CN108948013B - 从银柴胡中提取银柴胡氨ⅰ的方法及银柴胡氨ⅰ的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了银柴胡氨Ⅰ在防治炎症中的应用，属于医药应用技术领域。实验证明，中药材银柴胡中存在一种可以抗炎的化合物银柴胡氨Ⅰ，在1μM～5μM的浓度下，细胞生存率达到70%以上。通过对银柴胡进行包括预处理、提取、浓缩、萃取以及分离，富集得到银柴胡氨Ⅰ，其中，在预处理阶段，选用60～100目的银柴胡颗粒，增加提取溶剂与银柴胡的接触面，使用恒温的提取环境，进一步提高提取的效率，提高银柴胡氨Ⅰ得到率。同时，通过定温浓缩及定温萃取，进一步提高银柴胡氨Ⅰ得到率。

Description

从银柴胡中提取银柴胡氨Ⅰ的方法及银柴胡氨Ⅰ的应用
技术领域
本发明属于医药应用技术领域，具体涉及从银柴胡中提取银柴胡氨Ⅰ的方法及银柴胡氨Ⅰ的应用。
背景技术
文献记载，在银柴胡中能够分离得到银柴胡氨Ⅰ，然而，对银柴胡氨Ⅰ的药效以及如何从中药材银柴胡中富集提取银柴胡氨Ⅰ化合物的研究却鲜有报道，现有技术中，从银柴胡中提取分离银柴胡氨Ⅰ的过程复杂，耗时耗力，且不能保证最终目标化合物银柴胡氨Ⅰ的得到率。这极大的限制了银柴胡尤其是银柴胡中有效组分银柴胡氨Ⅰ在药用领域的发展。
银柴胡为石竹科植物Stellaria dichotoma L.var.lanceolata Bge的干燥根，味甘、微寒，主产于宁夏地区，是宁夏道地药材，目前约有15万亩的种植面积。文献记载银柴胡具有清虚热，除疳热的功能，用于阴虚发热、骨蒸痨热、小儿疳热等症。银柴胡的基础研究始于上世纪六十年代，目前，已从银柴胡中分离鉴定出发现12种甾醇类、18种生物碱类、13种环肽类、17种挥发性物质和5种酚酸类物质。有文献表明，银柴胡在缓解炎症、抗变态反应、抗动脉粥样硬化以及缓解肿瘤细胞恶化方面有着显著的作用。
由于银柴胡氨Ⅰ含量较少，往往被忽略或者和其他化合物一起被制成混合提取物来研究其医药学性质，这导致在对银柴胡氨Ⅰ药用价值研究的缺失，不能清楚的表明银银柴胡氨Ⅰ在治疗病症时的效果以及其表现出的细胞毒性。分离提纯银柴胡中的银柴胡氨Ⅰ并研究其药用价值将极大推进银柴胡在中药领域的应用。
发明内容
有鉴于此，本发明公开了一种高效且高得到率从银柴胡中提取银柴胡氨Ⅰ的方法。
本发明还公开了上述方法提取的银柴胡氨Ⅰ在防治炎症中的应用。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种从银柴胡中提取银柴胡氨Ⅰ的方法，包括以下步骤：
预处理：清洗中药材银柴胡，并粉碎，筛选其中60目～100目的粉状颗粒；
提取：取中药材银柴胡，投入实验室用多功能提取罐中，按预定药液比加入75％乙醇水溶液，在预定提取温度下，提取3h；
浓缩：将提取产生的粗液过滤后，在预定浓缩温度下蒸发浓缩，至无醇味；
萃取：对浓缩产生的浓缩液用石油醚在预定萃取比和萃取温度下进行萃取，石油醚萃取相浓缩得石油醚部，石油醚萃余相用二氯甲烷在预定萃取比和萃取温度下进行萃取，二氯甲烷萃取相浓缩得二氯甲烷部，对二氯甲烷部依次通过常压层析柱、硅胶柱、ODS柱进行分离，除杂后得到银柴胡氨Ⅰ；
其中，所述步骤“提取”中，预定药液比为1:10，预定提取温度为65℃～90℃；
所述步骤“浓缩”中，预定浓缩温度为55℃～70℃；
所述步骤“萃取”中，预定萃取温度为20℃～40℃，预定萃取比为1:3～1:5。
上述方法提取的银柴胡氨Ⅰ在防治炎症中的应用。
优选地，应用于预防或治疗炎症时，银柴胡氨Ⅰ的量为1μM～40μM。
优选地，应用于预防或治疗炎症时，银柴胡氨Ⅰ的量为1μM～5μM。
由上述技术方案可知，本发明提供了一种从银柴胡中提取银柴胡氨Ⅰ的方法，为银柴胡以及银柴胡氨Ⅰ的药理药效研究提供有效的参照。从银柴胡中提取富集银柴胡氨Ⅰ的过程中，采用恒温的提取方法，采用定温浓缩和萃取，最大程度提高实验室内银柴胡氨Ⅰ分离过程的效率以及银柴胡氨Ⅰ的化合物收率。本发明还公开了上述所述方法提取的银柴胡氨Ⅰ应用于预防或治疗炎症，实验验证，银柴胡中含有的银柴胡氨Ⅰ在抗炎中有着显著的效果，在其含量为1μM～5μM的低剂量浓度下，抗炎活性尤为显著，数据显示，其细胞生存率达到70％以上。
附图说明
图1是从银柴胡中提取富集银柴胡氨Ⅰ的工艺流程图。
图2是银柴胡二氯甲烷部分离流程图。
图3是银柴胡氨Ⅰ作为抗炎药物时细胞生存率柱状图。
具体实施方式
以下结合具体实施例，对本发明的技术方案做进一步说明。
银柴胡氨Ⅰ(dichotomide I)存在与中药材银柴胡中，其分子式为：C18H17N3O4，结构式如下：
Figure BDA0001771567170000031
银柴胡氨Ⅰ为黄色粉末，溶于二甲基亚砜(DMSO)。
请参看图3，发明人在实验中发现，银柴胡氨Ⅰ虽在银柴胡中含量较低，但其在抗炎的过程中发挥着积极且有效的作用，实验证明，银柴胡氨Ⅰ在浓度为1μM～5μM时，具有优秀的抗炎活性，数据显示，其细胞生存率达到70％以上，且细胞毒性较弱，银柴胡氨Ⅰ在浓度为1μM～40μM时，表现出优秀的抗炎活性。
银柴胡氨Ⅰ在银柴胡中的含量较低，在提取富集过程中，需要从各个方面，不断提高银柴胡氨Ⅰ的提取效率以及最终的银柴胡氨Ⅰ的得到率。
请参看图1，在一较佳实施例中，采用恒温的提取氛围，采用定温定萃取比的萃取分离氛围，有效的提高了从银柴胡中提取银柴胡氨Ⅰ的提取效率，也有效的提高了银柴胡氨Ⅰ的得到率。例如，采用如下的生产工艺流程：
预处理：清洗中药材银柴胡，并粉碎，筛选其中60目～100目的粉状颗粒；
提取：取中药材银柴胡，投入实验室用多功能提取罐中，按预定药液比加入75％乙醇水溶液，在预定提取温度下，提取3h；
浓缩：将提取产生的粗液过滤后，在预定浓缩温度下蒸发浓缩，至无醇味；
萃取：对浓缩产生的浓缩液用石油醚在预定萃取比和萃取温度下进行萃取，石油醚萃取相浓缩得石油醚部，石油醚萃余相用二氯甲烷在预定萃取比和萃取温度下进行萃取，二氯甲烷萃取相浓缩得二氯甲烷部，二氯甲烷萃余相用乙酸乙酯在预定萃取比和萃取温度下进行萃取，乙酸乙酯萃取相浓缩得乙酸乙酯部，对乙酸乙酯部依次通过常压层析柱、硅胶柱、ODS柱、LH-20凝胶柱色谱及PHPLC进行分离，除杂后得到银柴胡氨Ⅰ；
其中，所述步骤“提取”中，预定药液比为1:10，预定提取温度为65℃～90℃；
所述步骤“浓缩”中，预定浓缩温度为55℃～70℃；
所述步骤“萃取”中，预定萃取温度为20℃～40℃，预定萃取比为1:3～1:5。
作为优选，所述步骤“提取”中，预定提取温度为75℃。
作为优选，所述步骤“浓缩”中，预定浓缩温度为55℃。
作为优选，所述步骤“萃取”中，预定萃取温度为25℃。
作为优选，所述步骤“萃取”中，预定萃取比萃取液:萃取剂依次分别为1:3、1:3、1:4。
发明人还意外的发现，一定的真空度有益于银柴胡氨Ⅰ从银柴胡的分离效率，在上述实施例中，发明人选取了65KPaA～95KPaA(表压力，下同)的压力，即6KPaA～36KPaA的真空度来从银柴胡中分离提取银柴胡氨Ⅰ，银柴胡氨Ⅰ的最终得到量显著提高，同时，提取效率也得到了有效的提升。
下面通过具体实验过程，详细说明从银柴胡中提取银柴胡氨Ⅰ的工艺方法以及银柴胡氨Ⅰ作为抗炎药物的应用。
一、从银柴胡中提取银柴胡氨Ⅰ
1、取银柴胡共40kg，清洗后进行粉碎，筛选其中60～100目的粉状颗粒，每次3kg加入实验室用多功能提取罐中，加入75％乙醇水溶液30kg(药液比1:10)，在65℃提取温度下进行提取，提取时间为3h/次。
将所有提取完成得到的粗液在55℃浓缩温度下进行浓缩，直至无醇味，所得到的浓缩产物为银柴胡的总提取物。
取上述得到的总提取物部分，首先用石油醚(分析纯度)在25℃萃取温度下进行静置萃取，萃取比(萃取液：萃取剂，下同)为1:3，萃取完成后，萃取相在55℃萃取温度下浓缩得银柴胡的石油醚部；萃余相接着用二氯甲烷(分析纯)在相同萃取温度下进行静置萃取，萃取比为1:3，萃取完成后，萃取相在相同温度下浓缩得银柴胡的二氯甲烷部；萃余相接着用乙酸乙酯(分析纯)在相同温度下进行静置萃取，萃取比为1:4，萃取完成后，萃取相在相同温度下浓缩得银柴胡的乙酸乙酯部；萃余相接着用正丁醇(分析纯)在相同温度下进行静置萃取，萃取比为1:5，萃取完成后，萃取相在相同温度下浓缩得银柴胡的正丁醇部；萃余相在相同温度下浓缩得银柴胡的水部。
将上述过程中得到的银柴胡总提取物、石油醚部、二氯甲烷部、乙酸乙酯部、正丁醇部和水部分别在-4℃环境下冷藏备用。
本实施例中，总提取物的浸膏量为2.745Kg，总提物的浸膏得率为6.86％。其中，石油醚萃取率1.26％，二氯甲烷萃取率5.02％、乙酸乙酯萃取率1.72％、正丁醇萃取率18.25％。
2、实验1中，取银柴胡共40kg，清洗后进行粉碎，筛选其中60～100目的粉状颗粒，每次3kg加入实验室用多功能提取罐中，加入75％乙醇水溶液30kg(药液比1:10)，在75℃提取温度下进行提取，提取时间为3h/次。其他条件相同。
本实验中，总提取物的浸膏量为2.685Kg，总提取物的浸膏得率为6.71％。其中，石油醚萃取率1.24％，二氯甲烷萃取率4.91％、乙酸乙酯萃取率1.59％、正丁醇萃取率17.74％。
3、实验2中，取银柴胡共40kg，清洗后进行粉碎，筛选其中60～100目的粉状颗粒，每次3kg加入实验室用多功能提取罐中，加入75％乙醇水溶液30kg(药液比1:10)，在90℃提取温度下进行提取，提取时间为3h/次。其他条件相同。
本实验中，总提取物的浸膏量为2.606Kg，总提取物的浸膏得率为6.52％。其中，石油醚萃取率1.26％，二氯甲烷萃取率4.81％、乙酸乙酯萃取率1.62％、正丁醇萃取率17.83％。
实验1～实验3中，可以清楚的得到，提取温度对银柴胡的总浸膏量有着显著影响。恒温的提取环境，有利于提取溶剂和银柴胡药材颗粒充分反混，提取更加彻底。实验中，发明人还发现，恒温有利于提高总浸膏量的收率，但较高的提取温度，容易产生泡沫，从而影响到实验效率。故而，发明人选取提取温度为65℃～90℃，在此状态下，提高实验效率的同时提高了总提取物的浸膏得率，间接地提高了目标化合物银柴胡氨Ⅰ的收率。
4、实验2中，将所有提取完成得到的粗液在65℃浓缩温度下进行浓缩，直至无醇味，所得到的浓缩产物为银柴胡的总提取物。其他条件不变。
本实验中，总提取物的浸膏量为2.672Kg，总提取物的浸膏得率为6.68％。其中，石油醚萃取率1.25％，二氯甲烷萃取率4.90％、乙酸乙酯萃取率1.60％、正丁醇萃取率17.78％。
5、实验4中，将所有提取完成得到的粗液在75℃浓缩温度下进行浓缩，直至无醇味，所得到的浓缩产物为银柴胡的总提取物。其他条件不变。
本实验中，总提取物的浸膏量为2.586Kg，总提取物的浸膏得率为6.47％。其中，石油醚萃取率1.20％，二氯甲烷萃取率4.85％、乙酸乙酯萃取率1.55％、正丁醇萃取率17.01％。
6、实验2中，首先用石油醚(分析纯度)在30℃萃取温度下进行静置萃取，萃取比为1:3，萃取完成后，萃取相在55℃浓缩温度下浓缩得银柴胡的石油醚部；萃余相接着用二氯甲烷(分析纯)在相同萃取温度下进行静置萃取，萃取比为1:3，萃取完成后，萃取相在相同温度下浓缩得银柴胡的二氯甲烷部；萃余相接着用乙酸乙酯(分析纯)在相同温度下进行静置萃取，萃取比为1:4，萃取完成后，萃取相在相同温度下浓缩得银柴胡的乙酸乙酯部；萃余相接着用正丁醇(分析纯)在相同温度下进行静置萃取，萃取比为1:5，萃取完成后，萃取相在相同温度下浓缩得银柴胡的正丁醇部；萃余相在相同温度下浓缩得银柴胡的水部。其他条件不变。
本实验中，总提取物的浸膏量为2.674Kg，总提取物的浸膏得率为6.69％。其中，石油醚萃取率1.15％，二氯甲烷萃取率4.60％、乙酸乙酯萃取率1.50％、正丁醇萃取率17.63％。
7、实验6中，首先用石油醚(分析纯度)在40℃萃取温度下进行静置萃取，萃取比为1:3，萃取完成后，萃取相在55℃浓缩温度下浓缩得银柴胡的石油醚部；萃余相接着用二氯甲烷(分析纯)在相同萃取温度下进行静置萃取，萃取比为1:3，萃取完成后，萃取相在相同温度下浓缩得银柴胡的二氯甲烷部；萃余相接着用乙酸乙酯(分析纯)在相同温度下进行静置萃取，萃取比为1:4，萃取完成后，萃取相在相同温度下浓缩得银柴胡的乙酸乙酯部；萃余相接着用正丁醇(分析纯)在相同温度下进行静置萃取，萃取比为1:5，萃取完成后，萃取相在相同温度下浓缩得银柴胡的正丁醇部；萃余相在相同温度下浓缩得银柴胡的水部。其他条件不变。
本实验中，总提取物的浸膏量为2.679Kg，总提取物的浸膏得率为6.70％。其中，石油醚萃取率1.12％，二氯甲烷萃取率4.41％、乙酸乙酯萃取率1.23％、正丁醇萃取率16.12％。
实验2～实验7中，可以清楚的得到，浓缩温度、萃取温度以及萃取比对总提物的浸膏得率以及目标化合物银柴胡氨Ⅰ的收率都有着显著影响。浓缩温度过低，浓缩过慢，导致实验效率降低，而浓缩温度过高，则会导致银柴胡中的有效组分变质或者随着提取溶剂挥发，从而使目标化合物的收率降低。萃取温度以及萃取比是影响萃取效果的重要因素，过高的萃取温度和萃取比使得目标产物在萃余相中的溶解度增加，过低的萃取温度和萃取比导致萃取效率缓慢，且不能完全实现对目标产物的萃取分离，最终的结果都是降低了目标化合物银柴胡氨Ⅰ的收率。
8、实验2中，采用微负压的提取氛围，设定系统压力65KPaA,其他条件相同。
本实验中，总提取物的浸膏量为3.124Kg，总提取物的浸膏得率为7.81％。其中，石油醚萃取率1.15％，二氯甲烷萃取率4.52％、乙酸乙酯萃取率1.38％、正丁醇萃取率16.57％。
9、实验2中，采用微负压的提取氛围，设定系统压力85KPaA,其他条件相同。
本实验中，总提取物的浸膏量为2.987Kg，总提取物的浸膏得率为7.47％。其中，石油醚萃取率1.14％，二氯甲烷萃取率4.38％、乙酸乙酯萃取率1.29％、正丁醇萃取率17.01％。
10、实验2中，采用微负压的提取氛围，设定系统压力95KPaA,其他条件相同。
本实验中，总提取物的浸膏量为2.741Kg，总提取物的浸膏得率为6.85％。其中，石油醚萃取率1.12％，二氯甲烷萃取率4.38％、乙酸乙酯萃取率1.42％、正丁醇萃取率16.35％。
实验8到实验10可以看出，随着压力的降低，真空度提高，提取反应的物质交换速率不断加强，尤其是随着压力降低，提取溶剂的沸点降低，反应扰动明显，增加了目标化合物从银柴胡中被提取出来的效率，目标化合物的收率也有了显著的提高。随着压力进一步降低，反应罐中出现大量的泡沫，这极大的影响了反应的提取效率。
实验1～实验7中，制备了银柴胡的总提物、石油醚部、二氯甲烷部、乙酸乙酯部、正丁醇部以及水部。通过恒温提取，提高提取效率，使提取溶剂与银柴胡充分接触，反混，使提取得率有一定程度提高。而通过定温浓缩、定温萃取，使得在实验室的分离过程具有更为直观的参照性。通过各个参数的合理选择，相互配合，实现提高银柴胡总提取物浸膏得率，提高目标化合物银柴胡氨Ⅰ的最终收率，为在研究其药理作用和推广生产中提供有效借鉴。
二、银柴胡二氯甲烷部分离纯化
对银柴胡的二氯甲烷部进行分离，得到5种化合物。其分离过程如下：
取二氯甲烷部浸膏适量，甲醇溶解，用60g硅胶(100目～200目)拌样，并用旋转蒸发仪挥干溶剂使成粉末状。用常压层析柱(填料：100目～200目硅胶；直径：10cm)干法装柱上样，以石油醚-丙酮系统(20:1-0:1)梯度洗脱。按瓶(150ml)收集洗脱液，用TLC检测并合并相似流分，得到2个组分C1～C2，C1组分经硅胶柱(石油醚：丙酮＝15:1)，ODS柱(60～100％甲醇)，LH-20凝胶柱色谱(流动相：甲醇)，除杂后得到化合物1、化合物2和化合物4。C2组分经硅胶柱(石油醚：丙酮＝20:1)ODS柱(60～100％甲醇)，PTLC薄层板(石油醚：丙酮＝2:1)除杂后得到化合物3和化合物5。
经现代核磁光谱鉴定，化合物4为：银柴胡氨Ⅰ(dichotomide I)。
上述实验中，银柴胡氨Ⅰ的相对银柴胡二氯甲烷部的收率为0.0186％，即，每100g二氯甲烷部的提取物可分离获取18.6mg银柴胡氨Ⅰ。
上述实验中，从银柴胡的二氯甲烷部中分离提纯了目标化合物银柴胡氨Ⅰ，为在研究其药理药效作用的实验中提供可靠保障。
三、银柴胡氨Ⅰ抗炎活性实验
1、实验材料
Figure BDA0001771567170000101
Figure BDA0001771567170000111
2、主要仪器
Thermo371二氧化碳恒温培养箱 上海巴玖实业有限公司
超净工作台 苏州金净净化设备公司
SX-500高压灭菌锅 上海莱睿科学仪器有限公司
高速离心机 HC3518北京科大创新中佳分公司
-20℃低温冰箱 青岛海尔公司
-80℃低温冰箱 SANYO公司
移液器 吉尔森P型移液器公司
细胞培养板与细胞培养皿 Costa公司
显微镜 OLYMPUS公司
RNase-free枪头，EP管 Axygen Scientific公司
酶标仪 芬兰雷勃酶标仪公司
电热恒温水浴锅 上海森信实验仪器有限公司
电子精密天平 上海奥豪斯仪器有限公司
3、实验方法
实验用品去热源处理：
加样枪头、EP管、细胞培养瓶等塑料实验用品清洗干净后，经60℃辐照(1x106Gray，30分钟)，去热源处理。烧杯、试管、玻璃培养瓶等玻璃实验用品，清洗干净后经300°干烘2小时，冷却后锡箔纸密封瓶口，备用。其他实验用品按照常规实验高压消毒灭菌处理。
试剂配制：
细胞冻存液：为含10％胎牛血清(Fetal bovine serum,FBS)，10％DMSO的DMEM(dulbecco's modified eagle medium)高糖培养液。
LPS(脂多糖)配制：精密称取1mgLPS和量取1ml含10％胎牛血清的DMEM高糖培养液混合，震荡为母液。
单体配制：取各单体化合物放于1.5EP管，加1ml DMSO配制成母液，震荡混匀。
D-Hanks液：称取KCl 0.4g，NaCl 8g，Na2HPO4 0.133g，NaHCO30.35g，KH2PO4 0.06g，酚红0.02g，依次溶解在约700ml双蒸水里，将其定容于1000ml，充分混匀，分装入瓶，包扎严实，然后放入高压锅，在122℃下高压灭菌40min。
RAW264.7细胞复苏：
将装有RAW264.7的冻存管从液氮罐中取出，立即将其置于37℃温水中，迅速将其融化。然后将细胞悬液转入到预先加有适量含10％FPS，青霉素100U/ml，链霉素100μg/ml的DMEM高糖培养液的离心管中，盖上塞子，配平后1000rpm离心5min，去上清，加入DMEM高糖培养液，重悬细胞，然后接种到培养瓶内。
RAW264.7细胞培养：
RAW264.7细胞采用贴壁方法进行培养，培养液为含有10％FPS，青霉素100U/ml，链霉素100μg/ml的DMEM高糖培养液，培养条件为5％CO2，温度37℃，相对饱和湿度，将培养瓶放于倒置显徴镜下观察细胞的生长情况，依照细胞的生长状况，给予适当的换液，待细胞融合到80％-90％，按1：4进行传代。
RAW264.7细胞冻存：
取生长状态良好的RAW264.7，先用D-Hanks液洗1次，再加入D-Hanks液浸泡细胞2min后弃去液体，加入完全培养液后用滴管吹打细胞培养瓶底面，1000rpm离心5min收集细胞，加入2ml细胞冻存液，重悬细胞，移入冻存管中，拧紧管盖，标明细胞名称和冻存日期。将上述冻存管放入-20℃冰箱2h，然后转移到-80℃冰箱24h，最后转移到液氮中长期保存。
4、细胞建模及分组
将银柴胡分离得到的化合物银柴胡氨Ⅰ(dichotomide I)分别溶解于DMSO中，并按照实验要求用不含FBS的DMEM配制成以下浓度：40μM，20μM，10μM，5μM,1μM。以100ng/m L的LPS刺激每个浓度梯度组。设置正常组，为培养基，设置模型组，添加PBS。每个浓度设置4个复孔。细胞培养24小时后，吸去培养基，换成以上加药培养基，继续培养24小时。弃去含药培养基后换成正常培养基，再按照说明书，每孔加入10μL CCK-8溶液，继续培养2小时，在酶标仪上测定450nm处的吸光度，计算细胞生存率。
细胞生存率(％)＝(1-T/C)×100％
其中T表示实验孔的吸光度，C表示模型孔的吸光度。
上述实验中，可以清晰的得到，银柴胡氨Ⅰ具有较好的抗炎活性，在RAW264.7经LPS诱导炎症后，加入银柴胡氨Ⅰ的实验孔的细胞生存率相比模型孔内的细胞生存率显著提高，在1μM～5μM的浓度下，具有更佳的抗炎活性，细胞生存率达到70％以上。而随着银柴胡氨Ⅰ浓度的增加，则缓慢地显示出一定的细胞毒性。银柴胡氨Ⅰ在作为抗炎药物应用时，需要严格控制其浓度，浓度过高，则表现出较强的细胞毒性。
以上所揭露的仅为发明较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程，并依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于发明所涵盖的范围。

Claims (5)

1.一种从银柴胡中提取银柴胡氨Ⅰ的方法，其特征在于，包括以下步骤：
预处理：清洗中药材银柴胡，并粉碎，筛选其中60目～100目的粉状颗粒；
提取：取中药材银柴胡，投入实验室用多功能提取罐中，按预定药液比加入75%乙醇水溶液，在预定提取温度下，提取3h；
浓缩：将提取产生的粗液过滤后，在预定浓缩温度下蒸发浓缩，至无醇味；
萃取：对浓缩产生的浓缩液用石油醚在预定萃取比和萃取温度下进行萃取，石油醚萃取相浓缩得石油醚部，石油醚萃余相用二氯甲烷在预定萃取比和萃取温度下进行萃取，二氯甲烷萃取相浓缩得二氯甲烷部，对二氯甲烷部依次通过常压层析柱、硅胶柱、ODS柱进行分离，除杂后得到银柴胡氨Ⅰ；
其中，所述步骤“提取”中，预定药液比为1:10，预定提取温度为65℃～90℃；
所述步骤“浓缩”中，预定浓缩温度为55℃～70℃；
所述步骤“萃取”中，预定萃取温度为20℃～40℃，预定萃取比为1:3～1:5。
2.如权利要求1所述的从银柴胡中提取银柴胡氨Ⅰ的方法，其特征在于，所述步骤“提取”中，预定提取温度为75℃。
3.如权利要求2所述的从银柴胡中提取银柴胡氨Ⅰ的方法，其特征在于，所述步骤“浓缩”中，预定浓缩温度为55℃。
4.如权利要求1所述的从银柴胡中提取银柴胡氨Ⅰ的方法，其特征在于，所述步骤“萃取”中，预定萃取温度为25℃。
5.如权利要求4所述的从银柴胡中提取银柴胡氨Ⅰ的方法，其特征在于，所述步骤“萃取”中，预定萃取比依次分别为1:3、1:3。
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