番茄红素产量分别可以达到4.88、2.79、3.18、3.03mg/g DCW；添加诱导剂0.1mmol/L IPTG后的对应菌株番茄红素产量依次分别达到5.19、4.33、7.94、4.07mg/g DCW，其中最高的MXDXS比没有转化DXS的对照菌株(实施例1的转化质粒pTrc99aEBI重组大肠杆菌)产量(3.58mg/g DCW)提高了约1.2倍。

在协同表达IDI、DXS后(表达idi-dxs基因、CrtEBI基因)，重组菌株番茄红素产量达到最高，达到15.26mg/g DCW，比没有转化IDI、DXS的对照菌株(实施例1的转化质粒pTrc99aEBI的重组大肠杆菌)产量(3.58mg/g DCW)提高了约3.3倍。

综上可以说明，来自粘细菌的idi、dxs基因优于代谢工程改造中常用的基因。目前还未见报道利用粘细菌来源基因优化MEP途径，提高番茄红素产量。这为后续代谢工程改造提供了新的基因资源。

以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域普通的技术人员来说，依然可以对前述实施例记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或退替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。

序列表

<110> 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心）

<120> 番茄红素合成相关基因及其应用

<160> 11

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 3387

<212> DNA

<213> 戈壁奇球菌(Deinococcus gobiensis)

<400> 1

aagaaggaga tatacatatg cgtccggaac tgctggaacg tgttctgtct ctgctgccgg 60

aagctggtcc gcacccggaa ctggctcgtt tctacgaaat gctgcgtgac tacccgcgtc 120

gtggtggtaa aggtctgcgt tctgaactgc tgctggctgg tgctcgtgct tacggtgttc 180

gtgaaggtac cccgcagtgg gaatctgctc tgtggctggc tgctggtgtt gaactgttcc 240

agaactgggt tctgatccac gacgacatcg aagacgactc tgaagaacgt cgtggtcgtc 300

cggctctgca ccgtctgcac ggtgttgctc tggctatcaa cgctggtgac gctctgcacg 360

cttacatgtg ggctgctgtt gctcgtgctg gtgttccggg tgctcacgaa gaattcctgg 420

ctatggttca ccgtaccgct gaaggtcagc acctggacct ggcttgggtt gctggtcgtg 480

aatggggtct gaccgaacac gactacctgc agatggttgg tctgaaaacc gcttactaca 540

ccgttatcgt tccgctgcgt ctgggtgctc tggttgctgg tgctcagccg ccggaaaccc 600

tgaccccggc tggtctggct ctgggtaccg ctttccagat ccgtgacgac gttctgaacc 660

tggctggtga cgctgctaaa tacggtaaag aaatcgctgg tgacctgctg gaaggtaaac 720

gtaccctgat cgttctgcac tggctgggtc aggctccgga agaccagatc gctgttttcc 780

tggaccagat gcgtcgtgaa cgtccggaca aagacccgga agttgttgct cagatccacg 840

gttggctgct ggaatctggt tctgttgact acgctcagcg tgctgctcag gctcaggctg 900

aaaccggtct gaaactgctg ggtgacgttc tgggtgctgc tccggaacgt gaagctgctc 960

gtgctctgct gggtcgtgtt cgtgaactgg ctacccgtga agcttaaaat aattttgttt 1020

aactttaaga aggagatata ccatgacccg tgaacactct aaaaccttct acctgggttc 1080

tcgttgcttc ccgggtcgtc agcgtgctgc tgtttgggct gtttacgctg cttgccgtga 1140

aggtgacgac atcgctgacg gtggtggtcc ggacgttgac gctcgtctgg gtgactggtg 1200

gtctcgtgtt cagggtgctt tcgctggtcg tccgggtgaa cacccgaccg accgtgctct 1260

ggcttgggct gctcgtgaat acccgatccc gctgggtgct ttcgctgaac tgcacgaagg 1320

tctgcgtatg gacctgcgtg gtcacaacta cgcttctatg gacgacctga ccctgtactg 1380

ccgtcgtgtt gctggtgttg ttggtttcat gatcgctccg atctctggtt acgaaggtgg 1440

tgaagctacc ctggacaaag ctctgcgtct gggtcaggct atgcagctga ccaacatcct 1500

gcgtgacgtt ggtgaagacc tgtctctggg tcgtgtttac ctgccggctg aagttctgga 1560

ccgttacggt ctgtgccgtg ctgacctgga acgtggtgtt gttaccccgg aatactgcgc 1620

tatgctgcgt gacctgaccg ctcaggctcg tgcttggtac gctgaaggtc gtgctggtat 1680

cccgctgctg cgtggtcgtg ctcgtctggc tgttgctacc gctgctcgtg cttacgaagg 1740

tatcctggac gacctggaag ctgctggtta cgacaacttc aaccgtcgtg cttacgtttc 1800

tggtcgtcgt aaactgatga tgctgccgca ggcttggtgg gaactgcgtt ctttctctgc 1860

ttaagcagaa atacggaaca aggaggaaaa caaatgttcg acatgggtcc gaccgttatc 1920

accgttccgc acttcatcga agaactgttc tctctggaac gtgaccacgc tgctctgaac 1980

accccggact acccgccgca caccctgtct ggtgaacgtg ttaaagctgg tgactctggt 2040

ggtccgcgta cccgtgaata cgttaacctg gttccgatcc tgccgttcta ccgtatcgtt 2100

ttcgacgacg ctaccttctt cgactacgac ggtgacccgg tttctacccg tgaacagatc 2160

gctcgtctgg ctccggaaga cctggaaggt tacgaacgtt tccaccgtga cgctcaggct 2220

atcttcgaac gtggtttcct ggaactgggt tacacccact tcggtgacct gccgaccatg 2280

ctgcgtgttg ttccggacct gatgaaactg gacgctgttc gtaccctgtt ctctttcacc 2340

tctcgttact tctcttctga caaaatgcgt caggttttct ctttcgaaac cctgctgatc 2400

ggtggtaacc cgctgtctgt tccggctatc tacgctatga tccacttcgt tgaaaaaacc 2460

tggggtgttc actacgctat gggtggtacc ggtgctctgg ttcagggttt cgttcgtaaa 2520

ttccgtgaac tgggtggtac cgttcgttac ggtaccggtg ttgaagaaat cctggttgaa 2580

tctggtcgtg gtggtccggt tcgtgctccg gttggtccgc gtgttgctcg tggtgttcgt 2640

ctggaatctg gtgaagaact gcgtgctgac atcgttgttt ctaacggtga ctgggctaac 2700

acctacctga aacgtgttcc ggctgctgct cgtctggtta acaacgacct gcgtatcaaa 2760

gctgctccgc agtctatggg tctgctggtt atctacttcg gtttccgtga cgacggtcag 2820

ccgctgaacc tgcgtcacca caacatcctg ctgggtccgc gttacgaagc tctgctgcgt 2880

gaaatcttcg gtaaaaaagt tctgggtcag gacttctctc agtacctgca cgttccgacc 2940

ctgaccgacc cggctctggc tccggctggt caccacgctg cttacaccct ggttccggtt 3000

ccgcacaacg gttctggtat cgactggtct gttgaaggtc cgcgtctgac cgaacgtgtt 3060

ctggactacc tggaagaacg tggtttcatc ccggacctgc gtgctcgtct gacccacttc 3120

gaatacgtta ccccggacta cttcgaaggt accctggact cttacctggg taacgctttc 3180

ggtccggaac cggttctggc tcagtctgct ttcttccgtc cgcacaaccg ttctgaagac 3240

gttcgtggtc tgtacctggt tggtgctggt gctcagccgg gtgctggtac cccgtctgtt 3300

atgatgtctg ctaaaatgac cgctcgtctg atcgctgaag acttcggtat ccacccggac 3360

ctgctgggtg ctgctgctga cgactaa 3387

<210> 2

<211> 4008

<212> DNA

<213> 大肠杆菌(Escherichia coli)

<400> 2

ggggaattgt gagcggataa caattcccct gtagaaataa ttttgtttaa ctttaataag 60

gagatatacc atgggcagca gccatcacca tcatcaccac agccaggatc cgaattcgag 120

ctcggcgcgc ctgcaggtcg acaagcttgc ggccgcataa tgcttaagtc gaacagaaag 180

taatcgtatt gtacacggcc gcataatcga aattaatacg actcactata ggggaattgt 240

gagcggataa caattcccca tcttagtata ttagttaagt ataagaagga gatatacata 300

tggcagatct caattggata tcggccggcc acgcgatcgc tgacgtcggt accctcgagt 360

ctggtaaaga aaccgctgct gcgaaatttg aacgccagca catggactcg tctactagcg 420

cagcttaatt aacctaggct gctgccaccg ctgagcaata actagcataa ccccttgggg 480

cctctaaacg ggtcttgagg ggttttttgc tgaaacctca ggcatttgag aagcacacgg 540

tcacactgct tccggtagtc aataaaccgg taaaccagca atagacataa gcggctattt 600

aacgaccctg ccctgaaccg acgaccgggt cgaatttgct ttcgaatttc tgccattcat 660

ccgcttatta tcacttattc aggcgtagca ccaggcgttt aagggcacca ataactgcct 720

taaaaaaatt acgccccgcc ctgccactca tcgcagtact gttgtaattc attaagcatt 780

ctgccgacat ggaagccatc acagacggca tgatgaacct gaatcgccag cggcatcagc 840

accttgtcgc cttgcgtata atatttgccc atagtgaaaa cgggggcgaa gaagttgtcc 900

atattggcca cgtttaaatc aaaactggtg aaactcaccc agggattggc tgagacgaaa 960

aacatattct caataaaccc tttagggaaa taggccaggt tttcaccgta acacgccaca 1020

tcttgcgaat atatgtgtag aaactgccgg aaatcgtcgt ggtattcact ccagagcgat 1080

gaaaacgttt cagtttgctc atggaaaacg gtgtaacaag ggtgaacact atcccatatc 1140

accagctcac cgtctttcat tgccatacgg aactccggat gagcattcat caggcgggca 1200

agaatgtgaa taaaggccgg ataaaacttg tgcttatttt tctttacggt ctttaaaaag 1260

gccgtaatat ccagctgaac ggtctggtta taggtacatt gagcaactga ctgaaatgcc 1320

tcaaaatgtt ctttacgatg ccattgggat atatcaacgg tggtatatcc agtgattttt 1380

ttctccattt tagcttcctt agctcctgaa aatctcgata actcaaaaaa tacgcccggt 1440

agtgatctta tttcattatg gtgaaagttg gaacctctta cgtgccgatc aacgtctcat 1500

tttcgccaaa agttggccca gggcttcccg gtatcaacag ggacaccagg atttatttat 1560

tctgcgaagt gatcttccgt cacaggtatt tattcggcgc aaagtgcgtc gggtgatgct 1620

gccaacttac tgatttagtg tatgatggtg tttttgaggt gctccagtgg cttctgtttc 1680

tatcagctgt ccctcctgtt cagctactga cggggtggtg cgtaacggca aaagcaccgc 1740

cggacatcag cgctagcgga gtgtatactg gcttactatg ttggcactga tgagggtgtc 1800

agtgaagtgc ttcatgtggc aggagaaaaa aggctgcacc ggtgcgtcag cagaatatgt 1860

gatacaggat atattccgct tcctcgctca ctgactcgct acgctcggtc gttcgactgc 1920

ggcgagcgga aatggcttac gaacggggcg gagatttcct ggaagatgcc aggaagatac 1980

ttaacaggga agtgagaggg ccgcggcaaa gccgtttttc cataggctcc gcccccctga 2040

caagcatcac gaaatctgac gctcaaatca gtggtggcga aacccgacag gactataaag 2100

ataccaggcg tttcccctgg cggctccctc gtgcgctctc ctgttcctgc ctttcggttt 2160

accggtgtca ttccgctgtt atggccgcgt ttgtctcatt ccacgcctga cactcagttc 2220

cgggtaggca gttcgctcca agctggactg tatgcacgaa ccccccgttc agtccgaccg 2280

ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gaaagacatg caaaagcacc 2340

actggcagca gccactggta attgatttag aggagttagt cttgaagtca tgcgccggtt 2400

aaggctaaac tgaaaggaca agttttggtg actgcgctcc tccaagccag ttacctcggt 2460

tcaaagagtt ggtagctcag agaaccttcg aaaaaccgcc ctgcaaggcg gttttttcgt 2520

tttcagagca agagattacg cgcagaccaa aacgatctca agaagatcat cttattaatc 2580

agataaaata tttctagatt tcagtgcaat ttatctcttc aaatgtagca cctgaagtca 2640

gccccatacg atataagttg taattctcat gttagtcatg ccccgcgccc accggaagga 2700

gctgactggg ttgaaggctc tcaagggcat cggtcgagat cccggtgcct aatgagtgag 2760

ctaacttaca ttaattgcgt tgcgctcact gcccgctttc cagtcgggaa acctgtcgtg 2820

ccagctgcat taatgaatcg gccaacgcgc ggggagaggc ggtttgcgta ttgggcgcca 2880

gggtggtttt tcttttcacc agtgagacgg gcaacagctg attgcccttc accgcctggc 2940

cctgagagag ttgcagcaag cggtccacgc tggtttgccc cagcaggcga aaatcctgtt 3000

tgatggtggt taacggcggg atataacatg agctgtcttc ggtatcgtcg tatcccacta 3060

ccgagatgtc cgcaccaacg cgcagcccgg actcggtaat ggcgcgcatt gcgcccagcg 3120

ccatctgatc gttggcaacc agcatcgcag tgggaacgat gccctcattc agcatttgca 3180

tggtttgttg aaaaccggac atggcactcc agtcgccttc ccgttccgct atcggctgaa 3240

tttgattgcg agtgagatat ttatgccagc cagccagacg cagacgcgcc gagacagaac 3300

ttaatgggcc cgctaacagc gcgatttgct ggtgacccaa tgcgaccaga tgctccacgc 3360

ccagtcgcgt accgtcttca tgggagaaaa taatactgtt gatgggtgtc tggtcagaga 3420

catcaagaaa taacgccgga acattagtgc aggcagcttc cacagcaatg gcatcctggt 3480

catccagcgg atagttaatg atcagcccac tgacgcgttg cgcgagaaga ttgtgcaccg 3540

ccgctttaca ggcttcgacg ccgcttcgtt ctaccatcga caccaccacg ctggcaccca 3600

gttgatcggc gcgagattta atcgccgcga caatttgcga cggcgcgtgc agggccagac 3660

tggaggtggc aacgccaatc agcaacgact gtttgcccgc cagttgttgt gccacgcggt 3720

tgggaatgta attcagctcc gccatcgccg cttccacttt ttcccgcgtt ttcgcagaaa 3780

cgtggctggc ctggttcacc acgcgggaaa cggtctgata agagacaccg gcatactctg 3840

cgacatcgta taacgttact ggtttcacat tcaccaccct gaattgactc tcttccgggc 3900

gctatcatgc cataccgcga aaggttttgc gccattcgat ggtgtccggg atctcgacgc 3960

tctcccttat gcgactcctg cattaggaaa ttaatacgac tcactata 4008

<210> 3

<211> 549

<212> DNA

<213> 大肠杆菌(Escherichia coli)

<400> 3

atgcaaacgg aacacgtcat tttattgaat gcacagggag ttcccacggg tacgctggaa 60

aagtatgccg cacacacggc agacacccgc ttacatctcg cgttctccag ttggctgttt 120

aatgccaaag gacaattatt agttacccgc cgcgcactga gcaaaaaagc atggcctggc 180

gtgtggacta actcggtttg tgggcaccca caactgggag aaagcaacga agacgcagtg 240

atccgccgtt gccgttatga gcttggcgtg gaaattacgc ctcctgaatc tatctatcct 300

gactttcgct accgcgccac cgatccgagt ggcattgtgg aaaatgaagt gtgtccggta 360

tttgccgcac gcaccactag tgcgttacag atcaatgatg atgaagtgat ggattatcaa 420

tggtgtgatt tagcagatgt attacacggt attgatgcca cgccgtgggc gttcagtccg 480

tggatggtga tgcaggcgac aaatcgcgaa gccagaaaac gattatctgc atttacccag 540

cttaaataa 549

<210> 4

<211> 1050

<212> DNA

<213> 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)

<400> 4

gtgactcgag cagaacgaaa aagacaacac atcaatcatg ccttgtccat cggccagaag 60

cgggaaacag gtcttgatga tattacgttt gttcacgtca gtctgcccga tcttgcatta 120

gaacaagtag atatttccac aaaaatcggc gaactttcaa gcagttcgcc gatttttatc 180

aatgcaatga ctggcggcgg cggaaaactt acatatgaga ttaataaatc gcttgcgcga 240

gcggcttctc aggctggaat tccccttgct gtgggatcgc aaatgtcagc attaaaagat 300

ccatcagagc gtctttccta tgaaattgtt cgaaaggaaa acccaaacgg gctgattttt 360

gccaacctgg gaagcgaggc aacggctgct caggcaaagg aagccgttga gatgattgga 420

gcaaacgcac tgcagatcca cctcaatgtg attcaggaaa ttgtgatgcc tgaaggggac 480

agaagcttta gcggcgcatt gaaacgcatt gaacaaattt gcagccgggt cagtgtaccg 540

gtcattgtga aagaagtcgg cttcggtatg agcaaagcat cagcaggaaa gctgtatgaa 600

gctggtgctg cagctgttga cattggcggt tacgggggaa caaatttctc gaaaatcgaa 660

aatctccgaa gacagcggca aatctccttt tttaattcgt ggggcatttc gacagctgca 720

agtttggcgg aaatccgctc tgagtttcct gcaagcacca tgatcgcctc tggcggtctg 780

caagatgcgc ttgacgtggc aaaggcaatt gcgctggggg cctcttgcac cggaatggca 840

gggcattttt taaaagcgct gactgacagc ggtgaggaag gactgcttga ggagattcag 900

ctgatccttg aggaattaaa gttgattatg accgtgctgg gtgccagaac aattgccgat 960

ttacaaaagg cgccccttgt gatcaaaggt gaaacccatc attggctcac agagagaggg 1020

gtcaatacat caagctatag tgtgcgataa 1050

<210> 5

<211> 1059

<212> DNA

<213> 粘细菌(Myxococcus stipitatus)

<400> 5

atggtcgagg acatcacagc acggcgtaag gacgctcacc tcgacttgtg cgccaagggc 60

gaggtggagc ccgtcgagaa cagcaccctg ctggagcacg tgcacctggt ccactgcgcc 120

atgccggaga tggccgtgga ggacgtggac ctctccactc cgttcctggg caagcagctg 180

cgctacccgt tgctcgtcac cggaatgacg ggcggcaccg agcgagcagg cgcggtcaat 240

cgtgacctcg ccctggtcgc cgagcgccat ggcctggcct ttggtgtggg cagtcagcgc 300

gccatggccg aggacgcggc gagggcggtg acgttccagg tgcggcaggt ggcccccacg 360

gtggcgctgc tggggaacat cgggatgtac caggcggtgg ggttgggcgt ggacggggtg 420

cggcggttga tggatgcgat tggcgcggat ggaatcgcgc tgcacctcaa cgccgggcag 480

gaattgaccc agccggaagg cgaccgggat ttccgaggcg gttacgagat agtgcgggcg 540

ttggtgggag cgctgggcga gcggctcttg gtgaaggaga ccgggtgtgg cattggcccg 600

gaggtggctc gccggctggt ggagttgggg gtgcgcaacc tggatgtgtc cgggctgggc 660

ggcacttcgt gggttcgggt ggaacagctt cgggcctcgg gcgtacaagc caaggtgggg 720

gcggagttca gcacgtgggg gattcccacg gcggcggcgg tggcgacggt gcgcacggcg 780

gtggggtcgc aggtccgact ggtgggcagt ggtgggattc gcaccgggtt ggaggtcgcg 840

aaggtgctgg cgctgggggc ggacctggcg ggcatggcgc tcccgctgtt ccgggcgcag 900

caggagggcg gggtggaggg ggcggagcgg gccttggagg tcatcctcac ggggctgcgg 960

catgcgctgg tgctgacggg gagcaggagc tgcgcggagt tgcggcggcg tcctcgggtg 1020

gtgggcgggg tcttgaagga ttggatggcg gcgctgtag 1059

<210> 6

<211> 912

<212> DNA

<213> 戈壁奇球菌(Deinococcus gobiensis)

<400> 6

gtgccctggc cctaccgggc actgccggag cgcgacctgg acgccgtgga cctctccacg 60

accttcctgg gccgccgcct gagcgccccg gtcctggtcg gcgcgatgac gggcggggcc 120

gagcgcgccg ggcgcatcaa cttcaacctc gcgcgcgcgg cggggcgcct cgggctgggg 180

atgatgctcg gctcgcagcg cgtgatgctg gagcgcccgg aagcccgggc caccttcgcc 240

gtgcgggacg tggcccccga catcctgctc gtggggaacc tgggcgcggc gcagttcggg 300

ctgggctacg gccccgccga ggcgacgcgg gcggtgcgcg agatcggggc cgacgccctg 360

gcgatccatg tcaatccgct gcaggaggcc ctgcaacccg gcggcgacac gcgctgggcg 420

ggcctcgcgg cgcggctggc cgaggtggtg ccggcgctgg actttccggc ggtcctcaag 480

gaggtcgggc acggcctgga cgccgcgacc ctgcgcgcgg tggcgggcgc gggcttcgcc 540

gcctacgacg tggccggggc cggcggcacg agctgggcgc gcgtcgagca gctcgtccac 600

cggggcgagg tgctcagccc ggacctgtgc gacctcggcg tgcccaccgc ccaggccctg 660

cgggacgccc ggcaggccgc gccgcacgtg cccctgatcg cctcgggcgg tatccgcacc 720

ggcctggacg ccgcgcgcgc gctggcgctg ggtgcccagg tggtcgcggt ggcccgcccc 780

ctgctggagc ccgccctgga gagcagcgag gccgccgagg cgtggctgga gaacttcgtg 840

cgggagctgc gcgtggccct gttcgtcggg ggctacggcg gcgtggagga agtccggggc 900

agccagccgt ag 912

<210> 7

<211> 1863

<212> DNA

<213> 大肠杆菌(Escherichia coli)

<400> 7

atgagttttg atattgccaa atacccgacc ctggcactgg tcgactccac ccaggagtta 60

cgactgttgc cgaaagagag tttaccgaaa ctctgcgacg aactgcgccg ctatttactc 120

gacagcgtga gccgttccag cgggcacttc gcctccgggc tgggcacggt cgaactgacc 180

gtggcgctgc actatgtcta caataccccg tttgaccagt taatctggga tgtggggcat 240

caggcttatc cgcataaaat tttgaccggg cgccgcgaca aaatcggcac catccgtcag 300

aaaggtggcc tgcacccgtt cccgtggcgc ggcgaaagcg aatatgacgt attaagcgtc 360

gggcattcat caacctccat cagtgccgga attgggatcg cagttgctgc cgagaaagaa 420

ggcaaaaatc gccgcaccgt ctgtgtcatt ggcgatggcg cgattactgc tggcatggcg 480

tttgaagcga tgaatcacgc gggcgatatc cgtcctgata tgctggtggt tctcaacgac 540

aatgaaatgt cgatttccga aaatgttggc gcgctcaaca accatctggc gcagctgctt 600

tccggtaagc tttactcttc actgcgcgaa ggcggaaaaa aagttttctc tggcgtgcca 660

cccattaaag agctgctcaa acgtaccgaa gaacatatta aaggcatggt agtgcctggc 720

acgttgtttg aagagctggg ctttaactac atcggcccgg tggacggtca cgatgtgctg 780

gggcttatca ccacgcttaa gaacatgcgc gacctgaaag gcccgcagtt cctgcatatc 840

atgaccaaaa aaggtcgtgg ttatgaaccg gcagaaaaag acccaatcac cttccacgcc 900

gtgcctaaat ttgatccctc cagcggttgt ctgccgaaaa gtagcggcgg tttaccaagc 960

tattcaaaaa tctttggcga ctggttgtgc gaaaccgcag cgaaagataa caagctgatg 1020

gcgattactc cggcgatgcg tgaaggttcc ggcatggtcg agttttcacg taaattcccg 1080

gatcgctact tcgacgtggc aattgccgag caacacgcag tgacctttgc tgcgggtctg 1140

gcgattggag gctacaaacc cattgttgcg atctactcca ccttcctgca acgcgcctat 1200

gatcaggtgc tgcatgacgt ggcgattcaa aagcttccgg tcctgttcgc catcgaccgt 1260

gcgggcattg ttggtgctga cggtcaaacc caccagggcg cttttgatct ctcttacctg 1320

cgctgcatac cggaaatggt cattatgacc ccgagcgatg aaaacgaatg tcgccagatg 1380

ctctataccg gctatcacta taacgatggc ccgtccgcgg tgcgctaccc gcgcggcaac 1440

gcagttggcg tggaactgac gccactggaa aaactgccaa ttggcaaagg cattgtgaag 1500

cgtcgtggtg agaaactggc gatccttaac tttggtacgc tgatgccaga agcggcgaaa 1560

gtcgctgaat cgctgaacgc tacgctggtc gatatgcgtt tcgtgaaacc gcttgatgaa 1620

gcgttaattc tggaaatggc cgccagccat gaagcgctgg tcaccgtaga agaaaacgcc 1680

attatgggcg gcgcaggtag cggcgtgaac gaagtgctga tggcccatcg taaaccagta 1740

cccgtgctga acattggcct gcctgacttc tttattccac aaggaactca ggaagaaatg 1800

cgcgccgaac tcggcctcga tgccgccggt atggaagcca aaatcaaggc ctggctggca 1860

taa 1863

<210> 8

<211> 1902

<212> DNA

<213> 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)

<400> 8

ttggatcttt tatcaataca ggacccgtcg tttttaaaaa acatgtccat tgatgaatta 60

gagaaattaa gtgatgaaat ccgtcagttt ttaattacaa gtttatccgc ttccggcggc 120

cacatcggcc caaacttagg tgtcgtagag cttactgttg ccctgcataa ggaatttaac 180

agcccgaaag acaaattttt atgggatgta ggccatcagt cgtatgtcca taagctgctg 240

acaggacgcg gaaaagaatt tgcgacgctt cgccagtaca aagggctttg cggatttcca 300

aagcggagtg aaagcgagca cgatgtttgg gaaaccgggc acagctcgac ttctctgtca 360

ggcgcgatgg gaatggcagc tgcccgtgat attaaaggaa cggatgaata tattattccg 420

atcattggtg acggcgcgct gaccggcggt atggcgctcg aagcccttaa ccacatcggc 480

gacgagaaaa aagacatgat tgtcatcctt aatgataatg aaatgagtat tgcgccaaac 540

gtcggtgcca ttcactctat gctcggacgg ctccgcactg cggggaaata ccagtgggtc 600

aaagatgagc ttgaatactt atttaaaaag attccggcag ttgggggcaa gcttgccgcc 660

acggcggaac gggtcaaaga cagcctgaaa tacatgctcg tctccggaat gtttttcgag 720

gagctcggtt ttacgtattt gggcccagtg gacggacatt cttatcatga gctgattgag 780

aatcttcaat acgccaaaaa aacgaaaggc cctgttcttc tgcacgtcat tacgaaaaaa 840

gggaaggggt acaaaccggc tgagaccgat acgattggga catggcatgg taccggacca 900

tataaaatta ataccggtga ctttgtaaag ccgaaagccg cagctccttc gtggagcggt 960

cttgtcagcg gaactgtgca gcgaatggcg cgcgaggacg gacgcattgt agccattacg 1020

ccggctatgc ctgtcggttc aaagcttgaa ggcttcgcaa aggaattccc tgaccggatg 1080

ttcgacgtag gaatcgcaga acagcatgcc gcaacaatgg ctgcagctat ggcaatgcag 1140

ggtatgaagc cgtttttggc gatttactca accttcctgc aaagggcata tgaccaagtt 1200

gttcatgaca tctgccgcca aaacgctaat gtgtttattg gaattgaccg tgctggactc 1260

gttggcgctg atggagagac acatcaaggc gtgtttgata ttgcgtttat gcgccacatt 1320

ccaaacatgg tcttaatgat gccgaaagac gaaaatgaag gccagcacat ggttcataca 1380

gcacttagct atgacgaagg cccgatagca atgcgttttc cgcgcggaaa cggactcggc 1440

gtaaaaatgg atgaacagtt gaaaacgatt ccgatcggta cgtgggaggt gctgcgtcca 1500

gggaacgatg ctgtcatctt aacattcggc acaacaatcg aaatggcgat tgaagcagcc 1560

gaagagctgc agaaagaagg cctttccgtg cgcgttgtga atgcgcgttt tattaagccg 1620

attgatgaaa agatgatgaa gagtatccta aaagaaggct tgccaatttt aacaattgaa 1680

gaagcggtct tagaaggcgg tttcggaagc tcgattttag aattcgctca tgatcaaggt 1740

gaatatcata ctccgattga cagaatgggt atacctgatc ggtttattga acacggaagt 1800

gtaacagcgc ttcttgagga aattggactg acaaaacagc aggtggcaaa tcgtattaga 1860

ttactgatgc caccaaagac acacaaagga attggatcat ga 1902

<210> 9

<211> 1752

<212> DNA

<213> 粘细菌(Myxococcus stipitatus)

<400> 9

atggccgagc tgctggcgcg tatcgcttct ccatcggacg tccgggcgct gcccgaagcg 60

gacctgccgc atctgtgcgc ggagcttcgc gaggacatca tcgccatctg cggcaaggtg 120

ggggggcacc tcggcgcgtc gctgggggcc gtggagctca tcgtcgcgct ccaccgcgtc 180

ttccactcgc ccacggacgc gattctcttc gacgtggggc accaggccta cgcgcacaag 240

ctgctcaccg ggcggcgaga gctcatgcac acgctgcggc aggcgggcgg cgtggccccc 300

ttcctggacc cgcgtgagag tccgcacgat gcgctgctgg cgggccactc gtgcacggcc 360

gtgtccgcgg cgctgggcat gctcgaaggg cgtcggctga tggggcaccg gggccacgtg 420

gtggcgatgc tcggtgatgg cgggctcacc ggcggcctca cgttcgaggg actgaacaac 480

gcggggggca gcctcctgcc gctcgtggtg gtgctcaacg acaaccagat gtccatcagc 540

gccaacgtgg gcgccattcc ctcgctgctg cgcactcggg gcgcgcgcga cttcttccag 600

gggctgggct tcacgtatct ggggccggtg gacgggcatg acctggatgc gctgattcgg 660

gcgctgcgcg aggctcgggc gtccaaccgt cccgtggtgg tgcatgcgct gacgctcaag 720

ggcaagggct tccccccggc ggaggcggat gcccagacgc gcggacacgc gatgggccct 780

tacgagtggc gcgatggcaa gctggtgcgc tcgcgggggg ggcatcgcac gtacagcgag 840

gcgctcgcgt cggcgttgga agatgccatg gcgagagacc ctcgcgtcgt ggcggtgacg 900

cccgcgatgt tggagggctc ggcgctcaat gcgctcaagg ctcgcttccc ggaccgcgtg 960

cacgacgtgg gcatcgccga gcagcatgcc gtcacgttct gcgcggggct cgcggccgcg 1020

ggagcccggc cggtgtgctg catctactcc acgttcctcc agcgcgcgta cgatcagatc 1080

atccacgacg tgtgcctgcc gggcctgccc gtggtcttcg ccgtcgaccg ggccgggttg 1140

gtgggcgcgg atggcgccac gcaccagggc acctacgatg tcgcgtcgct gcggcctctc 1200

ccgggactga cgttgtgggc gcccgtggtc ggcgaggact tcgcgcccct gctcgcgacg 1260

gcgctcgagg cgcctcatcc ctccgtcatc cgcttcccgc gaggcacgct gccttcgctg 1320

cccacggagg tgcgggtgga cgcggcgccg gtgcgcggtg cccgctggtt ggtgcgcgcg 1380

gagaagcctc ggttgacggt ggtgacgctg gggccgctgg ggctcgcggc gctcgaggcg 1440

gctcgacagg agcccgggtg gagtgtgctc gatgcgcggg gcctgtctcc gctggacgag 1500

accgcgctgc tcgaggccgc ttcgtgtggc gccgtcctgg tggcggaaga gggcacggtg 1560

cgcggaggac tggggagcgc gctgctggag ctctatgcgg agcggggggc atctcctcgt 1620

gtccgagtgc tgggcatgcc ggacgtgttc atgcctcatg gtgacgcgcg ggtgcagcgt 1680

gccgagctgg ggctcgacgc cgcggggatg gtgcgcgcgg ggcgggcgtt gctggagggg 1740

aggggaccgt ga 1752

<210> 10

<211> 1845

<212> DNA

<213> 戈壁奇球菌(Deinococcus gobiensis)

<400> 10

gtggacagcc ccgacgacct caagctgctc tcgcgtgacc agttgcccga gctgacgcgg 60

gaggtgcgcg acgagatcgt gcgggtgtgc tcgcaggggg ggctgcacct cgcgtcctcg 120

ctgggggcca ccgacctcgt cgtggcgctg cactacgtcc tgaactcgcc gcgcgaccgg 180

atcctcttcg acgtggggca ccaggcctac gcgcacaaga tcctgaccgg ccgccgccgc 240

cagatgccga ccatcaagaa ggaaggcggg ctgtcgggct tcaccaaggt cagcgagtcg 300

ccgcacgacg cgatcacggt ggggcacgcg agcaccagcc tcgccaacgc gctgggcatg 360

gcgctggccc gtgacgcgca ggggcaggac cacaaggtcg tggccgtcat cggggacggc 420

tcgctgacgg gcggcatggc cctggcggcc ctgaacacca tcggggacat gaaccgcaag 480

atgctcatcg tcctgaacga caacgagatg agcatctcgg agaacgtcgg ggccatgaac 540

aagttcatgc gcggcctcca ggtccagaaa tggttccagg agggcgaggg cgccggcaag 600

aaggccgtcg aggcggtcag caagccgctc gccaacttca tgagccgtgc caagagcagc 660

acccggcact tcttcgaccc ggccagcgtg aaccccttcg cggcgatggg cctgcgctac 720

gtgggaccgg tggacggcca caacgtccag gaactcgtgt ggctgctcga acgcctgctg 780

gaccttgacg ggccgaccat cctgcacgtg gtcacgcgca agggcaaggg cctgagctac 840

gccgaggccg accccatcta ctggcacggc ccggccaagt tcgaccccga gaccggcgag 900

ttcaagccct cggacgccta ctcgtggagc gcggcctttg gggacgccgt gaccgaactg 960

gccgcgcacg acccgcgcac cttcgtcatc accccggcca tgcgcgaggg cagcgggctg 1020

gtgggctaca gcaaggcgca cccgcaccgc tacctcgacg tgggcattgc cgaggaggtc 1080

gccgtgacga ccgccgccgg catggccctc caggggctgc ggcccatcgt ggcgatctac 1140

agcagcttcc tgcaacgcgc ctacgaccag gtgctgcatg acgtggccat cgagaacctg 1200

aacgtgacct tcgccattga ccgcgcgggc atcgtggggg ccgacggcgc gacgcacaac 1260

ggcgtgttcg acctgagctt cctgcgcagc attccgggcc tgcacatcgg cctgccgcgc 1320

gacgccgccg agctgcgcgc catgctcaag tacgcccagg agcatcccgg ccccttcgcg 1380

gtgcgctacc cgcgcggcaa caccgagcgc gtgcccgagg gcacttggcc cgacatcgcc 1440

tggggagcgt gggagcgcct gaaggcgggc gacgacgtgg tcatcctggc gggcggcaag 1500

gcgctggact acgccctgaa ggcggcggcg ggcctggacg gcgtgggcgt ggtgaatgcc 1560

cgcttcgtca agccgctgga cgaaaagatg ctgcgcgaac tcgcgggtac ggcgcgcgcc 1620

ctcgtgacag tcgaggacaa cacggtggtc gggggcttcg gcagcgcggt cctcgaaaca 1680

ttgaacgccc tgaagttgaa cgtgccggtg cgcgtgctgg gcattcccga cgagttccag 1740

gagcacgcca ccgtcgagag cgtgcacgcc cgcgcgggga tcgacgcgca ggcgatccgc 1800

acggtgctcg ccgagctggg cgtggacgtg ccgctcgggg tgtga 1845

<210> 11

<211> 2828

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<400> 11

atggttgaag acatcaccgc tcgtcgtaaa gacgctcacc tggacctgtg cgctaaaggt 60

gaagttgaac cggttgaaaa ctctaccctg ctggaacacg ttcacctggt tcactgcgct 120

atgccggaaa tggctgttga agacgttgac ctgtctaccc cgttcctggg taaacagctg 180

cgttacccgc tgctggttac cggtatgacc ggtggtaccg aacgtgctgg tgctgttaac 240

cgtgacctgg ctctggttgc tgaacgtcac ggtctggctt tcggtgttgg ttctcagcgt 300

gctatggctg aagacgctgc tcgtgctgtt accttccagg ttcgtcaggt tgctccgacc 360

gttgctctgc tgggtaacat cggtatgtac caggctgttg gtctgggtgt tgacggtgtt 420

cgtcgtctga tggacgctat cggtgctgac ggtatcgctc tgcacctgaa cgctggtcag 480

gaactgaccc agccggaagg tgaccgtgac ttccgtggtg gttacgaaat cgttcgtgct 540

ctggttggtg ctctgggtga acgtctgctg gttaaagaaa ccggttgcgg tatcggtccg 600

gaagttgctc gtcgtctggt tgaactgggt gttcgtaacc tggacgtttc tggtctgggt 660

ggtacctctt gggttcgtgt tgaacagctg cgtgcttctg gtgttcaggc taaagttggt 720

gctgaattct ctacctgggg tatcccgacc gctgctgctg ttgctaccgt tcgtaccgct 780

gttggttctc aggttcgtct ggttggttct ggtggtatcc gtaccggtct ggaagttgct 840

aaagttctgg ctctgggtgc tgacctggct ggtatggctc tgccgctgtt ccgtgctcag 900

caggaaggtg gtgttgaagg tgctgaacgt gctctggaag ttatcctgac cggtctgcgt 960

cacgctctgg ttctgaccgg ttctcgttct tgcgctgaac tgcgtcgtcg tccgcgtgtt 1020

gttggtggtg ttctgaaaga ctggatggct gctctgtaaa acaaggagga aaacaaatgg 1080

ctgaactgct ggctcgtatc gcttctccgt ctgacgttcg tgctctgccg gaagctgacc 1140

tgccgcacct gtgcgctgaa ctgcgtgaag acatcatcgc tatctgcggt aaagttggtg 1200

gtcacctggg tgcttctctg ggtgctgttg aactgatcgt tgctctgcac cgtgttttcc 1260

actctccgac cgacgctatc ctgttcgacg ttggtcacca ggcttacgct cacaaactgc 1320

tgaccggtcg tcgtgaactg atgcacaccc tgcgtcaggc tggtggtgtt gctccgttcc 1380

tggacccgcg tgaatctccg cacgacgctc tgctggctgg tcactcttgc accgctgttt 1440

ctgctgctct gggtatgctg gaaggtcgtc gtctgatggg tcaccgtggt cacgttgttg 1500

ctatgctggg tgacggtggt ctgaccggtg gtctgacctt cgaaggtctg aacaacgctg 1560

gtggttctct gctgccgctg gttgttgttc tgaacgacaa ccagatgtct atctctgcta 1620

acgttggtgc tatcccgtct ctgctgcgta cccgtggtgc tcgtgacttc ttccagggtc 1680

tgggtttcac ctacctgggt ccggttgacg gtcacgacct ggacgctctg atccgtgctc 1740

tgcgtgaagc tcgtgcttct aaccgtccgg ttgttgttca cgctctgacc ctgaaaggta 1800

aaggtttccc gccggctgaa gctgacgctc agacccgtgg tcacgctatg ggtccgtacg 1860

aatggcgtga cggtaaactg gttcgttctc gtggtggtca ccgtacctac tctgaagctc 1920

tggcttctgc tctggaagac gctatggctc gtgacccgcg tgttgttgct gttaccccgg 1980

ctatgctgga aggttctgct ctgaacgctc tgaaagctcg tttcccggac cgtgttcacg 2040

acgttggtat cgctgaacag cacgctgtta ccttctgcgc tggtctggct gctgctggtg 2100

ctcgtccggt ttgctgcatc tactctacct tcctgcagcg tgcttacgac cagatcatcc 2160

acgacgtttg cctgccgggt ctgccggttg ttttcgctgt tgaccgtgct ggtctggttg 2220

gtgctgacgg tgctacccac cagggtacct acgacgttgc ttctctgcgt ccgctgccgg 2280

gtctgaccct gtgggctccg gttgttggtg aagacttcgc tccgctgctg gctaccgctc 2340

tggaagctcc gcacccgtct gttatccgtt tcccgcgtgg taccctgccg tctctgccga 2400

ccgaagttcg tgttgacgct gctccggttc gtggtgctcg ttggctggtt cgtgctgaaa 2460

aaccgcgtct gaccgttgtt accctgggtc cgctgggtct ggctgctctg gaagctgctc 2520

gtcaggaacc gggttggtct gttctggacg ctcgtggtct gtctccgctg gacgaaaccg 2580

ctctgctgga agctgcttct tgcggtgctg ttctggttgc tgaagaaggt accgttcgtg 2640

gtggtctggg ttctgctctg ctggaactgt acgctgaacg tggtgcttct ccgcgtgttc 2700

gtgttctggg tatgccggac gttttcatgc cgcacggtga cgctcgtgtt cagcgtgctg 2760

aactgggtct ggacgctgct ggtatggttc gtgctggtcg tgctctgctg gaaggtcgtg 2820

gtccgtaa 2828

Claims (8)

1.一种番茄红素合成相关基因，其特征在于，为MXidi基因，其核苷酸序列如SEQ IDNO.5所示；或idi-dxs基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示。

2.权利要求1所述的番茄红素合成相关基因编码的蛋白。

3.一种含有权利要求1所述的番茄红素合成相关基因的重组表达载体。

4.根据权利要求3所述的表达载体，其特征在于，为pACYCDuet-1载体。

5.一种含有权利要求1所述的番茄红素合成相关基因的基因工程菌。

6.根据权利要求5所述的基因工程菌，其特征在于，为大肠杆菌BL21(DE3)。

7.根据权利要求5所述的基因工程菌，其特征在于，所述的基因工程菌还含有重组质粒pTrc99aEBI，其是将序列如SEQ ID NO.1所示的CrtEBI基因与载体pTrc99a连接构建的重组质粒。

8.权利要求1所述的番茄红素合成相关基因在提高番茄红素产量中的应用。

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