CN108840924A - 一种高蛋白含量脑蛋白水解物的制备方法 - Google Patents

一种高蛋白含量脑蛋白水解物的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种高蛋白含量脑蛋白水解物的制备方法,包括以下步骤:a.首先对脑组织进行选取;b.待步骤a完成后再进行化冻清洗的工作;c.待步骤b完成后,再进行匀浆工作;d.待步骤c完成后,再进行胶原蛋白肽的准备;e.待步骤d完成后,再进行高能环保生物醇油的制备,通过使用纯机械的物理方法来去除脑组织中的脂肪类物质,无热原性,具有较高的抗氧化应激活性,对神经细胞具有很好的修复能力,是一种非常环保的方法,同时避免有机物在脑蛋白水解物中的残留,也更安全,可通过配合胶原蛋白肽的内置后,再进行两次的超滤及纳滤,使得主要成份为分子量小于1000的短肽和多肽的组合物,除去大分子杂质,保证了药物的高蛋白性及稳定性,便于推广使用。

Description

一种高蛋白含量脑蛋白水解物的制备方法
技术领域
本发明涉及脑蛋白水解物生产技术领域,具体为一种高蛋白含量脑蛋白水解物的制备方法。
背景技术
脑蛋白水解物是一种大脑所特有的肽能神经营养药物。能以多种方式作用于中枢神经,调节和改善神经元的代谢,促进突触的形成,诱导神经元的分化,并进一步保护神经细胞免受各种缺血和神经毒素的损害,注射后可很快分布于各组织中,能被人体代谢、同化、利用,剩余成分由肾脏排出体外。50%~80%的游离氨基酸可通过血-脑脊液屏障进入脑神经细胞,氨基酸在脑内的代谢很快,其半衰期为几秒钟至几小时。
目前,脑蛋白水解物可进行人工制备,配合医疗方面进行使用,但是在实际使用中,现有的脑蛋白水解物提取方式会使用到化学试剂和热源,虽然加快了制备速度,但是就难以保证脑蛋白水解物的环保性和高蛋白性,直接影响到了药物的使用,其次在无法保证成品分子量的情况下,对于使用中的吸收和稳定,也存在一定的不可控性,这些都是实际存在而又急需解决的问题。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷,提供一种高蛋白含量脑蛋白水解物的制备方法,通过使用纯机械的物理方法来去除脑组织中的脂肪类物质,无热原性,具有较高的抗氧化应激活性,对神经细胞具有很好的修复能力,是一种非常环保的方法,同时避免有机物在脑蛋白水解物中的残留,也更安全,可通过配合胶原蛋白肽的内置后,再进行两次的超滤及纳滤,使得主要成份为分子量小于1000的短肽和多肽的组合物,除去大分子杂质,保证了药物的高蛋白性及稳定性,便于推广使用。
为解决上述问题,本发明提供如下技术方案:一种高蛋白含量脑蛋白水解物的制备方法,包括以下步骤:
a.首先对脑组织进行选取;
b.待步骤a完成后再进行化冻清洗的工作;
c.待步骤b完成后,再进行匀浆工作;
d.待步骤c完成后,再进行胶原蛋白肽的准备;
e.待步骤d完成后,再进行高能环保生物醇油的制备;
f.待步骤e完成后,最后对高能环保生物醇油进行密封。
作为本发明的一种优选实施方式,所述步骤a中;脑组织的选取需要从健康猪新鲜大脑组织中提取,提取之后密封,直接进入—60℃冷冻库进行急速冷冻,确保细胞活性。
作为本发明的一种优选实施方式,所述步骤b中:取符合质量标准的猪脑,于投料前日从冷冻库中取出,室温化冻,洗净血水及污物,除去皮膜,用蒸馏水勾兑2%浓度的酒精,对猪脑漂洗三次,自然晾干。
作为本发明的一种优选实施方式,所述步骤c中:需配合无菌环境,将猪脑加入2倍蒸馏水,配合匀浆机,匀浆10min,过程中电机的转动为1300r/min,在静置20min后密封。
作为本发明的一种优选实施方式,所述步骤d中:胶原蛋白肽,从胶原蛋白物中提取得到的产物,胶原肽的平均分子量在1.000Da左右,相对胶原复杂的三级超螺旋结构,胶原肽的线状结构使其消化吸收率高达80%(胶原为<=1%)。
作为本发明的一种优选实施方式,所述步骤e还包括其制备方法,步骤包括如下;
S1、首先进行胰酶水解,用NaOH溶液调pH至7,将胰酶用注射用水溶解,平均1g胰酶加水3mL,加入氯化钙至0.045N,室温3—7℃,活化1h,即可得上清液;
S2、步骤S1结束后,再超滤及纳滤,上清液过一万五千分子量的超滤器,得超滤液,将超滤液用纳滤器纳滤,滤出原体积的三分之二,得纳滤截留液,此过程需循环两次;
S3、步骤S2结束后,再进行胶原蛋白肽的投放融合,配合超滤液进行肽图及氨基酸测定,通过小样制备确定稀释倍数,补充各种氨基酸至标准中限,同时加入终体积千分之二的亚硫酸氢钠,加水补足体积,调节pH,检测溶液的折光率及含氮量;
S4、步骤S3结束后,除菌过滤,灌封,灭菌,灯检,即得脑蛋白水解物。
与现有技术相比,本发明的有益效果如下:
本发明一种高蛋白含量脑蛋白水解物的制备方法,通过使用纯机械的物理方法来去除脑组织中的脂肪类物质,无热原性,具有较高的抗氧化应激活性,对神经细胞具有很好的修复能力,是一种非常环保的方法,同时避免有机物在脑蛋白水解物中的残留,也更安全,可通过配合胶原蛋白肽的内置后,再进行两次的超滤及纳滤,使得主要成份为分子量小于1000的短肽和多肽的组合物,除去大分子杂质,保证了药物的高蛋白性及稳定性,便于推广使用。
具体实施方式
本发明提供一种技术方案:一种高蛋白含量脑蛋白水解物的制备方法,包括以下步骤:
a.首先对脑组织进行选取;
b.待步骤a完成后再进行化冻清洗的工作;
c.待步骤b完成后,再进行匀浆工作;
d.待步骤c完成后,再进行胶原蛋白肽的准备;
e.待步骤d完成后,再进行高能环保生物醇油的制备;
f.待步骤e完成后,最后对高能环保生物醇油进行密封。
所述步骤a中;脑组织的选取需要从健康猪新鲜大脑组织中提取,提取之后密封,直接进入—60℃冷冻库进行急速冷冻,确保细胞活性。
所述步骤b中:取符合质量标准的猪脑,于投料前日从冷冻库中取出,室温化冻,洗净血水及污物,除去皮膜,用蒸馏水勾兑2%浓度的酒精,对猪脑漂洗三次,自然晾干。
所述步骤c中:需配合无菌环境,将猪脑加入2倍蒸馏水,配合匀浆机,匀浆10min,过程中电机的转动为1300r/min,在静置20min后密封。
所述步骤d中:胶原蛋白肽,从胶原蛋白物中提取得到的产物,胶原肽的平均分子量在1.000Da左右,相对胶原复杂的三级超螺旋结构,胶原肽的线状结构使其消化吸收率高达80%(胶原为<=1%)。
所述步骤e还包括其制备方法,步骤包括如下;
S1、首先进行胰酶水解,用NaOH溶液调pH至7,将胰酶用注射用水溶解,平均1g胰酶加水3mL,加入氯化钙至0.045N,室温3—7℃,活化1h,即可得上清液;
S2、步骤S1结束后,再超滤及纳滤,上清液过一万五千分子量的超滤器,得超滤液,将超滤液用纳滤器纳滤,滤出原体积的三分之二,得纳滤截留液,此过程需循环两次;
S3、步骤S2结束后,再进行胶原蛋白肽的投放融合,配合超滤液进行肽图及氨基酸测定,通过小样制备确定稀释倍数,补充各种氨基酸至标准中限,同时加入终体积千分之二的亚硫酸氢钠,加水补足体积,调节pH,检测溶液的折光率及含氮量;
S4、步骤S3结束后,除菌过滤,灌封,灭菌,灯检,即得脑蛋白水解物。
在一种高蛋白含量脑蛋白水解物的制备方法中,首先通过使用纯机械的物理方法来去除脑组织中的脂肪类物质,无热原性,具有较高的抗氧化应激活性,对神经细胞具有很好的修复能力,是一种非常环保的方法,同时避免有机物在脑蛋白水解物中的残留,也更安全,其次可通过配合胶原蛋白肽的内置后,再进行两次的超滤及纳滤,使得主要成份为分子量小于1000的短肽和多肽的组合物,除去大分子杂质,保证了药物的高蛋白性及稳定性,便于推广使用。
现通过本发明所制成的一种高蛋白含量脑蛋白水解物的制备方法与某市面常用脑蛋白水解物进行试验对比,试验过程如下;
1、采用亚铁还原能力实验,在低pH条件下,利用亚铁离子与TPTZ生成蓝紫色复合物来测量样品抗氧化能力。
2、配合不同目数的分筛装置,来对脑蛋白水解物进行分子量的过筛分测。
3、把脑蛋白水解物分为三组,放置于自然环境中,分时段检测,以对稳定周期进行预估。
4、实施脑蛋白水解物采用间接测定法,用高准确度、高灵敏度的方法测定高纯物质中的各种杂质含量,然后从待测物质中减去所测杂质总量的百分率作为该高纯物质的纯度。
试验数据如下:
抗氧化/% 分子量/M2 稳定周期/H 萃取纯度/%
实施例1 50% 2.5 24 ≥76.6
复检 55% 2.6 23.5 ≥74
对比例1 76% 3.2 38 ≥87
经实验对比,本发明所制成的一种高蛋白含量脑蛋白水解物的制备方法具有抗氧化程度高,分子量小,纯度高的特性。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点,对于本领域技术人员而言,显然本发明不限于上述示范性实施例的细节,而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下,能够以其他的具体形式实现本发明。因此,无论从哪一点来看,均应将实施例看作是示范性的,而且是非限制性的,本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定,因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已,并不用于限制本发明,尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,对于本领域的技术人员来说,其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种高蛋白含量脑蛋白水解物的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
a.首先对脑组织进行选取;
b.待步骤a完成后再进行化冻清洗的工作;
c.待步骤b完成后,再进行匀浆工作;
d.待步骤c完成后,再进行胶原蛋白肽的准备;
e.待步骤d完成后,再进行高能环保生物醇油的制备;
f.待步骤e完成后,最后对高能环保生物醇油进行密封。
2.根据权利要求1所述的一种高蛋白含量脑蛋白水解物的制备方法,其特征在于:所述步骤a中;脑组织的选取需要从健康猪新鲜大脑组织中提取,提取之后密封,直接进入—60℃冷冻库进行急速冷冻,确保细胞活性。
3.根据权利要求1所述的一种高蛋白含量脑蛋白水解物的制备方法,其特征在于:所述步骤b中:取符合质量标准的猪脑,于投料前日从冷冻库中取出,室温化冻,洗净血水及污物,除去皮膜,用蒸馏水勾兑2%浓度的酒精,对猪脑漂洗三次,自然晾干。
4.根据权利要求1所述的一种高蛋白含量脑蛋白水解物的制备方法,其特征在于:所述步骤c中:需配合无菌环境,将猪脑加入2倍蒸馏水,配合匀浆机,匀浆10min,过程中电机的转动为1300r/min,在静置20min后密封。
5.根据权利要求1所述的一种高蛋白含量脑蛋白水解物的制备方法,其特征在于:所述步骤d中:胶原蛋白肽,从胶原蛋白物中提取得到的产物,胶原肽的平均分子量在1.000Da左右,相对胶原复杂的三级超螺旋结构,胶原肽的线状结构使其消化吸收率高达80%(胶原为<=1%)。
6.根据权利要求1所述的一种高蛋白含量脑蛋白水解物的制备方法,其特征在于:所述步骤e还包括其制备方法,步骤包括如下;
S1、首先进行胰酶水解,用NaOH溶液调pH至7,将胰酶用注射用水溶解,平均1g胰酶加水3mL,加入氯化钙至0.045N,室温3—7℃,活化1h,即可得上清液;
S2、步骤S1结束后,再超滤及纳滤,上清液过一万五千分子量的超滤器,得超滤液,将超滤液用纳滤器纳滤,滤出原体积的三分之二,得纳滤截留液,此过程需循环两次;
S3、步骤S2结束后,再进行胶原蛋白肽的投放融合,配合超滤液进行肽图及氨基酸测定,通过小样制备确定稀释倍数,补充各种氨基酸至标准中限,同时加入终体积千分之二的亚硫酸氢钠,加水补足体积,调节pH,检测溶液的折光率及含氮量;
S4、步骤S3结束后,除菌过滤,灌封,灭菌,灯检,即得脑蛋白水解物。
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EP0412554A2 (en) * 1989-08-10 1991-02-13 Sumitomo Pharmaceuticals Company, Limited Sustained-release preparation for administration into brain
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侯放等: "脑蛋白水解物注射液制备方法研究", 《长春中医药大学学报》 *

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