CN108888775A - 一种透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束及其制备方法 - Google Patents

一种透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开的一种透明质酸‑甲氨蝶呤自组装纳米胶束及其制备方法，属于纳米药物制剂技术领域，将透明质酸与甲氨蝶呤通过含有二硫键的胱胺链接，再经透析法制备得到透明质酸‑甲氨蝶呤自组装纳米胶束。本发明通过利用带有二硫键的胱胺作为链接因子，将MTX与透明质酸相连，形成自组装胶束，一方面利用了透明质酸可以与肿瘤细胞特异性结合，使聚合物胶束具有靶向性，能够使药物有目标性的载入病灶部位，另一方面利用二硫键的谷胱甘肽响应性，实现药物的控制释放。

Description

一种透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束及其制备方法
技术领域
本发明属于纳米药物制剂技术领域，具体涉及一种透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束及其制备方法。
背景技术
肿瘤为不按照人正常细胞的新陈代谢规律生长，不受约束和控制的异常的细胞集团。在临床上，科学家们一直与肿瘤做抗争，但肿瘤治愈率仍未表现出显著提高趋势。陈万青带领其团队对全国肿瘤登记中心数据进行整理分析，报告显示：2015年中国恶性肿瘤发病人数为429.2万，死亡281.4万。在城市中，每10万人中有191.5人发病，每10万人中有109.5人死亡；而在农村中，这两项数据明显高于城市，每10万人中有213.6人发病，每10万人中有149.0人死亡。通过近十年来数据显示，随着我国日益转变的疾病模式和日趋明显的人口老龄化，我国肿瘤疾病负担渐渐增加，发病率呈明显上升趋势，死亡率也有所提高。
化学治疗是除手术外治疗癌症的最重要手段，主要存在两大问题：一是药物的毒副作用大，使接受化疗的癌症病人白细胞、红细胞及血小板数量的减少，病人出现恶心、呕吐以及脱发等副作用，甚至危及生命。二是肿瘤(癌细胞)的耐药性，尽管大多数癌症病人在化疗初期对药物有所反应，但最终肿瘤的耐药性机制往往导致了化疗的失败、病人死亡。传统纳米药物传递系统也存在载体制备复杂、载药率低、药物释放可控性差、易产生耐药性等不足，尤其是大多研究局限在以单一纳米给药形式实现复杂肿瘤治疗的目标上，一旦肿瘤组织中少量细胞对所使用的化疗药物产生耐药性，便易造成肿瘤复发。因此，如何利用药物输送手段提高治疗的肿瘤靶向性，并克服肿瘤细胞的耐药性一直是肿瘤治疗研究者面临的挑战。
胶束具有主动肿瘤靶向能力，因此利用胶束输送药物可明显增加药物的生物利用度，显著增加药物的抗癌能力和减少其毒副作用。聚合物胶束是近20年来快速发展起来的一种新型纳米载体，是由两亲性的聚合物在水中达到临界胶束浓度后自组装形成的具有疏水性内核和亲水性外壳的核-壳结构。聚合物胶束载药范围广、结构稳定、具有良好的通透性和滞留效应(EPR)，能够使药物有效地到达靶点且性能可以精确控制，其聚合物链上具有多种功能基团，疏水性核具有良好的载药及控制药物释放的能力，亲水外壳可以提高胶束的稳定性。
还原响应性的聚合物胶束是近年来的研究热点，氧化还原响应的聚合物胶束通常在聚合物的主链、侧链或交联结构中存在二硫键。二硫键是一种广泛存在于人体的化学键，在体液循环和细胞外介质中能够稳定存在，谷胱甘肽(GSH)是一种还原性物质，能使二硫键断裂生产硫醇，在细胞外液中含有微摩尔量的GSH，而在细胞内液中GSH的浓度高达10mmol/L左右，是细胞外液的100-1000倍，从而使得药物在细胞内选择性释放成为可能。另外，肿瘤细胞中谷胱甘肽(GSH)的浓度远远高于正常组织环境，所以二硫键容易断裂。
甲氨蝶呤(MTX)是一种有效的抗肿瘤药物，但现在临床上多为片剂和针剂，使用后释放药物无目标确定性，人体内各个部位均有吸收和代谢。这也就是的MTX在抗肿瘤的同时毒副作用也较大。与MTX相同情况的抗癌药物还有很多。因此，如何有效提高药物的靶向性和生物利用度、降低毒副作用是亟待解决的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束及其制备方法，该自组装纳米胶束具有靶向性、稳定性、且能够实现药物的控制释放；该制备方法合成路线设计合理、操作简单。
本发明是通过以下技术方案来实现：
本发明公开的一种透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束的制备方法，将透明质酸与甲氨蝶呤通过含有二硫键的胱胺链接，再经透析法制备得到透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束。
优选地，透明质酸、甲氨蝶呤及胱胺的反应摩尔比为(1～3)：1：1。
进一步地，一种透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束的制备方法，包括以下步骤：
1)胱胺-甲氨蝶呤体系的合成
将甲氨蝶呤溶于无水甲酰胺中，加入EDC和NHS，搅拌、避光活化处理1～5h，得到活化后的甲氨蝶呤溶液，然后向活化后的甲氨蝶呤溶液中加入胱胺，避光反应处理3～10h，合成得到胱胺-甲氨蝶呤体系；
2)透明质酸-SS-甲氨蝶呤体系的合成
将透明质酸溶解于无水甲酰胺中，加入EDC和NHS，搅拌、活化处理5h，得到活化后的透明质酸溶液，将该活化后的透明质酸溶液滴加到步骤1)制得的胱胺-甲氨蝶呤体系中，避光反应15～40h，得到透明质酸-SS-甲氨蝶呤体系；
3)自组装纳米胶束的形成
将透明质酸-SS-甲氨蝶呤体系置于透析袋中透析处理20～48h，定期换水，透析完成后离心去除未连接上的透明质酸，然后加水超声处理，再经冷冻干燥处理，制得透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束。
进一步地，步骤1)中，甲氨蝶呤与无水甲酰胺的用量比为(1～15)mg：1mL；EDC、NHS与甲氨蝶呤的摩尔比为(1～4)：(2.5～10)：(1～1.5)。
进一步地，步骤2)中，透明质酸与无水甲酰胺的用量比为(20～50)mg：1mL；EDC、NHS和透明质酸的摩尔比为(0.8～2):(0.2～0.6)：1。
进一步地，步骤3)中，透析选用截留分子量为2000Da的透析袋，透析处理期间，每隔2h更换一次去离子水。
进一步地，步骤3)中，离心是将透析后的胶束溶液在6000～9000R的转速下离心处理10～20min。
进一步地，其特征在于，所用透明质酸的分子量为2000～8000。
本发明还公开了采用上述的制备方法制得的透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束。
与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：
本发明公开的合成透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束的方法，利用透明质酸可与肿瘤细胞表面CD44的特异性结合这一特性，与抗肿瘤药物MTX链接后可实现MTX的定向给药，降低MTX的毒副作用，提高MTX的生物利用度。因此，通过利用带有二硫键的胱胺作为链接因子，将MTX与透明质酸相连，形成自组装胶束，一方面利用了透明质酸可以与肿瘤细胞特异性结合，使聚合物胶束具有靶向性，能够使药物有目标性的载入病灶部位，另一方面利用二硫键的谷胱甘肽响应性，实现药物的控制释放。本发明利用红外检测手段对自组装胶束进行了结构表征。利用紫外分光光度计、扫描电子显微镜对胶束进行了粒径及胶束形貌的表征，证明了胶束的成功制备。同时，对透明质酸-甲氨蝶呤自组装胶束的体外释药实验结果表明，含有二硫键的胶束在GSH浓度不同时能够做到智能应答，从而达到药物缓释、靶向、控制的目的。
进一步地，本发明所用透明质酸由于不同分子量的透明质酸形成的胶束的粒径大小不同，并且相对分子量越大的透明质酸，其在甲酰胺溶液中分子间的缠绕度就会越高，分子空间位阻越高，活化越困难，与DA-MTX体系反应越难进行，因此本发明选择分子量相对小的透明质酸，结果证明小分子量(2000～8000)透明质酸与DA-MTX形成的聚合物胶束粒径小，较稳定。
附图说明
图1为透明质酸-甲氨蝶呤体系合成示意图；
图2为透明质酸-甲氨蝶呤自组装及解离的示意图；
图3为HA-SS-MTX；MTX；HA；DA-MTX；DA红外光谱图；
图4为HA-SS-MTX胶束的粒径分布图；其中，(a)为分子量为5233g/mol的透明质酸形成的HA-SS-MTX胶束粒径图，(b)为分子量为50000g/mol的透明质酸形成的HA-SS-MTX胶束粒径图；
图5为HA-SS-MTX胶束的Zeta电位图；
图6为HA-SS-MTX胶束扫描电镜图；
图7为MTX标准曲线；
图8为MTX在不同浓度GSH条件下累计释放的紫外吸收强度。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。
本发明中出现的英文字母表述释义如下：
HA-SS-MTX表示：透明质酸-二硫键-甲氨蝶呤；
DA表示：胱胺；HA表示：透明质酸；
DA-MTX表示：胱胺-甲氨蝶呤；
EDC为：1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐；
NHS为：N-羟基琥珀酰亚胺。
一、HA-SS-MTX聚合物胶束的制备
本发明利用透明质酸的靶向性，以含有二硫键的胱胺为桥梁，联接具有抗肿瘤作用的药物MTX，经透析法制备HA-SS-MTX聚合物胶束。
1、制备HA-SS-MTX聚合物体系
MTX中含有-COOH，胱胺中含有-NH2，通过控制两者配比，进行-COOH与-NH2间的酰胺反应，实现MTX与HA的链接。胱胺中含有两个-NH2，一端与MTX的-COOH相连，另一端可与HA中的-COOH反应链接，实现HA与MTX的链接，合成示意图参见图1。
由于不同分子量的透明质酸形成的胶束的粒径大小不同，并且相对分子量越大的透明质酸，其在甲酰胺溶液中分子间的缠绕度就会越高，分子空间位阻越高，活化越困难，与DA-MTX体系反应越难进行。
本实施例中采用了两种不同相对分子量的透明质酸制备了聚合物胶束。小小分子量(5233g/mol)透明质酸，大分子量(50000g/mol)透明质酸。
具体制备方法包括以下步骤：
(1)胱胺的合成
称取2.00g胱胺二盐酸盐溶解于10mL去离子水中制成溶液a，0.78g氢氧化钠加入20mL去离子水制成溶液b；将溶液b逐滴加入到溶液a中，至pH值大于等于9，反应1h；在60℃下旋转蒸发20min，至有大量盐生成。用15mL无水二氯甲烷溶解、过滤，收集滤液，将滤液在40℃下旋转蒸发至液体呈粘稠状，得淡黄色液体，30℃下真空干燥，过夜，即得到胱胺(DA)。
(2)DA-MTX体系的合成
称取17.39mg MTX溶于5mL无水甲酰胺，加入14.7mg EDC、38mg NHS，搅拌、避光活化2h。向活化后的MTX溶液加入8mg制备好的DA，避光反应5h。
(3)HA-SS-MTX的合成
称取200mg小分子透明质酸(分子量2000-8000)，加热40℃，溶解于6mL无水甲酰胺中，向溶液中加入400mg EDC和1g NHS搅拌、活化5h。将活化好的小分子透明质酸滴加入DA-MTX体系中，避光反应24h，合成HA-SS-MTX体系。
2、胶束的形成
将制备好的HA-SS-MTX体系置于合适透析袋中，定期换水，在水中疏水端自动向内移动，亲水端自动向外移动，自组装形成胶束。自组装及解离示意图参见图2，具体HA-SS-MTX胶束的制备方法为：
选取截留分子量为2000Da的透析袋，预先处理好。把预处理过的透析袋用无水甲酰胺润洗，加入制备好的HA-DA-MTX，透析24小时，每隔2小时更换一次去离子水。利用透析法将透析袋中的无水甲酰胺置换出来，HA-DA-MTX体系在去离子水中自组装形成亲水链段在外、疏水连段在内的胶束。将透析后的胶束溶液在8000R转速下离心15分钟，吸去上清液，去除未连接上DA-MTX体系的透明质酸。向离心管中加入10mL去离子水，超声处理，使胶束均匀分散在水中，转移至培养皿中，冷冻干燥，得黄色海绵状产物。
二、产物的表征
1、HA-SS-MTX的表征
用药匙取适量溴化钾，用玛瑙研钵研磨成细粉末状，按照200:1比例加入按本发明上述方法制备得到的干燥胶束样品与溴化钾粉末混合并研细。将粉末倒入压片装置，压成半透明状薄片。利用红外光谱仪在500～3500cm-1波段对样品结构进行检测，结果如图3所示，从红外光谱图中，对比DA、MTX、DA-MTX的红外光谱可以看出，1668cm-1处出现了O＝CNH的振动吸收峰，这是由胱胺与MTX的羧基发生反应生成酰胺造成的，证明DA-MTX的成功合成。在透明质酸的红外光谱图中可以清楚看到，羟基的吸收峰在3310cm-1处有强吸收，峰型呈现钝而宽的形态，这是由于透明质酸分子内部的羟基形成了分子内或分子间氢键。透明质酸属于多糖类，在1147cm-1、1079cm-1、1024cm-1、946cm-1处有糖的特征吸收峰。对比HA-SS-MTX红外光谱图，可以看到在3390cm-1有羟基的吸收峰，并且在1151cm-1、1076cm-1、1041cm-1、949cm-1处有糖的特征吸收峰，证明聚合物胶束保持了透明质酸本身的基本结构。HA-SS-MTX红外光谱图与MTX的红外光谱图相对发现，在1611cm-1处有O＝CNH键的振动吸收峰，证明HA-SS-MTX自组装纳米胶束成功合成。
2、HA-SS-MTX胶束粒径及Zeta电位的表征
利用Nano-ZS-ZEN3600型动态光散射力度分析仪测量HA-DA-MTX胶束的粒径及Zeta电位，测量温度25℃。
(1)HA-SS-MTX胶束的粒径分布
结果如图4所示，其中，(a)是采用小分子量(5233g/mol)透明质酸与DA-MTX体系反应制得的胶束粒径图，(b)是大分子量(50000g/mol)透明质酸与DA-MTX体系反应制得的胶束粒径图。从图中可以看出，当透明质酸分子量增加的时候，HA-SS-MTX体系利用透析法形成的胶束粒径明显增大。这是由于分子量较大的透明质酸链长较长，形成的胶束粒径较大。由此，可以看出相对分子质量较小的透明质酸形成的聚合物胶束效果更好。
(2)HA-SS-MTX胶束的Zeta电位
从图5中可以看出，HA-SS-MTX胶束的Zeta电位为-4.83mV。分析MTX分子结构可以看到其本身就有-COOH和-NH2，这两种官能团的存在使得HA-SS-MTX聚合物胶束的Zeta电位绝对值有所减小。
3、HA-SS-MTX胶束形貌及尺寸表征
为了观察所制得的HA-SS-MTX胶束的形态学特征，利用扫描电子显微镜(SEM)来进行观察，对待测样品的处理过程如下：将制得胶束捣碎呈粉末状，将粉末投入去离子水中制成悬浮液后滴于附有支持膜的铜网上，室温下干燥。将干燥好的待测样品用SEM观察胶束的形态。结果如图6所示，可以清晰的看到胶束呈现球形，表面光滑，形貌规整。分析两组粒径数据可知，SEM中显示HA-SS-MTX聚合物胶束的粒径为600nm左右，大于粒度分析仪中测定的胶束水合直径。这可能是由于经SEM所测的样品在冻干过程中发生了团聚，在上样过程中吸水聚合导致所测的粒径值较大。
三、MTX载药量的测定
采用紫外分光光度计测定MTX的标准曲线。配置一系列浓度的MTX标准溶液，并测定其紫外吸光度值，以紫外吸光度为纵轴，MTX浓度为横轴，绘制标准曲线。在306nm波长下测定制备的胶束的紫外吸光度值，最后依据绘制的标准曲线计算出甲氨蝶呤的载药量(LC)及载药率(LE)，其载药量和载药率用下述公式计算：
具体地，MTX标准曲线的绘制方法如下：
称取10mg MTX标准药品溶解于10mL PBS溶液中(pH＝7.5)，用移液枪量取1mL上述溶液移入离心管中，加入1mLPBS溶液稀释，再准确量取1mL此溶液于另一离心管中，再加入1mLPBS溶液稀释，如此反复半数稀释，得到MTX浓度分别为0.0039、0.0078、0.0156、0.0313、0.0625、0.125mg/mL的PBS溶液。用紫外分光光度计在306nm处测定各个浓度PBS溶液的紫外强度，绘制MTX浓度与紫外强度关系图。
抗肿瘤药物MTX的载药量和载药率都是通过紫外分光光度计测定的，MTX的标准曲线如图7所示，其线性方程是：
Y＝-0.00867+4.75523X，R2＝0.99014。
根据MTX标准曲线方程和公式(1)、(2)计算出MTX的载药量为28.5％，载药率54.54％。
四、体外释药实验
准确称量15mg HA-SS-MTX胶束溶解在15mL配制好的PBS溶液(pH＝7.2)中，每5mL一份，分别转移到三个截留分子量为1000Da的透析袋中，标号A、B、C。将A样品放入装有80mL、0mM的GSH的PBS溶液的烧杯中；B样品放入装有80mL、10mM的GSH的PBS溶液的烧杯中；C样品装有80mL、40mM的GSH的PBS溶液的烧杯中。将三个放入样品的烧杯一同放入恒温摇床中，设置温度为37℃，振荡速率为150rpm下进行释药。在进行释药期间，按照设定时间，定时从烧杯中取出0.6mL溶液，同时补充加入等量的相对应的GSH浓度的原溶液。待释药72h后，通过紫外分光光度计测定MTX的吸光度，在PBS溶液(pH＝7.2)中，MTX的特征吸收峰在306nm。
还原响应型聚合物胶束不仅可以将药物运载到体内病灶部位，而且还应该达到在肿瘤部位的控制释放。MTX通过二硫键与透明质酸链接，二硫键易被还原断裂，利用二硫键的这个特性，调节谷胱甘肽的含量来调节MTX的释放。在体外进行模拟释药实验，40mM GAH，pH＝7.2模拟肿瘤细胞，同时与0mM GSH，10mM GSH，pH＝7.2条件下的释药情况相对比。
如图8所示，在40mM GSH条件下，MTX的释放量随着时间的增加而增加。从图中可以看到，在前10小时内。MTX的释放速度非常快，10个小时以后可能由于药物聚集，后来释药速度有所放缓。在10mM GSH条件下，前10小时内，MTX逐渐释放，速度比40mM GSH条件下的释放速度低，随着时间延长，药物逐渐释放。在0mM GSH条件下，前10个小时内MTX药物释放量随时间增大而增加，10小时后药物释放量缓慢增加，但直到60小时后药物释放量也较低。这也进一步证明在不含GSH的环境下聚合物胶束的稳定性良好。体外释药实验说明，在处于不同浓度的GSH环境条件下，聚合物胶束的应答不同，有效做到了药物的控制释放，并且所制作的胶束有一定的稳定性。

Claims (9)

1.一种透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束的制备方法，其特征在于，将透明质酸与甲氨蝶呤通过含有二硫键的胱胺链接，再经透析法制备得到透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束。
2.根据权利要求1所述的透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束的制备方法，其特征在于，透明质酸、甲氨蝶呤及胱胺的反应摩尔比为(1～3)：1：1。
3.根据权利要求1所述的透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)胱胺-甲氨蝶呤体系的合成
将甲氨蝶呤溶于无水甲酰胺中，加入EDC和NHS，搅拌、避光活化处理1～5h，得到活化后的甲氨蝶呤溶液，然后向活化后的甲氨蝶呤溶液中加入胱胺，避光反应处理3～10h，合成得到胱胺-甲氨蝶呤体系；
2)透明质酸-SS-甲氨蝶呤体系的合成
将透明质酸溶解于无水甲酰胺中，加入EDC和NHS，搅拌、活化处理5h，得到活化后的透明质酸溶液，将该活化后的透明质酸溶液滴加到步骤1)制得的胱胺-甲氨蝶呤体系中，避光反应15～40h，得到透明质酸-SS-甲氨蝶呤体系；
3)自组装纳米胶束的形成
将透明质酸-SS-甲氨蝶呤体系置于透析袋中透析处理20～48h，定期换水，透析完成后离心去除未连接上的透明质酸，然后加水超声处理，再经冷冻干燥处理，制得透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束。
4.根据权利要求3所述的透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束的制备方法，其特征在于，步骤1)中，甲氨蝶呤与无水甲酰胺的用量比为(1～15)mg：1mL；EDC、NHS与甲氨蝶呤的摩尔比为(1～4)：(2.5～10)：(1～1.5)。
5.根据权利要求3所述的透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束的制备方法，其特征在于，步骤2)中，透明质酸与无水甲酰胺的用量比为(20～50)mg：1mL；EDC、NHS和透明质酸的摩尔比为(0.8～2):(0.2～0.6)：1。
6.根据权利要求3所述的透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束的制备方法，其特征在于，步骤3)中，透析选用截留分子量为2000Da的透析袋，透析处理期间，每隔2h更换一次去离子水。
7.根据权利要求3所述的透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束的制备方法，其特征在于，步骤3)中，离心是将透析后的胶束溶液在6000～9000R的转速下离心处理10～20min。
8.根据权利要求1～7中任意一项所述的透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束的制备方法，其特征在于，所用透明质酸的分子量为2000～8000。
9.采用权利要求1～8中任意一项所述的制备方法制得的透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109705236A (zh) * 2019-01-14 2019-05-03 黑龙江大学 一种透明质酸的衍生物及其制备方法与应用
CN111821470A (zh) * 2020-09-01 2020-10-27 中南大学 包载甲氨蝶呤的铁-鞣酸配合物及其制备方法与应用
CN115702937A (zh) * 2021-08-04 2023-02-17 四川大学 改性多酚载体材料、靶向纳米递送系统及制备方法和用途
CN116251037A (zh) * 2021-12-09 2023-06-13 华熙生物科技股份有限公司 水解透明质酸钠自组装结构及其制备方法和应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005085294A1 (ja) * 2004-03-05 2005-09-15 Denki Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha ヒアルロン酸−メトトレキサート結合体
CN103301472A (zh) * 2013-04-28 2013-09-18 中国药科大学 生物体病灶部位特异性释药的两亲性多糖-抗肿瘤药物偶联物及其药物组合物的制备和应用
CN105596294A (zh) * 2015-12-21 2016-05-25 中国科学院深圳先进技术研究院 一种纳米靶向载药胶束及其制备方法和一种抗癌药物及其制备方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005085294A1 (ja) * 2004-03-05 2005-09-15 Denki Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha ヒアルロン酸−メトトレキサート結合体
CN103301472A (zh) * 2013-04-28 2013-09-18 中国药科大学 生物体病灶部位特异性释药的两亲性多糖-抗肿瘤药物偶联物及其药物组合物的制备和应用
CN105596294A (zh) * 2015-12-21 2016-05-25 中国科学院深圳先进技术研究院 一种纳米靶向载药胶束及其制备方法和一种抗癌药物及其制备方法

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109705236A (zh) * 2019-01-14 2019-05-03 黑龙江大学 一种透明质酸的衍生物及其制备方法与应用
CN111821470A (zh) * 2020-09-01 2020-10-27 中南大学 包载甲氨蝶呤的铁-鞣酸配合物及其制备方法与应用
CN111821470B (zh) * 2020-09-01 2022-08-12 中南大学 包载甲氨蝶呤的铁-鞣酸配合物及其制备方法与应用
CN115702937A (zh) * 2021-08-04 2023-02-17 四川大学 改性多酚载体材料、靶向纳米递送系统及制备方法和用途
CN116251037A (zh) * 2021-12-09 2023-06-13 华熙生物科技股份有限公司 水解透明质酸钠自组装结构及其制备方法和应用

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