CN108884492A - 借助多中心mirna谱的阿尔茨海默病中的特定标记 - Google Patents

借助多中心mirna谱的阿尔茨海默病中的特定标记 Download PDF

Info

Publication number
CN108884492A
CN108884492A CN201680081938.8A CN201680081938A CN108884492A CN 108884492 A CN108884492 A CN 108884492A CN 201680081938 A CN201680081938 A CN 201680081938A CN 108884492 A CN108884492 A CN 108884492A
Authority
CN
China
Prior art keywords
mir
hsa
mirna
sequence
homo sapiens
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201680081938.8A
Other languages
English (en)
Inventor
安德烈亚斯·凯勒
科德·弗里德里克·斯塔勒
丹尼尔·西克特
克里斯蒂娜·巴克斯
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Universitaet des Saarlandes
Original Assignee
Universitaet des Saarlandes
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Universitaet des Saarlandes filed Critical Universitaet des Saarlandes
Publication of CN108884492A publication Critical patent/CN108884492A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/178—Oligonucleotides characterized by their use miRNA, siRNA or ncRNA

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及用于诊断患者的阿尔茨海默病(AD)的方法，其中确定血液样品中miRNA的表达谱，并且将限定的miRNA的表达水平与参考样品的表达水平进行比较。本发明还涉及所述限定的miRNA作为诊断阿尔茨海默病的标志物的用途以及用于诊断阿尔茨海默病的试剂盒。

Description

借助多中心MIRNA谱的阿尔茨海默病中的特定标记
本发明涉及用于诊断患者的阿尔茨海默病(AD)的方法，其中确定血液样品中的miRNA的表达谱，并且将限定的miRNA的表达水平与参考样品的表达水平进行比较，涉及所述限定的miRNA作为诊断阿尔茨海默病的标志物的用途，以及涉及用于诊断阿尔茨海默病的试剂盒。
阿尔茨海默病通常根据患者病史、根据亲属的间接病史以及基于临床观察，基于特征性神经学特征和神经心理学特征的存在和基于可替代病情(诸如其他病症)或者短暂病情(诸如酒醉(alcoholization))(消除过程)的缺乏进行临床诊断。此外，可使用借助于计算机断层扫描 (CT)、磁共振成像(MRI)、单光子发射计算机断层扫描(SPECT)和/或正电子发射断层扫描(PET)的现代医学成像以便排除其他大脑症状或痴呆的子类型。它还可以预测从前驱期(轻度认知功能障碍(MCI))到阿尔茨海默病的转变。当它们作为诊断性工具可用时，使用SPECT神经影像和PET神经影像结合包括对精神状态检查的评估来确认阿尔茨海默病的诊断。在已经患有痴呆的人的情况下，与使用心理测试和病史分析的常规方法相比，SPECT似乎在区分阿尔茨海默病与其他可能病因方面更好。
进展已经导致提出了新的诊断性标准。已经开发了称为PiB PET 的新技术，以便能够使用与Aβ沉积物选择性结合的示踪剂直接且清楚地描绘体内β-淀粉样蛋白沉积物。PiB-PET化合物使用碳-11PET 扫描。最近的研究表明，PiB-PET在预测哪些患有轻度认知功能障碍的患者在两年内发展阿尔茨海默病的准确率为86％，并且该方法在排除发展阿尔茨海默病的可能性方面准确到约92％的程度。有人指出，将在未来使用淀粉样蛋白断层扫描，很可能与其他标记结合使用，而不是作为替代品。最近的研究表明，与未患有AD的人相比，AD患者具有降低的谷氨酸水平(Glu)以及具有降低的Glu/肌酸(Cr)的比例、 Glu/肌醇(mI)的比例、Glu/N-乙酰天冬氨酸(NAA)的比例和NAA/Cr的比例。海马中降低的NAA/Cr的比例和降低的Glu都可以作为阿尔茨海默病的早期指标。还发现，监测血液中脱氢表雄酮(DHEA)响应于氧化应激的差异可能是有用的测试：MCI患者的DHEA没有变化，而健康对照显示这一点。不久前，提出了血清miRNA(微小RNA)诊断性测试(H.Geekiyanage,G.A.Jicha,P.T.Nelson和C.Chan；Blood serum miRNA:Noninvasive biomarkers for Alzheimer’sdisease,Exp Neurol. 2012；235(2):491–496.doi:10.1016/j.expneurol.2011.11.026)。
然而，基于非侵入性分子生物标志物的阿尔茨海默病(AD)的可靠和早期诊断仍然是一个挑战。为了实现本发明的目标，发明人提出了创建用于从血液样品(特别是血细胞)诊断阿尔茨海默病的非编码微小 RNA(miRNA)的组合的表达谱。发明人已经发现，借助与健康患者相比某些miRNA的表达谱中的变化，有可能诊断阿尔茨海默病。
根据第一方面，本发明提供了用于诊断患者的阿尔茨海默病的方法，所述方法包括：
提供来自患者的血液样品，
创建来自所述血液样品的miRNA的表达谱，和
将至少一种miRNA的表达水平与参考水平进行比较，所述 miRNA包含选自以下的序列：hsa-miR-345-5p、hsa-miR-5006-3p、 hsa-miR-7848-3p、hsa-miR-6817-3p、hsa-miR-361-5p、hsa-miR-3157-3p 和hsa-miR-4482-3p，和/或所述miRNA包含在每种情况下与这些序列有多达3个碱基、优选多达2个碱基、进一步优选1个碱基差异的序列，所述比较允许对阿尔茨海默病进行诊断。
本发明的另一方面提供miRNA作为诊断阿尔茨海默病的标志物的用途，所述miRNA包含选自以下的序列：hsa-miR-345-5p、 hsa-miR-5006-3p、hsa-miR-7848-3p、hsa-miR-6817-3p、hsa-miR-361-5p、 hsa-miR-3157-3p和hsa-miR-4482-3p，和/或所述miRNA包含在每种情况下与这些序列有多达3个碱基、优选多达2个碱基、进一步优选1 个碱基差异的序列。
本发明另外提供了用于在来自患者的血液样品中诊断阿尔茨海默病的试剂盒，所述试剂盒包含：
用于检测至少一种miRNA序列的探针和/或引物，所述miRNA序列包含选自以下的序列：hsa-miR-345-5p、hsa-miR-5006-3p、 hsa-miR-7848-3p、hsa-miR-6817-3p、hsa-miR-361-5p、hsa-miR-3157-3p 和hsa-miR-4482-3p，和/或所述miRNA序列包含在每种情况下与这些序列有多达3个碱基、优选多达2个碱基、进一步优选1个碱基差异的序列。
可以从从属权利要求和详细描述中收集本发明的另外的方面。
除非另外限定，否则本文所使用的技术和科学术语具有与本发明领域中的本领域技术人员通常理解的含义相同的含义。
微小RNA或miRNA或微小核糖核酸是一类短的非编码RNA，其例如在基因表达中发挥作用。在此，miRNA是具有固定数量的碱基(例如少于500、少于200、少于100、少于50或少于30，但是例如多于 5、10或14个碱基)和确定的序列的多核苷酸。例如，还有可能从其获得cDNA，并因此，在根据本发明的方法中，还有可能从miRNA产生 cDNA，然后同样可以将所述cDNA与从来自不展示MS(特别是RRMS) 的患者的miRNA获得的cDNA水平进行比较。
在下文和上文中，对某些miRNA的参考是基于如可从Mirbase数据库(http:// mirbase.org/)，特别是Mirbase20(即Mirbase的第20版)收集的序列。
此外，还可以从下面表1中收集可以在根据本发明的方法和根据本发明的用途中使用的序列。在此，表1指定了成熟形式的miRNA，所述成熟形式可以与发夹形式(茎环形式)有差异。
表1：可以在根据本发明的方法和根据本发明的用途以及根据本发明的试剂盒中使用的miRNA的序列
在第一方面，本发明提供了用于诊断患者的阿尔茨海默病的方法，所述方法包括：
提供来自患者的血液样品，
创建来自所述血液样品的miRNA的表达谱，和
将至少一种miRNA的表达水平与参考水平进行比较，所述 miRNA包含选自以下的序列：hsa-miR-345-5p、hsa-miR-5006-3p、 hsa-miR-7848-3p、hsa-miR-6817-3p、hsa-miR-361-5p、hsa-miR-3157-3p 和hsa-miR-4482-3p，优选hsa-miR-345-5p、hsa-miR-5006-3p、hsa-miR-361-5p和hsa-miR-3157-3p，和/或所述miRNA包含在每种情况下与这些序列有多达3个碱基、优选多达2个碱基、进一步优选1 个碱基差异的序列，所述比较允许对阿尔茨海默病进行诊断。
在此，表达谱是样品中根据某些实施方案呈定量形式的 miRNA(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、 16、17、18、19、20、30、40、50、60、70、80、90、100或更多种miRNA)的表达的谱，而表达水平表示所表达的miRNA的特定量。
在此，血液样品的提供不受任何特定限制，但特别是非侵入性的，但是使用已经采集的血液样品。根据某些实施方案，还可以涵盖血液样品的收集和/或处理。在此，血液样品涵盖全血样品以及血液样品的级分(诸如例如血浆、血清等)，或者血液样品中的其他细胞(诸如外周血的单核细胞)。根据某些实施方案，血液样品包含血细胞或由血细胞组成。
提供血液样品的患者同样不受任何特定限制，并且例如可以涵盖脊椎动物，特别是哺乳动物，但是根据某些实施方案是人。特别地，根据某些实施方案，将本方法用于患者，例如疑似患有阿尔茨海默病和/或已诊断患有轻度认知功能障碍(MCI)的人中。
在此，尤其可以将在根据本发明的方法中使用的序列用于包含相应序列的一种或更多种miRNA的表达水平的变化中。
创建miRNA的表达谱的方法也不受任何特定限制，并且可以在此涵盖，例如用于确定核酸的常用微生物方法，根据某些实施方案，在此使用半定量或定量方法，特别是定量方法，以用于与参考水平进行比较。根据某些实施方案，创建miRNA的表达谱包括选自以下的至少一种方法：核酸杂交、核酸扩增、聚合酶延伸、测序、质谱分析及其任何组合。
在此，核酸杂交可以涵盖使用阵列(例如微阵列)，和/或原位杂交。为此目的，阵列可以例如涵盖使用与某些序列互补的序列，所述某些序列即miRNA，所述miRNA包含选自以下的序列：hsa-miR-345-5p、 hsa-miR-5006-3p、hsa-miR-7848-3p、hsa-miR-6817-3p、hsa-miR-361-5p、 hsa-miR-3157-3p和hsa-miR-4482-3p，优选hsa-miR-345-5p、 hsa-miR-5006-3p、hsa-miR-361-5p和hsa-miR-3157-3p，并且此外根据某些实施方案，另外地，所述miRNA包含选自以下的序列： hsa-miR-28-3p、hsa-miR-151a-3p、hsa-miR-1468-5p、hsa-miR-532-5p、 hsa-miR-17-3p和hsa-miR-30a，和/或所述miRNA包含在每种情况下与这些序列有多达3个碱基、优选多达2个碱基、进一步优选1个碱基差异的序列，所述互补序列可以例如适当地附接至支持物。为了定量，然后可有能例如用标记(诸如荧光标记或放射性核苷酸标记)标记样品的miRNA。
可替代地或另外地，还有可能适当地进行聚合酶链式反应(PCR)，优选定量PCR(qPCR)，特别是定量实时PCR(qRT-PCR)。
还可以想到的是测序方法，诸如下一代测序和/或质谱分析，特别是定量质谱分析。
在根据本发明的方法中与参考水平的比较不受任何特定限制，并且在此可以特别地涵盖与来自健康个体和/或具有MCI诊断而没有诊断出阿尔茨海默病的个体的进行比较。因此，该方法不仅允许诊断，而且还允许分期。借助这样的比较，例如有可能允许对阿尔茨海默病进行诊断。在此，比较可以例如基于数学方法(诸如相关性)、基于统计方法、基于概率理论、基于信息-理论方法或其组合来进行。
为了提供改进的信息，在此使用来自健康患者和阿尔茨海默病患者的大量的样品的统计比较是有利的，其中也可以例如从适合的数据库收集和/或可以基于由此开发的数学函数或算法确定此类数据。在此，统计方法不受任何特定限制，并且例如也可以以计算机辅助的方式进行。例如，可能在此使用t检验、Wilcoxon-Mann-Whitney检验、曲线下面积的确定(AUC)等。
根据某些实施方案，参考水平是从来自其第一组已经被诊断患有 AD并且第二组展现没有诊断出AD(即在这方面是健康的)的患者的大量样品获得的，优选根据年龄和性别调整组并且从健康患者组确定参考水平。为了提供更深远的信息，根据某些实施方案，另外还有可能使用诊断为MCI和/或MS的对照组。根据某些实施方案，在此从与待确定的样品相同种类的样品确定参考水平。
与序列有差异在此应理解为意思是与原始序列(例如在表1中指定的)相比，序列中的变化，例如，该序列中碱基的添加、插入、缺失或取代，特别是缺失和/或个别碱基取代。例如，在序列的一端和/或两端处可以有1或2个碱基的缺失，其中不超过3个碱基，优选不超过2 个碱基，进一步优选1个碱基的缺失并且特别是没有碱基缺失。另外地或者可替代地，序列内的1个或更多个碱基的变化也是可能的，相比于hsa-miR-345-5p、hsa-miR-5006-3p、hsa-miR-7848-3p、 hsa-miR-6817-3p、hsa-miR-361-5p、hsa-miR-3157-3p和 hsa-miR-4482-3p，优选hsa-miR-345-5p、hsa-miR-5006-3p、hsa-miR-361-5p和hsa-miR-3157-3p和/或hsa-miR-28-3p、 hsa-miR-151a-3p、hsa-miR-1468-5p、hsa-miR-532-5p、hsa-miR-17-3p和hsa-miR-30a的序列，最多再次变化3个碱基、优选2个碱基、进一步优选1个碱基并且特别优选无碱基变化。
根据某些实施方案，因此存在至少一种miRNA的表达水平与参考水平进行的比较，所述miRNA包含选自以下的序列： hsa-miR-345-5p、hsa-miR-5006-3p、hsa-miR-7848-3p、hsa-miR-6817-3p、 hsa-miR-361-5p、hsa-miR-3157-3p和hsa-miR-4482-3p，优选 hsa-miR-345-5p、hsa-miR-5006-3p、hsa-miR-361-5p和hsa-miR-3157-3p。
根据某些实施方案，存在与包含miRNA hsa-miR-345-5p的序列和 /或与与该序列(即所述miRNA的序列)有多达3个碱基、优选多达2 个碱基、进一步优选1个碱基差异的序列进行的至少一个比较。根据某些实施方案，存在与包含miRNA hsa-miR-5006-3p的序列和/或与与该序列有多达3个碱基、优选多达2个碱基、进一步优选1个碱基差异的序列进行的至少一个比较。根据某些实施方案，存在与包含 miRNA hsa-miR-7848-3p的序列和/或与与该序列有多达3个碱基、优选多达2个碱基、进一步优选1个碱基差异的序列进行的至少一个比较。根据某些实施方案，存在与包含miRNA hsa-miR-6817-3p的序列和/或与与该序列有多达3个碱基、优选多达2个碱基、进一步优选1 个碱基差异的序列进行的至少一个比较。根据某些实施方案，存在与包含miRNA hsa-miR-361-5p的序列和/或与与该序列有多达3个碱基、优选多达2个碱基、进一步优选1个碱基差异的序列进行的至少一个比较。根据某些实施方案，存在与包含miRNA hsa-miR-3157-3p的序列和/或与与该序列有多达3个碱基、优选多达2个碱基、进一步优选 1个碱基差异的序列进行的至少一个比较。根据某些实施方案，存在与包含miRNA hsa-miR-4482-3p的序列和/或与与该序列有多达3个碱基、优选多达2个碱基、进一步优选1个碱基差异的序列进行的至少一个比较。
根据某些实施方案，存在与包含miRNA hsa-miR-345-5p的序列进行的至少一个比较。根据某些实施方案，存在与包含miRNA hsa-miR-5006-3p的序列进行的至少一个比较。根据某些实施方案，存在与包含miRNA hsa-miR-7848-3p的序列进行的至少一个比较。根据某些实施方案，存在与包含miRNA hsa-miR-6817-3p的序列进行的至少一个比较。根据某些实施方案，存在与包含miRNA hsa-miR-361-5p 的序列进行的至少一个比较。根据某些实施方案，存在与包含miRNA hsa-miR-3157-3p的序列进行的至少一个比较。根据某些实施方案，存在与包含miRNA hsa-miR-4482-3p的序列进行的至少一个比较。
根据某些实施方案，另外将至少一种miRNA的表达水平与参考水平进行比较，所述miRNA包含选自以下的序列：hsa-miR-28-3p、 hsa-miR-151a-3p、hsa-miR-1468-5p、hsa-miR-532-5p、hsa-miR-17-3p 和hsa-miR-30a-3p，和/或所述miRNA包含在每种情况下与这些序列有多达3个碱基、优选多达2个碱基、进一步优选1个碱基差异的序列，所述比较允许对阿尔茨海默病进行诊断。
根据某些实施方案，在至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、 12或13种miRNA中观察到与参考水平相比的表达水平的变化，所述 miRNA包含选自以下的序列：hsa-miR-345-5p、hsa-miR-5006-3p、 hsa-miR-7848-3p、hsa-miR-6817-3p、hsa-miR-361-5p、hsa-miR-3157-3p、hsa-miR-4482-3p、hsa-miR-28-3p、hsa-miR-151a-3p、hsa-miR-1468-5p、 hsa-miR-532-5p、hsa-miR-17-3p和hsa-miR-30a-3p，和/或所述miRNA 包含在每种情况下与这些序列有多达3个碱基、优选多达2个碱基、进一步优选1个碱基差异的序列。根据某些实施方案，在至少2、3、 4、5、6、7、8、9、10、11、12或13种miRNA中观察到与参考水平相比的表达水平的变化，所述miRNA包含选自以下的序列： hsa-miR-345-5p、hsa-miR-5006-3p、hsa-miR-7848-3p、hsa-miR-6817-3p、 hsa-miR-361-5p、hsa-miR-3157-3p、hsa-miR-4482-3p、hsa-miR-28-3p、 hsa-miR-151a-3p、hsa-miR-1468-5p、hsa-miR-532-5p、hsa-miR-17-3p 和hsa-miR-30a-3p。
根据某些实施方案，在至少2、3、4、5、6或7种miRNA中观察到与参考水平相比的表达水平的变化，所述miRNA包含选自以下的序列：hsa-miR-345-5p、hsa-miR-5006-3p、hsa-miR-7848-3p、hsa-miR-6817-3p、hsa-miR-361-5p、hsa-miR-3157-3p和 hsa-miR-4482-3p、优选hsa-miR-345-5p、hsa-miR-5006-3p、 hsa-miR-361-5p和hsa-miR-3157-3p，和/或所述miRNA包含在每种情况下与这些序列有多达3个碱基、优选多达2个碱基、进一步优选1 个碱基差异的序列。根据某些实施方案，在至少2、3、4、5、6或7 种miRNA中观察到与参考水平相比的表达水平的变化，所述miRNA 包含选自以下的序列：hsa-miR-345-5p、hsa-miR-5006-3p、 hsa-miR-7848-3p、hsa-miR-6817-3p、hsa-miR-361-5p、hsa-miR-3157-3p 和hsa-miR-4482-3p，优选hsa-miR-345-5p、hsa-miR-5006-3p、 hsa-miR-361-5p和hsa-miR-3157-3p。
在此，在多于一种miRNA的表达水平变化的情况下，可以大大增加阿尔茨海默病诊断的显著性水平。
根据某些实施方案，miRNA是以下中的至少一种，其选自： hsa-miR-345、hsa-miR-5006、hsa-miR-7848、hsa-miR-6817、 hsa-miR-361、hsa-miR-3157和hsa-miR-4482，优选hsa-miR-345、 hsa-miR-5006、hsa-miR-361和hsa-miR-3157，和/或其具有与该序列有多达3个碱基、优选多达2个碱基、进一步优选1个碱基差异的序列。根据某些实施方案，miRNA是选自以下的至少一种：hsa-miR-345、 hsa-miR-5006、hsa-miR-7848、hsa-miR-6817、hsa-miR-361、 hsa-miR-3157和hsa-miR-4482，优选hsa-miR-345、hsa-miR-5006、 hsa-miR-361和hsa-miR-3157。根据某些实施方案，另外确定的与 miRNA相关的另外的miRNA是以下中的至少一种，其选自 hsa-miR-28、hsa-miR-151a、hsa-miR-1468、hsa-miR-532、hsa-miR-17和hsa-miR-30a，和/或其具有与该序列有多达3个碱基、优选多达2 个碱基、进一步优选1个碱基差异的序列，所述miRNA包含选自以下的序列：hsa-miR-345-5p、hsa-miR-5006-3p、hsa-miR-7848-3p、 hsa-miR-6817-3p、hsa-miR-361-5p、hsa-miR-3157-3p和 hsa-miR-4482-3p，和/或所述miRNA包含在每种情况下与这些序列有多达3个碱基、优选多达2个碱基、进一步优选1个碱基差异的序列。根据某些实施方案，另外确定的与miRNA相关的另外的miRNA是选自以下的至少一种：hsa-miR-28、hsa-miR-151a、hsa-miR-1468、 hsa-miR-532、hsa-miR-17和hsa-miR-30a，所述miRNA包含选自以下的序列：hsa-miR-345-5p、hsa-miR-5006-3p、hsa-miR-7848-3p、 hsa-miR-6817-3p、hsa-miR-361-5p、hsa-miR-3157-3p和hsa-miR-4482-3p，和/或所述miRNA包含在每种情况下与这些序列有多达3个碱基、优选多达2个碱基、进一步优选1个碱基差异的序列。因此，根据某些实施方案，另外确定选自以下的至少一种miRNA的表达水平：hsa-miR-28、hsa-miR-151a、hsa-miR-1468、hsa-miR-532、hsa-miR-17和hsa-miR-30a。
在此，如表2中所示，miRNA的这些实施方案对应于茎环形式或发夹形式，其与检测到的成熟形式相关(两者均针对根据本发明的用途的miRNA和针对可用于根据本发明的方法中的另外miRNA)并且其可以例如同样存在于样品中。因此，代替用特定的成熟形式，也可以用相应的茎环形式来进行比较。
表2：茎环形式与成熟形式之间的相关性
茎环形式 SEQ ID NO: 成熟形式 成熟形式的序列
hsa-miR-345 14 hsa-miR-345-5p gcugacuccuaguccagggcuc
hsa-miR-5006 15 hsa-miR-5006-3p uuucccuuuccauccuggcag
hsa-miR-7848 16 hsa-miR-7848-3p cuacccucggucugcuuaccaca
hsa-miR-6817 17 hsa-miR-6817-3p ucucucugacuccauggca
hsa-miR-361 18 hsa-miR-361-5p uuaucagaaucuccagggguac
hsa-miR-3157 19 hsa-miR-3157-3p cugcccuagucuagcugaagcu
hsa-miR-4482 20 hsa-miR-4482-3p uuucuauuucucaguggggcuc
hsa-miR-28 21 hsa-miR-28-3p cacuagauugugagcuccugga
hsa-miR-151a 22 hsa-miR-151a-3p cuagacugaagcuccuugagg
hsa-miR-1468 23 hsa-miR-1468-5p cuccguuugccuguuucgcug
hsa-miR-532 24 hsa-miR-532-5p caugccuugaguguaggaccgu
hsa-miR-17 25 hsa-miR-17-3p acugcagugaaggcacuuguag
hsa-miR-30a 26 hsa-miR-30a-3p cuuucagucggauguuugcagc
根据表2的茎环形式的核酸序列如下：
根据某些实施方案，在至少2、3、4、5、6或7种miRNA中观察到与参考水平相比的表达水平的变化，所述miRNA包含选自以下的序列：hsa-miR-345、hsa-miR-5006、hsa-miR-7848、hsa-miR-6817、 hsa-miR-361、hsa-miR-3157和hsa-miR-4482，和/或所述miRNA包含在每种情况下与这些序列有多达3个碱基、优选多达2个碱基、进一步优选1个碱基差异的序列。根据某些实施方案，在至少2、3、4、5、 6或7种miRNA中观察到与参考水平相比的表达水平的变化，所述 miRNA包含选自以下的序列：hsa-miR-345、hsa-miR-5006、 hsa-miR-7848、hsa-miR-6817、hsa-miR-361、hsa-miR-3157和 hsa-miR-4482。
根据另一方面，本发明提供了至少一种miRNA作为诊断阿尔茨海默病的标志物的用途，所述miRNA包含选自以下的序列： hsa-miR-345-5p、hsa-miR-5006-3p、hsa-miR-7848-3p、hsa-miR-6817-3p、hsa-miR-361-5p、hsa-miR-3157-3p和hsa-miR-4482-3p，优选hsa-miR-345-5p、hsa-miR-5006-3p、hsa-miR-361-5p和hsa-miR-3157-3p 和/或所述miRNA包含在每种情况下与这些序列有多达3个碱基、优选多达2个碱基、进一步优选1个碱基差异的序列。根据某些实施方案，使用至少一种miRNA，所述miRNA包含选自以下的序列： hsa-miR-345-5p、hsa-miR-5006-3p、hsa-miR-7848-3p、hsa-miR-6817-3p、 hsa-miR-361-5p、hsa-miR-3157-3p和hsa-miR-4482-3p，优选 hsa-miR-345-5p、hsa-miR-5006-3p、hsa-miR-361-5p和hsa-miR-3157-3p。
在此，根据某些实施方案，miRNA是以下中的至少一种，其具有选自由以下组成的组的序列：hsa-miR-345、hsa-miR-5006、 hsa-miR-7848、hsa-miR-6817、hsa-miR-361、hsa-miR-3157和 hsa-miR-4482、优选hsa-miR-345、hsa-miR-5006、hsa-miR-361和 hsa-miR-3157，和/或其具有在每种情况下与这些序列有多达3个碱基、优选多达2个碱基、进一步优选1个碱基差异的序列中的至少一种。在此，根据某些实施方案，miRNA是具有选自以下的序列的至少一种： hsa-miR-345、hsa-miR-5006、hsa-miR-7848、hsa-miR-6817、 hsa-miR-361、hsa-miR-3157和hsa-miR-4482，优选hsa-miR-345、 hsa-miR-5006、hsa-miR-361和hsa-miR-3157。
在另一方面，本发明提供了用于在来自患者的血液样品中诊断阿尔茨海默病的试剂盒，所述试剂盒包含：
用于检测至少一种miRNA序列的探针和/或引物，所述miRNA序列包含选自以下的序列：hsa-miR-345-5p、hsa-miR-5006-3p、 hsa-miR-7848-3p、hsa-miR-6817-3p、hsa-miR-361-5p、hsa-miR-3157-3p 和hsa-miR-4482-3p、优选hsa-miR-345-5p、hsa-miR-5006-3p、hsa-miR-361-5p和hsa-miR-3157-3p，和/或所述miRNA序列包含在每种情况下与这些序列有多达3个碱基、优选多达2个碱基、进一步优选1个碱基差异的序列。
根据某些实施方案，试剂盒包括用于检测至少一种miRNA序列的探针和/或引物，所述miRNA序列包含选自以下的序列： hsa-miR-345-5p、hsa-miR-5006-3p、hsa-miR-7848-3p、hsa-miR-6817-3p、hsa-miR-361-5p、hsa-miR-3157-3p和hsa-miR-4482-3p，优选 hsa-miR-345-5p、hsa-miR-5006-3p、hsa-miR-361-5p和hsa-miR-3157-3p。
根据某些实施方案，试剂盒包括用于检测至少一种miRNA序列的探针和/或引物，所述miRNA序列包含选自以下的序列： hsa-miR-345、hsa-miR-5006、hsa-miR-7848、hsa-miR-6817、 hsa-miR-361、hsa-miR-3157和hsa-miR-4482、优选hsa-miR-345、 hsa-miR-5006、hsa-miR-361和hsa-miR-3157和/或所述miRNA序列具有在每种情况下与这些序列有多达3个碱基、优选多达2个碱基、进一步优选1个碱基差异的序列。
根据某些实施方案，试剂盒包括用于检测至少一种miRNA序列的探针和/或引物，所述miRNA序列包含选自以下的序列： hsa-miR-345、hsa-miR-5006、hsa-miR-7848、hsa-miR-6817、 hsa-miR-361、hsa-miR-3157和hsa-miR-4482，优选hsa-miR-345、 hsa-miR-5006、hsa-miR-361和hsa-miR-3157。
根据本发明的试剂盒可另外包含用于检测至少一种miRNA序列的探针和/或引物，所述miRNA序列包含选自以下的序列： hsa-miR-28-3p、hsa-miR-151a-3p、hsa-miR-1468-5p、hsa-miR-532-5p、 hsa-miR-17-3p和hsa-miR-30a-3p，和/或所述miRNA序列包含在每种情况下与这些序列有多达3个碱基、优选多达2个碱基、进一步优选 1个碱基差异的序列，优选地，包含用于检测至少一种miRNA序列的探针和/或引物，所述miRNA序列包含选自以下的序列： hsa-miR-28-3p、hsa-miR-151a-3p、hsa-miR-1468-5p、hsa-miR-532-5p、 hsa-miR-17-3p和hsa-miR-30a-3p。根据本发明的试剂盒特别地可另外地包含用于检测至少一种miRNA序列的探针和/或引物，所述miRNA 序列具有选自以下的序列：hsa-miR-28、hsa-miR-151a、hsa-miR-1468、 hsa-miR-532、hsa-miR-17和hsa-miR-30a，和/或所述所述miRNA序列具有在每种情况下与这些序列有多达3个碱基、优选多达2个碱基、进一步优选1个碱基差异的序列，优选地，用于检测至少一种miRNA 序列的探针和/或引物，所述miRNA序列具有选自以下的序列： hsa-miR-28、hsa-miR-151a、hsa-miR-1468、hsa-miR-532、hsa-miR-17 和hsa-miR-30a。
根据某些实施方案，试剂盒包含用于检测以上序列中的2、3、4、 5、6、7、8、9、10、11、12或13种的探针和/或引物。
在此，探针和/或引物不受任何特定限制，并且可以例如包含寡聚体，所述寡聚体具有核苷酸序列(例如cDNA序列)并且与待检测的序列互补。
此外，还可能提供另外的探针和/或引物作为对照，例如与未患有 AD的患者相比，其表达谱没有变化的另外miRNA。还可能提供用于非特异性结合和/或杂交的对照。
根据某些实施方案，可将引物和/或探针及任选地对照应用于适合的底物。
根据某些实施方案，试剂盒还包含用于进行RT-PCR(特别是 qRT-PCR)的酶和/或试剂，这些不受任何特定限制。在此，试剂可以例如也涵盖标记(例如用于荧光标记和/或放射性核苷酸标记)。试剂盒还可以包含用于在PCR(优选qPCR和/或RT-PCR，特别是qRT-PCR)之前从miRNA进行cDNA合成的试剂。
在有意义的情况下，以上实施方案、配置和展开可以以任何方式相互组合。本发明的另外的可能的配置、展开和实施还涵盖本发明的特征的非明确陈述的组合，在上面描述或在下面关于示例性实施方案进行描述所述特征。特别地，本领域技术人员还将添加个别方面作为对本发明的特定基本形式的改进或补充。
下面将基于示例性实施方案进一步阐明本发明，然而所述示例性实施方案不限制本发明。
实施例1
在该实施例中，借助高通量测序作为公正技术检查来自个体的样品。对294名个体进行盲测多中心病例-对照研究，所述个体包含107 名AD患者、20名MCI患者、90名MS患者和77名年龄和性别的调整对照。使用下一代测序(NGS)以常规方式检查所有个体的 miRNome(即，微小RNA的全部)。在此，将AD患者和对照分成第一组群(其中54名AD患者和22名对照来自美国，首先对他们进行了测试)和第二复制组群，其中53名AD患者和55名对照来自德国大学医院。
当用294名个体进行NGS时，产生大约60亿条短RNA序列作为读出。从来自美国和德国的数据中剖析了AD组和对照组。在血液中共发现了586种miRNA。在美国组群中，AD样品和对照样品之间的表达中有210种miRNA被改变，并且在德国组群中，135种miRNA 被改变。在两项研究中，发现了69种miRNA的显著(p<0.00001)重叠。其中，96％的表达方向在两个组群中一致，并且曲线下面积(AUC)值显示出为0.92的高度显著的相关性(p<10–16)(95％置信区间(CI)为 0.87–0.95)。
表3中给出了本文发现的统计学上显著的miRNA，其可用于阿尔茨海默病的诊断。
标记中的miRNA似乎经由潜在的靶基因PARL(p＝0.004)和 SLC25A5(p＝0.002)参与线粒体功能障碍。
表3：与对照组比较的AD患者中表达水平显著不同的miRNA
对基于Wilcoxon-Mann-Whitney检验确定的两个所检查组群发现的另外的相关成熟miRNA序列如表4所示，在每种情况下发现其值来自于针对每个组群进行的一个Wilcoxon-Mann-Whitney检验。
表4：基于针对第一和第二组群的Wilcoxon-Mann-Whitney检验结果，与对照组相比的AD患者中具有不同表达水平的miRNA
实施例2
通过另外将其表达水平与MCI和MS(多发性硬化)患者的miRNA 表达水平进行比较来评估实施例1中发现的用于阿尔茨海默病的 miRNA的特异性。在表5中显示了与此相关的结果。
表5：与MCI和MS患者相比，在AD患者中具有显著不同的表达水平的miRNA
尽管来自实施例1的组的最显著AD miRNA在MS和AD之间也是失调的，MCI患者与AD患者更相似。
由于同一组的miRNA也能区分MCI、MS和AD，因此可以推断，所发现的标记中的miRNA对阿尔茨海默病具有特异性并因此可被用于该疾病的早期检测或诊断。
序列表
<110> 萨尔大学(Universitaet des Saarlandes)
<120> 借助多中心MIRNA谱的阿尔茨海默病中的特定标记
<130> 505-69 PCTCN
<150> EP 15201815.6
<151> 2015-12-22
<160> 84
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
gcugacuccu aguccagggc uc 22
<210> 2
<211> 21
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 2
uuucccuuuc cauccuggca g 21
<210> 3
<211> 23
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 3
cuacccucgg ucugcuuacc aca 23
<210> 4
<211> 19
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 4
ucucucugac uccauggca 19
<210> 5
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 5
uuaucagaau cuccaggggu ac 22
<210> 6
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 6
cugcccuagu cuagcugaag cu 22
<210> 7
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 7
uuucuauuuc ucaguggggc uc 22
<210> 8
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 8
cacuagauug ugagcuccug ga 22
<210> 9
<211> 21
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 9
cuagacugaa gcuccuugag g 21
<210> 10
<211> 21
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 10
cuccguuugc cuguuucgcu g 21
<210> 11
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 11
caugccuuga guguaggacc gu 22
<210> 12
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 12
acugcaguga aggcacuugu ag 22
<210> 13
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 13
cuuucagucg gauguuugca gc 22
<210> 14
<211> 98
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 14
acccaaaccc uaggucugcu gacuccuagu ccagggcucg ugauggcugg ugggcccuga 60
acgagggguc uggaggccug gguuugaaua ucgacagc 98
<210> 15
<211> 110
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 15
aaccauuagg gggcuguggu uugccagggc aggaggugga agggagcccc auuuacagug 60
guaacuuccu uucccuuucc auccuggcag gcuucagaga acuuuaccag 110
<210> 16
<211> 101
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 16
gcuggggcug ggugggugug gcaggcccac cuuggguaug caaagcucug acaguguuuc 60
acuugcuacc cucggucugc uuaccacacu cccaguucug c 101
<210> 17
<211> 66
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 17
aggauucugc cauaggaagc uuggagugga acugaccugc ccccuuucuc ucugacucca 60
uggcag 66
<210> 18
<211> 72
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 18
ggagcuuauc agaaucucca gggguacuuu auaauuucaa aaaguccccc aggugugauu 60
cugauuugcu uc 72
<210> 19
<211> 85
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 19
gggaagggcu ucagccaggc uagugcaguc ugcuuugugc caacacuggg gugaugacug 60
cccuagucua gcugaagcuu uuccc 85
<210> 20
<211> 70
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 20
agugagcaac ccagugggcu auggaaaugu guggaagaug gcauuucuau uucucagugg 60
ggcucuuacc 70
<210> 21
<211> 86
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 21
gguccuugcc cucaaggagc ucacagucua uugaguuacc uuucugacuu ucccacuaga 60
uugugagcuc cuggagggca ggcacu 86
<210> 22
<211> 90
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 22
uuuccugccc ucgaggagcu cacagucuag uaugucucau ccccuacuag acugaagcuc 60
cuugaggaca gggaugguca uacucaccuc 90
<210> 23
<211> 86
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 23
gguggguggu uucuccguuu gccuguuucg cugaugugca uucaacucau ucucagcaaa 60
auaagcaaau ggaaaauucg uccauc 86
<210> 24
<211> 91
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 24
cgacuugcuu ucucuccucc augccuugag uguaggaccg uuggcaucuu aauuacccuc 60
ccacacccaa ggcuugcaga agagcgagcc u 91
<210> 25
<211> 84
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 25
gucagaauaa ugucaaagug cuuacagugc agguagugau augugcaucu acugcaguga 60
aggcacuugu agcauuaugg ugac 84
<210> 26
<211> 71
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 26
gcgacuguaa acauccucga cuggaagcug ugaagccaca gaugggcuuu cagucggaug 60
uuugcagcug c 71
<210> 27
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 27
cuuucagucg gauguuuaca gc 22
<210> 28
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 28
aauguuggaa uccucgcuag ag 22
<210> 29
<211> 17
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 29
gcggggcugg gcgcgcg 17
<210> 30
<211> 20
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 30
gugcauugcu guugcauugc 20
<210> 31
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 31
ccaauauuac ugugcugcuu ua 22
<210> 32
<211> 23
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 32
ugagugugug ugugugagug ugu 23
<210> 33
<211> 21
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 33
ucagcuacua ccucuauuag g 21
<210> 34
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 34
aauugcacgg uauccaucug ua 22
<210> 35
<211> 23
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 35
ccggucccag gagaaccugc aga 23
<210> 36
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 36
ugagguagua gguugugugg uu 22
<210> 37
<211> 20
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 37
acuggacuug gagucagaaa 20
<210> 38
<211> 20
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 38
acugggcuug gagucagaag 20
<210> 39
<211> 23
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 39
agcuacauug ucugcugggu uuc 23
<210> 40
<211> 20
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 40
acuggacuug gagccagaag 20
<210> 41
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 41
uccgucucag uuacuuuaua gc 22
<210> 42
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 42
ugagguagua gguuguaugg uu 22
<210> 43
<211> 23
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 43
ccuccguguu accuguccuc uag 23
<210> 44
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 44
uuauaaagca augagacuga uu 22
<210> 45
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 45
uguccucuag ggccugcagu cu 22
<210> 46
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 46
cuauacgacc ugcugccuuu cu 22
<210> 47
<211> 21
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 47
ucacagugaa ccggucucuu u 21
<210> 48
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 48
ucucugggcc ugugucuuag gc 22
<210> 49
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 49
aaaaacugag acuacuuuug ca 22
<210> 50
<211> 20
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 50
aaaaguaauu gugguuuuug 20
<210> 51
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 51
aaaaguaauu gugguuuuug cc 22
<210> 52
<211> 20
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 52
aaaaguaauu gugguuuuug 20
<210> 53
<211> 21
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 53
aaaaguaauu gugguuuuug c 21
<210> 54
<211> 23
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 54
agcagcauug uacagggcua uca 23
<210> 55
<211> 21
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 55
uaaagugcug acagugcaga u 21
<210> 56
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 56
caaaagugau ugugguuuuu gc 22
<210> 57
<211> 23
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 57
agcagcauug uacagggcua uga 23
<210> 58
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 58
agagguagua gguugcauag uu 22
<210> 59
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 59
ugauauguuu gauauauuag gu 22
<210> 60
<211> 21
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 60
guuccugcug aacugagcca g 21
<210> 61
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 61
ugucuuacuc ccucaggcac au 22
<210> 62
<211> 23
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 62
aaaagugcuu acagugcagg uag 23
<210> 63
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 63
uacgucaucg uugucaucgu ca 22
<210> 64
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 64
ugugagguug gcauuguugu cu 22
<210> 65
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 65
uuuugugucu cccauucccc ag 22
<210> 66
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 66
ugagguagua guuugugcug uu 22
<210> 67
<211> 23
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 67
caaagugcuu acagugcagg uag 23
<210> 68
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 68
uacccauugc auaucggagu ug 22
<210> 69
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 69
ucuucaccug ccucugccug ca 22
<210> 70
<211> 21
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 70
uacaguacug ugauaacuga a 21
<210> 71
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 71
ugagguagga gguuguauag uu 22
<210> 72
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 72
uuggcugguc ucugcuccgc ag 22
<210> 73
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 73
cuggcccucu cugcccuucc gu 22
<210> 74
<211> 21
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 74
gaucucacuu uguugcccag g 21
<210> 75
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 75
ugagguagua gauuguauag uu 22
<210> 76
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 76
ugagguagua gguuguauag uu 22
<210> 77
<211> 23
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 77
cagugcaaua guauugucaa agc 23
<210> 78
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 78
uccccuucug caggccugcu gg 22
<210> 79
<211> 23
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 79
uaaagugcuu auagugcagg uag 23
<210> 80
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 80
uuccugggcu ucuccucugu ag 22
<210> 81
<211> 21
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 81
ucucucggcu ccucgcggcu c 21
<210> 82
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 82
ugagguagua aguuguauug uu 22
<210> 83
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 83
uucugccucu guccaggucc uu 22
<210> 84
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 84
ugagguagua guuuguacag uu 22

Claims (12)

1.用于诊断患者的阿尔茨海默病的方法，所述方法包括：
提供来自患者的血液样品，
创建来自所述血液样品的miRNA的表达谱，和
将至少一种miRNA的表达水平与参考水平进行比较，所述miRNA包含选自以下的序列：hsa-miR-345-5p、hsa-miR-5006-3p、hsa-miR-7848-3p、hsa-miR-6817-3p、hsa-miR-361-5p、hsa-miR-3157-3p和hsa-miR-4482-3p，和/或所述miRNA包含在每种情况下与这些序列有多达3个碱基、优选多达2个碱基、进一步优选1个碱基差异的序列，所述比较允许对阿尔茨海默病进行诊断。
2.如权利要求1所述的方法，其中另外将至少一种miRNA的表达水平与参考水平进行比较，所述miRNA包含选自以下的序列：hsa-miR-28-3p、hsa-miR-151a-3p、hsa-miR-1468-5p、hsa-miR-532-5p、hsa-miR-17-3p和hsa-miR-30a-3p，和/或所述miRNA包含在每种情况下与这些序列有多达3个碱基、优选多达2个碱基、进一步优选1个碱基差异的序列，所述比较允许对阿尔茨海默病进行诊断。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述患者是人。
4.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中在至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13种miRNA中观察到与参考水平相比的所述表达水平的变化，所述miRNA包含选自以下的序列：hsa-miR-345-5p、hsa-miR-5006-3p、hsa-miR-7848-3p、hsa-miR-6817-3p、hsa-miR-361-5p、hsa-miR-3157-3p、hsa-miR-4482-3p、hsa-miR-28-3p、hsa-miR-151a-3p、hsa-miR-1468-5p、hsa-miR-532-5p、hsa-miR-17-3p和hsa-miR-30a-3p，和/或所述miRNA包含在每种情况下与这些序列有多达3个碱基、优选多达2个碱基、进一步优选1个碱基差异的序列。
5.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述miRNA是选自以下的至少一种：hsa-miR-345、hsa-miR-5006、hsa-miR-7848、hsa-miR-6817、hsa-miR-361、hsa-miR-3157和hsa-miR-4482。
6.如权利要求2至5中任一项所述的方法，其中另外确定选自以下的至少一种miRNA的表达水平：hsa-miR-28、hsa-miR-151a、hsa-miR-1468、hsa-miR-532、hsa-miR-17和hsa-miR-30a。
7.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中创建所述表达谱包括核酸杂交、核酸扩增、聚合酶延伸、测序、质谱分析或其任何组合。
8.miRNA作为诊断阿尔茨海默病的标志物的用途，所述miRNA包含选自以下的序列：hsa-miR-345-5p、hsa-miR-5006-3p、hsa-miR-7848-3p、hsa-miR-6817-3p、hsa-miR-361-5p、hsa-miR-3157-3p和hsa-miR-4482-3p，和/或所述miRNA包含在每种情况下与这些序列有多达3个碱基、优选多达2个碱基、进一步优选1个碱基差异的序列。
9.如权利要求8所述的用途，其中所述miRNA是选自以下的至少一种：hsa-miR-345、hsa-miR-5006、hsa-miR-7848、hsa-miR-6817、hsa-miR-361、hsa-miR-3157和hsa-miR-4482。
10.用于在来自患者血液样品中诊断阿尔茨海默病的试剂盒，所述试剂盒包含：
用于检测至少一种miRNA序列的探针和/或引物，所述miRNA序列包含选自以下的序列：hsa-miR-345-5p、hsa-miR-5006-3p、hsa-miR-7848-3p、hsa-miR-6817-3p、hsa-miR-361-5p、hsa-miR-3157-3p和hsa-miR-4482-3p，和/或所述miRNA序列包含在每种情况下与这些序列有多达3个碱基、优选多达2个碱基、进一步优选1个碱基差异的序列。
11.如权利要求10所述的试剂盒，其还包含：
用于检测至少一种miRNA序列的探针和/或引物，所述miRNA序列包含选自以下的序列：hsa-miR-28-3p、hsa-miR-151a-3p、hsa-miR-1468-5p、hsa-miR-532-5p、hsa-miR-17-3p和hsa-miR-30a-3p，和/或所述miRNA序列包含在每种情况下与这些序列有多达3个碱基、优选多达2个碱基、进一步优选1个碱基差异的序列。
12.如权利要求10或11所述的试剂盒，其还包含用于进行RT-PCR的酶和/或试剂。
CN201680081938.8A 2015-12-22 2016-12-14 借助多中心mirna谱的阿尔茨海默病中的特定标记 Pending CN108884492A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP15201815.6A EP3184646B1 (de) 2015-12-22 2015-12-22 Spezifische signaturen in alzheimer durch multizentrische mirna-profile
EP15201815.6 2015-12-22
PCT/EP2016/081009 WO2017108535A1 (de) 2015-12-22 2016-12-14 Spezifische signaturen in alzheimer durch multizentrische mirna-profile

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN108884492A true CN108884492A (zh) 2018-11-23

Family

ID=55070738

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201680081938.8A Pending CN108884492A (zh) 2015-12-22 2016-12-14 借助多中心mirna谱的阿尔茨海默病中的特定标记

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20180371548A1 (zh)
EP (1) EP3184646B1 (zh)
CN (1) CN108884492A (zh)
ES (1) ES2734678T3 (zh)
WO (1) WO2017108535A1 (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111521592A (zh) * 2020-05-11 2020-08-11 深圳大学 一种信号放大的荧光检测体系、荧光生物传感器及其用途
CN111624179A (zh) * 2020-05-11 2020-09-04 深圳大学 荧光检测体系、荧光生物传感器及其用途
CN115245521A (zh) * 2021-04-28 2022-10-28 西比曼生物科技（上海）有限公司 含有干细胞胞外囊泡的滴鼻剂及其在治疗脑神经血管疾病中的应用

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111373052A (zh) 2017-09-05 2020-07-03 阿莫内塔诊断公司 非编码RNA(ncRNA)用于认知障碍的诊断
WO2019081497A1 (en) * 2017-10-25 2019-05-02 Hummingbird Diagnostics Gmbh MIARN AS BIOMARKERS OF ALZHEIMER'S DISEASE

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008153692A2 (en) * 2007-05-22 2008-12-18 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Microrna expression profiling of cerebrospinal fluid
WO2013022953A2 (en) * 2011-08-08 2013-02-14 Eugenia Wang Biomarker for alzheimer's disease and/or mild cognitively impairment, and use thereof
CN103620057A (zh) * 2011-04-18 2014-03-05 迪阿米尔有限责任公司 使用来自体液的miRNA来早期检测和监控轻度认知障碍(MCI)和阿尔茨海默病(AD)的方法
EP2733220A1 (en) * 2012-11-16 2014-05-21 Siemens Aktiengesellschaft Novel miRNAs as diagnostic markers
CN104981548A (zh) * 2012-11-16 2015-10-14 西门子公司 用于阿尔茨海默氏病的诊断性miRNA标志物

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009009457A1 (en) * 2007-07-06 2009-01-15 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Alzheimer's disease-specific micro-rna microarray and related methods
EP2496714B1 (en) * 2009-11-04 2016-08-31 DiamiR, LLC Methods of using micro-rna from bodily fluids for diagnosis and monitoring of mild cognitive impairment
RU2639509C2 (ru) * 2011-06-27 2017-12-21 Эйсай Ар Энд Ди Менеджмент Ко., Лтд. МикроРНК - БИОМАРКЕРЫ, УКАЗЫВАЮЩИЕ НА БОЛЕЗНЬ АЛЬЦГЕЙМЕРА
FR2986538B1 (fr) * 2012-02-06 2016-03-11 Centre Nat Rech Scient Utilisation du mir-199a-5p de ses cibles et/ou inhibiteurs pour le diagnostic, le pronostic et le traitement des pathologies fibroproliferatives

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008153692A2 (en) * 2007-05-22 2008-12-18 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Microrna expression profiling of cerebrospinal fluid
CN103620057A (zh) * 2011-04-18 2014-03-05 迪阿米尔有限责任公司 使用来自体液的miRNA来早期检测和监控轻度认知障碍(MCI)和阿尔茨海默病(AD)的方法
WO2013022953A2 (en) * 2011-08-08 2013-02-14 Eugenia Wang Biomarker for alzheimer's disease and/or mild cognitively impairment, and use thereof
EP2733220A1 (en) * 2012-11-16 2014-05-21 Siemens Aktiengesellschaft Novel miRNAs as diagnostic markers
CN104981548A (zh) * 2012-11-16 2015-10-14 西门子公司 用于阿尔茨海默氏病的诊断性miRNA标志物

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JUN-ICHI SATOH等: "MicroRNA-Seq Data Analysis Pipeline to Identify Blood Biomarkers for Alzheimer"s Disease from Public Data", 《BIOMARK INSIGHTS》 *
郑铁生: "《临床生物化学检验学习指导》", 30 November 2004, 中国医药科技出版社 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111521592A (zh) * 2020-05-11 2020-08-11 深圳大学 一种信号放大的荧光检测体系、荧光生物传感器及其用途
CN111624179A (zh) * 2020-05-11 2020-09-04 深圳大学 荧光检测体系、荧光生物传感器及其用途
CN115245521A (zh) * 2021-04-28 2022-10-28 西比曼生物科技（上海）有限公司 含有干细胞胞外囊泡的滴鼻剂及其在治疗脑神经血管疾病中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
US20180371548A1 (en) 2018-12-27
ES2734678T3 (es) 2019-12-11
EP3184646B1 (de) 2019-04-17
EP3184646A1 (de) 2017-06-28
WO2017108535A1 (de) 2017-06-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11414705B2 (en) Salivary biomarkers of brain injury
CN108884492A (zh) 借助多中心mirna谱的阿尔茨海默病中的特定标记
CN111910002A (zh) 食道癌的检测试剂盒或装置以及检测方法
KR20140044375A (ko) 알츠하이머병을 나타내는 마이크로rna 바이오마커들
CN111826444A (zh) 一种与胰腺癌相关的血清/血浆tsRNA标志物、探针及其应用
Fujiwara et al. Serum microRNA-126 and-223 as new-generation biomarkers for sarcoidosis in patients with heart failure
TWI571514B (zh) 評估罹患大腸直腸癌風險的方法
CA2962551C (en) Method for evaluating efficacy of chemoradiotherapy against squamous cell carcinoma
KR101289134B1 (ko) 유전성 샤르코-마리-투스 말초신경병증의 cmt4b3 아형에 대한 원인 유전자로서의 sbf1(mtmr5) 돌연변이 유전자 및 이를 이용한 상기 질병의 진단방법 및 진단용 조성물
WO2021230379A1 (ja) パーキンソン病の検出方法
JP7394441B2 (ja) 脳腫瘍を検査する方法
CN105861735A (zh) Rap1b在冠心病诊断中的应用
CN113699226A (zh) 一种ttn突变基因及扩张型心肌病检测试剂盒
CN108064273A (zh) 结直肠癌相关疾病的生物标志物
JP6616983B2 (ja) 軽度認知障害を検査する方法
KR20210157235A (ko) 장내 미생물을 이용한 신질환 위험도 예측 또는 진단용 조성물, 그를 이용한 진단키트, 정보제공방법 및 신질환 예방 또는 치료제 스크리닝 방법
CN114746551A (zh) 大肠癌诊断用标志物、辅助大肠癌的诊断的方法、收集数据以用于大肠癌诊断的方法、大肠癌的诊断试剂盒、大肠癌治疗药物、大肠癌的治疗方法、大肠癌的诊断方法
JPWO2020054474A1 (ja) 関節リウマチを検査する方法
CN117187389A (zh) 定量检测kcnn3、rab3b、cadps2及azgp1转录水平的成套试剂及其应用
KR20210021279A (ko) 고혈압 또는 비만의 예측 또는 진단용 조성물
KR20200002237A (ko) 비만 진단을 위한 마이크로RNA let-7a 또는 let-7f 바이오마커 및 이의 용도
JP2010029171A (ja) 統合失調症の診断方法
Kennerson et al. DO 5 A combination of linkage analysis and exome sequencing identifies a new gene for X-linked Charcot–Marie–Tooth neuropathy

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20181123

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication