CN108904563A - 一种全株人参原浆加工方法及用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种全株人参原浆的加工方法及用途。该方法以全株鲜人参或其干品为原料，配伍山药，通过超声清洗、切段(鲜)、粉碎(干)、加热、打浆、均质、浓缩等步骤制成全株人参原浆和浓缩浆。与利用酶解、发酵等其他人参液体制品制备方法相比，本发明完整地保留了人参的原有风味、营养物质及功效成分，并且加热打浆和均质过程产生了活性较强的稀有人参皂苷Rg3、Rh1、Rh2等，它们的含量分别增加2‑20倍。本发明组合加工方法先进，制浆快速简捷，服用方便，稀有活性皂苷含量高，起效快，吸收好。制备的全株人参原浆制品具有较强的抗疲劳，抗衰老，增强免疫和抗肿瘤等生物活性，可开发成药品、健康及保健食品应用。
Description
技术领域：
本发明属于医药技术领域，涉及一种全株人参原浆加工方法及用途。
背景技术：
人参属植物为五加科多年生宿性根双子叶草本植物，人参属植物起源于第三纪古热带，主要有五种，现有人参，三七，假人参，竹节参，珠子参，西洋参等多种。2012年8月29日卫生部17号文件将人参(人工种植)纳入新食品原料，2014年新增15种中药材中将人参作为药食同源品进行开发。人参属植物中的林下山参又称野山参，不用田间管理，没有农药残留，且含有丰富的人参皂苷等多种活性成分。人参性甘、微苦，微温，归脾、肺、心、肾经，具有大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津养血、安神益智的功效。现代科学证明，人参中含有丰富的人参皂苷等多种活性和营养物质，具有滋补强壮、补气、安神、生津、止渴、明目、益智之功效；可以提高工作效率，减少疲劳，提高免疫力，又具有抗癌，延缓衰老等作用。
山药为药食同源品，具有补脾养胃、生津益肺、补肾涩精等功效。人参味甘、微寒、性温，单纯以人参为原料制作人参制品，容易产生上火等症状。人参配伍山药，相辅相成，可平衡人参的燥性，具有除燥滋阴、益气生津、健脾和胃、抗疲劳、抗衰老和提高免疫力等功效。山药肉质细嫩、含有黏液多糖等丰富的营养物质，与人参一起进行打浆、加热、均质，有利于成浆和浆体的稳定性。
鲜人参和林下山参(野山参)表面、支根间都带有大量泥土，甚至病原生物及虫卵等，在传统清洗过程中不仅用水量大，洗涤时间长，人参参体表皮所含活性成分容易流失，而且劳动强度高。超声波清洗因其不受清洗件表面复杂形状的限制，具有清洗时间快、效果好和无污染等特点。该技术在清洗过程中会产生空化和机械等效应，可在人参参体周围产生上千个大气压力，对表皮附土直接反复冲击，破坏污物与参体表面的吸附，还可“钻入”参体与参须“缝隙”中震动，使尘土脱落。在清洗人参及类似的根茎类药材方面具有时间短、耗水少、有效物质流失少等特点。
加热、打浆和均质的目的是破碎人参参体成为微小颗粒，加速并提高营养和有效物质的溶出以及这些成分分散的均匀性，以提高全株原浆的质量和稳定性。特点如下：
(1)可将人参参体破碎，使人参浆液成为微米级原浆(20-100μm)。
(2)可使人参制品成为均相、稳定的原浆。
(3)加热打浆可破碎参体细胞，有利于营养和活性物质的快速释出，特别是促进人参稀有皂苷转化和含量的增加。
(4)人参原浆制法科学，原理清晰，技术组合先进，制浆快速简捷，服用方便，起效快、吸收好。
现有专利报道中未见有全株人参原浆和浓缩浆的专利报道。专利CN 931020026中公开的方法是将人参搅碎后压榨制得的浆液，非全株原浆制品，留下的参体残渣中含有营养和有效成分；专利CN 105147588A公开的方法是将人参干粉、水和两歧双歧杆菌混合、发酵后得到的是人参生物发酵液；专利CN 103446208A公开的方法获得的是纤维素部分水解的人参液；专利CN 103446209A公开的方法是用α-淀粉酶酶解后制得人参浆。以上公开报道的制备方法都无法实现全株人参营养和功效成分的充分利用以及完整保留人参特有的原始风味，而涉及全株人参原浆的制备方法尚未见研究报道。
现有技术中并没有将超声振荡清洗、加热打浆和均质技术组合用于全株人参制品的加工。
目前已从人参中分离出100多种人参皂苷单体成分。而人参中含有的低含量稀有人参皂苷又是人参皂苷中的重要活性成分，主要包括Rg3、Rh1、Rh2等。现代研究证明，稀有人参皂苷具有较强的抗肿瘤作用，其中以人参皂苷Rg3的抗肿瘤作用最显著，临床广泛应用于各种肿瘤的治疗。人参稀有皂苷还可改善自然衰老以及预防老年痴呆、增强机体免疫和记忆力等药理活性。因此，首次在全株人参加热制浆过程中实现人参稀有活性皂苷的快速转化和倍量的增加，不但为人参创新研制出新颖的原浆制品，也为该产品的疗效和保健作用提供了稀有活性皂苷的物质基础，大大提升了人参的使用价值和市场竞争力。
国内外转化稀有人参皂苷的方法多为化学法、酶解法和微生物法。化学方法反应条件剧烈，要求高，副产物多，残留有对人体有害的溶剂；酶解法转化稀有皂苷反应条件不易控制，成本高；微生物法转化发酵过程中，有的皂苷对液体培养基中的菌株有抑制效应，且发酵过程中进行了多次分批发酵，大大增加了制作成本。近年研究发现，鲜人参加工炮制成红参过程中，人参皂苷Rg3等稀有活性皂苷就会产生，所以，人参皂苷Rg3不是鲜人参天然存在的，而是在加工红参过程中加热“蒸出来”的。而红参炮制要经过鲜参浸润、清洗、分选、蒸制、晾晒、高温烘干、打潮、下须、低温烘干等过程，加工时间长，操作过程繁杂，制作成本较高。本发明在制作过程中，经加热打浆和均质后不但可使稀有人参皂苷快速发生转化，稀有人参皂苷Rg3、Rh2、Rh1等含量增加了2-20倍，且具有加工方法先进、快速便捷、成本低等特点。
发明内容：
本发明的目的是提供一种以人参为原料，配伍山药，利用先进、简捷的方法制作所述全株人参原浆或浓缩浆的方法。
本发明所提出的人参原浆制品包括全株鲜人参和林下山参(野山参)及它们的干燥品制成的原浆或浓缩浆，该人参原浆制品是由人参配伍山药组成，其重量比为3:1-10:1。
本发明所提出的全株人参原浆制品包括人参原浆或浓缩浆。人参属植物中含有大量的活性成分，用其制作的浆体中含有1％-20％的人参皂苷，适合用于直接食用，能够提高机体免疫能力，具有抗肿瘤、抗疲劳、抗衰老等功效。
所述全株人参原浆的密度在每毫升0.3-0.7g之间；全株人参浓缩浆的密度在每毫升1.05-2.05g之间。
制作上述全株人参原浆的方法，包括以下步骤：
将全株的鲜人参用超声频率为35-75KHz的超声清洗后和山药切段，或人参干品粉碎后与山药段，放入高速打浆机中加热打浆。人参和山药的重量比为3:1-10:1；加水量：1-5倍；打浆功率：800-1100W，转速为30000-35000r/min；打浆加热时间为2-15min；温度为：80-100℃；均质乳化：转速为2800-3200r/min，时间为5-15min，即得原浆；将原浆减压浓缩，即为浓缩浆。
具体地，包括以下步骤：
(1)超声清洗：去除参体表面附土污物；
(2)加热打浆：将全株人参和山药样品切段或粉碎，放入高速打浆机中，加入一定比例的水，加热打浆；
(3)均质：将上述浆液用胶体磨进行均质或高压均质，乳化后即为全株人参原浆；
(4)浓缩：将均质好的原浆减压浓缩后即为全株人参浓缩浆；
(5)装瓶、灭菌：将制成的全株人参原浆制品装瓶，进行灭菌、分装；
(6)检测：对全株人参进行原有人参皂苷Rg1、Re、Rb1和加热制浆转化后产生的稀有人参皂苷Rg3、Rh1、Rh2进行HPLC法同步测定。
其中，步骤(1)中的超声清洗中，超声频率为35-75KHz，超声时间为10-30min，其功率密度在0.5～2.0W/cm2范围内；
步骤(2)中的加热打浆中，人参、山药的重量比为3:1-10:1；加入水的比例为人参和山药重量的1-5倍量；打浆功率800-1100W，优选为：950W；转速为30000-35000r/min，优选为：32000r/min；打浆加热时间为2-15min，优选为：10min；加热温度为80-100℃。
步骤(3)中的均质步骤中，转速为2800-3200r/min，优选为：2800r/min，均质时间为5-15min，优选为：12min。
步骤(3)和(4)中，人参原浆含水量为30％-40％；浓缩浆含水量为10％-12％。
步骤(3)和(4)中，人参原浆(浓缩浆)经加热制浆和均质后可转化产生活性更强的稀有人参皂苷Rg3、Rh1、Rh2。制浆前后样品中稀有活性皂苷Rg3、Rh1、Rh2的含量分别增加了2-20倍。原浆制品中的含量分别为：Rg3为0.010-0.200mg/g，Rh1为0.050-0.200mg/g，Rh2为0.030-0.300mg/g；浓缩浆中的含量分别为：Rg3为0.080-0.180mg/g，Rh1为0.100-0.300mg/g，Rh2为0.120-0.290mg/g。
本发明所提出的原浆和浓缩浆制品是以全株鲜人参和林下山参(野山参)及其干燥品为原料，配伍山药，通过超声清洗、切段粉碎、加热打浆、均质乳化、浓缩等步骤制成人参原浆和其浓缩浆。该制品不但完整地保留了人参特有的风味，充分利用了全株人参的营养和功效成分，而且通过制浆过程转化产生了活性更强、含量提高2-20倍的稀有皂苷Rg3、Rh1、Rh2，为该制品能够更好地发挥增强免疫、抗疲劳、抗衰老和抗肿瘤等作用提供了物质基础和科学依据。
本发明首次对人参(林下山参)原浆制品按《中国药典》规定检测指标——人参皂苷Re、Rg1、Rb1与3种稀有人参皂苷Rg3、Rh1、Rh2进行了同步HPLC检测。结果显示，人参(林下山参)原浆中原有皂苷含量Re为0.20-0.520mg/g，Rg1为0.180-0.380mg/g，Rb1为0.380-0.680mg/g；经加热、打浆和均质后转化产生的稀有皂苷含量Rg3为0.010-0.200mg/g，Rh1为0.050-0.200mg/g，Rh2为0.030-0.300mg/g；人参(林下山参)浓缩浆中原有皂苷含量Re为0.080-0.180mg/g，Rg1为0.120-0.320mg/g，Rb1为0.080-0.280mg/g，稀有皂苷含量Rg3为0.080-0.180mg/g，Rh1为0.100-0.300mg/g，Rh2为0.120-0.290mg/g。
研究表明，人参被摄入人体之后，原有的人参皂苷基本不能通过胃肠道直接吸收，而是经过肠内菌代谢成稀有皂苷而吸收。加热会使人参皂苷的种类和含量发生变化，在加热过程中人参皂苷转化为稀有皂苷的主要规律为Rb1→Rd→Rg3→Rh2→PPD、Re→Rg1→Rh1→PPT。本发明的人参原浆和浓缩浆为全株鲜人参或其干品经粉碎、加热、打浆、均质、浓缩而成，此制品通过制浆过程的加热转化，提高了稀有人参皂苷含量2-20倍，增强了人体对这些稀有活性物质的吸收度和保健效果。
本发明具有如下优点：
1、组合加工方法先进，产品形式(态)新颖，营养功效成分全面、均衡。加热打浆和均质技术组合应用，可使全株人参粉碎、加热打浆和均质乳化后，营养和有效物质快速释出，稀有皂苷快速转化，且倍量增加，具有吸收好、起效快、作用强等特点。
2、本发明采用超声技术进行清洗，能快速清除鲜参体表附土和污物，使有效成分流失减少。
3、本发明对制作的人参原浆进行浓缩，有效富集了鲜参的活性成分，减少了服用量。
4、本发明将山药与人参配伍使用，可平衡人参的燥性，具有除燥滋阴、益气生津、健脾和胃、抗疲劳、抗衰老和提高免疫力等功效。山药肉质细嫩、含有黏液多糖等丰富的营养物质，与人参一起打浆、加热、均质，有利于浆体的稳定性。
5、本发明首次对全株人参制品以《中国药典》规定了人参药材的质控检测指标——人参皂苷Rg1、Re、Rb1和人参加热转化后产生的稀有人参皂苷Rg3、Rh1、Rh2进行HPLC法同步测定，发现了稀有皂苷Rg3、Rh2、Rh1等在此技术应用过程中转化的规律和含量变化，保证了产品的有效性和质量的可控性。
附图说明
图1为对照品(A)、林下山参药材(B)和鲜林下山参原浆(C)HPLC图
1-6分别为：人参皂苷Rg1，Re，Rb1，Rh1，Rg3，Rh2。
具体实施方式：
实施例1：全株人参原浆的制备
取350g鲜人参进行超声振荡清洗鲜参18min，超声频率为40KHz，其功率密度在1.0W/cm2范围内；取70g山药，将清洗干净的人参与山药切段，放入高速打浆机中，加入3倍水，加热打浆，打浆功率为850W，转速为26000r/min，加热打浆时间为6min。接着均质乳化，转速为2800r/min，均质时间为8min。浆体粒径为20-80μm；稀有皂苷的含量分别为：Rg3为0.022mg/g，Rh2为0.033mg/g，Rh1为0.065mg/g。
将加工后的原浆制品装瓶，常规灭菌2min，得到全株鲜人参原浆。
实施例2：全株人参原浆的制备
取350g鲜人参进行超声振荡清洗鲜参20min，超声频率为45KHz，其功率密度在1.2W/cm2范围内；取70g山药，将清洗干净的人参与山药切段，放入高速打浆机中，加入4倍水，加热打浆，打浆功率为1000W，转速为30000r/min，加热打浆时间为10min。接着均质乳化，转速为3000r/min，均质时间为12min。浆体粒径为15-60μm；稀有皂苷的含量分别为：Rg3为0.032mg/g，Rh2为0.081mg/g，Rh1为0.115mg/g。
将加工后的原浆制品装瓶，常规灭菌2min，得到全株鲜人参原浆。
实施例1和2制备结果对比显示，改变制浆参数，即随着打浆功率、转数的增大和打浆、均质时间的延长，稀有皂苷的含量增加。
实施例3：全株干参原浆的制备
取100g干燥人参，粉碎成细粉(50-100目)；取10g山药切段，将粉碎后的干参粉与山药段放入高速打浆机中，加入1.5倍水，加热打浆，打浆功率为850W，转速为26000r/min，加热打浆时间为6min。接着均质乳化，转速为2800r/min，均质时间为8min。浆体粒径为15-60μm；稀有皂苷的含量分别为：Rg3为0.027mg/g，Rh2为0.041mg/g，Rh1为0.072mg/g。
将加工后的原浆制品装瓶，常规灭菌2min，得到全株生晒人参原浆。
实施例4：全株人参浓缩浆的制备
取350g鲜人参进行超声振荡清洗鲜参20min，超声频率为45KHz，其功率密度在1.2W/cm2范围内；取1.5g山药，将清洗干净的鲜参与山药切段，放入高速打浆机中，加入5倍水，加热打浆，打浆功率为900W，转速为30000r/min，加热打浆时间为10min。再放入胶体磨中，转速为2800r/min，均质乳化时间为15min，浆体粒径为20-50μm。将打好浆的人参浆进行密闭气锅减压浓缩，减压浓缩温度为60℃，时间为55min，测定的该浓缩浆的含水量为12％，稀有皂苷含量Rg3为0.125mg/g，Rh2为0.248mg/g，Rh1为0.212mg/g。
将加工后的浓缩浆制品装瓶，常规灭菌2min，得到全株人参浓缩浆。
实施例5：全株林下山参(野山参)原浆的制备
取100g鲜林下山参进行超声振荡清洗10min，超声频率为50KHz，其功率密度在1.2W/cm2范围内；取10g山药，将清洗干净的鲜林下山参与山药切段，放入高速打浆机中，加入3倍水，加热打浆，打浆功率为1000W，30000r/min，加热打浆时间为12min。再放入胶体磨中，转速为3000r/min，均质乳化时间为15min，浆体粒径为20-40μm。稀有皂苷含量Rg3为0.122mg/g，Rh2为0.214mg/g，Rh1为0.098mg/g。
将加工后的林下山参原浆制品装瓶，常规灭菌2min，得到全株林下山参原浆。
实施例6–11中，使用的全株人参原浆均为实施例2中的人参原浆，使用的全株人参浓缩浆均为实施例4中的人参浓缩浆。
实施例6：全株人参原浆和浓缩浆中6种人参皂苷(3种稀有皂苷)的HPLC检测
①取全株人参原浆和浓缩浆各1g于具塞三角瓶中，分别精密加入10mL甲醇溶液，称重，浸泡60min后，超声提取20min，放冷称重，加甲醇补足重量，离心取上清液，备用。
②配制人参皂苷Re、Rg1、Rb1、Rg3、Rh1、Rh2的标准品溶液，浓度分别为0.01，0.05，0.10，0.20，0.50mg/mL。试样进行HPLC分析，色谱柱为Agela Innoval ODS-2色谱柱，4.6×250mm，5μm；柱温25℃；进样量20μl；流动相：乙腈(A)-水(B)梯度洗脱，0-10min，18％-27％A；10-30min，27％-33％A；30-40min，33-52％A；40-70min，68％A；检测波长：203nm，用峰面积对浓度做各皂苷的标准回归曲线。
③将标准溶液和处理好的样品按相同色谱条件进行检测，用人参皂苷Re、Rg1、Rb1、Rg3、Rh1、Rh2的保留时间对样品色谱峰进行定性。
④采用外标法对样品峰定量。测定并计算样品中人参皂苷Re、Rg1、Rb1、Rg3、Rh1、Rh2的含量，结果见下表。
表1全株人参制浆前后样品中6种皂苷HPLC检测结果(n＝3)
将人参制浆前和加热打浆、均质后原浆及浓缩浆检测结果进行对比分析后发现，原浆和浓缩浆中各皂苷含量均发生改变，即原浆和浓缩浆中稀有皂苷Rg3、Rh1、Rh2的含量均高于制浆前样品。原浆和浓缩浆在加热制浆过程中，原有含量较高人参皂苷Re、Rg1、Rb1发生了次级转化，产生了含量增加了2-4倍的稀有皂苷Rg3、Rh1、Rh2。
人参皂苷Rg3是红参特有的成分，在鲜人参中几乎检测不到。稀有人参皂苷Rg3、Rh2、Rh1是由人参皂苷Re、Rg1、Rb1等降解转化而来，是人参许多生物学活性的重要物质基础。本研究在人参原浆和浓缩浆中分别检测到了人参皂苷Rg3等稀有人参皂苷，它们可作为全株人参原浆和浓缩浆制品质量评价和控制的标志性成分。
实施例7：全株林下山参(野山参)原浆中6种人参皂苷HPLC检测
林下山参，又叫野山参，指人工播种在山林、野生状态下自然生长的人参，主产地为辽东地区，是一味名贵的中药材。目前已发现林下山参含有人参皂苷Re、Rg1、Rg2、Rf、Rh1、Rh2、Rb2、Rc、Rd、Ro，其中人参皂苷Re、Rg1和Rb1等在林下山参中含量较高，而人参皂苷Rg3、Rh1、Rh2等为转化产生的稀有皂苷。
本实施例选用辽宁桓仁产鲜林下山参进行原浆制备工艺的研究，首次对林下山参制浆前后人参皂苷Re，Rg1，Rb1和3个稀有活性皂苷Rg3，Rh1，Rh2的含量进行检测，对比林下山参在制浆过程中稀有人参皂苷产生和6种人参皂苷的含量变化，为林下山参浆的质量控制提供可行的检测方法，也为林下山参制品的保健作用和应用价值提供科学依据。
仪器与试剂JYL-Y915匀质打浆机(中国九阳电器有限公司)；KQ-300B超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；BSA124S电子天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司，万分之一)；UV Detecter L-2400、Autosampler L-2200、Pump L-2130高效液相色谱仪(株式会社日立制作所)。
色谱条件Innoval ODS-2色谱柱(4.6×250mm，5μm)；流动相：乙腈(A)-水(B)，线性梯度洗脱0-10min，18-27％A；10-30min，27-33％A；30-40min，33-52％A；40-70min，52-68％A；体积流量1.0mL·min-1；柱温30℃；检测波长203nm；进样量20μL。在该色谱条件下，各成分色谱峰与相邻峰的分离度良好，分离度均大于1.5，色谱图如图1。
对照品溶液的制备精密称取人参皂苷单体对照品Re，Rg1，Rb1，Rg3，Rh1，Rh2各1.0mg，置于10mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇晃均匀，制备成浓度为100.0mg·L-1的混合对照品溶液，用0.45μm有机微孔滤膜滤过，备用。
林下山参浆的制作将鲜参样品超声清洗10min，去除参体表面附着的泥土后取出，置于阴凉通风处晾干；精密称取50g林下山参置于打浆机中，加入100mL饮用水加热打浆5min，得到每3g浆体中含1g鲜林下山参的浆液，备用。
样品溶液的制备精密称取1.0g鲜林下山参及3.0g林下山参浆液，分别精密加入10倍量浓度为70％的乙醇溶液，超声处理30min，冷却至室温后离心取上清液，残渣如上述方法处理一次，合并上清液，减压浓缩至干。提取物加色谱甲醇溶解定容至5mL，摇匀。溶液经0.45μm有机微孔滤膜滤过，即得供试样品溶液。
样品测定准确称取鲜林下山参1.0g及鲜林下山参浆液样品3.0g，按前法制备供试品溶液和HPLC测定，采用外标法计算样品中人参皂苷Re，Rg1，Rb1，Rg3，Rh1，Rh2的含量，测定结果见表2。
表2林下山参制浆前后样品中6种人参皂苷的测定结果(n＝3)
人参皂苷Rg3，Rh1，Rh2为具有显著多种生物活性的稀有人参皂苷，它们可在一定条件下(加热、酸碱、微生物和酶水解)由人参皂苷Re、Rg1、Rb1转化而来。在红参加工过程中，由于持续的高温加热蒸制，原有人参皂苷Re、Rg1、Rb1等发生水解转化反应，使稀有皂苷Rg3、Rh2、Rh1的含量增加。
本实施例将鲜林下山参经加热打浆、均质乳化后制成林下山参原浆。结果表明，林下山参制浆后人参皂苷Re、Rg1、Rb1含量减少，而稀有活性皂苷Rg3、Rh1、Rh2的含量分别增加了8.7倍、9.3倍和3.2倍。因此，鲜林下山参制浆后不但去除了燥性，同时由于稀有皂苷含量的倍增，提高了该产品的疗效和保健作用，从而体现出珍贵药材的应有价值，也为全株鲜林下山参及其制品的质量控制提供简便、可行的质控方法。
实施例8：全株人参浓缩浆抗衰老实验
将实施例制得的人参浓缩浆进行实验，通过同步化操作准备大量L1期野生型秀丽线虫N2，加入S Medium调整虫密度至10～20条/10μL，再加入大肠杆菌OP50使OD570≈0.4，在20℃下培养42～45h后，线虫即进入L4期。取适量虫液，加入S Medium稀释虫密度至10～20条/100μL，同时补充OP50使OD570≈0.6，再依次加入100μg/mL 5-FUDR溶液、50μg/mL羧苄青霉素溶液和0.1μg/mL两性霉素溶液，将调整好的虫液在20℃下继续培养2d至成虫初期。将虫液按照90μL/孔加入96孔板中，分别加入10μL人参浓缩浆和人参+山药浓缩浆，终浓度均为2mg/mL。对照组加入10μL S Medium。试验组和对照组均各设10个平行孔。然后用parafilm封盖，在酶标仪上振荡30sec使组合物和虫液混合均匀。将准备好的96孔板置于20℃下培养，以开始给试验样品为第0d，每隔2d统计每孔中秀丽线虫的存活状况，直至其全部死亡。统计过程中将身体僵直不动并对轻微震动无反应的秀丽线虫判断为死亡状态。秀丽线虫存活率用Kaplan-Meier法进行分析，并以log-rank test比较组合物和单一组分与对照组的差异性。实验结果表明，在正常条件下，野生型秀丽线虫N2的平均寿命为25d。当给予2mg/mL试验样品后，人参+山药浓缩浆(28.1d)和人参浓缩浆(27.5d)能够显著延长秀丽线虫的寿命(P≤0.05)。
实施例9：全株人参原浆抗疲劳实验
实验动物为昆明小鼠，体重为18-22g。按人体推荐量10g人参鲜品/天计算全株鲜人参原浆，选择人体推荐量的10倍剂量进行给试验样品。实验动物给鲜人参浓缩浆，按照动物灌胃给药剂量0.2mL/10g，配成人参原浆样品浓度为0.0415g/mL、0.083g/m和0.166g/mL，分别相当于人体推荐用量的20、10和5倍，设对照组(蒸馏水)，阳性对照选用制浆前人参样品，给试验样品剂量0.2mL/10g。每组10只动物，按上述剂量每天经口给试验样品一次，溶剂对照组给等容量蒸馏水，连续30天。动物每天称量体重，连续15天，计算小鼠体重增长值及体重增长率。第30天给受试物后30min，做小鼠负重(5％体重铅箔)游泳试验，水温25℃，记录各组小鼠力竭游泳时间，计算各组平均游泳时间，结果与对照组比较分析。第30天给试验样品后30min，做小鼠不负重游泳10min，于游泳前、后立即及游泳后休息20min，分三次进行内眦采血，按试剂盒要求测定血乳酸含量。以三个时间点血乳酸曲线下面积为指标与对照组比较进行方差分析。同时进行肝糖原测定：末次给药30min后处死小鼠，取肝脏，按试剂盒要求计算肝糖原含量，结果见下表。
表3小鼠负重游泳实验结果
(*代表与空白对照组相比，P<0.05；**代表与空白对照组相比P<0.01)
表4对小鼠血乳酸含量的影响
(*代表与空白对照组相比，P<0.05；**代表与空白对照组相比P<0.01)
表5对小鼠肝糖原含量的影响
(*代表与空白对照组相比，P<0.05；**代表与空白对照组相比P<0.01)
缓解体力疲劳功能动物试验结果表明：小鼠生长状态良好，体重稳定正常增加；中、高剂量组小鼠负重游泳时间与对照组比较显著延长，且血乳酸和肝糖原含量结果表明：高剂量鲜人参原浆(0.166g/mL)的抗疲劳效果优于制浆前鲜人参样品。
实施例10：全株人参浓缩浆增强免疫实验
依照《保健食品检验与评价技术规范》增强免疫力功能检验方法，将制得的人参浓缩浆按0.050、0.500、1.500g/kg·BW 3个剂量灌胃给予实验小鼠，同时设对照组(蒸馏水)，按照动物灌胃给试验样品剂量0.2mL/10g，每天灌胃1次，空白对照给予等量蒸馏水，阳性对照给予制浆前样品0.500g/kg·BW，连续灌胃30d。迟发型变态反应：绵羊红细胞进行腹腔免疫，0.25mL/只小鼠。免疫后4d，测量足跖部厚度，测量部位皮下注射20％绵羊红细胞，25μL/只小鼠，24h后测量左后足跖部厚度3次，取平均值。小鼠碳廓清实验：小鼠尾静脉注射印度墨汁，注入墨汁后2、10min，分别取血25μL加到1mL 0.2％Na2CO3溶液中，测定OD 600nm，计算吞噬指数。刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠淋巴细胞转化实验：制单细胞悬液，细胞浓度至4×106个/mL。加入24孔培养板，每孔1.25mL，每孔加70μL ConA液，培养72h。68h后，MTT法测定OD 570nm。抗体生成细胞检测：腹腔注射3％绵羊红细胞，0.25mL/只。免疫4d后取脾，制成细胞悬液，将脾细胞悬液加入RPMI1640培养液中，浓度调至4×106个/mL。制备琼脂糖玻片，温育2h，加入补体，温育1.5h，计数溶血空斑数。
结果如下表：
表6小鼠迟发型变态反应、单核-巨噬细胞碳廓清能力实验结果
表7小鼠淋巴细胞转化、抗体生成实验结果
经口灌胃给予小鼠鲜人参浓缩浆30d，小鼠迟发型变态反应中、高剂量组与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)，能增强细胞免疫功能；高剂量效果优于制浆前鲜人参样品。在小鼠单核-巨噬细胞的碳廓清能力试验中，中(0.500g/kg·BW)、高剂量(1.500g/kg·BW)组与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)，能增强单核-巨噬细胞功能；在抗体生成数、ConA诱导的淋巴细胞转化能力试验中，各剂量组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。以上实验结果表明，鲜人参浓缩浆具有增强免疫力功能。
实施例11：全株人参原浆抗肿瘤实验
实验动物为C57BL/6小鼠，5-6周龄，体重为18-22g，雌雄各半。构建H22肝癌，Lewis肺癌，B16黑色素瘤荷瘤的C57BL/6小鼠。全株人参原浆0.250、0.500、1.000g/kg·BW 3个剂量灌胃给予实验小鼠，同时设对照组(蒸馏水)，按照动物灌胃给药剂量0.2mL/10g，每天灌胃1次，空白对照给予等量蒸馏水，阳性对照给予制浆前样品0.500g/kg·BW，连续灌胃30d。每天称量动物体重，以观察药物的安全性；每隔两天测量肿瘤长径(a)和短径(b)，以动态的观察肿瘤的变化，肿瘤体积公式：V＝ab2/2。给药结束后处死裸鼠，摘取肿瘤称重并拍照。采用相对肿瘤增殖率T/C(％)作为试验评价指标。原则上评价标准为：T/C(％)>40％为无效；T/C(％)≤40％，并经统计学处理P<0.05为有效。相对肿瘤增殖率T/C(％)：针对DU145和Bcap-37癌症异体移植瘤模型的抗肿瘤活性评价指标。计算公式如下：T/C％＝TRTV/CRTV×100％。(TRTV：治疗组RTV；CRTV：阴性对照组RTV)。根据测量的结果计算出相对肿瘤体积(relative tumor volume，RTV)，计算公式为：RTV＝Vt/V0。其中V0为分笼给药时(即d0)测量所得肿瘤体积，Vt为每一次测量时的肿瘤体积。瘤重抑制率％＝(Wmodel-W给药)/Wmodel×100％，Wmodel：给药结束后模型组的瘤重，W给药：给药结束后治疗组的瘤重。
表8对H22肝癌荷瘤小鼠的肿瘤抑制作用(n＝10，*P<0.05，**P<0.01)
表9对Lewis肺癌荷瘤小鼠的肿瘤抑制作用(n＝10,*P<0.05，**P<0.01)
表10对黑色素瘤B16荷瘤小鼠的肿瘤抑制作用(n＝10,*P<0.05，**P<0.01)
经口灌胃给予H22肝癌，Lewis肺癌及黑色素瘤B16荷瘤小鼠人参原浆30d，0.500、1.000g/kg这两个剂量与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05，P<0.01)，能有效的抑制癌细胞的增殖；三个剂量组的效果都优于制浆前人参样品。以上实验结果表明，全株人参原浆具有较强抑制癌细胞增殖的作用。
Claims (10)
1.一种全株人参原浆制品，其特征在于：包含人参原浆和浓缩浆，所述的原浆或浓缩浆是以全株鲜人参或其干品为原料，配伍山药，以重量比为3:1-10:1制备而成。
2.根据权利要求1所述的一种人参原浆制品，其特征在于：所述的人参为全株鲜人参和全株鲜林下山参(野山参)及它们的干燥品。
3.根据权利要求1所述的一种人参原浆制品，其特征在于：所述全株人参原浆的密度在每毫升0.3-0.7g之间；含水量为30％-40％；所述人参浓缩浆的密度在每毫升1.05-2.05g之间；含水量为10％-12％。
4.根据权利要求1、2或3所述的一种人参原浆制品的加工方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)超声清洗：将鲜参用超声振荡法清洗；
(2)加热打浆：将鲜参和山药样品切段，或人参干品粉碎后与山药段，放入高速打浆机中，加入一定比例的水，加热打浆；
(3)均质：将上述浆液用胶体磨进行均质，乳化后即为人参原浆；
(4)浓缩：将均质好的原浆，减压浓缩，即为人参浓缩浆；
(5)装瓶、灭菌：将制成的全株人参原浆制品装瓶，进行灭菌、分装；
(6)检测：对全株人参进行原有人参皂苷Rg1、Re、Rb1和加热制浆转化后产生的稀有人参皂苷Rg3、Rh1、Rh2进行HPLC法同步测定。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：
步骤(1)中的超声振荡清洗中，超声频率为35-75KHz，超声时间为10-30min，其功率密度在0.5-2.0W/cm2范围内。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：
步骤(2)中的加热打浆中，人参和山药的重量比为3:1-10:1；加入水的比例为人参和山药重量的1-5倍量；打浆功率为800-1100W，转速为30000-35000r/min；打浆加热时间为2-15min；温度为：80-100℃。
7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：
步骤(3)中的均质步骤中，胶体磨转速为2800-3200r/min，均质时间为5-15min。
8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：
步骤(3)和(4)中，人参原浆含水量为30％-40％；浓缩浆含水量为10％-12％。
9.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：
步骤(3)和(4)中，人参原浆或浓缩浆经加热制浆和均质后可转化产生活性更强的稀有人参皂苷Rg3、Rh1、Rh2，原浆制品中的含量分别为：Rg3为0.010-0.200mg/g，Rh1为0.050-0.200mg/g，Rh2为0.030-0.300mg/g；浓缩浆中的含量分别为：Rg3为0.080-0.180mg/g，Rh1为0.100-0.300mg/g，Rh2为0.120-0.290mg/g。
10.权利要求1-3任何一项所述的人参原浆制品在制备抗疲劳，抗衰老，增强免疫及抗肿瘤药物、保健或健康食品中的应用。
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