CN108741089B - 一种消除电磁辐射的益生菌制剂的生产方法及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种消除电磁辐射的益生菌制剂的生产方法，包括以下步骤：将松茸、灰树花、青春双歧杆菌分别进行扩大培养，将松茸扩大菌种液、灰树花扩大菌种液同时接种到三角瓶中，将青春双歧杆菌扩大菌种液接种到三角瓶中，分别接种到种子罐培养得种子罐菌种液，先将松茸、灰树花种子罐种子罐菌种液接种到发酵罐中进行发酵，补料后，接种青春双歧杆菌种子罐菌种液发酵，得到终端混合发酵液；离心，收集活菌体及其有效代谢产物，制成菌悬液，将辅料液与菌悬液二者混合搅拌均匀，制成混合液；将制成的混合液干燥制成防辐射干燥菌粉，与番茄粉、绿豆淀粉、海带多糖、黑木耳多糖等复配制成益生菌制剂，同时公开了其在消除电磁辐射中的应用。

Description

一种消除电磁辐射的益生菌制剂的生产方法及应用
技术领域
本发明涉及一种消除电磁辐射的益生菌制剂的生产方法及应用。
背景技术
我们生活的周围，工作环境都存在电磁辐射，家是给人温暖和安全的地方，可若是不注意一些生活习惯，在这安全之所可能存在着健康隐患，最典型的是电磁污染。我们都知道电视、电冰箱、电脑、洗衣机、微波炉、手机、电热毯等工作时，产生的电磁波就是电磁辐射，电磁辐射作用于人体，达到一定剂量后，即产生生物效应，损害人体健康，其最重要的一条就是会引发癌症。
继大气污染、水污染、噪声污染之后，电磁辐射成为“第四污染源”。联合国人类环境大会将电磁辐射列入必须控制的主要污染物之一。电磁辐射无色、无味、无形，可以穿透包括人类在内的多种物质，人体如果长期暴露在超安全的剂量下，细胞就会被大面积杀伤或杀死。据国外资料显示，电磁辐射已成为当今危害人类健康的致病源之一，电磁波磁场中人群白血病发病为正常环境中的2.93倍，肌肉肿瘤发病为正常环境中的3.26倍。国内外专家认为，电磁辐射是造成儿童白血病的原因之一，并能诱发人体癌细胞增殖，影响人的生殖系统，导致儿童智力残缺，影响人的血管系统，会出现心悸、心区疼痛或压迫感、心律不齐、心动过缓，女性常有月经紊乱，男性出现机能减退、阳痿等病症。
现代的办公、工作、居住，人们长期在电脑前办公，手机随身携带，强烈的电磁辐射会对人体造成伤害特别是生育期的女性容易造成胎儿畸形和各种致癌致畸的发生。据最新调查显示，我国每年出生的2000万儿童中，有35万为残缺儿，其中25万为智力残缺。专家认为电磁辐射也是影响因素之一，医学研究表明，长期处于电磁辐射的环境中会使血液、淋巴液和细胞原生质发生改变，使正常细胞转变为肿瘤细胞。
如何防治电磁辐射污染及对人体健康的危害：
目前研究防电磁辐射的产品主要有防护服、防护头盔和防护眼镜、防辐射化妆品、防辐射涂料、电脑辐射消除器，口服食品有玉米肽、蛋白肽等。以上产品不能从根本上解决电磁辐射对人体的伤害，因为防护服等产品是物理作用，它不能完全将电磁辐射隔离，不能完全将人体包裹，只适合在特定条件下的工作人员穿戴。口服产品因为是单一或几种普通原料的复合物，没有经过特殊工艺加工，是不能真正起到防电磁辐射作用的。
松茸是国际上公认的珍稀名贵的天然药用菌，我国二级濒危保护物种。目前世界范围内只能半人工栽培，产量极低。松茸含有蛋白质、多糖、脂肪、多种氨基酸、维生素等，有很高的营养价值和特殊的药用效果。据过去很多文献记载，松茸具有强身、益肠胃、止痛、理气化痰、驱虫等功效。
现代科学研究表明，松茸多糖具有抗电磁辐射、治疗糖尿病、抗癌等特殊的药用价值。
灰树花：灰树花中提取的β-葡聚糖和聚合糖酶、多糖具有很高的抗电磁辐射、抗肿瘤活性的作用，还有防止便秘、提高免疫力、预防衰老延长寿命的独特功效，所以被称为“菌中之王”。
茶多酚，50年代日本将广岛原子弹爆炸后蒙难者迁移到茶区居住并饮用大量优质绿茶，不仅仍然存活，而且体质良好。这一事实调查发现，茶是一种辐射解毒剂。
双歧杆菌体多糖及其黏性蛋白：双歧杆菌体多糖，减少电磁辐射对人体造成的伤害，能明显促进肠道内放射性物质的排泄，减少人体内放射性物质的蓄积，减少辐射对DAN修复的干扰，维护人体自身的修复功能。
双歧杆菌黏蛋白是一种多糖蛋白质的混合物，对人体具有特殊的保健作用，它可以把人体内的辐射物质黏附排出体外，还能防止脂肪沉积在心血管口，保持血管弹性，预防类风湿关节炎，减少皮下脂肪堆积等，效果显著。
以上单一的食用菌，茶多酚、双歧杆菌都具有抗电磁辐射的作用，因有效物质含量极低且单一，其实际使用效果却并不理想。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供一种消除电磁辐射的益生菌制剂的生产方法，利用食用菌松茸、灰树花、益生双歧杆菌、绿茶、大麦茶、绿豆、玉米粉等，经液体深层好氧、厌氧，发酵获得一种绿色新抗电磁辐射生物制剂。利用液体深层发酵法生产抗辐射生物制剂的优点在于，具有生产工艺简单、易操作、生产周期短、设备利用率高、原料易得、成本低廉，使用效果更加明显广泛。
一种消除电磁辐射的益生菌制剂的生产方法，包括以下步骤：
（1）将ACCC-51588松茸、ACCC-50246灰树花、CICC-6070青春双歧杆菌分别进行扩大培养，得到松茸扩大菌种液、灰树花扩大菌种液和青春双歧杆菌扩大菌种液，
（2）将松茸扩大菌种液、灰树花扩大菌种液同时接种到三角瓶中，培养得到松茸、灰树花一级菌种液，将青春双歧杆菌扩大菌种液接种到三角瓶中，培养得到青春双歧杆菌一级菌种液；
（3）将松茸、灰树花一级菌种液接种到种子罐培养，得到松茸、灰树花种子罐菌种液，将青春双歧杆菌一级菌种液接种到种子罐培养，得到青春双歧杆菌种子罐菌种液；
（4）先将松茸、灰树花种子罐菌种液接种到发酵罐中进行第一步发酵，得到松茸、灰树花发酵液，补料后，接种青春双歧杆菌种子罐菌种液，发酵，得到终端混合发酵液；
（5）将终端混合发酵液离心，收集活菌体及其有效代谢产物，取自来水25公斤加入到收集的100公斤活菌体及其有效代谢产物中，制成菌悬液，剩余的25公斤自来水与麦芽糊精10公斤、低聚异麦芽糖1.5公斤、海藻糖5公斤、L-半胱氨酸盐酸盐0.8公斤、山药多糖1公斤混合，制成辅料液，然后将辅料液与菌悬液二者混合搅拌均匀，制成混合液；
（6）将制成的混合液干燥至水分6%以内，粉碎至80目，制成防辐射干燥菌粉，按照质量配比：防辐射干燥菌粉2%，番茄粉5%，绿豆淀粉6%，海带多糖3%，黑木耳多糖0.5%，鱼腥草多糖0.5%，魔芋葡甘聚糖3%，菊苣粉60%，低聚木糖10%，低聚异麦芽糖5%，异麦芽酮糖2%，聚葡萄糖3%混合均匀，制成益生菌制剂。
上述方法中：步骤（1）中松茸、灰树花、青春双歧杆菌扩大培养的接种操作为：菌种分别加入培养基2毫升，制成冻干管菌悬液，然后分别加入培养基10毫升，进行扩大化培养；
步骤（2）中松茸扩大菌种液、灰树花扩大菌种液接种到三角瓶的接种量分别为100毫升培养基接种扩大菌种液3毫升；青春双歧杆菌扩大菌种液的接种量为：100毫升一级种子培养基接种扩大菌种液4毫升；
步骤（3）中松茸、灰树花一级菌种液接种到种子罐的接种量为：100公斤种子罐培养基接种4公斤一级种子菌种液；青春双歧杆菌一级菌种液接种到种子罐的接种量为：100公斤种子罐培养基接种5公斤一级种子菌种液；
步骤（4）中松茸、灰树花种子罐菌种液接种到发酵罐中接种量是每100公斤发酵罐中的培养基接种6公斤；青春双歧杆菌种子罐菌种液接种到发酵罐中接种量是每100公斤发酵罐中的培养基接种6公斤。
上述方法中：步骤（4）中松茸、灰树花发酵罐的培养条件、发酵温度30℃，搅拌转速100转/分钟，无菌空气通入量以每分钟每100公斤培养基通气0.1立方为准，罐压0.05兆帕，发酵时间40小时，青春双歧杆菌种子液接种后发酵的条件为培养条件、发酵温度30℃，搅拌转速100转/分钟，无菌空气通入量以每分钟每100公斤培养基通气0.1立方为准，罐压0.05兆帕，发酵时间24小时。
优选地，步骤（5）中终端混合发酵液离心的条件为：采用管式离心机以发酵液37℃，离心转速为每分钟1万转，发酵液每分钟流速3公斤。
优选地，步骤（1）松茸、灰树花的扩大培养的培养基的配方：土豆淀粉10克，葡萄糖30克，磷酸氢二钾1克，硫酸镁0.2克，水1000毫升；青春双歧杆菌扩大培养培养基：蛋白胨8克，牛肉浸膏8克，酵母浸膏3克，磷酸氢二钾1克，葡萄糖15克，硫化钠1克，自来水1000毫升；
步骤（2）中一级松茸、灰树花种子培养的培养基：土豆淀粉5克、玉米粉20克、葡萄糖25克、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.3克，水1000毫升；一级青春双歧杆菌种子培养的培养基：蛋白胨6克，牛肉浸膏6克，酵母浸粉4克，葡萄糖10克，硫化钠2克，磷酸氢二钾3克，蛋氨酸1克，自来水1000毫升；
步骤（3）中松茸、灰树花种子罐培养基质量分数为：土豆淀粉5%，葡萄糖8%，蛋白胨0.5%，磷酸氢二钾0.4%，聚醚消泡剂0.1%，自来水86%；青春双歧杆菌种子罐培养基质量分数为：蛋白胨1%，牛肉浸膏1.5%，酵母浸膏0.5%，葡萄糖1.6%，7水硫酸镁0.3%，磷酸氢二钾0.5%，茶多酚0.1%，自来水95%。
优选地，步骤（4）中补料的培养基质量分数为：蛋白胨1.5%，牛肉浸膏2%，酵母浸膏1%，葡萄糖2%，7水硫酸镁0.1%，磷酸氢二钾0.6%，绿茶（按含茶多酚20%计算）0.3%，乳糖0.5%，低聚异麦芽糖1%，自来水91%；第一步发酵发酵的培养基质量分数为：葡萄糖1.5%，玉米粉1.5%，乳糖1%，绿豆粉5%，土豆淀粉0.5%，7水硫酸镁0.3%，磷酸氢二钾0.5%，维生素B10.3%，低聚异麦芽糖0.3%，菊苣粉1%，聚葡萄糖1.5%，聚醚消泡剂0.1 %，自来水86.5%。
上述方法制备的益生菌制剂为囊剂、粉剂、片剂、膏剂、液体或乳制品。
上述所述的生产方法得到的益生菌在消除电磁辐射中的应用。
有益效果
益生菌是一种有益于人体健康活的微生物，常用的益生菌有嗜酸乳杆菌和双歧杆菌两大类，与副干酪乳杆菌、植物乳杆菌一起被称为“健康四益菌”。副干酪乳杆菌、植物乳杆菌作为益生菌，能够耐受人口中的酶、胃液中低pH值和小肠中的胆汁酸，所以副干酪乳杆菌、植物乳杆菌进入人体后可以在肠道内大量存活，起到调节肠道菌群平衡、促进人体消化吸收、改善睡眠等作用。副干酪乳杆菌、植物乳杆菌活菌及其代谢产物对人体健康起到重要作用，特别是副干酪乳杆菌、植物乳杆菌在发酵过程中产生的代谢产物色氨酸，能促进大脑神经细胞分泌出使人欲睡的神经递质五羟色胺及对生理功能具有调节作用的多肽类物质，让人感到全身舒适，有利于解除疲劳并入睡。代谢产物中的叶酸能够维持大脑血清素的稳定，促进神经健康。副干酪乳杆菌、植物乳杆菌活菌体在人体肠道中定植繁殖生长过程中还会产生VK，VK可以安神，让人保持心情平和，有效改善睡眠质量并防止焦虑抑郁症状的发生。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
发酵所采用的菌种是我国获准使用的益生菌种，市售可得。
（1）松茸菌种，菌号：ACCC-51588中国农业微生物菌种保藏中心
灰树花，菌号：ACCC-50246中国农业微生物菌种保藏管理中心
青春双歧杆菌，菌号：CICC-6070中国工业微生物菌种保藏管理中心
生产中所使用的设备：恒温培养箱、厌氧培养箱、真空干燥箱、真空冷冻干燥机、管式无油离心机、种子罐、发酵罐、贮罐、混合搅拌机、粉碎机、无菌包装机、三角瓶、试管及玻璃器皿、超净工作台、高压灭菌器。
实施例1
菌种培养：购进菌种的扩大培养。
松茸、灰树花的培养：
培养基的配制。土豆淀粉10克，葡萄糖30克，磷酸氢二钾1克，硫酸镁0.2克，水1000毫升，pH自然。
操作方法：取1000毫升自来水，加入土豆淀粉，边加边搅拌，然后加入磷酸氢二钾、硫酸镁，搅拌均匀，然后装入三角瓶中灭菌，121℃±0.1℃，30分钟即可（此称为A试管培养基）。
接种：在无菌条件下（超净工作台中）分别打开购进的松茸、灰树花冻干管菌种（即安瓿管菌种），菌种量均为0.5g，因用的是二株菌种，在此阶段须分别培养，然后分别向每个打开的冻干管（安瓿管）中加入以上灭好菌的A培养基2毫升，摇动溶化备用，此称为冻干管（安瓿管）菌悬液，然后再取2支试管分别装有以上灭好菌的培养基10毫升，将溶化好的松茸、灰树花冻干管菌悬液分别加入到试管中，用胶塞、牛皮纸封好管口，放入恒温培养箱中28℃静置培养72小时备用，此称为松茸、灰树花扩大菌种液。
青春双歧杆菌的培养：
培养基的配制。蛋白胨8克，牛肉浸膏8克，酵母浸膏3克，磷酸氢二钾1克，葡萄糖15克，硫化钠1克，自来水1000毫升，pH自然。
操作方法：取自来水1000毫升，按以上配方中所使用的原料依次加入，不分先后，搅拌溶化，分装入三角瓶中121℃、25分钟灭菌备用（此称为双歧杆菌培养基A）。
接种：在无菌条件下（超净工作台中）打开购进的青春双歧杆菌冻干管菌种（安瓿管），菌种量均为0.5g，然后向冻干管中加入以上灭好菌的青春双歧杆菌培养基A 2毫升，摇动溶化备用，此称为双歧杆菌冻干管悬菌液，然后取试管装有以上灭好菌的青春双歧杆菌培养基A 10毫升，将溶化好的双歧杆菌冻干管悬菌液加入到试管中，用胶塞、牛皮纸封好管口，放厌氧培养箱中30℃，静置培养48小时备用，此称为青春双歧杆菌扩大菌种液。
一级松茸、灰树花种子培养：
配方：土豆淀粉5克、玉米粉20克、葡萄糖25克、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.3克，水1000毫升，pH自然。
操作：将上述原料称好后，不分前后的加入到配方的自来水中，开动搅拌机，搅拌30分钟使全溶化，此称为松茸、灰树花一级种子培养液。
将搅拌溶化好的一级种子培养液按用量加入到三角瓶中，然后用透气膜扎好瓶口，放医用消毒器中灭菌，首先打开消毒器上的排气阀门，等有少量蒸汽排出时关闭。当消毒器上的蒸汽压力达到0.05兆帕时，打开消毒器上的排气阀门排汽6-8分钟，然后关闭排气阀门，继续加温，当消毒器中蒸汽压力达到0.12-0.14兆帕时开始计时，灭菌时间为30分钟，离毕后停止加热，让其自然将温，当消毒器上的压力表归零时，打开消毒器，取出灭好菌的培养基放入超净工作台中自然降温，当温度降至30℃时，将以上培养好的松茸、灰树花扩大菌种液移接到以上灭好菌的一级种子培养液中（各按3%接种，即100毫升培养液接种松茸扩大菌种液3毫升、灰树花扩大菌种液3毫升，在此二个菌种是混合在一起培养的）。完毕后封好三角瓶口，放恒温培养箱中在30℃的条件下静置培养48小时即可，此称为松茸、灰树花一级菌种液。
一级青春双歧杆菌种子培养
配方：蛋白胨6克，牛肉浸膏6克，酵母浸粉4克，葡萄糖10克，硫化钠2克，磷酸氢二钾3克，蛋氨酸1克，自来水1000毫升，pH自然。
操作：将上述原料称好，不分前后的加入到配方中的自来水中，开动搅拌机，搅拌20分钟使全溶化，此称为青春双歧杆菌一级种子培养液。
将搅拌好的青春双歧杆菌一级种子培养液按用量加入到三角瓶中，然后用透气膜扎好瓶口，放医用消毒器中消毒，首先打开消毒器上的排气阀门，等有少量蒸汽排出时关闭。当消毒器上的蒸汽压力达到0.05兆帕时，打开消毒器上的排气阀门，排气6-8分钟，然后关闭排气阀门，继续加温，当消毒器中蒸汽压力达到0.12-0.14兆帕时开始计时，灭菌时间为25分钟，完毕后停止加热，让其自然将温，当消毒器上的压力表归零时，打开消毒器，取出灭好菌的培养基放入超净工作台中自然降温，当温度降至37℃时，将以上培养好的青春双歧杆菌扩大菌种液移接到以上灭好菌的一级种子培养液中（按4%接种，即100毫升一级种子培养液接种扩大菌种液4毫升）。完毕后封好三角瓶口，放厌氧培养箱中在37℃的条件下静置培养24小时备用，此称为青春双歧杆菌一级菌种液。
发酵设备、管道及无菌空气过滤系统补料罐的灭菌：
操作：首先打开各进出管道及无菌空气管道的阀门，通入0.12-0.14兆帕的蒸汽，让蒸汽与管道阀门联通并有少量蒸汽排出，通气40分钟，让管道内的蒸汽压力保持0.12-0.14兆帕，保持40分钟，然后关闭各进出管道阀门，备用。
种子罐及发酵罐的空罐灭菌：
关闭各个阀门，打开罐底部的排污阀罐夹层的排污阀，打开直接蒸汽阀门向罐内通入0.12-0.14兆帕的蒸汽，当罐内蒸汽压力达到121℃时开始计时，灭菌时间为40分钟，然后关闭罐底部及罐夹层的排污阀，让罐中温度自然降至80℃以下备用。
松茸、灰树花种子罐菌种培养
配方：土豆淀粉5%，葡萄糖8%，蛋白胨0.5%，磷酸氢二钾0.4%，聚醚消泡剂0.1%，自来水86%，pH自然。
具体操作：首先将配方中所使用的自来水投入到已空罐灭菌的种子罐中，开动搅拌机，分别加入配方中所需用的原料（加入顺序不分先后），然后在不停搅拌下通入蒸汽加温。首先利用罐夹层或盘管换热器蒸汽加热到95℃时，再改用直接蒸汽加热，当罐中温度达到121℃时保持30分钟即可达到灭菌的效果，然后关闭蒸汽，开始通过罐夹层或盘管换热器中的自来水冷却降温，当罐内温度降到30℃备用，此称为松茸、灰树花种子罐菌种培养基。然后将以上培养好的松茸、灰树花一级种子菌种液在无菌条件下接种到种子罐当中，接种量按4%（即100公斤种子罐培养基接种4公斤一级种子菌种液）。然后盖好罐口的接种帽开始搅拌培养，温度30℃，pH值自然，搅拌转速100转/分钟，罐压0.05兆帕，培养时间48小时即可达到要求，此称为松茸、灰树花种子罐菌种液。
青春双歧杆菌种子罐菌种培养
配方：蛋白胨1%，牛肉浸膏1.5%，酵母浸膏0.5%，葡萄糖1.6%，7水硫酸镁0.3%，磷酸氢二钾0.5%，茶多酚0.1%，自来水95%，pH自然。
具体操作：首先将配方中所使用的自来水投入到已空罐灭菌的种子罐中，开动搅拌机，分别加入配方中所使用的原料（加入顺序不分先后），然后在不停搅拌下通入蒸汽加温。首先利用罐夹层或盘管换热器蒸汽加热到95℃时，再改为直接蒸汽加热，当罐中温度达到121℃时保持30分钟即可达到灭菌的效果，然后关闭蒸汽，开始通过罐夹层或盘管换热器中的自来水冷却降温，当罐内温度降到37℃备用，此称为青春双歧杆菌种子罐菌种培养基。
然后将以上培养好的青春双歧杆菌一级菌种液在无菌条件下接种到种子罐当中，接种量按5%（即100公斤种子罐培养基接种5公斤一级菌种液）。然后盖好罐口的接种帽，通入高纯氮气（99.9%的），保持罐压0.05-0.07兆帕即可，开动搅拌机培养，温度37℃，pH自然，搅拌转速120转/分钟，罐压0.05-0.07兆帕，培养时间18小时即可达到质量要求，此称为青春双歧杆菌种子罐菌种液。
补料罐补料配方及灭菌操作：
配方：蛋白胨1.5%，牛肉浸膏2%，酵母浸膏1%，葡萄糖2%，7水硫酸镁0.1%，磷酸氢二钾0.6%，绿茶（按含茶多酚20%计算）0.3%，乳糖0.5%，低聚异麦芽糖1%，自来水91%。
具体操作：首先将配方中所使用的自来水投入到已空罐灭菌的补料罐中，开动搅拌机，分别加入配方中所使用的原料（加入顺序不分先后），然后在不停搅拌下通入蒸汽加温。首先利用罐夹层或盘管换热器蒸汽加热到95℃时，再改为直接蒸汽加热，当罐中温度达到121℃时保持25分钟即可达到灭菌的效果，然后关闭蒸汽，开始通过罐夹层或盘管换热器中的自来水冷却降温，当罐内温度降到37℃备用，此称为补料。（绿茶的预处理：取配方中的水、茶重量的10倍，加热到95℃，然后将茶叶放到水中浸泡10分钟，连续泡3次，用纱布过滤后取清液加入到补料罐中）
发酵
配方：葡萄糖1.5%，玉米粉1.5%，乳糖1%，绿豆粉5%，土豆淀粉0.5%，7水硫酸镁0.3%，磷酸氢二钾0.5%，维生素B1 0.3%，低聚异麦芽糖0.3%，菊苣粉1%，聚葡萄糖1.5%，聚醚消泡剂0.1 %，自来水86.5%，pH值自然。
具体操作：首先将配方中所使用的自来水投入到已空罐灭菌的发酵罐中，开动搅拌机，然后向罐中加入配方中所使用的原料（加入顺序不分先后），然后通入蒸汽加热。首先利用罐夹层或盘管换热器加热到95℃时，再改为直接蒸汽加热，当罐中温度达到121℃时开始计时，保持35分钟即可达到灭菌的效果，然后通过罐夹层或盘管换热器中的自来水冷却降温，当罐内温度降到30℃时，开始接入松茸、灰树花种子罐菌种液，接种前首先提高种子罐的罐压力达到0.1兆帕，发酵罐的罐压保持0.05兆帕，然后打开接种管道阀门，将种子罐培养好的菌种液通过压差的方式输送到发酵罐中去，然后关闭接种管道阀门。
接种量是每100公斤发酵罐中的培养基接种6公斤，培养条件、发酵温度30℃，搅拌转速100转/分钟，无菌空气通入量以每分钟每100公斤培养基通气0.1立方为准，罐压0.05兆帕，pH值自然，发酵时间40小时即可，此称为松茸、灰树花发酵液。
将发酵合格的松茸、灰树花发酵液在不停搅拌下加温至37℃，然后利用管道输送方式将灭菌的补料加入发酵罐中（松茸、灰树花发酵液），然后再将青春双歧杆菌种子罐菌种液通过管道输送方式加入到发酵罐中，接种量是每100公斤发酵罐中的培养基接种6公斤，通入高纯氮气（含量99.9%的），保持罐压0.05兆帕，开始厌氧发酵，培养条件：发酵温度37℃，搅拌转速100转/分钟，无菌空气通入量以每分钟每100公斤培养基通气0.1立方为准，罐压0.05兆帕，pH值自然，发酵时间24小时，此称为终端混合发酵液。
离心：
首先将终端混合发酵液抽入到贮罐中，然后开始离心，采用管式离心机以发酵液37℃，离心转速为每分钟1万转，发酵液每分钟流速3公斤的条件下为最佳工艺离心，完毕后收集活菌体及其有效代谢产物备用。
干燥前预处理。首先取收集的活菌体及其有效代谢产物100公斤（按100公斤计时）、麦芽糊精10公斤、低聚异麦芽糖1.5公斤、海藻糖5公斤、L-半胱氨酸盐酸盐0.8公斤、山药多糖1公斤、自来水50公斤。
操作：首先取配方中的自来水25公斤加入到收集的100公斤活菌体及其有效代谢产物中，搅拌均匀制成菌悬液，剩余的25公斤自来水将以上配方中的原料溶化，称为辅料液，然后将辅料液与菌悬液二者混合搅拌均匀，称为混合液。
干燥：采用真空干燥箱或真空冷冻干燥机将混合液干燥，干燥后的水分控制在6%为宜，然后采用80目细度的粉碎机将其粉碎，包装备用，此称为防辐射干燥菌粉。
防辐射产品的成品复配：
配方：防辐射干燥菌粉2 %，番茄粉5%，绿豆淀粉6%，海带多糖3%，黑木耳多糖0.5%，鱼腥草多糖0.5%，魔芋葡甘聚糖3%，菊苣粉60%，低聚木糖10%，低聚异麦芽糖5%，异麦芽酮糖2%，聚葡萄糖3%。
混合操作：将以上各物料放入三维调解混合机中（先加入菊苣粉，其他物料不分先后）混合均匀，然后按要求分装胶囊，压片、铅塑包装中即为成品。也可根据市场要求做成囊剂、粉剂、片剂、膏剂、液体、乳制品等出售。
发酵培养基的优化
拟定配方：葡萄糖3%，玉米粉3%，乳糖2.5%，绿豆粉7%，土豆淀粉2%，7水硫酸镁1%，磷酸氢二钾1.5%，维生素B1 1%，低聚异麦芽糖1%，菊苣粉5%，聚葡萄糖5%，自来水。
优化后的发酵培养基：葡萄糖1.5%，玉米粉1.5%，乳糖1%，绿豆粉5%，土豆淀粉0.5%，7水硫酸镁0.3%，磷酸氢二钾0.5%，维生素B1 0.3%，低聚异麦芽糖0.3%，菊苣粉1%，聚葡萄糖1.5%，聚醚消泡剂0.1 %，自来水86.5%。
培养基优化原料选择用量
（1）葡萄糖从0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%、3%进行了反复210批次试验，最后用量最优的是1.5%。
（2）玉米粉从0.25%、0.5%、0.75%、1%、1.25%、1.5%、2%、2.5%、3%进行反复185批次试验，最后最优用量是1.5%。
（3）乳糖从0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%进行反复175批次试验，最后最优用量是1%
（4）绿豆粉从1%、1.5%、2%、2.5%、3%、3.5%、4%、4.5%、5%、5.5%、6%、6.5%、7%进行反复220批次试验，最后最优用量是5%。
（5）土豆淀粉从0.25%、0.5%、0.75%、1%、1.25%、1.5%、1.75%、2%进行反复185批次试验，最后最优用量是0.5%。
（6）7水硫酸镁从0.1%、0.2%、0.3%、0.5%、0.8%、1%进行反复90批次试验，最后最优用量是0.3%。
（7）磷酸氢二钾0.25%、0.5%、0.75%、1%、1.25%、1.5%进行反复90批次试验，最后最优用量是0.5%。
（8）维生素B1从0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.7%、1%进行反复140批次试验，最后最优用量是0.3%。
（9）低聚异麦芽糖从0.1%、0.2%、0.25%、0.3%、0.5%、0.7%、1%进行反复150批次试验，最后最优用量是0.3%。
（10）菊苣粉从0.1%、0.5%、0.8%、1%、2%、2.5%、3.5%、5%进行反复120批次试验，最后最优用量是1%。
（11）聚葡萄糖从0.25%、0.5%、1%、1.25%、1.5%、2%、3%、4%、5%进行反复140批次试验，最后最优用量是1.5%。.
pH值的优化.该发酵培养基经灭菌后的自然pH值为6-6.5之间，发酵过程中由于该菌产生酸性物质，最终可将发酵液pH值维持在5-6之间，这个pH区间值也是收获产品最佳的。
在发酵试验过程中我们对pH值调整为3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8并反复进行了345批次试验，最终选择pH值为自然最佳。
对比例1
将实施例中松茸扩大菌种液、灰树花扩大菌种液同时接种到三角瓶中，培养得到松茸、灰树花一级菌种液，将青春双歧杆菌扩大菌种液接种到三角瓶中，培养得到青春双歧杆菌一级菌种液，换为松茸扩大菌种液、青春双歧杆菌扩大菌种液同时接种到三角瓶中，得到松茸、青春双歧杆菌一级菌种液，将灰树花扩大菌种液单独接种到三角瓶中培养得到灰树花一级菌种液。其他条件不变。
对比例2
将实施例中松茸扩大菌种液、灰树花扩大菌种液同时接种到三角瓶中，培养得到松茸、灰树花一级菌种液，将青春双歧杆菌扩大菌种液接种到三角瓶中，培养得到青春双歧杆菌一级菌种液，换为灰树花扩大菌种液、青春双歧杆菌扩大菌种液同时接种到三角瓶中，得到灰树花、青春双歧杆菌一级菌种液，将松茸扩大菌种液单独接种到三角瓶中培养得到松茸一级菌种液。其他条件不变。
对比例3
将实施例中松茸扩大菌种液、灰树花扩大菌种液同时接种到三角瓶中，培养得到松茸、灰树花一级菌种液，将青春双歧杆菌扩大菌种液接种到三角瓶中，培养得到青春双歧杆菌一级菌种液，换为仅将松茸扩大菌种液单独接种到三角瓶中培养得到松茸一级菌种液。其他条件不变。
对比例4
将实施例中松茸扩大菌种液、灰树花扩大菌种液同时接种到三角瓶中，培养得到松茸、灰树花一级菌种液，将青春双歧杆菌扩大菌种液接种到三角瓶中，培养得到青春双歧杆菌一级菌种液，换为仅将灰树花扩大菌种液单独接种到三角瓶中培养得到灰树花一级菌种液。其他条件不变。
对比例5
将实施例中松茸扩大菌种液、灰树花扩大菌种液同时接种到三角瓶中，培养得到松茸、灰树花一级菌种液，将青春双歧杆菌扩大菌种液接种到三角瓶中，培养得到青春双歧杆菌一级菌种液，换为仅将青春双歧杆菌扩大菌种液单独接种到三角瓶中培养得到青春双歧杆菌一级菌种液。其他条件不变。
将实施例及对比例收集到的有效代谢产物进行检测，对照组6为未进行发酵，从以下表中可以看出发酵后的有效物质含量：
Figure 122494DEST_PATH_IMAGE002
从以上表中可以看出，发酵后的各种有效物质大大超过了对照组，有效物质的提高为抗辐射产品的有效性提供了保障。
试验组
动物试验结果
动物名称：小白鼠正常对照组
动物名称：小白鼠
Figure 210273DEST_PATH_IMAGE004
试验组服用实施例1抗辐射产品组
动物名称：小白鼠
Figure DEST_PATH_IMAGE006
随机选取小鼠200只，进行辐射试验，每24小时开微波炉1小时，开电脑3小时，手机干扰3小时，每天服25毫克实施例1及对比例1-5所制备的益生菌制剂的溶化饮水，应用于实验结果如下：
Figure DEST_PATH_IMAGE008
人体应用效果
Figure DEST_PATH_IMAGE010
注：选择试用的人员大多数是现代化电脑办公人员和经常接触微波炉的，都用手机。
说明：
女性：服用10天血糖明显稳定的94人，头痛头昏明显改善者56人，疲劳无力者改善40人，有10人各项指标没有改善。
服用30天血糖稳定者128人，头痛头昏改善者152人，睡眠改善者194人。
服用60天血糖稳定者188人，头痛头昏改善者192人，睡眠明显改善者190人，记忆力提高者176人。
男性
服用10天血糖明显稳定的108人，头痛头昏明显改善者72人，疲劳无力者改善92人，有6人各项指标没有改善。
服用30天血糖稳定者142人，头痛头昏改善者138人，睡眠改善者186人。
服用60天血糖稳定者192人，头痛头昏改善者194人，睡眠明显改善者196人，记忆力提高者184人。
以上体验者服用60天抗辐射产品，然后停服120天，以上改善症状未出现反弹。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (7)

1.一种消除电磁辐射的益生菌制剂的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将ACCC-51588松茸、ACCC-50246灰树花、CICC-6070青春双歧杆菌分别进行扩大培养，得到松茸扩大菌种液、灰树花扩大菌种液和青春双歧杆菌扩大菌种液；
（2）将松茸扩大菌种液、灰树花扩大菌种液同时接种到三角瓶中，培养得到松茸、灰树花一级菌种液，将青春双歧杆菌扩大菌种液接种到三角瓶中，培养得到青春双歧杆菌一级菌种液；
（3）将松茸、灰树花一级菌种液接种到种子罐培养，得到松茸、灰树花种子罐菌种液，将青春双歧杆菌一级菌种液接种到种子罐培养，得到青春双歧杆菌种子罐菌种液；
（4）先将松茸、灰树花种子罐菌种液接种到发酵罐中进行第一步发酵，得到松茸、灰树花发酵液，补料后，接种青春双歧杆菌种子罐菌种液，发酵，得到终端混合发酵液；
松茸、灰树花发酵罐的培养条件、发酵温度30℃，搅拌转速100转/分钟，无菌空气通入量以每分钟每100公斤培养基通气0.1立方为准，罐压0.05兆帕，发酵时间40小时，青春双歧杆菌种子液接种后发酵的条件为培养条件、发酵温度30℃，搅拌转速100转/分钟，无菌空气通入量以每分钟每100公斤培养基通气0.1立方为准，罐压0.05兆帕，发酵时间24小时；
补料的培养基质量分数为：蛋白胨1.5%，牛肉浸膏2%，酵母浸膏1%，葡萄糖2%，7水硫酸镁0.1%，磷酸氢二钾0.6%，绿茶0.3%，其中绿茶按含茶多酚20%计算，乳糖0.5%，低聚异麦芽糖1%，自来水91%；
第一步发酵的培养基质量分数为：葡萄糖1.5%，玉米粉1.5%，乳糖1%，绿豆粉5%，土豆淀粉0.5%，7水硫酸镁0.3%，磷酸氢二钾0.5%，维生素B1 0.3%，低聚异麦芽糖0.3%，菊苣粉1%，聚葡萄糖1.5%，聚醚消泡剂0.1 %，自来水86.5%；
（5）将终端混合发酵液离心，收集活菌体及其有效代谢产物，取自来水25公斤加入到收集的100公斤活菌体及其有效代谢产物中，制成菌悬液，剩余的25公斤自来水与麦芽糊精10公斤、低聚异麦芽糖1.5公斤、海藻糖5公斤、L-半胱氨酸盐酸盐0.8公斤、山药多糖1公斤混合，制成辅料液，然后将辅料液与菌悬液二者混合搅拌均匀，制成混合液；
（6）将制成的混合液干燥至水分6%以内，粉碎至80目，制成防辐射干燥菌粉，按照质量配比：防辐射干燥菌粉2%，番茄粉5%，绿豆淀粉6%，海带多糖3%，黑木耳多糖0.5%，鱼腥草多糖0.5%，魔芋葡甘聚糖3%，菊苣粉60%，低聚木糖10%，低聚异麦芽糖5%，异麦芽酮糖2%，聚葡萄糖3%混合均匀，制成益生菌制剂。
2.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，步骤（1）中松茸、灰树花、青春双歧杆菌扩大培养的接种操作为：菌种分别加入培养基2毫升，制成冻干管菌悬液，然后分别加入培养基10毫升，进行扩大化培养；
步骤（2）中松茸扩大菌种液、灰树花扩大菌种液接种到三角瓶的接种量分别为100毫升培养基接种扩大菌种液3毫升；青春双歧杆菌扩大菌种液的接种量为：100毫升一级种子培养基接种扩大菌种液4毫升；
步骤（3）中松茸、灰树花一级菌种液接种到种子罐的接种量为：100公斤种子罐培养基接种4公斤一级种子菌种液；青春双歧杆菌一级菌种液接种到种子罐的接种量为：100公斤种子罐培养基接种5公斤一级种子菌种液；
步骤（4）中松茸、灰树花种子罐菌种液接种到发酵罐中接种量是每100公斤发酵罐中的培养基接种6公斤；青春双歧杆菌种子罐菌种液接种到发酵罐中接种量是每100公斤发酵罐中的培养基接种6公斤。
3.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，步骤（5）中终端混合发酵液离心的条件为：采用管式离心机以发酵液37℃，离心转速为每分钟1万转，发酵液每分钟流速3公斤。
4.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，步骤（1）松茸、灰树花的扩大培养的培养基的配方：土豆淀粉10克，葡萄糖30克，磷酸氢二钾1克，硫酸镁0.2克，水1000毫升；青春双歧杆菌扩大培养培养基：蛋白胨8克，牛肉浸膏8克，酵母浸膏3克，磷酸氢二钾1克，葡萄糖15克，硫化钠1克，自来水1000毫升；
步骤（2）中一级松茸、灰树花种子培养的培养基：土豆淀粉5克、玉米粉20克、葡萄糖25克、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.3克，水1000毫升；一级青春双歧杆菌种子培养的培养基：蛋白胨6克，牛肉浸膏6克，酵母浸粉4克，葡萄糖10克，硫化钠2克，磷酸氢二钾3克，蛋氨酸1克，自来水1000毫升；
步骤（3）中松茸、灰树花种子罐培养基质量分数为：土豆淀粉5%，葡萄糖8%，蛋白胨0.5%，磷酸氢二钾0.4%,聚醚消泡剂0.1%，自来水86%；青春双歧杆菌种子罐培养基质量分数为：蛋白胨1%，牛肉浸膏1.5%，酵母浸膏0.5%，葡萄糖1.6%，7水硫酸镁0.3%，磷酸氢二钾0.5%，茶多酚0.1%，自来水95%。
5.一种权利要求1-4之一所述的生产方法制备的益生菌制剂。
6.根据权利要求5所述的益生菌制剂，其特征在于，益生菌制剂为囊剂、粉剂、片剂、膏剂、液体或乳制品。
7.一种权利要求5所述的益生菌制剂在制备消除电磁辐射的制剂中的应用。
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