CN108849521A - 一种提高菘蓝花培效率的分化培养基及其制备流程 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种提高菘蓝花培效率的分化培养基及其制备流程。该分化培养基的组分包括大量元素、微量元素、铁盐、有机成分、天然活性物质、无机物、碳源、凝固剂、植物激素。培养基的制备按照制备母液、制备天然活性物、配制混合培养液、溶解凝固剂和碳源、调节pH、培养基分装与高压蒸汽灭菌、培养基内添加四甲基戊二酸这一流程进行。采用本发明后能够提高菘蓝花药愈伤组织绿苗分化率、降低白化率，从而可以显著提高菘蓝花药培养效率，为菘蓝新品种选育提供有力的手段。

Description

一种提高菘蓝花培效率的分化培养基及其制备流程

技术领域

本发明涉及药用植物培育技术领域，尤其涉及一种可以显著提高菘蓝花培效率的花药分化培养基及其制备流程。

背景技术

菘蓝（Isatis indigotica Fortune ）是十字花科菘蓝属二年生草本植物，其茎直立，绿色，顶部多分枝，植株光滑无毛，带白粉霜。菘蓝原产于中国，分布较广，主要分布在内蒙古、河北、安徽、甘肃、黑龙江等省，在我国具有悠久的栽培药用历史，是我国传统中药材。《中国药典》2015年版收载菘蓝干燥根为板蓝根，叶为大青叶，具有清热解毒，凉血利咽之功效，为常用中药之一。研究表明板蓝根和大青叶化学成分相当复杂，目前已经分离得到的有吲哚类化合物、芥子苷类化合物、含硫类化合物、木脂素类化合物、有机酸类化合物等，由于这些化学成分的多样性以及成分之间的相互作用，决定了其药理活性的多样性。现代药理研究证实，板蓝根和大青叶不仅具有抗病毒、抗菌抑菌、抗内毒素的常规作用，还具有免疫增强、抗肿瘤、降血脂、清除自由基等特殊作用。菘蓝如今是40种大宗药材之一，主治感冒发热、发斑、发疹、咽喉肿痛、流行性性脑炎、乙型脑炎、肝炎、丹毒等，由于其药用广泛，药效独特，毒副作用较少，是一种市场需求量大且长期畅销的药材，因此种植菘蓝前景广阔，经济效益巨大。

除药用价值外，菘蓝还具有工业价值和较高的营养价值。菘蓝鲜叶可提取蓝色染料，种子榨油供工业用。此外研究表明菘蓝茎叶含有丰富的矿质元素、生物素和多种营养成分，至少含有17种氨基酸，其中7种为人体必需的氨基酸，其总糖量、纤维素、谷氨酸含量、钙和钾含量较高，对人体健康十分有益，因此具有较高的食用价值。

中医素有“药食同源”之说，表明医药与饮食两者同源一脉。药膳即是这一概念的最好诠释。药膳是以药物和食物为原料，经过烹饪加工制成的一种具有食疗作用的膳食。它“寓医于食”，既将药物作为食物，又将食物赋以药用；既具有营养价值，又可防病治病、强身健体、延年益寿。因此，药膳是一种兼有药物功效和食品美味的特殊膳食，它可以使食用者得到美食享受，又在享受中，使其身体得到滋补，疾病得到治疗。菘蓝充分满足了药膳的要求，因此还可以将菘蓝开发为一种兼具营养和保健功效的药食同源的特种蔬菜，具有广阔的市场前景。

菘蓝主要靠种子进行繁殖，其种质资源较为丰富，由于长期栽培形成很多地方品种，其在植株形态、叶片、色泽、种子、果实的形状大小存在一定差异。但是由于这些地方品种长期只种不选，自留自用，产量和品质大大降低。因此培育高产、优质、遗传性状稳定的新品种是当务之急。杂交育种是菘蓝培育新品种的常规手段，但是这种方法育种过程缓慢且杂交后代会出现性状分离，获得的菘蓝品质和产量不稳定。生物技术是以生物体系或者生物工程原理生产生物产品、培育新品种的综合技术。近年来，现代生物技术在药用植物育种方面广泛运用，常用的生物技术育种方法有单倍体育种、诱变育种、转基因育种、胁迫法育种等，将生物技术育种结合于常规育种中，已成为当代作物遗传育种的重要特点。其中单倍体育种方法具有极早稳定分离后代、缩短育种年限、简化选育程序等优点，但是该方法在菘蓝育种方面还未得到广泛的应用。

单倍体育种常用花药进行离体培养，该方法是利用植物组织培养技术，把发育到一定阶段的花药，通过无菌操作技术，接种在人工培养基上以改变花药内花粉粒的发育程序，诱导其形成愈伤组织，随后使愈伤组织分化成单倍体植株，再通过某种手段使染色体组加倍，从而使植物恢复正常染色体数的过程。目前关于菘蓝组织培养及植株再生体系建立的文献较多，但关于菘蓝花药培养的研究较少，而且还存在着愈伤组织、不定芽分化率低、玻璃化现象严重等问题，这些问题严重的影响着菘蓝花药培养技术的进一步发展。通过研究我们发现培养基组分是影响花培效率的一个很重要的因素，因此，开发出提高菘蓝花药诱导率和分化率的培养基，对于加快菘蓝新品种选育具有重要的实用价值。

发明内容

本发明的目的是针对目前菘蓝花培育种中愈伤组织绿苗分化效率较低的现状，提供了一种菘蓝分化培养基及制备流程。

本发明采用的技术方案如下：

一种提高菘蓝花培效率的分化培养基及其制备流程，其特征在于，分化培养基以1L计，组成为：

大量元素：KNO₃ 1730~2050mg，NaH₂PO₄·H₂O 420~480mg，(NH₄)₂SO₄ 133~154mg，MgSO₄·7H₂O 495~515mg，Ca(NO₃)₂·4H₂O 300~340mg；

微量元素：MnSO₄·4H₂O 10~14mg，ZnSO₄·7H₂O 2.5~3.5mg，H₃BO₃ 5~7mg，KI 0.6~0.8mg，CuSO₄·5H₂O 0.022~0.026mg，CoCl₂·6H₂O 0.022~0.026mg，Na₂MoO₄·2H₂O 0.21~0.24mg；

铁盐：FeSO₄·7H₂O 25~29mg，Na₂-EDTA 34~38mg；

有机成分：肌醇47~56mg，D-蛋氨酸3~5 mg，甘氨酸3~5mg，L-天门冬酰胺19~25mg，盐酸硫胺素0.1~0.3mg，盐酸吡哆醇 0.4~0.6mg，生物素1.2 ~1.8mg，烟酸0.33~0.41mg，泛酸0.45~0.50mg；

天然活性物质：胡萝卜提取液60~65mL，生姜汁12~18mL；

无机物：N-甲基-N-亚硝基脲1.4~1.6 mg，AgNO₃ 6~9 mg，硅藻土0.2~0.5g；

碳源：蔗糖17~24g，麦芽糖9~12g；

凝固剂：植物凝胶2~4g；

植物激素：四甲基戊二酸 0.8~1.1mg，苯肽胺酸钠 0.3~0.5mg，KT-30 0.2~0.4mg；

余量为蒸馏水；

该分化培养基的制备流程包括以下步骤：

（1）制备母液

大量元素制备成20倍的母液；微量元素制备成200倍的母液，其中Na₂MoO₄·2H₂O先用蒸馏水单独溶解，再倒入其他微量元素母液中；铁盐制备成200倍的母液，FeSO₄·7H₂O 和Na₂-EDTA先分别加热搅拌溶解，然后将两种溶液混合；肌醇单独制备成100倍母液，其它有机成分制备成200倍母液；四甲基戊二酸和苯肽胺酸钠称量好后直接用蒸馏水定容，KT-30先用少量无水乙醇预溶，然后再用蒸馏水定容，三种植物激素均制备成质量浓度为0.1mg/mL的母液；以上各种母液制备完后分别用玻璃瓶贮存，铁盐母液需用棕色玻璃瓶装，所用母液均置于0~4℃冷藏保存备用；

（2）制备天然活性物质

胡萝卜提取液的制备：将胡萝卜洗净后切成小块，加水煮沸20min后冷却，包于纱布内挤压出汁液，沉淀后取上清液，置于0~4℃冷藏保存备用；

生姜汁的提取：将生姜块洗净后先放在冰箱中冷藏30min，再将生姜切成小块研磨成泥状，包于纱布内挤压出汁液，稍静置后过滤至密封容器中，0~4℃冷藏保存备用；

（3）配制混合培养液

先在烧杯中加入一些蒸馏水，分别量取所需量的大量元素、微量元素、铁盐、肌醇、其他有机成分的母液加入烧杯中，再量取KT-30和苯肽胺酸钠的母液、胡萝卜提取液和生姜汁加入烧杯中，再将称量好的N-甲基-N-亚硝基脲、AgNO₃硅藻土加入烧杯中，搅拌溶解；

（4）溶解凝固剂和碳源

用天平称取所需的植物凝胶、蔗糖、麦芽糖放入烧杯中，再加入适量的蒸馏水，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状，然后再将上述配好的混合培养液加入到煮沸的植物凝胶中，最后加蒸馏水定容至1 L，搅拌均匀；

（5）调节pH

用滴管吸取物质的量浓度为0.5mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入制备好的培养基中，边滴边搅拌，并随时用酸度计测培养基的pH，调节培养基的pH为5.6~6.0；

（6）培养基分装与高压蒸汽灭菌

待制备好的培养基稍微冷却后，按照40ml /瓶将培养基分装入100ml三角瓶中，塞上胶塞，包上锡箔纸，然后将三角瓶置于温度为121℃、压力为15kPa高压蒸汽条件下灭菌20min，而后降温至55℃取出，置于超净工作台中；

（7）培养基内添加四甲基戊二酸

按照40ml /瓶培养基的用量计算需加入的四甲基戊二酸母液用量，无菌操作下加入已灭菌的四甲基戊二酸母液，趁热摇匀，密封后自然冷却。

所述分化培养基以1L计，最佳配方如下：

大量元素：KNO₃ 1960mg，NaH₂PO₄·H₂O 455mg，(NH₄)₂SO₄ 147mg，MgSO₄·7H₂O 500mg，Ca(NO₃)₂·4H₂O 320mg；

微量元素：MnSO₄·4H₂O 12mg，ZnSO₄·7H₂O 3mg，H₃BO₃ 6mg，KI 0.7mg，CuSO₄·5H₂O0.024mg，CoCl₂·6H₂O 0.025mg，Na₂MoO₄·2H₂O 0.22mg；

铁盐：FeSO₄·7H₂O 27mg，Na₂-EDTA 36mg；

有机成分：肌醇51mg，D-蛋氨酸4mg，甘氨酸4mg，L-天门冬酰胺23mg，盐酸硫胺素0.2mg，盐酸吡哆醇 0.5mg，生物素1.5mg，烟酸0.38mg，泛酸0.47mg；

天然活性物质：胡萝卜提取液63mL，生姜汁15mL；

无机物：N-甲基-N-亚硝基脲1.5 mg，AgNO₃ 7mg，硅藻土0.4g；

碳源：蔗糖21g，麦芽糖10g；

凝固剂：植物凝胶3g；

植物激素：四甲基戊二酸 1.0mg，苯肽胺酸钠 0.4mg，KT-30 0.3mg；

余量为蒸馏水。

所述步骤（7）中四甲基戊二酸母液的灭菌方法为：使用孔径为0.22μm的无菌微孔滤膜过滤灭菌。

本发明的有益效果：

（1）本发明通过调节培养基组分的配比，并创新性添加一些有机成分、天然活性物质、诱变剂、硅藻土、高效植物激素四甲基戊二酸与苯肽胺酸钠等，可以有效提高菘蓝花药愈伤组织绿苗分化率，降低白化率及培养基褐化率，从而显著提高菘蓝花药培养效率。

（2）本发明首次提供了一种菘蓝花培分化培养基及其制备流程，为菘蓝单倍体育种方法的建立以及菘蓝新品种培育提供了有力的保证。

具体实施方式

下面结合实施案例对本发明作进一步说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

以下各实施例的实施时间为2018年5月，选用的甘蓝叶型和芥菜叶型菘蓝均来源于选择江苏省涟水县中药材种植基地。

实施例1

本实施例使用的分化培养基以1L计，其配方为：

大量元素：KNO₃ 1960mg，NaH₂PO₄·H₂O 455mg，(NH₄)₂SO₄ 147mg，MgSO₄·7H₂O 500mg，Ca(NO₃)₂·4H₂O 320mg；

微量元素：MnSO₄·4H₂O 12mg，ZnSO₄·7H₂O 3mg，H₃BO₃ 6mg，KI 0.7mg，CuSO₄·5H₂O0.024mg，CoCl₂·6H₂O 0.025mg，Na₂MoO₄·2H₂O 0.22mg；

铁盐：FeSO₄·7H₂O 27mg，Na₂-EDTA 36mg；

有机成分：肌醇51mg，D-蛋氨酸4mg，甘氨酸4mg，L-天门冬酰胺23mg，盐酸硫胺素0.2mg，盐酸吡哆醇 0.5mg，生物素1.5mg，烟酸0.38mg，泛酸0.47mg；

天然活性物质：胡萝卜提取液63mL，生姜汁15mL；

无机物：N-甲基-N-亚硝基脲1.5mg，AgNO₃ 7mg，硅藻土0.4g；

碳源：蔗糖21g，麦芽糖10g；

凝固剂：植物凝胶3g；

植物激素：四甲基戊二酸 1.0mg，苯肽胺酸钠 0.4mg，KT-30 0.3mg；

余量为蒸馏水。

根据以上配方及本发明的培养基制备流程制备分化培养基：

（1）制备母液

大量元素制备成20倍的母液；微量元素制备成200倍的母液，其中Na₂MoO₄·2H₂O先用蒸馏水单独溶解，再倒入其他微量元素母液中；铁盐制备成200倍的母液，FeSO₄·7H₂O 和Na₂-EDTA先分别加热搅拌溶解，然后将两种溶液混合；肌醇单独制备成100倍母液，其它有机成分制备成200倍母液；四甲基戊二酸和苯肽胺酸钠称量好后直接用蒸馏水定容，KT-30先用少量无水乙醇预溶，然后再用蒸馏水定容，三种植物激素均制备成质量浓度为0.1mg/mL的母液；以上各种母液制备完后分别用玻璃瓶贮存，铁盐母液需用棕色玻璃瓶装，所用母液均置于3℃冷藏保存备用；

（2）制备天然活性物质

胡萝卜提取液的制备：将胡萝卜洗净后切成小块，加水煮沸20min后冷却，包于纱布内挤压出汁液，沉淀后取上清液，置于3℃冷藏保存备用；

生姜汁的提取：将生姜块洗净后先放在冰箱中冷藏30min，再将生姜切成小块研磨成泥状，包于纱布内挤压出汁液，稍静置后过滤至密封容器中，3℃冷藏保存备用；

（3）配制混合培养液

先在烧杯中加入一些蒸馏水，分别量取所需量的大量元素、微量元素、铁盐、肌醇、其他有机成分的母液加入烧杯中，再量取KT-30和苯肽胺酸钠的母液、胡萝卜提取液和生姜汁加入烧杯中，再将称量好的N-甲基-N-亚硝基脲、AgNO₃硅藻土加入烧杯中，搅拌溶解；

（4）溶解凝固剂和碳源

用天平称取所需的植物凝胶、蔗糖、麦芽糖放入烧杯中，再加入适量的蒸馏水，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状，然后再将上述配好的混合培养液加入到煮沸的植物凝胶中，最后加蒸馏水定容至1 L，搅拌均匀；

（5）调节pH

用滴管吸取物质的量浓度为0.5mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入制备好的培养基中，边滴边搅拌，并随时用酸度计测培养基的pH，调节培养基的pH为5.8；

（6）培养基分装与高压蒸汽灭菌

待制备好的培养基稍微冷却后，按照40ml /瓶将培养基分装入100ml三角瓶中，塞上胶塞，包上锡箔纸，然后将三角瓶置于温度为121℃、压力为15kPa高压蒸汽条件下灭菌20min，而后降温至55℃左右取出，置于超净工作台中；

（7）培养基内添加四甲基戊二酸

按照40ml /瓶培养基的用量计算需加入的四甲基戊二酸母液用量，无菌操作下加入已灭菌的四甲基戊二酸母液，趁热摇匀，密封后自然冷却。

选取甘蓝叶型菘蓝和芥菜叶型菘蓝两个品种的花药愈伤组织作为供体，当诱导培养后的花药愈伤组织长到2~3mm大小时，转到分化培养基上诱导绿苗，培养条件控制为：温度25℃、湿度75%、光照强度2500lx l4h/暗10h。培养31天统计愈伤组织绿苗分化率，分化率＝分化出绿芽的愈伤组织数/转移到分化培养基上的愈伤组织数×100％。

实施例2

本实施例使用的分化培养基的配方为：MS培养基+NAA 0.5mg/L+6-BA 1.0mg/L，pH为5.8（该配方来自李焘等《菘蓝花药培养及单倍体的诱导》），同样选取该两个菘蓝品种花药愈伤作为供体，操作方法、培养方法同实施例1，统计绿苗分化率。

实施例3

本实施例使用的分化培养基的配方为：MS培养基+6-BA 1.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L，pH为5.8（该配方来自李志亮，叶嘉等《菘蓝组培再生体系的建立》），同样选取该两个菘蓝品种花药愈伤作为供体，操作方法、培养方法同实施例1，统计绿苗分化率。

实施例4

本实施例使用的分化培养基的配方为：MS培养基+BA 4.0mg/L+NAA 0.1 mg/L+ 3%蔗糖，pH为5.8（该配方来自陈志萍，夏寒冰等《松花菜花药培养再生植株》），同样选取该两个菘蓝品种花药愈伤作为供体，操作方法、培养方法同实施例1，统计绿苗分化率。

实施例5

本实施例使用的分化培养基的配方为：1/2 MS培养基+NAA 0.1mg/L+BA 1.0mg/L+KT1.0mg/L，pH为5.8（该配方来自张恩慧，欧承刚等《甘蓝花药培养胚状体诱导形成影响因子研究》），同样选取该两个菘蓝品种花药愈伤作为供体，操作方法、培养方法同实施例1，统计绿苗分化率。

以上实施例中，实施例1为本发明提供的分化培养基，实施例2对比了前人使用的菘蓝花药分化培养基，实施例3引用了不同菘蓝外植体愈伤组织分化培养基，实施例4、5引用了其他十字花科植物花药分化常用的培养基配方。实施例2~5的培养基制备方法参照实施例1，根据各自培养基配方先分别制备大量元素、微量元素、铁盐及、有机成分、植物激素的母液，再制备混合培养液，加入琼脂和碳源加热溶解后调节pH，最后分装灭菌。将各个实施例愈伤组织分化率结果统计如下表1所示。

从以上统计的结果可以看出，实施例1提供的菘蓝花药分化培养基对甘蓝叶型和芥菜叶型菘蓝愈伤组织的分化率分别达到了84.5%和76.3%，显著高于实施例2~5，说明本发明提供的培养基配方是最优组合，并且特异性地针对甘蓝叶型和芥菜叶型菘蓝花药分化培养。本发明对于进一步推广单倍体育种在菘蓝培育上的应用具有重要意义和经济价值。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (3)

1.一种提高菘蓝花培效率的分化培养基及其制备流程，其特征在于，分化培养基以1L计，组成为：

大量元素：KNO₃ 1730~2050mg，NaH₂PO₄·H₂O 420~480mg，(NH₄)₂SO₄ 133~154mg，MgSO₄·7H₂O 495~515mg，Ca(NO₃)₂·4H₂O 300~340mg；

微量元素：MnSO₄·4H₂O 10~14mg，ZnSO₄·7H₂O 2.5~3.5mg，H₃BO₃ 5~7mg，KI 0.6~0.8mg，CuSO₄·5H₂O 0.022~0.026mg，CoCl₂·6H₂O 0.022~0.026mg，Na₂MoO₄·2H₂O 0.21~0.24mg；

铁盐：FeSO₄·7H₂O 25~29mg，Na₂-EDTA 34~38mg；

有机成分：肌醇47~56mg，D-蛋氨酸3~5 mg，甘氨酸3~5mg，L-天门冬酰胺19~25mg，盐酸硫胺素0.1~0.3mg，盐酸吡哆醇 0.4~0.6mg，生物素1.2 ~1.8mg，烟酸0.33~0.41mg，泛酸0.45~0.50mg；

天然活性物质：胡萝卜提取液60~65mL，生姜汁12~18mL；

无机物：N-甲基-N-亚硝基脲1.4~1.6 mg，AgNO₃ 6~9 mg，硅藻土0.2~0.5g；

碳源：蔗糖17~24g，麦芽糖9~12g；

凝固剂：植物凝胶2~4g；

植物激素：四甲基戊二酸 0.8~1.1mg，苯肽胺酸钠 0.3~0.5mg，KT-30 0.2~0.4mg；

余量为蒸馏水；

该分化培养基的制备流程包括以下步骤：

（1）制备母液

大量元素制备成20倍的母液；微量元素制备成200倍的母液，其中Na₂MoO₄·2H₂O先用蒸馏水单独溶解，再倒入其他微量元素母液中；铁盐制备成200倍的母液，FeSO₄·7H₂O 和Na₂-EDTA先分别加热搅拌溶解，然后将两种溶液混合；肌醇单独制备成100倍母液，其它有机成分制备成200倍母液；四甲基戊二酸和苯肽胺酸钠称量好后直接用蒸馏水定容，KT-30先用少量无水乙醇预溶，然后再用蒸馏水定容，三种植物激素均制备成质量浓度为0.1mg/mL的母液；以上各种母液制备完后分别用玻璃瓶贮存，铁盐母液需用棕色玻璃瓶装，所用母液均置于0~4℃冷藏保存备用；

（2）制备天然活性物质

胡萝卜提取液的制备：将胡萝卜洗净后切成小块，加水煮沸20min后冷却，包于纱布内挤压出汁液，沉淀后取上清液，置于0~4℃冷藏保存备用；

生姜汁的提取：将生姜块洗净后先放在冰箱中冷藏30min，再将生姜切成小块研磨成泥状，包于纱布内挤压出汁液，稍静置后过滤至密封容器中，0~4℃冷藏保存备用；

（3）配制混合培养液

先在烧杯中加入一些蒸馏水，分别量取所需量的大量元素、微量元素、铁盐、肌醇、其他有机成分的母液加入烧杯中，再量取KT-30和苯肽胺酸钠的母液、胡萝卜提取液和生姜汁加入烧杯中，再将称量好的N-甲基-N-亚硝基脲、AgNO₃硅藻土加入烧杯中，搅拌溶解；

（4）溶解凝固剂和碳源

用天平称取所需的植物凝胶、蔗糖、麦芽糖放入烧杯中，再加入适量的蒸馏水，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状，然后再将上述配好的混合培养液加入到煮沸的植物凝胶中，最后加蒸馏水定容至1 L，搅拌均匀；

（5）调节pH

用滴管吸取物质的量浓度为0.5mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入制备好的培养基中，边滴边搅拌，并随时用酸度计测培养基的pH，调节培养基的pH为5.6~6.0；

（6）培养基分装与高压蒸汽灭菌

待制备好的培养基稍微冷却后，按照40ml /瓶将培养基分装入100ml三角瓶中，塞上胶塞，包上锡箔纸，然后将三角瓶置于温度为121℃、压力为15kPa高压蒸汽条件下灭菌20min，而后降温至55℃取出，置于超净工作台中；

（7）培养基内添加四甲基戊二酸

按照40ml /瓶培养基的用量计算需加入的四甲基戊二酸母液用量，无菌操作下加入已灭菌的四甲基戊二酸母液，趁热摇匀，密封后自然冷却。

2.根据权利要求1所述的一种提高菘蓝花培效率的分化培养基及其制备流程，其特征在于，所述分化培养基以1L计，最佳配方如下：

大量元素：KNO₃ 1960mg，NaH₂PO₄·H₂O 455mg，(NH₄)₂SO₄ 147mg，MgSO₄·7H₂O 500mg，Ca(NO₃)₂·4H₂O 320mg；

微量元素：MnSO₄·4H₂O 12mg，ZnSO₄·7H₂O 3mg，H₃BO₃ 6mg，KI 0.7mg，CuSO₄·5H₂O0.024mg，CoCl₂·6H₂O 0.025mg，Na₂MoO₄·2H₂O 0.22mg；

铁盐：FeSO₄·7H₂O 27mg，Na₂-EDTA 36mg；

有机成分：肌醇51mg，D-蛋氨酸4mg，甘氨酸4mg，L-天门冬酰胺23mg，盐酸硫胺素0.2mg，盐酸吡哆醇 0.5mg，生物素1.5mg，烟酸0.38mg，泛酸0.47mg；

天然活性物质：胡萝卜提取液63mL，生姜汁15mL；

无机物：N-甲基-N-亚硝基脲1.5 mg，AgNO₃ 7mg，硅藻土0.4g；

碳源：蔗糖21g，麦芽糖10g；

凝固剂：植物凝胶3g；

植物激素：四甲基戊二酸 1.0mg，苯肽胺酸钠 0.4mg，KT-30 0.3mg；

余量为蒸馏水。

3.根据权利要求1所述的一种提高菘蓝花培效率的分化培养基及其制备流程，其特征在于，所述步骤（7）中四甲基戊二酸母液的灭菌方法为：使用孔径为0.22μm的无菌微孔滤膜过滤灭菌。