CN108849520A - 一种菘蓝单倍体育种用花培诱导培养基及其配制方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种菘蓝单倍体育种用花培诱导培养基及其配制方法。该培养基由大量元素、微量元素、铁盐及络合剂、少量有机添加物、大量有机添加物、无机添加物、植物生长调节剂、植物活性提取液所组成。培养基的配制方法包括制备母液、制备植物活性提取液、配制混合培养液、配制培养基、调节pH、培养基分装与高压蒸汽灭菌、培养基内添加己酸二乙氨基乙醇酯等步骤。本发明所述的培养基具有高效率地诱导菘蓝花药愈伤组织、降低褐化的优点，可以大幅度地提高菘蓝花药培养效率，加快菘蓝花培育种进程。

Description

一种菘蓝单倍体育种用花培诱导培养基及其配制方法

技术领域

本发明涉及一种菘蓝单倍体育种用花培诱导培养基及其配制方法，具体涉及一种可以显著提高菘蓝花药培养效率的花药诱导培养基及其配制方法，属于药食同源植物培育技术领域。

背景技术

菘蓝（Isatis indigotica Fortune）是十字花科菘蓝属二年生草本植物，其干燥根入药，称为板蓝根，干燥叶入药，称为大青叶。菘蓝适应性较强，能耐寒，喜温暖怕水涝，在我国很多地区均有分布，主要栽培于河北、安徽、甘肃、黑龙江等省。菘蓝的药用价值很高，具有清热解毒、凉血消斑，利咽消肿等功效。主治流感、流脑、乙脑、肺炎、丹毒、热毒发斑、神昏吐衄、咽肿、痄腮、火眼、疮疹、舌绛紫暗、喉痹、烂喉丹痧、大头瘟疫、痈肿；可防治流行性乙型脑炎、急慢性肝炎、流行性腮腺炎、骨髓炎等症。板蓝根具有广泛的药理活性，不仅对特异性免疫、非特异性免疫、体液免疫和细胞免疫有一定的促进作用，还有降血脂、抗内毒素、抗病毒、抗肿瘤、抗炎、抗菌、清除自由基等作用。其使用也越来越广泛，以板蓝根为主要原料的产品层出不穷，如板蓝根冲剂、板蓝根针剂、三九感冒灵、康必得、蒲地蓝口服液等抗感冒和抗病毒类中成药等，因此板蓝根药材的市场需求量巨大。

菘蓝还具有较高的营养价值。与其他十字花科蔬菜相似，菘蓝茎叶含有丰富的矿质元素、维生素和多种营养成分，至少含有17种氨基酸，其中7种为人体必需的氨基酸，其总糖量、纤维素、谷氨酸含量、钙和钾含量较高，民间也有不少食谱以菘蓝为原材料。

中医素有“药食同源”之说，表明医药与饮食两者同源一脉。药膳即是这一概念的最好诠释。药膳是以药物和食物为原料，经过烹饪加工制成的一种具有食疗作用的膳食。它“寓医于食”，既将药物作为食物，又将食物赋以药用；既具有营养价值，又可防病治病、强身健体、延年益寿。因此，药膳是一种兼有药物功效和食品美味的特殊膳食，它可以使食用者得到美食享受，又在享受中，使其身体得到滋补，疾病得到治疗。菘蓝充分满足了药膳的要求，因此还可以将菘蓝开发为一种兼具营养和保健功效的药食同源的特种蔬菜，具有广阔的市场前景。

菘蓝主要靠种子进行繁殖，所以培育优质的种子是实现菘蓝大规模规范化生产的基本保证。菘蓝属异花授粉作物，其杂种优势明显，到目前为止，生产上使用的优良品种几乎全为自交不亲和系作亲本配制的一代杂种。但采用多代自交分离纯化选育自交不亲和系配制一代杂种，这种方法纯合速度慢，而且连续自交多代后存在植株衰退现象。另一方面由于菘蓝是药用植物，其育种方向应在保证有效成分含量高表达的基础上追求一般农艺性状，包括产量、抗性等，但采用常规育种手段创制菘蓝新种质的困难越来越大，迫切需要通过生物技术手段促进品种选育。目前，常用的生物技术育种方法有单倍体育种、转基因育种、胁迫法育种等，其中单倍体育种方法中的通过采用花药培养得到单倍体植株后经加倍产生纯合二倍体的花培育种具有极早稳定分离后代、缩短育种年限、简化选育程序等优点，但是菘蓝单倍体育种程序还未建立，菘蓝单倍体培养研究尚处于起步阶段。

将生物技术育种结合于常规育种中，已成为当代作物遗传育种的重要特点。应用花药培养降低作物倍性获得的单倍体植株，无论是在作物的育种，还是在遗传图谱构建、重要性状QTL定位及基因的克隆筛选等分子生物学研究都具有重要应用价值。目前，关于菘蓝组织培养及植株再生体系建立的文献较多，但关于菘蓝花药培养的研究较少，而且还存在着愈伤组织、不定芽诱导率低、玻璃化现象严重等问题，这些问题严重的影响着菘蓝花药培养技术的进一步发展。因此，加快菘蓝花培育种机理研究，开发出花药愈伤诱导率分化率更高的培养基，具有重要的产业意义。

发明内容

本发明的目的是针对目前菘蓝花培育种中花药诱导愈伤组织效率较低的现状，提供了一种菘蓝花药诱导培养基及配制方法。

本发明采用的技术方案如下：

一种菘蓝单倍体育种用花培诱导培养基及其配制方法，其特征在于，诱导培养基的配方如下：

大量元素：KNO₃ 2300~2500mg/L，NH₄NO₃ 1400~1700mg/L，KH₂PO₄ 550~600mg/L，MgSO₄·7H₂O 360~400mg/L，CaCl₂·2H₂O 410~460mg/L；

微量元素：MnSO₄·4H₂O 20~25mg/L，ZnSO₄·7H₂O 7~9mg/L，H₃BO₃ 11~14mg/L，KI 0.6~0.8mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.022~0.026mg/L，CoCl₂·6H₂O 0.022~0.026mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O0.20~0.30mg/L；

铁盐及络合剂：FeSO₄·7H₂O 53~58mg/L，Na₂-EDTA 60~64mg/L；

少量有机添加物：肌醇45~55mg/L，谷氨酰胺40~60 mg/L，脯氨酸14~17 mg/L，丝氨酸22~25mg/L，维生素B1 0.2~0.5mg/L，维生素B6 0.4~0.6mg/L，维生素C 6~8mg/L，烟酸0.45~0.65mg/L，核苷0.33~0.37mg/L；

大量有机添加物：山梨醇5~7g/L，蔗糖15~20g/L，麦芽糖10~13g/L，植物凝胶2~4g/L；

无机添加物：N-甲基-N-亚硝基脲3.0~3.3 mg/L，硅藻土0.2~0.5g/L；

植物生长调节剂：己酸二乙氨基乙醇酯 0.3~0.5mg/L，NAA 0.7~1.0mg/L，肉桂酸 0.2~0.4mg/L；

植物活性提取液：胡萝卜提取液30~36mL/L，西瓜汁20~27mL/L；

诱导培养基的配制方法包括如下步骤：

（1）制备母液

大量元素、微量元素、铁盐及络合剂母液分别制备成20、200、200倍的母液；少量有机添加物中肌醇单独制备成100倍母液，其它制备成200倍母液；己酸二乙氨基乙醇酯称量好后直接用蒸馏水定容，NAA和肉桂酸分别称量好后先用少量无水乙醇预溶，然后用热的蒸馏水定容，己酸二乙氨基乙醇酯、NAA和肉桂酸均制备成质量浓度为0.1mg/mL的母液；各种母液制备完后分别用玻璃瓶贮存，铁盐及络合剂母液需用棕色玻璃瓶装，所用母液均置于0~4℃冷藏保存备用；

（2）制备植物活性提取液

胡萝卜提取液的制备：将胡萝卜洗净后称取45g，带皮切成碎块，加入100ml蒸馏水，煮沸20min后捣碎，用4～6层纱布过滤静置，待沉淀后取上清液；

西瓜汁的提取：将新鲜西瓜瓜瓤取出切成小块，放入榨汁机中榨成汁，稍静置后过滤至密封塑料瓶中，0~4℃冷藏保存备用；

（3）配制混合培养液

先在烧杯中加入一些蒸馏水，分别量取所需量的大量元素、微量元素、铁盐及络合剂、肌醇、其他少量有机添加物、NAA和肉桂酸的母液、胡萝卜提取液和西瓜汁加入烧杯中，再将称量好的山梨醇、蔗糖、麦芽糖、N-甲基-N-亚硝基脲、硅藻土加入烧杯中，搅拌溶解；

（4）配制培养基

用天平称取所需的植物凝胶，放入烧杯中，再加入适量的蒸馏水，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状，然后再将上述配好的混合培养液加入到煮沸的植物凝胶中，最后加蒸馏水定容至1 L，搅拌均匀；

（5）调节pH

用滴管吸取物质的量浓度为0.5mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入制备好的培养基中，边滴边搅拌，并随时用酸度计测培养基的pH，调节培养基的pH为5.6~6.0；

（6）培养基分装与高压蒸汽灭菌

待制备好的培养基稍微冷却后，按照40ml /瓶将培养基分装入100ml三角瓶中，塞上胶塞，包上锡箔纸，然后将三角瓶置于温度为121℃、压力为15kPa高压蒸汽条件下灭菌20min，而后降温至55℃取出，置于超净工作台中；

（7）培养基内添加己酸二乙氨基乙醇酯

按照40ml/瓶培养基的用量计算需加入的己酸二乙氨基乙醇酯母液用量，无菌操作下加入已灭菌的己酸二乙氨基乙醇酯母液，趁热摇匀，密封后自然冷却。

所述诱导培养基的最优配方如下：

大量元素：KNO₃ 2400mg/L，NH₄NO₃ 1550mg/L，KH₂PO₄ 570mg/L，MgSO₄·7H₂O 380mg/L，CaCl₂·2H₂O 440mg/L；

微量元素：MnSO₄·4H₂O 22mg/L，ZnSO₄·7H₂O 8mg/L，H₃BO₃ 13mg/L，KI 0.7mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.024mg/L，CoCl₂·6H₂O 0.024mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.26mg/L；

铁盐及络合剂：FeSO₄·7H₂O 558mg/L，Na₂-EDTA 62mg/L；

少量有机添加物：肌醇48mg/L，谷氨酰胺50mg/L，脯氨酸15 mg/L，丝氨酸23.5mg/L，维生素B1 0.3mg/L，维生素B6 0.5mg/L，维生素C 7mg/L，烟酸0.55mg/L，核苷0.34mg/L；

大量有机添加物：山梨醇6g/L，蔗糖17g/L，麦芽糖11g/L，植物凝胶3g/L；

无机添加物：N-甲基-N-亚硝基脲3.1 mg/L，硅藻土0.35g/L；

植物生长调节剂：己酸二乙氨基乙醇酯 0.4mg/L，NAA 0.8mg/L，肉桂酸 0.3mg/L；

植物活性提取液：胡萝卜提取液34mL/L，西瓜汁25mL/L。

所述步骤（7）中己酸二乙氨基乙醇酯母液的灭菌方法为：使用孔径为0.22μm的无菌微孔滤膜过滤灭菌。

本发明的有益效果：

（1）本发明通过创新性添加核苷、山梨醇、N-甲基-N-亚硝基脲、己酸二乙氨基乙醇酯、肉桂酸、硅藻土等成分，可以有效提高花药愈伤组织诱导率，并且获得愈伤组织质量好，褐化率低，从而显著提高菘蓝花药培养效率。

（2）本发明首次建立了一种菘蓝花培诱导培养基及其配制方法，为菘蓝单倍体育种方法的建立打下了坚实的基础。

具体实施方式

下面结合具体实施案例对本发明的有益效果作进一步说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

2017年4月中旬，选择江苏省涟水县中药材种植基地栽培的甘蓝叶型菘蓝作为花药供体进行诱导培养，其详细步骤如下：

本实施例使用的诱导培养基的配方为：

大量元素：KNO₃ 2400mg/L，NH₄NO₃ 1550mg/L，KH₂PO₄ 570mg/L，MgSO₄·7H₂O 380mg/L，CaCl₂·2H₂O 440mg/L；

微量元素：MnSO₄·4H₂O 22mg/L，ZnSO₄·7H₂O 8mg/L，H₃BO₃ 13mg/L，KI 0.7mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.024mg/L，CoCl₂·6H₂O 0.024mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.26mg/L；

铁盐及络合剂：FeSO₄·7H₂O 558mg/L，Na₂-EDTA 62mg/L；

少量有机添加物：肌醇48mg/L，谷氨酰胺50mg/L，脯氨酸15 mg/L，丝氨酸23.5mg/L，维生素B1 0.3mg/L，维生素B6 0.5mg/L，维生素C 7mg/L，烟酸0.55mg/L，核苷0.34mg/L；

大量有机添加物：山梨醇6g/L，蔗糖17g/L，麦芽糖11g/L，植物凝胶3g/L；

无机添加物：N-甲基-N-亚硝基脲3.1 mg/L，硅藻土0.35g/L；

植物生长调节剂：己酸二乙氨基乙醇酯 0.4mg/L，NAA 0.8mg/L，肉桂酸 0.3mg/L；

植物活性提取液：胡萝卜提取液34mL/L，西瓜汁25mL/L；

根据以上配方制备诱导培养基：

（1）制备母液

大量元素、微量元素、铁盐及络合剂母液分别制备成20、200、200倍的母液；少量有机添加物中肌醇单独制备成100倍母液，其它制备成200倍母液；己酸二乙氨基乙醇酯称量好后直接用蒸馏水定容，NAA和肉桂酸分别称量好后先用少量无水乙醇预溶，然后用热的蒸馏水定容，己酸二乙氨基乙醇酯、NAA和肉桂酸均制备成质量浓度为0.1mg/mL的母液；各种母液制备完后分别用玻璃瓶贮存，铁盐及络合剂母液需用棕色玻璃瓶装，所用母液均置于3℃冷藏保存备用；

（2）制备生理活性物质

胡萝卜提取液的制备：将胡萝卜洗净后称取45g，带皮切成碎片，加入100ml蒸馏水，煮沸20min，用4～6层纱布过滤静置，待沉淀后取上清液；

西瓜汁的提取：将新鲜西瓜瓜瓤取出切成小块，放入榨汁机中榨成汁，稍静置后过滤至密封塑料瓶中，3℃冷藏保存备用；

（3）配制混合培养液

先在烧杯中加入一些蒸馏水，分别量取所需量的大量元素、微量元素、铁盐及络合剂、肌醇、其他少量有机添加物、NAA和肉桂酸的母液、胡萝卜提取液和西瓜汁加入烧杯中，再将称量好的蔗糖、麦芽糖、山梨醇、N-甲基-N-亚硝基脲、硅藻土加入烧杯中，搅拌溶解；

（4）配制培养基

用天平称取所需的植物凝胶，放入烧杯中，再加入适量的蒸馏水，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状，然后再将上述配好的混合培养液加入到煮沸的植物凝胶中，最后加蒸馏水定容至1 L，搅拌均匀；

（5）调节pH

用滴管吸取物质的量浓度为0.5mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入制备好的培养基中，边滴边搅拌，并随时用酸度计测培养基的pH，调节培养基的pH为5.8；

（6）培养基分装与高压蒸汽灭菌

待制备好的培养基稍微冷却后，按照40ml /瓶将培养基分装入100ml三角瓶中，塞上胶塞，包上锡箔纸，然后将三角瓶置于温度为121℃、压力为15kPa高压蒸汽条件下灭菌20min，而后降温至53℃左右取出，置于超净工作台中；

（7）培养基内添加己酸二乙氨基乙醇酯

先将己酸二乙氨基乙醇酯母液用孔径为0.22μm的无菌微孔滤膜过滤灭菌，然后按照40ml /瓶培养基的用量计算需加入的己酸二乙氨基乙醇酯母液用量，无菌操作下加入已灭菌的己酸二乙氨基乙醇酯母液，趁热摇匀，密封后自然冷却。

2017年4月选择晴天上午9:00-10:00采集菘蓝未开花的花蕾，将采集的花蕾先置于4℃低温预处理3天。接种前将花蕾用自来水冲洗10～20min，在超净工作台无菌条件下，先用75%酒精消毒2min，再用0.1%升汞+2-3滴吐温-80消毒15min，无菌水冲洗3～4次后，用接种针从花蕾中挑取带有花丝的花药，接种到菘蓝花药诱导培养基上。将培养基置于温度24℃、光照强度3000lx、每天光照14h条件下，培养28天，统计花药愈伤组织诱导率，愈伤组织诱导率（%）=产生愈伤组织的花药数（枚）/接种花药数（枚）*100%；再培养14天，统计愈伤组织褐化率，愈伤组织褐化率（%）=褐化的愈伤组织数（枚）/产生的愈伤组织总数*100%。

实施例2

本实施例使用的诱导培养基的配方为：MS培养基+6-BA 0.5mg/L+NAA 1.0mg/L，pH为5.8（该配方来自李焘等《菘蓝花药培养及单倍体的诱导》），花药来源、培养方法同实施例1，统计愈伤组织诱导率及褐化率。

实施例3

本实施例使用的诱导培养基的配方为：B5培养基+2 ,4-D 2.0mg /L +KT 2.0mg /L+6%蔗糖，pH为5.8（该配方来自张恩慧，欧承刚等《甘蓝花药培养胚状体诱导形成影响因子研究》），花药来源、培养方法同实施例1，统计愈伤组织诱导率及褐化率。

实施例4

本实施例使用的诱导培养基的配方为：MS培养基+3%蔗糖+2,4-D 0.5mg/L+BA 1.0 mg/L，pH为5.8（该配方来自陈国菊，雷建军等《花椰菜花药培养研究》），花药来源、培养方法同实施例1，统计愈伤组织诱导率及褐化率。

实施例5

本实施例使用的诱导培养基的配方为：MS培养基+BA 3.0mg/L+NAA 0.3mg/L，pH为5.8（该配方来自黄普乐，吴伟锋等《羽衣甘蓝花药培养研究》），花药来源、培养方法同实施例1，统计愈伤组织诱导率及褐化率。

以上实施例2~5中，实施例2对比了前人使用的菘蓝花药诱导培养基，实施例3~5引用了其他十字花科植物花药诱导常用的培养基配方。实施例2~5的培养基制备方法参照实施例1，根据各自培养基配方先分别制备大量元素、微量元素、铁盐及络合剂、有机添加物、植物生长调节剂的母液，再制备混合培养液，加入琼脂后调节pH，最后分装灭菌。

将各个实施例愈伤组织诱导率及褐化率结果统计如表1。

从以上统计的结果可以看出，实施例1即本发明提供的菘蓝花药诱导培养基对甘蓝叶型菘蓝愈伤组织的诱导率达到了28.33%，显著高于实施例2~5，而且愈伤组织褐化率在几个实施例中也是最低的，说明本发明提供的培养基配方更适合菘蓝花药培养，而且具有愈伤组织诱导率高、获得的愈伤组织褐化低、质量好的优点，对于推动菘蓝花培育种有重要意义。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (3)

1.一种菘蓝单倍体育种用花培诱导培养基及其配制方法，其特征在于，诱导培养基的配方如下：

大量元素：KNO₃ 2300~2500mg/L，NH₄NO₃ 1400~1700mg/L，KH₂PO₄ 550~600mg/L，MgSO₄·7H₂O 360~400mg/L，CaCl₂·2H₂O 410~460mg/L；

微量元素：MnSO₄·4H₂O 20~25mg/L，ZnSO₄·7H₂O 7~9mg/L，H₃BO₃ 11~14mg/L，KI 0.6~0.8mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.022~0.026mg/L，CoCl₂·6H₂O 0.022~0.026mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O0.20~0.30mg/L；

铁盐及络合剂：FeSO₄·7H₂O 53~58mg/L，Na₂-EDTA 60~64mg/L；

少量有机添加物：肌醇45~55mg/L，谷氨酰胺40~60 mg/L，脯氨酸14~17 mg/L，丝氨酸22~25mg/L，维生素B1 0.2~0.5mg/L，维生素B6 0.4~0.6mg/L，维生素C 6~8mg/L，烟酸0.45~0.65mg/L，核苷0.33~0.37mg/L；

大量有机添加物：山梨醇5~7g/L，蔗糖15~20g/L，麦芽糖10~13g/L，植物凝胶2~4g/L；

无机添加物：N-甲基-N-亚硝基脲3.0~3.3 mg/L，硅藻土0.2~0.5g/L；

植物生长调节剂：己酸二乙氨基乙醇酯 0.3~0.5mg/L，NAA 0.7~1.0mg/L，肉桂酸 0.2~0.4mg/L；

植物活性提取液：胡萝卜提取液30~36mL/L，西瓜汁20~27mL/L；

诱导培养基的配制方法包括如下步骤：

（1）制备母液

大量元素、微量元素、铁盐及络合剂母液分别制备成20、200、200倍的母液；少量有机添加物中肌醇单独制备成100倍母液，其它制备成200倍母液；己酸二乙氨基乙醇酯称量好后直接用蒸馏水定容，NAA和肉桂酸分别称量好后先用少量无水乙醇预溶，然后用热的蒸馏水定容，己酸二乙氨基乙醇酯、NAA和肉桂酸均制备成质量浓度为0.1mg/mL的母液；各种母液制备完后分别用玻璃瓶贮存，铁盐及络合剂母液需用棕色玻璃瓶装，所用母液均置于0~4℃冷藏保存备用；

（2）制备植物活性提取液

胡萝卜提取液的制备：将胡萝卜洗净后称取45g，带皮切成碎块，加入100ml蒸馏水，煮沸20min后捣碎，用4～6层纱布过滤静置，待沉淀后取上清液；

西瓜汁的提取：将新鲜西瓜瓜瓤取出切成小块，放入榨汁机中榨成汁，稍静置后过滤至密封塑料瓶中，0~4℃冷藏保存备用；

（3）配制混合培养液

先在烧杯中加入一些蒸馏水，分别量取所需量的大量元素、微量元素、铁盐及络合剂、肌醇、其他少量有机添加物、NAA和肉桂酸的母液、胡萝卜提取液和西瓜汁加入烧杯中，再将称量好的山梨醇、蔗糖、麦芽糖、N-甲基-N-亚硝基脲、硅藻土加入烧杯中，搅拌溶解；

（4）配制培养基

用天平称取所需的植物凝胶，放入烧杯中，再加入适量的蒸馏水，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状，然后再将上述配好的混合培养液加入到煮沸的植物凝胶中，最后加蒸馏水定容至1 L，搅拌均匀；

（5）调节pH

用滴管吸取物质的量浓度为0.5mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入制备好的培养基中，边滴边搅拌，并随时用酸度计测培养基的pH，调节培养基的pH为5.6~6.0；

（6）培养基分装与高压蒸汽灭菌

待制备好的培养基稍微冷却后，按照40ml /瓶将培养基分装入100ml三角瓶中，塞上胶塞，包上锡箔纸，然后将三角瓶置于温度为121℃、压力为15kPa高压蒸汽条件下灭菌20min，而后降温至55℃取出，置于超净工作台中；

（7）培养基内添加己酸二乙氨基乙醇酯

按照40ml/瓶培养基的用量计算需加入的己酸二乙氨基乙醇酯母液用量，无菌操作下加入已灭菌的己酸二乙氨基乙醇酯母液，趁热摇匀，密封后自然冷却。

2.根据权利要求1所述的一种菘蓝单倍体育种用花培诱导培养基及其配制方法，其特征在于，所述诱导培养基的最优配方如下：

大量元素：KNO₃ 2400mg/L，NH₄NO₃ 1550mg/L，KH₂PO₄ 570mg/L，MgSO₄·7H₂O 380mg/L，CaCl₂·2H₂O 440mg/L；

微量元素：MnSO₄·4H₂O 22mg/L，ZnSO₄·7H₂O 8mg/L，H₃BO₃ 13mg/L，KI 0.7mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.024mg/L，CoCl₂·6H₂O 0.024mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.26mg/L；

铁盐及络合剂：FeSO₄·7H₂O 558mg/L，Na₂-EDTA 62mg/L；

少量有机添加物：肌醇48mg/L，谷氨酰胺50mg/L，脯氨酸15 mg/L，丝氨酸23.5mg/L，维生素B1 0.3mg/L，维生素B6 0.5mg/L，维生素C 7mg/L，烟酸0.55mg/L，核苷0.34mg/L；

大量有机添加物：山梨醇6g/L，蔗糖17g/L，麦芽糖11g/L，植物凝胶3g/L；

无机添加物：N-甲基-N-亚硝基脲3.1 mg/L，硅藻土0.35g/L；

植物生长调节剂：己酸二乙氨基乙醇酯 0.4mg/L，NAA 0.8mg/L，肉桂酸 0.3mg/L；

植物活性提取液：胡萝卜提取液34mL/L，西瓜汁25mL/L。

3.根据权利要求1所述的一种菘蓝单倍体育种用花培诱导培养基及其配制方法，其特征在于，所述步骤（7）中己酸二乙氨基乙醇酯母液的灭菌方法为：使用孔径为0.22μm的无菌微孔滤膜过滤灭菌。