CN108721179B - 一种具有美白功效的植物提取物组合物及制法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明属于化妆品领域，具体涉及具有美白功效的植物提取物组合物及制法和用途，植物组合物由植物苦参、竹叶、火棘果、枸杞提取物组成，可用于皮肤护理，尤其是皮肤美白化妆品，各植物提取物的含量为：苦参1~34%、竹叶1~34%、火棘果1~34%和枸杞1~34%。通过上述植物提取物的复配而成的组合物，能从多种途径出发减少皮肤黑色素，且对皮肤具有多种作用，因此，该组合物能更有效的发挥美白的功效。
Description
技术领域
本发明属于化妆品领域，具体涉及具有美白功效的植物提取物组合物及制法和用途，植物组合物由植物苦参、竹叶、火棘果、枸杞提取物组成，可用于皮肤护理，尤其是皮肤美白化妆品。
背景技术
亚洲女性一直追求肌肤白若凝脂。然而由于工作节奏快、心理压力大、内分泌失调、环境污染等内外因素的影响，皮肤也相应会出现暗沉、色素沉着等现象，因此美白是皮肤护理最重要的主题之一。通常所说的黑色素主要是指优黑素和褐黑素。现代美容医学表明，黑色素是通过一系列氧化反应形成的：在酪氨酸酶、多巴色素互变异构酶、5,6-二羟基吲哚羧酸氧化酶这三种酶不同阶段的参与下，黑色素细胞中的酪氨酸经过一系列反应生成5,6-二羟基吲哚或5,6-二羟基吲哚羧酸，以形成优黑素；同时，在半胱氨酸或谷胱甘肽的催化下，上述反应过程中的中间产物多巴醌被转换为半胱氨酰多巴或谷氨酰胺多巴，最后生成褐黑素。进而，黑色素细胞组织将黑色素转移到表皮基底层细胞中，随着细胞的新陈代谢而被带到角质层中，最后随角质化细胞脱落。
皮肤美白的机制有多种，例如：防御紫外线辐射、抑制黑素细胞中酪氨酸酶/多巴互变酶/5,6-二羟基吲哚羧酸氧化酶活性、提高机体超氧化歧化酶活性并清除多余超氧自由基、抑制黑素转移、促进角质细胞更新等，但是，目前在产品中采用的美白化妆品添加剂较为单一，且美白机制以抑制酪氨酸酶活性为主，缺乏多种机制综合运用。
随着生活水平的提高，人们对美白化妆品的要求也越来越高。除了美白肌肤外，还有许多方面有待加强，如延缓皮肤衰老、减少皱纹、光滑肌肤，这些可通过提高机体超氧化歧化酶活性和清除多余超氧自由基来实现；促黑素细胞激素（α-MSH）是由黑色素细胞产生的，其与黑皮素-1（MCR-1）受体相结合，会通过一系列反应最终激活酪氨酸酶的合成表达，从而促进黑色素合成增加，若能抑制α-MSH产生可从酪氨酸酶合成的源头阻止黑素生成，最终达到美白效果。此外，机制单一的美白产品总体效果较差，因此，为了研发出功效更突出的美白化妆品，需要多种机制的综合运用来更好的达到美白肌肤的目的。
苦参，性寒，可清热燥湿、杀虫止痒、缓解皮肤瘙痒平衡油脂分泌，疏通并收敛毛孔，清除皮肤内毒素杂质，促进受损血管神经细胞的生长和修复，恢复皮下毛细血管细胞活力，还可用于湿疹、湿疮、湿毒疮疡。
竹叶提取物高度浓缩了黄酮类化合物和香豆素类内酯营养素，具有良好的抗自由基能力；其抗衰老，抗疲劳和免疫调节作用与松花粉相当；降血脂和血胆固醇作用与银杏叶提取物相近；抗菌，消炎和抗病毒作用与茶多酚相似；具有调节血脂的保健功能，可有效保护人体健康。
火棘果，消积止痢，活血止血。用于消化不良，肠炎，痢疾，小儿疳积，崩漏，白带，产后腹痛。
枸杞，具有促进免疫、抗衰老、抗肿瘤、抗疲劳、抗辐射、调节血脂、降血糖、降血压、保护生殖系统、提高视力、提高呼吸道抗病能力、美容养颜和滋润肌肤。
上述植物传统上都是用来食用或者入药，补充人体所需营养元素，或起到调节人体机理作用。目前国内外尚未见到将上述植物提取物的组合物用于皮肤美白的皮肤护理化妆中，该组合物能从多种途径出发减少皮肤黑色素，且对皮肤具有多种积极作用，能更有效的发挥美白的功效。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种具有美白功效的植物提取物组合物，该组合物作用可靠，具有抑制黑色素以及美白肌肤的作用。
本发明要解决的另一技术问题在于提供上述具有美白功效的植物提取物组合物的制备方法。
本发明所要解决的再一技术问题在于提供上述具有美白功效的植物提取物组合物的用途，用于皮肤护理产品中。
为解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：一种具有美白功效的植物提取物组合物，组合物由植物苦参、竹叶、火棘果和枸杞的提取物组成，
优选地，按重量百分比计，各植物提取物的含量为：苦参1~34%、竹叶1~34%、火棘果1~34%和枸杞1~34%。
应当指出的是，本发明中各植物提取物的百分含量是以组合物的干重为基准，但在制备过程中往往得到的是包含该组合物的溶液。
针对上述的具有美白功效的植物提取物组合物的制备方法，包括以下步骤：
S10，在30℃-80℃的温度下，将上述植物组方用乙醇水溶液浸泡，得到乙醇提取液；
S20，乙醇提取液过滤后浓缩，用大孔吸附树脂进行纯化，洗脱后收集洗脱液；
S30，浓缩洗脱液，加入1,3-丁二醇，搅拌均匀，静置12-36小时，收集上清液；
S40，对上清液进行离心分离，获得离心上清液，离心上清液内包含上述具有美白功效的植物提取物组合物。
优选地，S10具体包括以下步骤：
S101，量取上述植物组方，以克为单位，记总重量为数值A；
S102，以毫升为单位，记乙醇水溶液的体积为数值B，量取10%-80%乙醇水溶液使得数值B为数值A的5-20倍；
S103，植物组方在10%-80%的乙醇水溶液中浸泡提取，提取次数为1-3次，每次浸泡提取2-48小时，合并乙醇提取液。
优选地，S20中，乙醇提取液浓缩10-50倍。
优选地，S20中，洗脱步骤用洗脱剂为10-95%的乙醇水溶液。
优选地，S30中，洗脱液浓缩10-20倍。
优选地，S30中，1,3-丁二醇的添加量为洗脱液的体积的0.5-3倍。
针对上述方法制得的具有美白功效的植物提取物组合物的用途，用于制备皮肤护理化妆品或药品，包括霜剂、乳液、化妆水、凝胶剂、面膜、涂擦剂和洗剂。
采用本发明具有如下的有益效果：
1、苦参中的生物碱类成分能抑制黑素细胞中酪氨酸酶的活性，能够抑制黑色素从黑素细胞中向角质层转移，同时对皮肤具有抵御外界刺激的舒缓作用，从而有美白镇静皮肤的作用。
2、竹叶中的有机酸能够有效抑制α-MSH引起的酪氨酸酶活性增加和黑素合成增多，且能抑制α-MSH引起的酪氨酸酶蛋白表达，同时具有清除过量自由基抗氧化效果，因此能够有效促进皮肤美白。
3、火棘果中的有机酸类成分能够抑制酪氨酸酶活性，促进表皮角质细胞更新，加速黑素代谢；黄酮类成分具有清除自由基、抑制酪氨酸酶的作用，因此具有美白延缓衰老的效果。
4、枸杞中的多糖类成分能够提高角质层水合作用，增强皮肤屏障，有机酸类成分可抑制酪氨酸酶活性，从而具有美白及增强皮肤屏障作用。
5、通过上述植物提取物的复配而成的组合物，能从多种途径出发减少皮肤黑色素，且对皮肤具有多种作用，因此，该组合物能更有效的发挥美白的功效。
附图说明
图1为本发明实施例具有美白功效的植物提取物组合物的以L-酪氨酸为底物的体外酪氨酸酶活性评价图；
图2为本发明实施例具有美白功效的植物提取物组合物的自然状态下对黑色素生成的抑制作用。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
量取苦参1g、竹叶34g、火棘果34g和枸杞31g，用20倍量[溶液体积(ml):药材重量(g)]的含80%的乙醇水溶液在30℃浸泡提取1次，每次浸泡2h，制备成乙醇提取液；
将乙醇提取液过滤后浓缩10倍，用大孔吸附树脂进行纯化，用95%的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱后收集洗脱液；
洗脱液浓缩10倍后，加3倍体积的1,3-丁二醇，搅拌均匀，静置24小时，收集上清液；
对上清液进行离心操作，获得离心上清液，离心上清液内包含本发明的组方中需要的有效成分，即具有美白功效的植物提取物组合物。
实施例2
量取苦参33g、竹叶34g、火棘果32g和枸杞31g，用10倍量[溶液体积(ml):药材重量(g)]的含10%的乙醇水溶液在40℃浸泡提取2次，每次浸泡48h，制备成乙醇提取液；
将乙醇提取液过滤后浓缩50倍，用大孔吸附树脂进行纯化，用75%的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱后收集洗脱液；
洗脱液浓缩15倍后，加0.5倍体积的1,3-丁二醇，搅拌均匀，静置36小时，收集上清液；
对上清液进行离心操作，获得离心上清液，离心上清液内包含本发明的组方中需要的有效成分，即具有美白功效的植物提取物组合物。
实施例3
量取苦参34g、竹叶1g、火棘果33g和枸杞32g，用5倍量[溶液体积(ml):药材重量(g)]的含50%的乙醇水溶液在50℃浸泡提取3次，每次浸泡24h，制备成乙醇提取液；
将乙醇提取液过滤后浓缩30倍，用大孔吸附树脂进行纯化，用10%的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱后收集洗脱液；
洗脱液浓缩13倍后，加1倍体积的1,3-丁二醇，搅拌均匀，静置12小时，收集上清液；
对上清液进行离心操作，获得离心上清液，离心上清液内包含本发明的组方中需要的有效成分，即具有美白功效的植物提取物组合物。
实施例4
量取苦参34g、竹叶31g、火棘果1g和枸杞34g，用15倍量[溶液体积(ml):药材重量(g)]的含30%的乙醇水溶液在65℃浸泡提取2次，每次浸泡36h，制备成乙醇提取液；
将乙醇提取液过滤后浓缩40倍，用大孔吸附树脂进行纯化，用30%的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱后收集洗脱液；
洗脱液浓缩20倍后，加1.5倍体积的1,3-丁二醇，搅拌均匀，静置18小时，收集上清液；
对上清液进行离心操作，获得离心上清液，离心上清液内包含本发明的组方中需要的有效成分，即具有美白功效的植物提取物组合物。
实施例5
量取苦参34g、竹叶18g、火棘果30g和枸杞18g，用7倍量[溶液体积(ml):药材重量(g)]的含70%的乙醇水溶液在80℃浸泡提取3次，每次浸泡12h，制备成乙醇提取液；
将乙醇提取液过滤后浓缩20倍，用大孔吸附树脂进行纯化，用50%的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱后收集洗脱液；
洗脱液浓缩18倍后，加2倍体积的1,3-丁二醇，搅拌均匀，静置32小时，收集上清液；
对上清液进行离心操作，获得离心上清液，离心上清液内包含本发明的组方中需要的有效成分，即具有美白功效的植物提取物组合物。
应用实施例1
将实施例1-4制得的具有美白功效的植物提取物组合物，制备成皮肤护理化妆品或药品，包括霜剂、乳液、化妆水、凝胶剂、面膜、涂擦剂和洗剂。
应用实施例2：体外酪氨酸酶活性功效评价
酪氨酸酶(Tyrosinase)是皮肤黑素生物合成的关键酶，不仅决定黑素合成的速率，还是黑素细胞分化成熟的特征性标志。在皮肤黑素生物合成过程中，酪氨酸羟化生成多巴，多巴氧化生成多巴醌，二羟基吲哚转化生成吲哚醌，这些反应步骤均需酪氨酸酶的参与。
1、实验主要试剂及仪器
表1. 实验所用主要试剂及仪器
| 仪器试剂名称 | 品牌 | 型号 | 储存条件 |
| Na<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub>.12H<sub>2</sub>O（磷酸盐缓冲溶液） | 国药 | 100203008 | RT |
| NaH<sub>2</sub>PO4.2H<sub>2</sub>O（磷酸盐缓冲溶液） | 国药 | 20040718 | RT |
| L-酪氨酸 | Sigma | V900426-100G | 4℃ |
| Mushroom Tyrosinase | Sigma | T3824-50KU | 干粉，4℃ |
| 酶标仪 | Thermo | MultiSkan FC | RT |
2、实验方法
以L-酪氨酸为底物：向96孔板中依次加入磷酸盐缓冲溶液（100mM，pH6.8）、样品溶液GL1（实施例2制得的具有美白功效的植物提取物组合物）、L-酪氨酸溶液（0.5mg/ml），然后加入酪氨酸酶液（250U/ml），混匀于37℃反应2h后，在酶标仪492nm处测吸光度。
3、实验结果
如图1所示，以L-酪氨酸为底物的反应中，37˚C反应2h时，GL1剂量依赖性地抑制酪氨酸酶活性（IC50=95.8μg/ml），最大抑制率达到52%，且效果显著强于同等浓度下的VCE（阳性对照：维生素C乙基醚）。
应用实施例3：作用于B16F1细胞上的功效评价
黑色素细胞是皮肤的重要组成细胞之一，呈树状突起，细胞内形成的黑色素通过树状突起运输到角质层细胞内。它以1：36比例与角质形成细胞构成一个表皮单位，存在于表皮基底层，黑色素细胞通过合成黑色素形成皮肤颜色，同时可吸收紫外线，使机体免遭紫外线的损害。皮肤颜色的深浅是由黑色素细胞合成黑色素数量的多少决定。
1、实验主要试剂及仪器
表2. 实验所用主要试剂及仪器
| 仪器试剂名称 | 品牌 | 型号 | 储存 |
| B16F1细胞 | 武汉细胞库 | CRL-6323 | -80℃ |
| 96孔板 | Corning | 3599 | RT |
| 培养瓶 25cm² | Corning | 430639 | RT |
| DMEM, high glucose, no phenol red | Gibco | 31053-028 | 4℃ |
| 0.25% Trypsin-EDTA (1X), Phenol Red（胰酶） | Gibco | 25200-056 | 4℃ |
| Foetal Bovine Serum（新生胎牛血清） | Gibco | 10099-141 | -20℃ |
| Penicillin/Streptomycin solution（青霉素） | Gibco | 15140-122 | 4℃ |
| Neutral Red Dye（中性红染色） | Sigma | N7005-1G | 4℃ |
| 倒置显微镜 | 江南永新 | XD202 | RT |
| 离心机 | 国产 | SelectSpin Spectra 6C | RT |
| 细胞计数仪 | Thermo | Countess II | RT |
| 二氧化碳培养箱 | Thermo | 371 | RT |
| 8道排枪及单枪 | Eppendorf | 20-200ul；0.5-10ul | RT |
| 酶标仪 | Thermo | MultiSkan FC | RT |
2、实验方法
用DMEM培养基补充10%新生胎牛血清、青霉素（100IU/ml）和链霉素（100µg/ml），37℃，5%CO2条件下培养B16F1小鼠黑色素瘤细胞。取对数期的B16F1细胞，弃去培养液，用PBS液（磷酸盐缓冲溶液）清洗2次，加入0.25%胰酶室温放置2min，培养液终止消化，1000rpm离心3min，用无酚红的完全DMEM培养液重悬细胞，进行计数，调节细胞浓度为1.5×105/ml，每孔100μl加入96孔板中，37℃，5%CO2条件下培养。24h后，细胞贴壁，加入不同浓度的待测样品（实施例2制得的具有美白功效的植物提取物组合物）及VCE（阳性对照：维生素C乙基醚），于37˚C5%CO2恒温培养箱继续培养72h。
黑色素含量测定：取出150μL细胞上清至新的96孔板，在酶标仪上于405nm处测定黑色素含量。
细胞活力测定：细胞活性用中性红摄取的方法来检测。细胞加入200μL预热的中性红染液（33μg/mL），孵育3h，弃去培养液，PBS清洗一次，加入100μL萃取液（50H2O：49ethanol：1acetic acid），室温温和震荡10min之后于540nm处测定吸收值。
3、实验结果
如图2所示，37˚C培养72h后，GL1剂量依赖性地抑制B16细胞产生的黑色素总量（IC50=34.8μg/ml），最大抑制率达到88%，且效果显著强于同等浓度下的VCE。
应用实施例2及应用实施例3证明：本发明的具有美白功效的植物提取物组合物，各成分之间发生协同作用，能从多种途径出发减少皮肤黑色素，且对皮肤具有多种作用，因此，该组合物能更有效的发挥美白的功效。其中，苦参中的生物碱类成分能抑制黑素细胞中酪氨酸酶的活性，能够抑制黑色素从黑素细胞中向角质层转移，同时对皮肤具有抵御外界刺激的舒缓作用，从而有美白镇静皮肤的作用；竹叶中的有机酸能够有效抑制α-MSH引起的酪氨酸酶活性增加和黑素合成增多，且能抑制α-MSH引起的酪氨酸酶蛋白表达，同时具有清除过量自由基抗氧化效果，因此能够有效促进皮肤美白；火棘果中的有机酸类成分能够抑制酪氨酸酶活性，促进表皮角质细胞更新，加速黑素代谢，黄酮类成分具有清除自由基、抑制酪氨酸酶的作用，因此具有美白延缓衰老的效果；枸杞中的多糖类成分能够提高角质层水合作用，增强皮肤屏障，有机酸类成分可抑制酪氨酸酶活性，从而具有美白及增强皮肤屏障作用。因此将本发明的具有美白功效的植物提取物组合物制备成皮肤护理化妆品或药品，包括霜剂、乳液、化妆水、凝胶剂、面膜、涂擦剂和洗剂后，美白效果显著且稳定。
应当理解，本文所述的示例性实施例是说明性的而非限制性的。尽管结合附图描述了本发明的一个或多个实施例，本领域普通技术人员应当理解，在不脱离通过所附权利要求所限定的本发明的精神和范围的情况下，可以做出各种形式和细节的改变。
Claims (2)
1.一种具有美白功效的植物提取物组合物，其特征在于，所述的组合物由植物苦参、竹叶、火棘果和枸杞的提取物组成；
按重量百分比计，所述各植物提取物的含量为：苦参1~34%、竹叶1~34%、火棘果1~34%和枸杞1~34%；
所述的具有美白功效的植物提取物组合物的制备方法，包括以下步骤：
S10，在30℃-80℃的温度下，将上述植物组方用乙醇水溶液浸泡，得到乙醇提取液；
S20，乙醇提取液过滤后浓缩，用大孔吸附树脂进行纯化，洗脱后收集洗脱液；
S30，浓缩所述洗脱液，加入1,3-丁二醇，搅拌均匀，静置12-36小时，收集上清液；
S40，对上清液进行离心分离，获得离心上清液，所述离心上清液内包含所述具有美白功效的植物提取物组合物；
S30中，所述洗脱液浓缩10-20倍，1,3-丁二醇的添加量为洗脱液的体积的0.5-3倍；
所述S10具体包括以下步骤：
S101，量取上述植物组方，以克为单位，记总重量为数值A；
S102，以毫升为单位，记所述乙醇水溶液的体积为数值B，量取10%-80%乙醇水溶液使得数值B为数值A的5-20倍；
S103，植物组方在10%-80%的乙醇水溶液中浸泡提取，提取次数为1-3次，每次浸泡提取2-48小时，合并乙醇提取液；
所述S20中，所述乙醇提取液浓缩10-50倍；
所述S20中，洗脱步骤用洗脱剂为10-95%的乙醇水溶液。
2.一种如权利要求1所述的植物提取物组合物的用途，其特征在于，用于制备皮肤护理化妆品或药品，包括霜剂、乳液、化妆水、凝胶剂、面膜和洗剂。
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