CN108938650A - 华蟾素的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了华蟾素在制备治疗肺纤维化的药物中的应用。发明提供了一种华蟾素的新用途，即华蟾素在制备治疗肺纤维化疾病药物中的应用。本发明中，华蟾素对肺纤维化有良好的功效，无不良反应，可减缓博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化，为治疗、缓解或改善肺纤维化疾病提供良好的应用前景。

Description

华蟾素的应用

技术领域

本发明涉及药物化学领域，具体而言，涉及含华蟾素的应用。

背景技术

肺纤维化(pulmonaryfibrosis，PF)是许多病因各异的肺间质疾病的共同结局，是以肺泡持续性损伤、成纤维细胞(fi-broblast，FB)增殖及大量细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)沉积为特征，由异常的上皮-间质相互作用而维系和促进，从而导致肺泡和肺间质出现不同程度的炎症和纤维化，进而导致肺结构破坏和呼吸衰竭，所以也称间质性肺疾病(interstitial lung disease，ILD)或弥漫性实质性肺疾病(diffuseparenchymal lung disease，DPLD)。

特发性肺纤维化(Idiopathic pulmonary fibrosis，IPF)属于间质性肺疾病(ILDs)家族中的特发性间质性肺炎(IIP)组。IPF是一种病因不明的最常见的而且最严重的慢性炎症性间质性肺疾病，临床上表现为进行性呼吸困难伴刺激性干咳，病情常持续进展，中位生存期约为2.8年，5年生存率不足50％，患者多死于呼吸衰竭和继发肺部感染。世界各地均有报道，近年来其发病率呈不断上升趋势且无明显地理和种族差别，多为中老年人，常在50～70岁发病，儿童发病罕见。鉴于大量的临床情况，IPF的患病率和发病率很难估计，100000中有15-250的概率发生，根据国家、年龄、性别不同，每年有34000个新发病例。

目前肺移植是唯一可延长肺纤维化患者生存期的治疗手段，美国FDA2014年批准了尼达尼布和吡非尼酮应用于IPF患者的治疗，国内于2014年批准吡非尼酮上市，2017年9月批准尼达尼布上市。虽然这些药物可以延缓肺功能下降速度，但不能逆转病情进展，而且相当一部分患者对治疗反应欠佳，其具体药理机制尚未完全清楚。临床上主要采用抗炎药和/或免疫抑制剂、抗纤维化药物、抗凝血药物、肺移植等措施进行治疗，常用的药物包括糖皮质类固醇、硝基咪唑硫嘧啶、环孢霉素、霉酚酸酯，以及可以影响胶原形成的秋水仙碱和青霉胺等。糖皮质激素类药物用于治疗特发性肺纤维化已有超过50年的历史，对各项临床研究的结果汇总发现，糖皮质激素类药物对特发性肺纤维化患者的显效率最高不超过16％。硝基咪唑硫嘌呤用于治疗特发性肺纤维化已经超过20多年，其有效性仍存在争议。其他药物在临床上的有效性也存在不同程度上的争议。

因此阐明肺纤维化的发生发展机制，探索新的潜在的药物靶点，开发出针对肺纤维化的疗效确认、相对安全、价格合理的药物具有重要的社会意义和医学意义。

华蟾素(Cinobufotalin)是从中华大蟾蜍全皮中提取的水溶性化合物，它的主要成分包括蟾毒内酯类、吲哚生物碱类、多肽、胆固醇等。华蟾素作为一种传统中药，在抗炎、抗病毒、抗肿瘤、强心升压、消肿止痛方面具有重要的应用价值。截至目前，尚无华蟾素可减缓肺纤维化的相关报道。

发明内容

本发明的目的在于提供华蟾素在制备治疗肺纤维化的药物中的应用。

根据本发明的实施例，提供了一种华蟾素在制备治疗肺纤维化的药物中的应用，其中，所述华蟾素的分子结构式为：

在上述应用中，所述华蟾素在制备治疗特发性肺纤维化的药物中的应用。

在上述应用中，所述华蟾素的有效治疗量为80-120mg/kg。

在上述应用中，所述治疗肺纤维化的药物包含华蟾素及华蟾素在药学上可接受的盐、酯、水合物或它们的组合以及辅料。

在上述应用中，所述治疗肺纤维化的药物的剂型选自片剂、胶囊剂、丸剂、栓剂、气雾剂、口服液体制剂、颗粒剂、散剂、注射剂、糖浆剂、酒剂、酊剂、露剂、膜剂或它们的组合。

在上述应用中，所述治疗肺纤维化的药物的给药方式包括口服、注射、植入、外用、喷雾、吸入或它们的组合。

发明提供了一种华蟾素的新用途，即华蟾素在制备治疗肺纤维化疾病药物中的应用。本发明中，华蟾素对肺纤维化有良好的功效，无不良反应，可减缓博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化，为治疗、缓解或改善肺纤维化疾病提供良好的应用前景。

本发明提供的治疗肺纤维化药物的优势在于：华蟾素可以抑制机体的肺纤维化水平、抑制肺部细胞外基质过度沉积、对肺纤维化具有很好的治疗效果。此外，该药物患者不仅容易接受，且毒副作用小、价格低廉、来源广泛、容易获取，还便于了解患者对药物的反应。

附图说明

图1示出了经生理盐水、博莱霉素、和华蟾素给药不同处理后小鼠体重变化。

图2示出了华蟾素减少博莱霉素诱导肺组织纤维化后小鼠肺部胶原含量(*，p<0.05，即统计学上具有显著性差异)。

图3A示出了H&E染色验证华蟾素抑制博莱霉素诱导的进行性肺组织纤维化(标尺:100μm)。

图3B示出了肺组织切片的纤维化面积百分比统计，验证华蟾素抑制博莱霉素诱导的肺组织纤维化。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明使用的试验材料及其来源包括：

(1)小鼠

雄性C57BL/6J，(周龄8-10周)野生型小鼠：由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。

动物到达后，由专人接收动物于双走廊屏障环境小鼠饲养室内，填写《试验动物接收记录表》(BG-017-V00)，接收时对动物大体情况进行观察，并随机抽取动物进行称重，确保试验动物与引进标准基本吻合。实验动物使用许可证号：SYXK(津)2012-0003。

(2)供试品

华蟾素，购自成都普思生物科技股份有限公司，纯度：99.21％。

博莱霉素，购自日本化药株式会社。

羧甲基纤维素钠，购自生工生物工程(上海)有限公司。

水合氯醛，购自天津市柏欧合创化学试剂经销中心。

盐酸，购自永飞化学试剂有限公司。

氯胺T，购自源叶生物有限公司。

高氯酸，购自天津渤化化学试剂有限公司。

对二甲氨基苯甲醛，购自北京华夏远洋科技有限公司。

实施例1小鼠肺纤维化模型的建立和药效学检测

实验方法及步骤：

1、小鼠肺纤维化模型的建立

将36只小鼠随机分为三组，空白对照组(生理盐水组)、肺纤维化模型组(博莱霉素)、华蟾素组(建模后给药华蟾素)，每组12只。

肺纤维化动物模型制备是指雄性C57BL/6J，(周龄8-10周)野生型小鼠，以10％水合氯醛按0.5ml/100g给予小鼠腹腔注射麻醉，气管内有创注射2U/Kg博莱霉素。具体实施方式如下：麻醉小鼠后称重记录，将小鼠固定于操作台，颈部用70％酒精消毒，用手术刀在小鼠颈部垂直划开大约1cm长创口，利用显微镊分离组织暴露气管，将注射器经气管软骨环间隙朝向心端刺入气管，然后按2U/kg的计量缓慢注入与其体重相适应体积的博莱霉素生理盐水溶液，立即将动物直立并左右旋转，使药液在肺内均匀分布。

空白对照组注射同体积的生理盐水(0.9％Nacl)。

2、肺纤维化小鼠的给药治疗

华蟾素治疗是指在博莱霉素处理第7-14天(建模后第2周)时，每天通过灌胃给予华蟾素组小鼠100mg/kg华蟾素，空白对照组和肺纤维化模型组灌胃给予相同体积的相应溶剂羧甲基纤维素钠(CMC-Na)作为对照。博莱霉素处理14天后检测各组小鼠肺胶原含量及肺纤维化严重程度。

药效学检测和实验结果及评价：

1、肺胶原含量检测：

即，羟脯氨酸含量测定，是指在博莱霉素注射第14天处死小鼠，分离小鼠右肺，放入5ml安培瓶，120℃烘箱烘干，盐酸水解后调整PH至6.5-8.0，过滤残渣，加入PBS调整总体积为10ml，取50μL样品，加入350μL去离子水，加入200μL氯胺T(Chloramine T)溶液室温孵育20分钟，加入200μL高氯酸(perchloric acid)室温孵育5分钟，加入200μL对二甲氨基苯甲醛(P-DMAB)65℃孵育20分钟。取200μL至96孔板中测定样品570nm的吸光值，利用标准品读数绘制标准曲线，进而根据标准曲线所得公式求得所测样品羟脯氨酸浓度Cs。按以下公式换算为全部右肺所含羟脯氨酸的量W(μg/右肺)＝Cs×8(所测样品稀释倍数)×10(样品总体积)。

2、肺纤维化严重程度比较：

博莱霉素(2U/Kg)处理小鼠诱导肺纤维化发生后，华蟾素组在博莱霉素处理第7-14天每天通过灌胃给予小鼠100mg/kg华蟾素，同时空白对照组和肺纤维化模型组灌胃给予相同体积的相应溶剂羧甲基纤维素钠(CMC-Na)作为对照。各组小鼠在博莱霉素处理14天后取肺组织观察纤维化严重程度。

3、实验结果及评价：

参考图1，图1示出了经生理盐水、博莱霉素、和华蟾素给药不同处理后小鼠体重变化。从图1可以看出，相比于生理盐水组和博莱霉素组，华蟾素组小鼠自给药后体重开始缓慢回升。

参考图2，图2示出了华蟾素减少博莱霉素诱导后小鼠肺部胶原含量。从图2中可以看出，与给予CMC-Na的小鼠的博莱霉素组相比，华蟾素组小鼠的肺组织中羟脯氨酸含量明显降低，这说明华蟾素能够减少博莱霉素所诱导的胶原含量，进而说明华蟾素能够抑制博莱霉素诱导的肺组织中胶原合成。此外，在如下表1中示出了相应的数据，即生理盐水组、博莱霉素组、华蟾素组小鼠中羟脯氨酸含量。

表1华蟾素抑制博莱霉素诱导的羟脯氨酸含量(微克/右肺)

生理盐水组	博莱霉素组	华蟾素组
			121.93±7.25	222.33±16.64	184.81±4.38

参考图3A-3B，图3A示出了H&E染色验证华蟾素抑制博莱霉素诱导的进行性肺组织纤维化(标尺:100μm)。图3B示出了肺组织切片的纤维化面积百分比统计，验证华蟾素抑制博莱霉素诱导的肺组织纤维化。由图3A可知，通过对小鼠肺组织切片进行H&E染色，发现华蟾素组的小鼠肺纤维化程度低于博莱霉素组小鼠的肺纤维化程度。由图3B可知，对肺组织切片进行纤维化的定量统计，发现华蟾素给药组小鼠肺纤维化面积明显低于博莱霉素组小鼠肺纤维化面积。在表2中示出了华蟾素给药组小鼠肺纤维化面积百分比和博莱霉素组小鼠肺纤维化面积百分比。

表2华蟾素抑制博莱霉素诱导的肺纤维化(百分比)

博莱霉素组	华蟾素组
		21.28±2.77	11.77±2.16

从而，发明提供了一种华蟾素的新用途，即华蟾素在制备治疗肺纤维化疾病药物中的应用。本发明中，华蟾素对肺纤维化有良好的功效，无不良反应，可减缓博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化，为治疗、缓解或改善肺纤维化疾病提供良好的应用前景。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.华蟾素在制备治疗肺纤维化的药物中的应用，其中，所述华蟾素的分子结构式为：

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述华蟾素在制备治疗特发性肺纤维化的药物中的应用。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述华蟾素的有效治疗量为80-120mg/kg。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的应用，其特征在于，所述治疗肺纤维化的药物包含华蟾素及华蟾素在药学上可接受的盐、酯、水合物或它们的组合以及辅料。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述治疗肺纤维化的药物的剂型选自片剂、胶囊剂、丸剂、栓剂、气雾剂、口服液体制剂、颗粒剂、散剂、注射剂、糖浆剂、酒剂、酊剂、露剂、膜剂或它们的组合。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述治疗肺纤维化的药物的给药方式包括口服、注射、植入、外用、喷雾、吸入或它们的组合。