CN108815031A - 一种中药组合物发酵原浆及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种中药组合物发酵原浆及其制备方法和应用；包括如下步骤：将中药组合物、菌液和水混合得到初始体系，对初始体系进行发酵培养，得到中药组合物发酵原浆；所述中药组合物包含如下质量份数的组份：燕麦30～50、黄芩20～40、积雪草10～20、虎杖5～10、甘草5～10；其有效成分为将中药组合物、水与德氏乳杆菌混合而得的初始体系发酵而得的发酵液经灭菌、离心而得的上清液；本发明通过德氏乳杆菌对中药组合物发酵，保留了中药成分的功效和活性，避免传统提取方式造成的活性成分流失，制备工艺简单，条件温和，可实现工业化大规模生产，可为企业带来良好的经济效益，具备广阔的前景。

Description

一种中药组合物发酵原浆及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及化妆品领域，主要涉及一种中药组合物发酵原浆及其制备方法和应用。

背景技术

毛囊和皮脂腺是皮肤微生物的主要寄居场所，构成隔离人体内环境与外界环境的第一道生物屏障，具有维持皮肤微生态平衡与自净的作用。当皮肤受到侵扰时，皮肤常驻菌和/或暂居菌的数量就会剧增，导致皮肤菌群紊乱，从而会出现皮肤油脂分泌旺盛、皮肤炎症、粉刺痤疮、头屑头痒等一系列皮肤问题。

如果能够为皮肤提供一种营养成分，促进皮肤有益菌的生长及抑制皮肤有害菌的繁殖，就能维持肌肤pH值，维持皮肤水分及养分的平衡，消除敏感和炎症，增强皮肤的屏障。本发明筛选具有修护皮肤功效的天然中药成分，从皮肤微生态角度去提供一种安全的有效的化妆品是具有开发前景和经济价值的。

发明内容

针对现有市场的空缺和技术的不足，本发明提供了一种中药组合物发酵原浆及其制备方法和应用，通过对具有修护功效的中药筛选及组分的合理配比，使用现代发酵技术提取出其中有效成分，得到的发酵原浆添加至化妆品中，具有维持皮肤微生态的功效，有广阔的应用前景和巨大的市场价值。

本发明的第一个目的在于提供一种中药组合物发酵原浆的制备方法，包括如下步骤：将中药组合物、菌液和水混合得到初始体系，对初始体系进行发酵培养，得到中药组合物发酵原浆。

上述制备方法中，所述中药组合物包含如下质量份数的组份：燕麦30～50、黄芩20～40、积雪草10～20、虎杖5～10、甘草5～10；所述燕麦、黄岑、积雪草、虎杖和甘草各中药原料为其干粉，其粒径为80～200目，具体可为100目。

所述中药组合物发酵原浆采用以下制备方法：

1)备料

将各中药原料除杂、清洗、烘干，粉碎至80～200目；配制浓度为10⁶～10⁸cfu/ml的发酵菌菌液，pH值调整为6.5～7.5。

2)发酵

按配比将菌液、中药组合物和水混合，在28～42℃、100r/min的摇床中发酵36～48h，得发酵液。

3)提纯

将所得发酵液过滤，滤液在105～120℃的温度下高压灭菌20～35min，使菌种失活。将灭菌后的发酵滤液在3000～8000r/min、离心半径为8～12cm的条件下离心20～35min，弃沉淀，收集上清液，即为本发明提供的中药组合物发酵原浆。

所述制备方法中，所述菌液浓度为106～108cfu/ml，pH值调整为6.5～7.5；所述初始体系中，所述菌液：中药组合物和水的配比为10mL～50mL：10g～50g：300～500g。

所述菌液中，菌种为乳杆菌，更具体为德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillusdelbrueckii subsp.Bulgaricus)，购自广东省微生物研究所微生物菌种保藏中心。

本发明的第二个目的在于提供一种中药组合物。

所述中药组合物包含如下质量份数的组份：燕麦30～50、黄芩20～40、积雪草10～20、虎杖5～10、甘草5～10；所述燕麦、黄岑、积雪草、虎杖和甘草各中药原料为其干粉，其粒径为80～200目，具体可为100目。

优选地，所述中药组合物由包括以下重量份数的组分制成，燕麦40、黄芩30、积雪草15、虎杖10、甘草5。

优选地，所述中药组合物由包括以下重量份数的组分制成，燕麦50、黄芩25、积雪草10、甘草10、虎杖5。

优选地，所述中药组合物由包括以下重量份数的组分制成，燕麦40、黄芩30、积雪草20、甘草5、虎杖5。

本发明的第三个目的在于提供一种中药组合物发酵原浆。

本发明的第四个目的在于提供一种利用中药组合物发酵原浆在制备化妆品中的应用。

所述化妆品含有所述中药组合物发酵原浆，其用量为0.05‐95％w/w，优选用量以质量分数计为1‐95％。

优选地，所述化妆品包括化妆水、乳液、面霜、面膜、洁面乳或BB霜。

目前，将中药组合物以发酵的方式提取应用与化妆品中的情况并不多见，将中药组合物发酵原浆用于维持皮肤微生态平衡从而修护皮肤健康的还未有报道。本发明选用传统中药中具有修护舒缓、抗敏消炎、祛红止痒的有效种类，以中医中“君臣佐使”的遣方原则合理复配，从而发挥原料的最大功效。利用合适的菌种以现代发酵工艺制得，优化制备工艺，产品天然安全无副作用，反应条件温和，能有效节约生产成本，简化生产步骤，节约生产时间，最大限度的保持原料的功效性。该发酵技术能够实现大规模的工业化生产，并能控制产品质量的稳定性。

与现有技术相比，本发明具有如下优点：

(1)各中药依照“君臣佐使”遣方原则合理复配，可协同增效，最大发挥原料的养颜功效，比单一中药功效更全面。

(2)本发明提供的制备工艺提取率高，使用发酵提取法的优势是能有效简化生产工艺，使反应过程在温和的条件下进行。同时，发酵提取法还可以改变原料成分分子结构，提升原料功效，降低毒性和刺激性，优化色泽、味道等优势，是一种较理想的中药提取新工艺，有利于推广应用。

(3)将本发明的中药组合物发酵原浆用于化妆品中可有效维持皮肤微生态平衡，促进肌肤有益菌的生长，抑制有害菌的活性，促进肌肤健康；产品可调节皮肤水油平衡，使皮肤柔滑细嫩；舒缓敏感，增强皮肤屏障；还对痤疮的生成及复发有一定的抑制作用，降低肌肤敏感度，用于化妆品中能有效恢复肌肤健康，具有巨大的市场价值。

具体实施方式

为更进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合本发明的优选实施例来进一步说明本发明的技术方案，但本发明并非局限在实施例范围内。

实施例1中药组合物发酵原浆(Ⅰ)及其制备方法

一种中药组合物，由包括以下重量份数的组分制成：燕麦40、黄芩30、积雪草15、虎杖10、甘草5；所述中药组合物发酵原浆中发酵菌液、中药组合物与水的用量比为30mL：40g：300g。

制备方法如下：

1)备料

将各中药原料除杂、清洗、烘干，粉碎至100目；配制浓度为10⁶～10⁸cfu/ml的发酵菌菌液，pH值调整为6.5～7.5。

2)发酵

按配比将菌液、中药组合物和水混合，在32℃、100r/min的摇床中发酵40小时，得发酵液。

3)提纯

将所得发酵液过滤，滤液在110℃的温度下高压灭菌30min，使菌种失活。将灭菌后的发酵滤液在6000r/min、离心半径为9cm的条件下离心30min，弃沉淀，收集上清液，即为本发明提供的中药组合物发酵原浆。

实施例2中药组合物发酵原浆(Ⅱ)及其制备方法

一种中药组合物，由包括以下重量份数的组分制成：燕麦50、黄芩25、积雪草10、甘草10、虎杖5；所述中药组合物发酵原浆中发酵菌液、中药组合物与水的用量比为40mL：45g：400g。

制备方法如下：

1)备料

将各中药原料除杂、清洗、烘干，粉碎至80目；配制浓度为10⁶～10⁸cfu/ml的发酵菌菌液，pH值调整为6.5～7.5。

2)发酵

按配比将菌液、中药组合物和水混合，在35℃、100r/min的摇床中发酵48小时，得发酵液。

3)提纯

将所得发酵液过滤，滤液在110℃的温度下高压灭菌30min，使菌种失活。将灭菌后的发酵滤液在6000r/min、离心半径为9cm的条件下离心30min，弃沉淀，收集上清液，即为本发明提供的中药组合物发酵原浆。

实施例3中药组合物发酵原浆(Ⅲ)及其制备方法

一种中药组合物，由包括以下重量份数的组分制成：燕麦40、黄芩30、积雪草20、甘草5、虎杖5；所述中药组合物发酵原浆中发酵菌液、中药组合物与水的用量比为25mL：30g：300g。

制备方法如下：

1)备料

将各中药原料除杂、清洗、烘干，粉碎至200目；配制浓度为10⁶～10⁸cfu/ml的发酵菌菌液，pH值调整为6.5～7.5。

2)发酵

按配比将菌液、中药组合物和水混合，在28℃、100r/min的摇床中发酵36小时，得发酵液。

3)提纯

将所得发酵液过滤，滤液在120℃的温度下高压灭菌30min，使菌种失活。将灭菌后的发酵滤液在8000r/min、离心半径为9cm的条件下离心30min，弃沉淀，收集上清液，即为本发明提供的中药组合物发酵原浆。

实施例4中药组合物发酵原浆保湿面膜

一种中药组合物发酵原浆保湿面膜见表1。

表1

组分	重量份数
		去离子水	至100
甘油	10.00
		1,3‐丙二醇	7.00
透明质酸钠	0.10
		黄原胶	0.10
羟乙基纤维素	0.10
		尿囊素	0.50
泛醇	1.00
		1,2‐己二醇	0.80
对羟基苯乙酮	0.50
		中药组合物发酵原浆(Ⅰ)	30.00

制备方法如下：

(1)将黄原胶和透明质酸钠在甘油中预先分散，然后和尿囊素、泛醇、羟乙基纤维素一起投入到去离子水中，加热至80℃，搅拌溶解至均匀透明，降温；

(2)预先将对羟基苯乙酮在1,3‐丙二醇和1,2‐己二醇中加热溶解至透明，在体系降温至55℃时投入搅拌溶解至透明；

(3)降温至40℃时，将中药组合物发酵原浆(Ⅰ)投入，搅拌均匀至完全溶解；

(4)检验颜色、pH、香味，外观等理化指标，检验合格后200目过滤出料。

实施例5中药组合物发酵原浆舒缓面膜

一种中药组合物发酵原浆舒缓面膜见表2。

表2

组分	重量份数
		中药组合物发酵原浆(Ⅱ)	至100
甘油	7.00
		1,3‐丙二醇	5.00
透明质酸钠	0.10
		黄原胶	0.10
羟乙基纤维素	0.10
		甘草酸二钾	0.50
芦荟提取物	1.00
		1,2‐己二醇	0.80
对羟基苯乙酮	0.50

制备方法如下：

(1)将黄原胶和透明质酸钠在甘油中预先分散，然后和甘草酸二钾、羟乙基纤维素一起投入到中药组合物发酵原浆(Ⅱ)中，搅拌溶解至分散均匀透明；

(2)预先将对羟基苯乙酮在1,3‐丙二醇和1,2‐己二醇中加热溶解，投入至搅拌溶解均匀；

(3)将芦荟提取物投入，搅拌均匀至完全溶解；

(4)检验颜色、pH、香味，外观等理化指标，检验合格后200目过滤出料。

实施例5中药组合物发酵原浆雪融睡眠面膜

一种中药组合物发酵原浆雪融睡眠面膜见表3。

表3

组分	重量份数
		去离子水	至100
甘油	7.00
		1,3‐丙二醇	5.00
透明质酸钠	0.10
		黄原胶	0.10
卡波姆	0.30
		聚丙烯酸酯交联聚合物‐6	0.30
氨甲基丙醇	0.20
		环五聚二甲基硅氧烷	5.00
聚二甲基硅氧烷	0.50
		牛油果树果脂	2.00
1,2‐己二醇	0.80
		对羟基苯乙酮	0.50
中药组合物发酵原浆(Ⅲ)	40.00

制备方法如下：

(1)将黄原胶和透明质酸钠在甘油中预先分散，然后和卡波姆、聚丙烯酸酯交联聚合物‐6一起投入到去离子水中，加热至80℃搅拌溶解至分散均匀，降温；

(2)预先将对羟基苯乙酮在1,3‐丙二醇和1,2‐己二醇中加热溶解，在体系降温至55℃时投入搅拌溶解至透明；

(3)降温至40℃时，均质速度6000rpm下均质5分钟，至分散均匀完全，加入氨甲基丙醇和中药组合物发酵原浆(Ⅲ)，均质速度3000rpm下均质3分钟；

(4)预先将牛油果树果脂略加热溶解后与环五聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷混合均匀，投入体系中，均质速度1200rpm下均质至分散均匀完全

(5)检验颜色、pH、香味，外观等理化指标，检验合格后出料。

对比例1～5单味中药发酵原浆

分别取单味中药，燕麦、黄芩、积雪草、甘草和虎杖各40克，除杂、清洗、烘干，粉碎至100目。配制浓度为10⁶～10⁸cfu/ml的发酵菌菌液，发酵菌液、中药粉末与水的用量比为30mL：40g：300g。在32℃、100r/min的摇床中发酵40小时，得发酵液。将所得发酵液过滤，滤液在110℃的温度下高压灭菌30min，使菌种失活。将灭菌后的发酵滤液在6000r/min、离心半径为9cm的条件下离心30min，弃沉淀，收集上清液，即为单味中药的发酵原浆。

对比例6～10单味中药发酵原浆保湿面膜

与实施例4相比，除了将中药组合物发酵原浆(Ⅰ)改为对比例1～5以外，其他条件与实施例4相同。

对比例11常规的中药组合物提取方式

分别取燕麦40克、黄芩30克、积雪草15克、虎杖10克和甘草5克除杂、清洗、烘干，粉碎至100目，用体积浓度为75％乙醇在90℃下浸提，料液比为1:20，浸提时间为2小时。将上述提取液离心去除沉淀，合并滤液，在50℃减压浓缩至药液与初始中药组合物粉末百分比为1：5，得到常规的中药组合物提取物。

对比例12普通保湿面膜

与实施例4相比，除了不添加中药组合物发酵原浆(Ⅰ)外，其他条件与实施例4相同。

对比例13普通中药保湿面膜

与实施例4相比，除了将中药组合物发酵原浆(Ⅰ)改为对比例12以外，其他条件与实施例4相同。

试验例1皮肤微生态平衡测试

1.1试样的配制

分别配制浓度为0.5％的实施例1、对比例1～5的实验介质和0.5％的市售葡萄糖对照介质。

1.2实验原理

实验将对皮肤菌群对特定的中药组合物发酵原浆营养成分(以葡萄糖计)和普通葡萄糖的吸收利用率进行对比测试，从而研究特定的益生菌营养素被皮肤菌群的消耗过程。

1.3实验方法

取皮肤表面的一部分菌群分别被移植到以下实施例、对比例和对照介质中，测试48小时后，计算残余的葡萄糖/植物原浆营养成分的量。

衡量标准如下表4所示：

表4消耗量衡量标准

消耗水平	消耗状态
		0～20％	无消耗
20～40％	消耗程度差
		40～60％	中等消耗程度
60～100％	高至全部消耗

1.4实验结果

实验结果见表5所示：

表5实际消耗量对比

普通的葡萄糖对无论是病原菌还是益生菌都同样具有较高的吸收利用率，而中药组合物发酵产物、单味中药发酵产物能以生物选择性地保护和被皮肤表面的益生菌利用，而不会明显地被病原菌代谢，相对病原菌是作为生物抑制剂存在的，其中，中药组合物发酵产物的生物选择性更强，经试验测试证实其他实施例也有相似的效果。

试验例2竞争性生长测试

2.1试样的配制

分别配制浓度为0.5％的实施例1、对比例1～5的实验介质(胰蛋白胨USP)。

2.2实验原理

测试特定中药组合物发酵原浆、单味中药发酵原浆在益生菌与病原菌同时存在时对菌群生产情况的影响和作用。

2.3实验方法

将菌群在含有0.5％的实施例1、对比例1～5的实验介质(胰蛋白脉USP)中培育，24小时后计算细菌数目。

混合介质：克氏库微球菌与金黄色葡萄球菌。

2.4实验结果

表6竞争性测试结果

实验数据显示，中药组合物发酵原浆、单味中药发酵原浆中的营养素能够促进益生菌的生长，对病原菌则不会促进其生长，反而会使病原菌因缺乏食物和营养而数量逐渐减少，起到选择性被益生菌利用，并抑制病原菌的作用；其中，实施例的中药组合物发酵原浆对益生菌的促进和对病原菌的抑制效果优于单味中药发酵原浆，经试验测试证实其他实施例也有相似的效果。

试验例3控油效果功能评价

3.1试样的配制

分别制备实施例4，对比例6～10，对比例12、13，进行如下皮肤油脂含量测试。

3.2实验原理

皮肤油脂含量的测试的测试仪器是德国Courage+Khazaka公司(德国CK公司)制造的皮肤油脂含量Sebumeter测试探头。

皮肤油脂含量的测试方法是采用世界公认的SEBUMETER法。

3.3实验方法

选取油性皮肤的志愿者160名，年龄在20～35岁，男女各半。随机分成8组，每组10名男性及10名女性。志愿者于试验开始前30天不能使用任何控油产品，如化妆品或外用药品或内服保健品等。试验前，要求受试者清洗颜面部并在清洗后2小时进入温度22±1℃，湿度50±5％的恒温恒湿房间内静坐30min，并保持放松状态。实验中按随机表选取志愿者的左右额头，取眉间中线与距上眉缘1cm平行线的交叉点为中点，然后在测试中点向左向右并列各测试一个位置。测试结束后，志愿者需按要求每天1次进行半脸的产品的贴敷，不使用产品一侧作为空白对照。连续试用28天，并要求试验的第14天(D14)及第28天(D28)进行回访。结果如下表所示：

表7控油效果测试结果

测试结果	前额D14油脂减少量(％)	前额D28油脂减少量(％)
			实施例4	13.0％	40.1％
对比例6	6.7％	7.0％
			对比例7	7.2％	12.0％
对比例8	10.9％	24.5％
			对比例9	8.8％	16.9％
对比例10	3.4％	4.0％
			对比例12	0.6％	1.7％
对比例13	4.6％	13.4％
			空白	‐5.2％	3.6％

实验数据显示，含有中药组合物发酵原浆、单味中药发酵原浆和中药组合物常规提取物的面膜对皮肤油脂分泌都有一定的抑制效果。其中实施例4的中药组合物间的协同作用显著，优于单味中药的效果；并且使用发酵法对中药组合物处理提取明显优于常规提取法。通过试验表明，其他实施例也具有类似的效果，即本发明中药组合物发酵原浆具有良好的控油作用。

试验例5舒缓敏感刺激效果功能评价

5.1试样的配制

分别制备实施例4，对比例6～10，10％乳酸溶液。

5.2实验方法

实验中按随机表进行半边脸测试，一侧为实施4，另一侧为对比例，选择受试者鼻唇沟部位进行试验，将10％乳酸溶液50ul滴在直径为0.8cm的单层滤纸上，分别在3min、4min和5min询问受试者刺痛感，按4分法进行评分(0分为没有刺痛感，1分为轻度刺痛，2分为中度刺痛，3分为重度刺痛),记录自愿者的评分作为该侧乳酸刺激评分(D0)。测试结束后，志愿者需按要使用，一侧脸使用一种产品，另一侧脸使用另一种产品。使用时禁止交叉污染并按要求每天使用产品1次，并要求试验的第14天(D14)及第28天(D28)进行回访。每个时间点的照明条件应保持一致：窗帘关闭、适当的照明。受试者在床躺着。床倾斜的角度在每个时间点都应该保持一致。床的位置必须在地面上标注，以确保D14和D28的位置的一致性。同一个志愿者的测试由同一个测量人员完成。5.3实验结果

表8乳酸刺激测试结果变化率 单位(％)

测试指标	D14乳酸刺激评分	D28乳酸刺激评分
			实施例4	‐28.1	‐29.8
对比例6	‐18.6	‐20.3
			对比例7	‐3.5	‐4.1
对比例8	‐5.7	‐5.6
			对比例9	‐2.2	‐1.9
对比例10	‐7.4	‐9.2

由表8数据显示，人体半脸试验评价的结果能很明显的对比出实施例和对比例的功效差别。其中，含中药组合物发酵原浆和单味中药发酵原浆的面膜均对皮肤角质层有着一定的修复作用，但中药组合物发酵原浆对于修复皮肤角质层更为显著，其能有效舒缓皮肤敏感度降低乳酸刺激效果，通过试验表明，其他实施例也具有类似的效果。

试验例6抑制痤疮功效测试评价

6.1试样的配制

分别配制实施例4和对比例12，进行如下抑制痤疮功效测试。

6.2实验方法

选取双侧面部有明显痤疮，正处于新生或炎症期，且颜面部皮肤属于易长粉刺类型志愿者30名，年龄在20～30岁，男女各半，进行半脸测试。评价内容为，由皮肤科医生对志愿者左右脸的白头粉刺、黑头粉刺2个级别的痤疮进行个数的标记及数目统计。志愿者需按要求每天一次进行半脸的产品贴敷，连续试用28天，并要求试验的第14天(D14)及第28天(D28)进行回访。根据对痤疮的抑制效果，收集半脸实验试用评价表，结果如下表所示：

6.3实验结果

表9抑制痤疮测试结果变化率 单位(％)

结果显示，实施例5和对比实施例12的功效存在明显差异，说明其中含本发明中药组合物发酵原浆的产品对痤疮有非常显著的抑制效果。

因此，本发明中药组合物发酵原浆可以促进肌肤益生菌的生长，有效抑制肌肤病原菌，维持肌肤微生态的平衡，由此可以控制皮肤油脂分泌，抑制痤疮的生成，抑制接触性敏感，有效修护角质，缓解由角质过薄、受损而引起的一系列敏感症状。

以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。

Claims (10)

1.一种中药组合物发酵原浆的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将中药组合物、菌液和水混合得到初始体系，对初始体系进行发酵培养，得到中药组合物发酵原浆。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述制备方法中，所述菌液浓度为106～108cfu/ml，pH值调整为6.5～7.5；

所述初始体系中，所述菌液：中药组合物和水的配比为10mL～50mL：10g～50g：300～500g。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：所述发酵培养的温度为28～42℃，时间为36～48h。

4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：所述菌液中，菌种为乳杆菌；所述中药组合物为其干粉，其粒径为80～200目。

5.根据权利要求4中所述的制备方法，其特征在于：所述乳杆菌为德氏乳杆菌，更具体为德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp.Bulgaricus)。

6.根据权利要求1或2所述的制备方法，特征在于：所述制备方法还包括对所述发酵培养后得到的发酵液依次进行灭菌、离心、取上清液得到中药组合物发酵原浆的步骤。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：所述灭菌的条件如下：灭菌温度为105～120℃；灭菌时间为20～35min；所述离心的条件如下：离心转速为3000～8000r/min；离心时间为20～35min；离心半径为8～12cm。

8.权利要求1‐2中任一项所述的中药组合物，其特征在于：所述中药组合物包含如下质量份数的组分：

燕麦30～50

黄芩20～40

积雪草10～20

虎杖5～10

甘草5～10。

9.权利要求1‐2中任一项所述制备方法制备得到的中药组合物发酵原浆。

10.根据权利要求8所述的中药组合物发酵原浆在制备化妆品中的应用，其特征在于：所述化妆品含有所述中药组合物发酵原浆，其用量为0.05‐95％w/w。