CN108949666A - 一种分离萤火虫发光囊细胞的方法 - Google Patents

一种分离萤火虫发光囊细胞的方法 Download PDF

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黄祥宏
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Abstract

本发明属于细胞生物学领域，具体涉及一种分离萤火虫发光囊细胞的方法。可用于筛选萤火虫发光器细胞，建立细胞系供于研究。本发明提供的一种分离萤火虫发光囊细胞的方法，包括以下步骤：(1)将发光囊组织置于80～120ul胰酶中，剪碎；(2)在CO2恒温箱中消化3～7min；(3)在含8％～12％FBS的Sf‑900TMIII SFM培养液终止消化。本发明提供的一种分离萤火虫发光囊细胞的方法，可用于筛选萤火虫发光器细胞，建立细胞系，以用于研究萤火虫发光原理、细胞生物学、发育生物学及分子生物学等。

Description

一种分离萤火虫发光囊细胞的方法
技术领域
本发明属于细胞生物学领域，具体涉及一种分离萤火虫发光囊细胞的方法。
背景技术
近二十年来，我国在昆虫细胞培养技术方面发展较快，但是，建成的昆虫细胞系却几乎全部来源于鳞翅目和双翅目的几十种昆虫的二十多株，而鞘翅目昆虫细胞系的建立却极少，这与鞘翅目昆虫在昆虫中第一大类的身份极其不符。而国际上已建立鞘翅目天牛科、叶甲科、象鼻虫和金龟科的供十株左右鞘翅目昆虫细胞系，所以在我国建立鞘翅目昆虫细胞系具有很重要的意义。
鞘翅目中的萤火虫具有极高的观赏价值，也是一种捕捉害虫的益虫，目前还没有其细胞系，筛选萤火虫的发光器细胞系和其他细胞系，用于研究萤火虫发光原理、细胞生物学、发育生物学及分子生物学等方面的研究显得极其重要。
发明内容
本发明针对上述问题，提供一种分离萤火虫发光囊细胞的方法，可用于筛选萤火虫发光器细胞，建立细胞系供于研究。
本发明提供的一种分离萤火虫发光囊细胞的方法，包括以下步骤：
(1)将发光囊组织置于80～120ul胰酶中，剪碎；
(2)在CO2恒温箱中消化3～7min；
(3)在含8％～12％FBS的Sf-900TM III SFM培养液终止消化。
作为本发明的进一步优化，包括步骤(1)之前的准备步骤，如下：
用70％～80％的酒精对萤火虫消毒，取出萤火虫发光囊，浸泡与PBS中，在4℃的环境下保存备用。
作为本发明的进一步优化，步骤(1)中的采用小号手术剪剪至肉眼无法可见大小。
本发明还提供一种萤火虫发光囊细胞的冻存方法，即用胰酶消化法收集2瓶处于对数生长期的萤火虫发光囊细胞，1000g离心5min后弃去上清，用1mL冻存含20％FBS和10％DMSO的Sf-900TM III SFM培养液将细胞重悬后置于冻存管中，将冻存管置于程序降温盒中于-80℃过夜，最后投入-196℃液氮中长期保存，并做好记录。
本发明还提供一种所述冻存萤火虫发光囊细胞的复苏方法，即从液氮中取出冻存管，于37℃水浴中迅速解冻，1000g离心5min收集细胞后接种于25cm2的培养瓶中，放置于培养箱中27℃培养，待细胞贴壁后弃上清，更换培养液，继续培养。
本发明提供的一种分离萤火虫发光囊细胞的方法，可用于筛选萤火虫发光器细胞，建立细胞系，以用于研究萤火虫发光原理、细胞生物学、发育生物学及分子生物学等。
附图说明
图1是本发明分离出的萤火虫发光囊细胞视图。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作详细说明。
采用本发明分离出的萤火虫发光囊细胞视图如图1所示。
下列实施例实施之前所需做的准备工作如下：
PBS配置：在600ml的ddH2O中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24gKH2PO4，用HCl调节溶液pH至7.4，定容至1L，滤器过滤后，高压灭菌，室温保存；
材料配置：用70％～80％的酒精对萤火虫消毒，取出萤火虫发光囊，浸泡与PBS中，在4℃的环境下保存备用。
实施例1
(1)将发光囊组织置于100ul胰酶中，采用小号手术剪剪至肉眼无法可见大小；
(2)在CO2恒温箱中消化5min，此时取一滴细胞悬液在400倍显微镜下观察，可见圆形透亮的细胞，该细胞体积约为其他常规细胞的1/5；
(3)在含10％FBS的Sf-900TM III SFM培养液终止消化。
实施例2
(1)将发光囊组织置于80ul胰酶中，剪碎；
(2)在CO2恒温箱中消化3min；
(3)在含8％FBS的Sf-900TM III SFM培养液终止消化。
实施例3
(1)将发光囊组织置于120ul胰酶中，采用小号手术剪剪至肉眼无法可见大小；
(2)在CO2恒温箱中消化7min；
(3)在含12％FBS的Sf-900TM III SFM培养液终止消化。
本发明还提供一种萤火虫发光囊细胞的冻存方法，即用胰酶消化法收集2瓶处于对数生长期的萤火虫发光囊细胞，1000g离心5min后弃去上清，用1mL冻存含20％FBS和10％DMSO的Sf-900TM III SFM培养液将细胞重悬后置于冻存管中，将冻存管置于程序降温盒中于-80℃过夜，最后投入-196℃液氮中长期保存，并做好记录。
本发明还提供一种所述冻存萤火虫发光囊细胞的复苏方法，即从液氮中取出冻存管，于37℃水浴中迅速解冻，1000g离心5min收集细胞后接种于25cm2的培养瓶中，放置于培养箱中27℃培养，待细胞贴壁后弃上清，更换培养液，继续培养。
将复苏后的细胞进行台盼蓝染色，用细胞计数仪测定可得出细胞的存活率大于95％。
最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (5)

1.一种分离萤火虫发光囊细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将发光囊组织置于80～120ul胰酶中，剪碎；
(2)在CO2恒温箱中消化3～7min；
(3)在含8％～12％FBS的Sf-900TMIII SFM培养液终止消化。
2.根据权利要求1所述一种分离萤火虫发光囊细胞的方法，其特征在于，包括步骤(1)之前的准备步骤，如下：
用70％～80％的酒精对萤火虫消毒，取出萤火虫发光囊，浸泡与PBS中，在4℃的环境下保存备用。
3.根据权利要求1所述一种分离萤火虫发光囊细胞的方法，其特征在于，步骤(1)中的采用小号手术剪剪至肉眼无法可见大小。
4.一种权利要求1所述萤火虫发光囊细胞的冻存方法，其特征在于，用胰酶消化法收集2瓶处于对数生长期的萤火虫发光囊细胞，1000g离心5min后弃去上清，用1mL冻存含20％FBS和10％DMSO的Sf-900TMIII SFM培养液将细胞重悬后置于冻存管中，将冻存管置于程序降温盒中于-80℃过夜，最后投入-196℃液氮中长期保存，并做好记录。
5.一种权利要求4所述冻存萤火虫发光囊细胞的复苏方法，其特征在于，从液氮中取出冻存管，于37℃水浴中迅速解冻，1000g离心5min收集细胞后接种于25cm2的培养瓶中，放置于培养箱中27℃培养，待细胞贴壁后弃上清，更换培养液，继续培养。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111321106A (zh) * 2020-03-03 2020-06-23 青岛农业大学 一株华北大黑鳃金龟细胞系及其应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006026608A2 (en) * 2004-08-31 2006-03-09 Johns Hopkins University Transgenic mammals and cell lines for the identification of glutamate transporter modulators
US20080187942A1 (en) * 2000-03-30 2008-08-07 Diagnostic Hybrids, Inc. Methods of using chimeric receptors to identify autoimmune disease
CN102140433A (zh) * 2010-12-28 2011-08-03 北京民海生物科技有限公司 一种细胞冻存方法
CN102174471A (zh) * 2010-12-30 2011-09-07 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 慢病毒介导的三融合报告基因转染标记iPS细胞的方法
CN108018264A (zh) * 2018-01-29 2018-05-11 南阳师范学院 一种利用多拷贝基因共表达杆状病毒外源蛋白的构建和表达方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080187942A1 (en) * 2000-03-30 2008-08-07 Diagnostic Hybrids, Inc. Methods of using chimeric receptors to identify autoimmune disease
WO2006026608A2 (en) * 2004-08-31 2006-03-09 Johns Hopkins University Transgenic mammals and cell lines for the identification of glutamate transporter modulators
CN102140433A (zh) * 2010-12-28 2011-08-03 北京民海生物科技有限公司 一种细胞冻存方法
CN102174471A (zh) * 2010-12-30 2011-09-07 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 慢病毒介导的三融合报告基因转染标记iPS细胞的方法
CN108018264A (zh) * 2018-01-29 2018-05-11 南阳师范学院 一种利用多拷贝基因共表达杆状病毒外源蛋白的构建和表达方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
NAOKI NAKATANI等: "Artificial color tuning of firefly luminescence: Theoretical mutation by tuning electrostatic interactions between protein and luciferin", 《CHEMICAL PHYSICS LETTERS》 *
袁洪海: "两种水生萤火虫发光器的超微结构研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 基础科学辑》 *
袁洪海等: "条背萤成虫与幼虫发光器的超微结构观察", 《昆虫知识》 *
陆鼎一编著: "《化学故事新编》", 31 July 2007, 苏州大学出版社 *
韩泰伦等编: "《21世纪青少年科学素质教育全书 神秘的动物王国》", 31 May 2004, 内蒙古人民出版社 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111321106A (zh) * 2020-03-03 2020-06-23 青岛农业大学 一株华北大黑鳃金龟细胞系及其应用
CN111321106B (zh) * 2020-03-03 2022-07-26 青岛农业大学 一株华北大黑鳃金龟细胞系及其应用

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