CN108913729A - 一种奈必洛尔中间体的酶还原制备方法 - Google Patents

一种奈必洛尔中间体的酶还原制备方法 Download PDF

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王家洪
宋庆宝
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Abstract

本发明公开了一种奈必洛尔中间体——式I所示的2‑氯‑1‑(6‑氟‑3,4‑二氢‑2H‑1‑苯并吡喃‑2‑基)乙醇的酶还原制备方法，其包括：(1)配制PH＝6.5‑8.0的磷酸盐缓冲溶液；(2)于反应容器中加入步骤(1)配制的磷酸盐缓冲溶液、式II所示的R构型或S构型的2‑氯‑1‑(6‑氟‑3,4‑二氢‑2H‑1‑苯并吡喃‑2‑基)乙酮、路易斯酸、S构型或R构型的羰基还原酶、辅酶I、供氢体，所述的供氢体是异丙醇或异丁醇，在温度20‑50℃下反应，反应结束后经后处理分别得相应构型的2‑氯‑1‑(6‑氟‑3,4‑二氢‑2H‑1‑苯并吡喃‑2‑基)乙醇。本发明方法反应条件温和，产物得率高，手性纯度好，易于操作，适用于工业化生产。

Description

一种奈必洛尔中间体的酶还原制备方法
技术领域
本发明属于药物化学领域，涉及一种奈必洛尔中间体——式I所示的2-氯-1-(6-氟-3,4-二氢-2H-1-苯并吡喃-2-基)乙醇的酶还原制备方法。
背景技术
奈必洛尔盐酸盐(Nebivolol Hydrochloride)，也称为盐酸奈必洛尔，是由美国Johnson&Johnson公司开发的选择性β-阻滞剂，主要用于治疗原发性高血压和慢性心力衰竭。该药物具有疗效显著、服药方便和不良反应少等优点，是一个很有前途的心血管药物，已于2007年由FDA批准在美国上市。奈必洛尔盐酸盐是由等摩尔量的(RSSS)构型和(SRRR)构型组成的外消旋体。
已有多篇文献和专利报道了奈必洛尔的合成方法。在这些合成方法中，环氧化合物III常被使用作为关键的中间体。在可行的车间生产工艺中，化合物I由化合物II经由还原试剂的作用或经由酶还原得到，然后再经碱作用即可制得该关键中间体III。
由于中间体III有两个手性中心，其基本由化合物I传承而来，因此不对称还原制备高纯度及高ee值的化合物I就显得非常必要。到目前为止，已有多篇专利报道了化合物I的制备。
CN102127061报道了化合物II用硼氢化钠或硼氢化钾还原得到化合物I。该方法的缺点是还原没有立体选择性，得到的化合物I是一对非对应异构体，也即混合物，而非单一的某一构型的化合物，增加了后续工艺分离异构体的难度。
WO2008040528/CN101522656报道了化合物II用硼氢化物或氢化铝锂或铑、钌、铱、钯等金属催化剂还原得到化合物I。该方法的缺点是还原没有立体选择性，得到的化合物I是混合物，而非单一的某一构型的化合物，增加了后续工艺分离异构体的难度。
CN105503842报道了化合物II用糖醛还原酶不对称还原制备化合物I。该方法的优点是可以得到高纯度和高ee值的化合物I，但缺点是在反应过程中由于氢源甲酸或甲酸铵的氢被不断消耗，溶液的PH值会逐渐增大，而糖醛还原酶需要比较合适的PH范围才能保持活性和立体选择性，因此实际操作过程中需要不断监控并调节反应液PH值在一个比较狭小的合适范围内，在操作上比较难控制。
从上面文献综述可见，已有的奈必洛尔中间体I的合成方法还存在着诸多不足之处，因此新颖高效和适合于工业化生产的制备方法的开发具有现实意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种式I所示的2-氯-1-(6-氟-3,4-二氢-2H-1-苯并吡喃-2-基)乙醇的酶还原制备方法，该方法反应条件温和，产物得率高，手性纯度好，易于操作，适用于工业化生产。
为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：
一种式I所示的2-氯-1-(6-氟-3,4-二氢-2H-1-苯并吡喃-2-基)乙醇的酶还原制备方法，包括：
(1)配制PH＝6.5-8.0的磷酸盐缓冲溶液；
(2)于反应容器中加入步骤(1)配制的磷酸盐缓冲溶液、式II所示的R构型或S构型的2-氯-1-(6-氟-3,4-二氢-2H-1-苯并吡喃-2-基)乙酮(简称：RorS-CLK)、路易斯酸、S构型或R构型的羰基还原酶(简称：RorS-羰基还原酶)、辅酶I(NAD)、供氢体，所述的供氢体是异丙醇或异丁醇，在温度20-50℃下反应，反应结束后经后处理分别得相应构型的2-氯-1-(6-氟-3,4-二氢-2H-1-苯并吡喃-2-基)乙醇(即：S,S-CLA、S,R-CLA、R,S-CLA或R,R-CLA)；
本发明中，由于羰基还原酶在PH＝6.5-8.0的磷酸盐缓冲溶液中能保持较好的活性，而在其它组分配置的缓冲溶液中活性会下降甚至会失活，故反应在磷酸盐缓冲溶液中进行。进一步，磷酸盐缓冲溶液的pH值优选为6.5-7.5，更优选7.0-7.5，最优选7.3-7.5。
本发明中，磷酸盐缓冲溶液的配制方法为：将磷酸二氢盐水溶液缓缓倒入到磷酸氢盐或磷酸盐水溶液中，调节并用pH计控制溶液pH值在所需范围内。所使用的试剂磷酸二氢盐可以是磷酸二氢钾和磷酸二氢钠中的一种或两种的任意组合，优选磷酸二氢钾。磷酸氢盐可以是磷酸氢二钾和磷酸氢二钠中一种或两种的任意组合，优选磷酸氢二钾。磷酸盐可以是磷酸钾和磷酸钠中的一种或两种的任意组合，优选磷酸钾。磷酸二氢盐、磷酸氢盐、磷酸盐的水溶液浓度各自为0.05-0.25mol/L，各自优选为0.08-0.12mol/L。
本发明步骤(2)中，所使用的路易斯酸可以是氯化锌、氯化镁、氯化铁或氯化铝，优选氯化镁。
本发明步骤(2)中，所述的供氢体优选异丙醇。
本发明步骤(2)中，PP缓冲溶液与RorS-CLK的重量比为0.5-5:1，优选0.8-2:1，最优选1:1。路易斯酸与RorS-CLK的重量比为0.001-0.04:1，优选0.01-0.04:1，最优选0.024:1。(SorR)-羰基还原酶与RorS-CLK的重量比为0.3-1.5:1，优选0.5-1.5:1，最优选0.7:1。辅酶I(NAD)与RorS-CLK的重量比为0.01-0.1％:1，优选0.03-0.06％:1，最优选0.04％。供氢体与RorS-CLK的重量比为0.5-3:1，优选0.8-1.6:1，最优选1:1。
本发明步骤(2)中，反应温度优选为25-35℃，更优选28-32℃。
本发明步骤(2)中，反应时间为2-40小时，优选为18-30小时。
本发明所包括的步骤(2)，反应结束后，后处理过程如下：加入氯化钠或氯化钾溶液，减压蒸除有机溶剂，降至室温后加入甲基叔丁基醚(MTBE)或二氯甲烷(DCM)以及适量硅藻土，充分搅拌后过滤，滤饼用MTBE或DCM淋洗，分层，有机层经干燥、减压浓缩蒸干溶剂得黄色油状物，即为2-氯-1-(6-氟-3,4-二氢-2H-1-苯并吡喃-2-基)乙醇。
上述后处理步骤中，加入氯化钠或氯化钾溶液的目的是在后续升温蒸除有机溶剂的过程中破坏酶的活性，使之失活，并同时在后续分层过程中防止溶液乳化。本发明对于氯化钠或氯化钾溶液的浓度没有特别要求，质量浓度在3％至饱和浓度都可以。氯化钠或氯化钾溶液的加入质量优选为磷酸盐缓冲溶液加入质量的0.8-1.2倍。
上述后处理步骤中，加入硅藻土的目的是助滤，否则比较难以过滤，加入质量为RorS-羰基还原酶质量的0.2-0.5倍。
同现有的奈必洛尔中间体I的合成技术相比，本发明具有如下的技术优势：
(1)工艺简单，反应条件温和。
(2)产物得率高。产物得率一般都大于95％。
(3)产物手性纯度高。ee≥99％，优于传统的化学制备法。
(4)易于工业化生产。本发明工艺简单，反应中不需要监控和调节反应液的pH值，虽然反应过程中需要不断消耗氢，但氢由异丙醇或异丁醇供给，异丙醇或异丁醇氢被拿掉后变为丙酮或甲乙酮(丁酮)，反应液的pH值不会发生改变。从投料到反应结束，只需要设备控制好反应温度，其它的操作基本都不需要，因而比较适合于工业化大生产。
具体实施方式
通过下述实施例将有助于进一步理解本发明，但并不限制本发明的内容。(SorR)-羰基还原酶购自江苏八巨药业有限公司(北区)；
辅酶I(NAD)购自百灵威科技有限公司。
实施例1
将0.06M的磷酸二氢钾溶液缓缓加入到0.06M的磷酸氢二钾溶液中，用PH计监测直到PH＝6.5-7.0，得到PH＝6.5-7.0的PP缓冲溶液。
往反应器中加入40g PP缓冲溶液、50.0g(R)-CLK、1.0g氯化镁、0.025g辅酶NAD、(S)-羰基还原酶30.0g、异丙醇50g，充分搅拌后缓慢控温至20-25℃，保温反应38小时。加入3％的氯化钠溶液40g，60℃水浴中真空减压蒸除有机溶剂，降至室温后加入甲基叔丁基醚(MTBE)50ml，硅藻土15g，充分搅拌后抽滤，10ml MTBE洗涤滤饼，滤液静置后分层，无水硫酸钠干燥有机层，过滤，有机层浓缩至干，得黄色油状物(R,S)-CLA 47.6g，得率95.2％，产物经手性GC检测，ee值为99.2％；非手性GC检测，纯度为98.63％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.81-6.70(m,3H，Ar),4.03-3.96(m,1H),3.80-3.74(m,1H),3.65-3.40(m,2H),2.65-2.50(m,2H),2.31-2.20(b,1H,-OH),2.13-1.88(m,2H).m/z(EI):230.0510(M+,Calcu forC11H12ClFO2230.0507).
实施例2
将0.2M的磷酸二氢钾溶液缓缓加入到0.2M的磷酸氢二钾溶液中，用PH计监测直到PH＝7.5-8.0，得到PH＝7.5-8.0的PP缓冲溶液。
往反应器中加入50g PP缓冲溶液、50.0g(R)-CLK、1.0g氯化锌、0.025g辅酶NAD、(S)-羰基还原酶30.0g、异丙醇80g，充分搅拌后缓慢控温至25-30℃，保温反应30小时。加入3％的氯化钠溶液50g，60℃水浴中真空减压蒸除有机溶剂，降至室温后加入甲基叔丁基醚(MTBE)50ml，硅藻土15g，充分搅拌后抽滤，10ml MTBE洗涤滤饼，滤液静置后分层，无水硫酸钠干燥有机层，过滤，有机层浓缩至干，得黄色油状物(R,S)-CLA 47.5g，得率95.0％，产物经手性GC检测，ee值为99.3％；非手性GC检测，纯度为98.82％。
实施例3
将0.1M的磷酸二氢钾溶液缓缓加入到0.1M的磷酸氢二钾溶液中，用PH计监测直到PH＝7.3-7.5，得到PH＝7.3-7.5的PP缓冲溶液。
往反应器中加入100g PP缓冲溶液、50.0g(S)-CLK、1.0g氯化镁、0.025g辅酶NAD、(S)-羰基还原酶30.0g、异丙醇50g，充分搅拌后缓慢控温至30-35℃，保温反应20小时。加入3％的氯化钠溶液100g，60℃水浴中真空减压蒸除有机溶剂，降至室温后加入甲基叔丁基醚(MTBE)50ml，硅藻土15g，充分搅拌后抽滤，10ml MTBE洗涤滤饼，滤液静置后分层，无水硫酸钠干燥有机层，过滤，有机层浓缩至干，得黄色油状物(S,S)-CLA 48.6g，得率97.2％，产物经手性GC检测，ee值为99.8％；非手性GC检测，纯度为98.95％。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.80-6.70(m,3H，Ar),4.03-3.95(m,1H),3.86-3.75(m,1H),3.68-3.47(m,2H),2.70-2.58(m,2H),2.30-2.21(b,1H,-OH),2.13-1.92(m,2H).m/z(EI):230.0509(M+,Calcu forC11H12ClFO2230.0507).
实施例4
将0.1M的磷酸二氢钾溶液缓缓加入到0.1M的磷酸钾溶液中，用PH计监测直到PH＝7.3-7.5，得到PH＝7.3-7.5的PP缓冲溶液。
往反应器中加入50g PP缓冲溶液、50.0g(S)-CLK、1.0g氯化镁、0.025g辅酶NAD、(R)-羰基还原酶30.0g、异丁醇50g，充分搅拌后缓慢控温至28-32℃，保温反应24小时。加入3％的氯化钠溶液50g，60℃水浴中真空减压蒸除有机溶剂，降至室温后加入甲基叔丁基醚(MTBE)50ml，硅藻土15g，充分搅拌后抽滤，10ml MTBE洗涤滤饼，滤液静置后分层，无水硫酸钠干燥有机层，过滤，有机层浓缩至干，得黄色油状物(S,R)-CLA 48.0g，得率96％，产物经手性GC检测，ee值为99.6％；非手性GC检测，纯度为98.88％。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.82-6.70(m,3H，Ar),4.05-3.96(m,1H),3.80-3.72(m,1H),3.65-3.40(m,2H),2.65-2.52(m,2H),2.31-2.18(b,1H,-OH),2.13-1.88(m,2H).m/z(EI):230.0510(M+,CalcuforC11H12ClFO2230.0507).
实施例5
将0.1M的磷酸二氢钠溶液缓缓加入到0.1M的磷酸氢二钠溶液中，用PH计监测直到PH＝7.0-7.5，得到PH＝7.0-7.5的PP缓冲溶液。
往反应器中加入50g PP缓冲溶液、50.0g(R)-CLK、1.0g氯化铁、0.025g辅酶NAD、(R)-羰基还原酶30.0g、异丙醇50g，充分搅拌后缓慢控温至28-32℃，保温反应25小时。加入3％的氯化钠溶液50g，60℃水浴中真空减压蒸除有机溶剂，降至室温后加入二氯甲烷(DCM)50ml，硅藻土15g，充分搅拌后抽滤，10ml DCM洗涤滤饼，滤液静置后分层，无水硫酸钠干燥有机层，过滤，有机层浓缩至干，得黄色油状物(R,R)-CLA 46.8g，得率93.6％，产物经手性GC检测，ee值为99.2％；非手性GC检测，纯度为98.68％。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.82-6.70(m,3H，Ar),4.03-3.95(m,1H),3.85-3.74(m,1H),3.68-3.47(m,2H),2.72-2.60(m,2H),2.30-2.18(b,1H,-OH),2.15-1.92(m,2H).m/z(EI):230.0509(M+,CalcuforC11H12ClFO2230.0507).
实施例6
将0.1M的磷酸二氢钠溶液缓缓加入到0.1M的磷酸钠溶液中，用PH计监测直到PH＝7.0-7.5，得到PH＝7.0-7.5的PP缓冲溶液。
往反应器中加入80g PP缓冲溶液、50.0g(S)-CLK、1.2g氯化铝、0.05g辅酶NAD、(S)-羰基还原酶50.0g、异丙醇60g，充分搅拌后缓慢控温至45-50℃，保温反应3小时。加入3％的氯化钠溶液80g，60℃水浴中真空减压蒸除有机溶剂，降至室温后加入二氯甲烷(DCM)50ml，硅藻土15g，充分搅拌后抽滤，10ml DCM洗涤滤饼，滤液静置后分层，无水硫酸钠干燥有机层，过滤，有机层浓缩至干，得黄色油状物(S,S)-CLA 44.8g，得率89.6％，产物经手性GC检测，ee值为98.4％；非手性GC检测，纯度为98.67％。
实施例7
将0.1M的磷酸二氢钾溶液缓缓加入到0.08M的磷酸氢二钾溶液中，用PH计监测直到PH＝7.3-7.5，得到PH＝7.3-7.5的PP缓冲溶液。
往反应器中加入80g PP缓冲溶液、50.0g(R)-CLK、0.8g氯化镁、0.03g辅酶NAD、(R)-羰基还原酶75.0g、异丁醇80g，充分搅拌后缓慢控温至28-32℃，保温反应18小时。加入3％的氯化钠溶液80g，60℃水浴中真空减压蒸除有机溶剂，降至室温后加入甲基叔丁基醚(MTBE)50ml，硅藻土15g，充分搅拌后抽滤，10ml MTBE洗涤滤饼，滤液静置后分层，无水硫酸钠干燥有机层，过滤，有机层浓缩至干，得黄色油状物(R,R)-CLA 49.5g，得率99％，产物经手性GC检测，ee值为99.8％；非手性GC检测，纯度为98.75％。
实施例8
将0.2M的磷酸二氢钾溶液缓缓加入到0.1M的磷酸氢二钾溶液中，用PH计监测直到PH＝7.3-7.5，得到PH＝7.3-7.5的PP缓冲溶液。
往反应器中加入50g PP缓冲溶液、50.0g(R)-CLK、1.8g氯化镁、0.05g辅酶NAD、(S)-羰基还原酶30.0g、异丙醇80g，充分搅拌后缓慢控温至28-32℃，保温反应24小时。加入3％的氯化钠溶液50g，60℃水浴中真空减压蒸除有机溶剂，降至室温后加入甲基叔丁基醚(MTBE)50ml，硅藻土15g，充分搅拌后抽滤，10ml MTBE洗涤滤饼，滤液静置后分层，无水硫酸钠干燥有机层，过滤，有机层浓缩至干，得黄色油状物(R,S)-CLA 48.7g，得率97.4％，产物经手性GC检测，ee值为99.5％；非手性GC检测，纯度为99.13％。
实施例9
将0.1M的磷酸二氢钾溶液缓缓加入到0.1M的磷酸氢二钾溶液中，用PH计监测直到PH＝7.0-7.5，得到PH＝7.0-7.5的PP缓冲溶液。
往反应器中加入50g PP缓冲溶液、50.0g(S)-CLK、1.0g氯化锌、0.04g辅酶NAD、(R)-羰基还原酶40.0g、异丙醇50g，充分搅拌后缓慢控温至35-40℃，保温反应16小时。加入3％的氯化钠溶液50g，60℃水浴中真空减压蒸除有机溶剂，降至室温后加入甲基叔丁基醚(MTBE)50ml，硅藻土15g，充分搅拌后抽滤，10ml MTBE洗涤滤饼，滤液静置后分层，无水硫酸钠干燥有机层，过滤，有机层浓缩至干，得黄色油状物(S,R)-CLA 45.9g，得率91.8％，产物经手性GC检测，ee值为98.7％；非手性GC检测，纯度为98.72％。
实施例10
将0.1M的磷酸二氢钾溶液缓缓加入到0.1M的磷酸氢二钾溶液中，用PH计监测直到PH＝7.3-7.5，得到PH＝7.3-7.5的PP缓冲溶液。
往反应器中加入50g PP缓冲溶液、50.0g(S)-CLK、1.0g氯化铝、0.04g辅酶NAD、(R)-羰基还原酶50.0g、异丙醇50g，充分搅拌后缓慢控温至40-45℃，保温反应6小时。加入3％的氯化钠溶液50g，60℃水浴中真空减压蒸除有机溶剂，降至室温后加入甲基叔丁基醚(MTBE)50ml，硅藻土15g，充分搅拌后抽滤，10ml MTBE洗涤滤饼，滤液静置后分层，无水硫酸钠干燥有机层，过滤，有机层浓缩至干，得黄色油状物(S,R)-CLA 45.0g，得率90％，产物经手性GC检测，ee值为98.3％；非手性GC检测，纯度为98.75％。
实施例11
将0.1M的磷酸二氢钾溶液缓缓加入到0.1M的磷酸氢二钾溶液中，用PH计监测直到PH＝7.3-7.5，得到PH＝7.3-7.5的PP缓冲溶液。
往反应器中加入50g PP缓冲溶液、50.0g(R)-CLK、1.2g氯化镁、0.02g辅酶NAD、(R)-羰基还原酶35.0g、异丙醇50g，充分搅拌后缓慢控温至28-32℃，保温反应24小时。加入3％的氯化钠溶液50g，60℃水浴中真空减压蒸除有机溶剂，降至室温后加入甲基叔丁基醚(MTBE)50ml，硅藻土15g，充分搅拌后抽滤，10ml MTBE洗涤滤饼，滤液静置后分层，无水硫酸钠干燥有机层，过滤，有机层浓缩至干，得黄色油状物(R,R)-CLA 49.7g，得率99.4％，产物经手性GC检测，ee值为99.8％；非手性GC检测，纯度为99.35％。
实施例12
将0.09M的磷酸二氢钾溶液缓缓加入到0.12M的磷酸氢二钾溶液中，用PH计监测直到PH＝7.3-7.5，得到PH＝7.3-7.5的PP缓冲溶液。
往反应器中加入50g PP缓冲溶液、50.0g(R)-CLK、1.8g氯化镁、0.005g辅酶NAD、(S)-羰基还原酶15.0g、异丙醇150g，充分搅拌后缓慢控温至28-32℃，保温反应40小时。加入3％的氯化钠溶液50g，60℃水浴中真空减压蒸除有机溶剂，降至室温后加入甲基叔丁基醚(MTBE)50ml，硅藻土15g，充分搅拌后抽滤，10ml MTBE洗涤滤饼，滤液静置后分层，无水硫酸钠干燥有机层，过滤，有机层浓缩至干，得黄色油状物(R,S)-CLA 48.2g，得率96.4％，产物经手性GC检测，ee值为99.2％；非手性GC检测，纯度为98.99％。
实施例13
将0.1M的磷酸二氢钾溶液缓缓加入到0.08M的磷酸氢二钾溶液中，用PH计监测直到PH＝7.3-7.5，得到PH＝7.3-7.5的PP缓冲溶液。
往反应器中加入50g PP缓冲溶液、50.0g(R)-CLK、1.8g氯化镁、0.005g辅酶NAD、(S)-羰基还原酶40.0g、异丁醇25g，充分搅拌后缓慢控温至28-32℃，保温反应32小时。加入3％的氯化钠溶液50g，60℃水浴中真空减压蒸除有机溶剂，降至室温后加入甲基叔丁基醚(MTBE)50ml，硅藻土15g，充分搅拌后抽滤，10ml MTBE洗涤滤饼，滤液静置后分层，无水硫酸钠干燥有机层，过滤，有机层浓缩至干，得黄色油状物(R,S)-CLA 46.7g，得率93.4％，产物经手性GC检测，ee值为99.0％；非手性GC检测，纯度为98.85％。

Claims (10)

1.一种式I所示的2-氯-1-(6-氟-3,4-二氢-2H-1-苯并吡喃-2-基)乙醇的酶还原制备方法，包括：
(1)配制PH＝6.5-8.0的磷酸盐缓冲溶液；
(2)于反应容器中加入步骤(1)配制的磷酸盐缓冲溶液、式II所示的R构型或S构型的2-氯-1-(6-氟-3,4-二氢-2H-1-苯并吡喃-2-基)乙酮、路易斯酸、S构型或R构型的羰基还原酶、辅酶I、供氢体，所述的供氢体是异丙醇或异丁醇，在温度20-50℃下反应，反应结束后经后处理分别得相应构型的2-氯-1-(6-氟-3,4-二氢-2H-1-苯并吡喃-2-基)乙醇；其中R构型或S构型的2-氯-1-(6-氟-3,4-二氢-2H-1-苯并吡喃-2-基)乙酮、S构型或R构型的羰基还原酶分别简称为RorS-CLK、RorS-羰基还原酶；
2.如权利要求1所述的酶还原制备方法，其特征在于：步骤(1)中，磷酸盐缓冲溶液的pH值为6.5-7.5，更优选7.0-7.5，最优选7.3-7.5。
3.如权利要求1或2所述的酶还原制备方法，其特征在于：步骤(2)中，磷酸盐缓冲溶液与RorS-CLK的重量比为0.5-5:1，路易斯酸与RorS-CLK的重量比为0.001-0.04:1，RorS-羰基还原酶与RorS-CLK的重量比为0.3-1.5:1，辅酶I与RorS-CLK的重量比0.01-0.1％:1，供氢体与RorS-CLK的重量比0.5-3:1。
4.如权利要求3所述的酶还原制备方法，其特征在于：步骤(2)中，磷酸盐缓冲溶液与RorS-CLK的重量比为0.8-2:1，路易斯酸与RorS-CLK的重量比为0.01-0.04:1，RorS-羰基还原酶与RorS-CLK的重量比为0.5-1.5:1，辅酶I与RorS-CLK的重量比为0.03-0.06％:1，供氢体与RorS-CLK的重量比为0.8-1.6:1。
5.如权利要求3所述的酶还原制备方法，其特征在于：步骤(2)中，反应温度为25-35℃，优选为28-32℃。
6.如权利要求4所述的酶还原制备方法，其特征在于：步骤(2)中，反应温度为25-35℃，优选为28-32℃。
7.如权利要求3所述的酶还原制备方法，其特征在于：步骤(2)中，反应时间为2-40小时，优选为18-30小时。
8.如权利要求4-6之一所述的酶还原制备方法，其特征在于：步骤(2)中，反应时间为2-40小时，优选为18-30小时。
9.如权利要求3所述的酶还原制备方法，其特征在于：步骤(2)中，所述的路易斯酸为氯化镁，所述的供氢体为异丙醇；磷酸盐缓冲溶液与RorS-CLK的重量比为1:1；路易斯酸与RorS-CLK的重量比为0.024:1；RorS-羰基还原酶与RorS-CLK的重量比为0.7:1；辅酶I与RorS-CLK的重量比为0.04％；供氢体与RorS-CLK的重量比为1:1；反应温度为28-32℃，反应时间为18-30小时。
10.如权利要求1所述的酶还原制备方法，其特征在于：步骤(2)的后处理过程如下：加入氯化钠或氯化钾溶液，减压蒸除有机溶剂，降至室温后加入甲基叔丁基醚或二氯甲烷以及适量硅藻土，充分搅拌后过滤，滤饼用甲基叔丁基醚或二氯甲烷淋洗，分层，有机层经干燥、减压浓缩蒸干溶剂得黄色油状物，即为2-氯-1-(6-氟-3,4-二氢-2H-1-苯并吡喃-2-基)乙醇。
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