CN108714192B - 用于改善大脑神经营养功能的组合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于改善大脑神经营养功能的组合物，按重量百分比计，包括以下组分，芦笋提取物91.9‑99.8％，磷脂酰丝氨酸0‑2.4％、真菌提取物0‑2.4％、茶氨酸0.09‑1.6％、γ‑氨基丁酸0.09‑2.0％，芦笋提取物为固体粉末状或液体状，芦笋提取物为芦笋茎、叶、下脚料中的一种或多种中提取的芦笋皂苷含量≥0.3g/100g的提取物，真菌提取物为香菇、灵芝、猴头菇、姬菇、杏鲍菇中一种或多种中的提取物，芦笋提取物、真菌提取物的提取溶剂均为水或乙醇与水的混合物，该组合物能够通过提高海马乙酰胆碱含量、促进脑源性神经营养因子生长，同时促进神经生长因子基因表达等机制，发挥改善大脑神经营养功能作用。

Description

用于改善大脑神经营养功能的组合物及其应用
技术领域
本发明属于食品药品技术领域，涉及一种组合物，特别是一种用于改善大脑神经营养功能的组合物及其应用。
背景技术
大脑作为调控身体各个系统和器官的高级中枢,参与并调节学习、记忆、语言及意识等神经活动。脑的功能与人类的生活息息相关,脑功能的异常对人的认知、情感、行为以及各个脏器的功能都会产生不同程度的影响, 进一步影响到人类的日常生活、工作学习和社会活动等。我国是世界第一人口大国，但整体而言人口素质偏低、高素质人才资源缺乏，这已成为制约我国社会与经济发展的瓶颈。当今社会强调优先发展教育事业，建设教育强国，加快教育现代化，办好人民满意的教育。我国3亿多儿童青少年的教育与学习质量、效率的提高有赖于对他们大脑神经功能规律的了解。许多研究表明，我国儿童青少年群体中，阅读障碍的发生率为6％左右，计算障碍的发生率为5％左右，注意缺陷障碍的发生率为7％左右，学习障碍的发生率可能高达10％。它们正严重地影响着数以千万计的儿童青少年的健康成长，急需提出科学、有效的解决方案。同时，在人口老龄化日益加剧的今天,以神经元退行性变为主要特征的老年病的发病率呈现逐年上升趋势。据《2010年第六次全国人口普查主要数据公报(第1号)》显示，我国人口平均预期寿命达74.83岁，60岁及以上老龄人口总数已逾2亿,与老龄化相关的神经疾病是危害老年人群健康的主要杀手。临床上常见的神经退行性疾病,如阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病、糖尿病脑病以及抑郁症等。目前关于改善脑神经功能的很多方法多是来自观察性研究，美国国立卫生研究院2010年评价表明，众多声称改善脑神经功能的方法如维他命 B6、B12、维他命E、β-胡萝卜素、欧米伽-3s等均无明显效果。
日本专利(申请号JP20060050766)，名称为“脑功能改良剂”的发明专利，公开了一种芦笋组合物，优选是芦笋嫩茎的提取物。优选芦笋的提取物含有GABA，优选通过加入选自DHA、EPA、卵磷脂和茶氨酸的一个或多个物质获得改良大脑的功能改良剂。此专利存在脑功能范围较宽，未公开芦笋组合物具体如何应用及作用机理。国内专利(申请号201710064316.0，本单位前期研究)，公开了一种芦笋组合物，包括芦笋提取物、γ-氨基丁酸、茶氨酸，限定了各组分组成，其中芦笋组合物的活性成分是芦笋皂苷，且限定了芦笋皂苷的含量范围，确定了发明芦笋组合物具有调节神经递质平衡的功能，可应用于睡眠障碍、更年期症状等问题，未公开大脑功能方面应用，且其中芦笋提取物是通过常规方法获得。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了用于改善大脑神经营养功能的组合物，能通过提高海马乙酰胆碱含量、促进脑源性神经营养因子生长及促进神经生长因子基因表达作用改善大脑神经营养功能，该组合物组方合理，根据大脑神经营养功能机制科学配伍，原料全部选自食品法律法规允许使用范围，食用安全、方便。
为实现改善大脑神经营养功能，本发明采用的具体技术方案是：用于改善大脑神经营养功能的组合物，关键在于，按重量百分比计，包括以下组分，芦笋提取物91.9-99.8％，磷脂酰丝氨酸0.3-2.4％、真菌提取物 0.3-2.4％、茶氨酸0.09-1.6％、γ-氨基丁酸0.09-2.0％，所述改善大脑神经营养功能是指提高海马乙酰胆碱含量或促进脑源性神经营养因子生长或促进神经生长因子基因表达作用。
优选的，按重量百分比计，包括以下组分，芦笋提取物94-97％，磷脂酰丝氨酸1-2％、真菌提取物1-2％、茶氨酸0.5-1.2％、γ-氨基丁酸0.5-1.5％。
所述的芦笋提取物的制备方法为：将芦笋茎、叶、下脚料中的一种或多种干燥粉碎后浸泡或者鲜芦笋压榨后的芦笋汁，采用水或乙醇水溶液为溶剂，采用常温浸提和超高压提取依次交替提取方法，得到芦笋提取液，将芦笋提取液经活性炭吸附、电极膜过滤提纯后，浓缩至比重1.02-1.08，得到液体芦笋提取物；然后，将液体芦笋提取物干燥后，得到固体芦笋提取物。
所述依次交替提取方法超高压提取次数为2-4次，每次超高压提取时间为1-2min,提取压力为200-500MPa,料液比为1:10-1:30,总浸提时间为 30-60min。
所述活性炭吸附的活性炭加入量是提取液重量的3-8％，所述活性炭吸附的接触时间为15-120min。
所述电极膜的厚度为0.15～1.0mm。
所述的液体芦笋提取物的芦笋皂苷含量≥0.35g/100g的提取物，固体芦笋提取物的芦笋皂苷含量≥1.4g/100g的提取物。
所述的真菌提取物为香菇、灵芝、猴头菇、姬菇、杏鲍菇中一种或多种中的提取物。
所述的真菌提取物的提取溶剂为水或乙醇与水的混合物。
一种用上述用于改善大脑神经营养功能的组合物在制备调理学习和/ 或记忆能力、失认症、健忘症、失语症、脑神经组织损伤、脑中风后遗症、脑瘫、脑萎缩或痴呆症的食品、保健食品或药品中的应用。
本发明的有益效果为：本发明是在前期大量动物实验及临床试验证明芦笋提取物具有改善睡眠障碍功能基础上，进而深入研究芦笋提取物在脑神经功能领域更广泛地应用，以芦笋提取物为主要原料，搭配具有增加神经递质乙酰胆碱的产生，增强脑葡萄糖代谢，降低氢化可的松的水平，增强神经生长因子的活性作用的磷脂酰丝氨酸、具有抗氧化、保护神经细胞与促进神经元细胞分化功能的真菌提取物、具有竞争性地与NMDA和非NMDA受体结合而保护神经元作用的茶氨酸、具有提高葡萄糖磷酸酯酶的活性，促使脑细胞活动旺盛作用的γ-氨基丁酸，各组分通过不同靶点分别发挥作用，相互协同、缺一不可，共同组成具有改善大脑神经营养功能的组合物。发明人在无数次反复实验基础上探索出具有显著改善大脑神经营养功能组合物的配伍方法，并通过无数次验证实验确定了各组合物的配比关系，最终制得的本发明组合物能够通过提高海马乙酰胆碱含量、促进脑源性神经营养因子生长，同时促进神经生长因子基因表达等机制，发挥改善大脑神经营养功能作用。
附图说明
图1为实施例1旷场实验中各组小鼠在旷场中的总路程的统计图；
图2为实施例1旷场实验中各组小鼠在旷场中的速度的统计图；
图3为实施例1旷场实验中各组小鼠在旷场中心区域的时间的统计图；
图4为实施例1新物体识别实验中各组小鼠对物体的总探索时间的统计图；
图5为实施例1新物体识别实验中各组小鼠的辨别指数的统计图；
图6为实施例1中Y-迷宫实验的结构示意图；
图7为实施例1中Y-迷宫实验中各组小鼠的自发交替的统计图；
图8为实施例1中水迷宫实验中训练期第四天各组小鼠的潜伏期的统计图；
图9为实施例1中水迷宫实验中测试期各组小鼠在目标象限的时间的统计图；
图10为实施例1中样品采集的各组小鼠海马中乙酰胆碱的含量的统计图；
图11为实施例1中样品采集的各组小鼠海马中乙酰胆碱酯酶的含量的统计图；
图12为实施例1中样品采集的各组小鼠海马中与记忆相关的基因表达的RT-PCR结果；
图13为实施例1中样品采集的各组小鼠血清中丙二醛的含量的测定结果；
图14为实施例1中样品采集的各组小鼠血清中过氧化氢酶的含量的测定结果；
图15为实施例1中样品采集的各组小鼠血清中的总抗氧化能力的测定结果；
图16为实施例1中样品采集的各组小鼠血清中超氧化物歧化酶活力的测定结果；
图17为实施例1中样品采集的各组小鼠脑中丙二醛的含量的测定结果；
图18为实施例1中样品采集的各组小鼠脑中过氧化氢酶的含量的测定结果；
图19为实施例1中样品采集的各组小鼠脑总抗氧化能力的测定结果；
图20为实施例1中样品采集的各组小鼠脑中超氧化物歧化酶活力的测定结果。
具体实施方式
本发明是改善大脑神经营养功能的组合物，更加具体地，本发明是通过提高脑内Ach(乙酰胆碱)含量、促进BDNF(脑源性神经营养因子)生长或促进NGF(神经生长因子)基因表达等作用改善大脑神经营养功能的正常发挥涉及用于改善大脑神经营养功能的组合物。下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1
用于改善大脑神经营养功能的组合物，按重量百分比计，包括以下组分：芦笋提取物95％，磷脂酰丝氨酸1.5％、真菌提取物1.4％、茶氨酸0.8％、γ-氨基丁酸1.3％。所述改善大脑神经营养功能是指提高海马乙酰胆碱含量或促进脑源性神经营养因子生长或促进神经生长因子基因表达作用。
其中芦笋提取物的制备方法为：将芦笋茎、叶干燥粉碎后浸泡，采用 40％乙醇水溶液为溶剂，采用常温浸提和超高压提取依次交替提取方法，超高压提取次数为2次，每次超高压提取时间为2min，提取压力为200MPa，料液比为1:15，总浸提时间为40min，得到芦笋提取液，将芦笋提取液经活性炭吸附，活性炭加入量是提取液重量的3％，所述活性炭吸附的接触时间为60min，然后采用厚度为0.3mm的电极膜过滤提纯后，浓缩至比重1.02，得到液体芦笋提取物；所述的液体芦笋提取物的芦笋皂苷含量为 0.37g/100g；
真菌提取物为由乙醇与水的混合物为溶剂从香菇、灵芝、猴头菇、姬菇、杏鲍菇提取得到。
该组合物可用于制备调理学习和/或记忆能力、失认症、健忘症、失语症、脑神经组织损伤、脑中风后遗症、脑瘫、脑萎缩或痴呆症的食品、保健食品或药品。所述的痴呆为艾滋病引发痴呆、宾斯万格病、路易体痴呆、额颞叶痴呆、多发性脑梗死性痴呆、皮克氏病、阿尔兹海默症性痴呆或血管性痴呆。
以本发明实施例1的产品对小鼠进行实验：
(一)实验主要试剂
普通饲料；本发明实施例1组成按饮料制备工艺制备成的饮料产品 (AEAS，秦皇岛长胜营养健康科技有限公司)；氢溴酸东茛菪碱(郑州遂城医药有限公司)；盐酸多奈哌齐(卫才(中国)药业有限公司)；菝葜皂苷元标准品(南京春秋有限公司)；乙酰胆碱(ACh)试剂盒、乙酰胆碱转移酶(ChAT)测定试剂盒、乙酰胆碱酯酶(AChE)测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)；丙二醛(MDA)试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、过氧化氢酶(CAT)试剂盒和总抗氧化能力(T-AOC)(上海索宝生物科技公司)；Tris饱和酚、Ezup柱式细菌基因组DNA抽提试剂盒、PCR 产物纯化试剂盒、琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒、蛋白酶K(上海生工生物工程有限公司)；焦碳酸二乙酯(DEPC)、糖原核酸助沉剂、去离子甲酰胺(上海江莱生物)；琼脂糖、50×TAE(南京生兴生物)；Trizol(美国Biomiga公司)；TaqDNA聚合酶、Oligo(dT)、dNTP、M-MLV逆转录酶、5×逆转录缓冲液、Rnase Inhibitor、SYBR Green Master Mix(赛默飞世尔科技(中国)有限公司)；Taq PCR Master Mix(上海睿迪生物科技有限公司)；限制性内切酶HhaI和MspI(上海瑞楚工程有限公司)；基因引物(上海捷瑞生物工程公司)；其他试剂均为国产分析纯。
(二)实验主要设备
CLAMS实验动物综合监测系统(美国Columbus Instruments公司)；旷场实验装置、新物体识别实验装置、Y-迷宫实验装置、水迷宫实验装置；行为学分析软件(上海欣软信息科技有限公司)；One-Drop分光光度计(上海采邑生物科技有限公司)；XB70制冰机(美国GRANT公司)；R686VLT 超低温冷冻冰箱(美国INVETRO公司)；东胜龙梯度PCR仪(北京五洲东方科技发展有限公司)；电热压力蒸汽灭菌器(上海申安医疗仪器仪表厂)；M5酶标仪(美国Molecular Devices公司)；Eppendorf真空离心浓缩仪、5430R台式冷冻离心机(德国Eppendorf公司)；7900HT Fast Real-Time PCR仪、ABI3730XL测序仪(美国ABI公司)；安捷伦1200 液相色谱仪(美国安捷伦科技有限公司)；Mettle Toledo AB204-N电子天平、Mettler Toledo 320pH计(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)； precellys 24多功能组织均质器(法国Bertin公司)；SW-CJ-1F净化工作台(苏州净化设备有限公司)；恒温水浴锅(精宏实验设备有限公司)。
(三)动物饲养
本动物实验由江南大学动物管理委员会批准，遵循动物实验伦理原则开展。60只4周龄SPF级雄性ICR小鼠，购于上海斯莱克有限公司，昼夜周期保持在8:00/20:00，室温23±2℃，湿度60％。经过1周的预饲养后，分成6个组别(每组10只)：对照组(CT)，模型组(SC)，阳性对照组(DON)，低剂量AEAS组(LS)，中剂量AEAS组(MS)，高剂量AEAS组(HS)。其中，CT和SC组小鼠每天灌胃无菌水。低、中、高剂量AEAS组分别灌胃0.2g/kg，1g/kg，2g/kg的AEAS。阳性对照组 (DON)每天灌胃多奈哌齐(4mg/kg)作为阳性对照。在下文实验及结果测定中，*表示与CT组差异显著，P<0.05；#表示与SC组差异显著， P<0.05。
(四)旷场实验
旷场实验(open field test)又称敞箱实验，是评价实验动物在新异环境中自发活动的一种方法。主要是为了评价AEAS是否对小鼠有副作用，比如影响小鼠的自发活动或者引起小鼠焦虑样行为。在一个黑暗的房间里，放置一个(40×40×30cm)的实验箱。实验箱由透明黑色有机玻璃组成，在实验箱的上方装有与电脑连接的摄像机，跟踪和记录小鼠在实验中的实时图像以获得行为数据。测试区分为16个正方形(10×10cm)。位于中心区域的四个正方形被定义为中心区。为了评估小鼠的自发活动，将每只小鼠放在盒子的中心并允许其自由探索30分钟。进行测试的组别为：CT，LS，MS和HS。实验结果如图1-3所示，其中图1为旷场实验中各组小鼠在旷场中的总路程的统计图，图2为旷场实验中各组小鼠在旷场中的速度的统计图，图3为旷场实验中各组小鼠在旷场中心区域的时间的统计图。
(五)新物体识别实验
新物体识别实验包括熟悉期和测试期两个阶段。在熟悉期前，将测试小鼠分别放入没有物体的实验箱内10min。在熟悉期当天，将四只相同的硬塑料瓶(
Figure RE-GDA0001734616840000061
H：10cm)或矩形块(4×4×10cm)放在实验箱的四周，且四个物体到边的距离相等。允许小鼠自由探索10min。实验间隔期间用酒精彻底清洗对象以确保没有嗅觉提示。24h后测试小鼠的长期记忆。在测试期，在实验箱中放两个熟悉和两个新的物体，放置的位置不变，允许小鼠自由探索10min。在熟悉期和测试期，记录小鼠探索物体所花费的时间等数据。此外，在测试中，小鼠对新物体的辨别情况，采用辨别指数(DI)来计算。公式如下：DI＝(t新物体探索-t熟悉物体探索) /t总探索。在实验前1h按组灌胃，30min后，除对照物腹腔注射0.9％的生理盐水外，其余各组均注射东莨菪碱(2mg/kg)诱导记忆障碍。实验结果如图4-5所示，其中图4为新物体识别实验中各组小鼠对物体的总探索时间的统计图，图5为新物体识别实验中各组小鼠的辨别指数的统计图。
(六)Y-迷宫实验
Y迷宫(Y-maze)是三臂水平的迷宫(40×5×12cm)，三个臂之间以120°角对称。迷宫的底部和墙壁都是由不透明的聚乙烯塑料制造。任意定义3个臂的名称如ABC等。小鼠最初被放置在任意一个臂内，摄像头会记录在8min内每只小鼠进入每个臂的次数以及顺序。自发交替 (spontaneous alternation)被定义为连续进入3个臂(即ABC，CAB或 BAC，而不是ABA)。在实验间隔，用酒精擦拭迷宫的三个臂彻底清理气味。根据以下公式：自发交替(spontaneous alternation)＝[(交替数)/ (总臂条目-2)]。在实验前1h按组灌胃，30min后，除对照物腹腔注射0.9％的生理盐水外，其余各组均注射东莨菪碱(2mg/kg)诱导记忆障碍。实验结果如图6-7所示，其中图6为Y-迷宫实验的结构示意图，图7 为Y-迷宫实验中各组小鼠的自发交替的统计图。
(七)水迷宫实验
水迷宫(Morris water maze)是测试小鼠空间学习和记忆经典的实验。水迷宫实验在一个装满水的圆水池(
Figure RE-GDA0001734616840000062
H：50cm)中进行。水温保持在25±0.5℃。在水池内含有在实验中不变的视觉线索。迷宫分为四个象限(东北，西北，东南，西南)。逃生平台(
Figure RE-GDA0001734616840000063
H：30cm) 可以在实验中移动。水迷宫实验包括三个测试：可见平台实验，隐藏平台实验和探针实验。整个实验期间，应该保持房间内安静，且实验人员不要随意走动。
可见平台实验是为了评估小鼠的视力以及剔除无法游泳的小鼠。水池充满水，平台放置在水面以上1cm处，并且在平台上放置一个旗帜以增加可视度。每只小鼠进行了四次训练。四次训练中，平台被顺序移动。每次将小鼠轻轻地从泳池的不同象限沿池壁放入，并允许其自由游泳。测试时间为60s，若小鼠在60s内找到平台，则记录找到平台的潜伏期。如果时间超过60s，潜伏期记为60s。在实验前1h按组灌胃，30min后，除对照物腹腔注射0.9％的生理盐水外，其余各组均注射东莨菪碱(2mg/kg) 诱导记忆障碍。
隐藏平台实验是测试小鼠的空间记忆能力。水池充满水，直到平台被隐藏在水面以下1cm处。同时，在水里加入墨汁，保证小鼠无法看见平台。训练期为四天，每只小鼠进行四次训练，依次从水池不同的象限放入小鼠。整个训练期间，平台位置保持不变。每次训练时间为60s，当小鼠找到平台时，则被留在平台上10s，并记录潜伏期。如果小鼠在60s内找不到平台，引导其找到平台，并在平台上停留15s，记录潜伏期60s。将小鼠用温暖的毛巾擦干后放回笼子中，每只小鼠训练时间至少间隔30 min。在实验前1h按组灌胃，30min后，除对照物腹腔注射0.9％的生理盐水外，其余各组均注射东莨菪碱(2mg/kg)诱导记忆障碍。
隐藏平台实验完成后二十四小时进行探针实验。将平台从水池中移除，将小鼠从距平台最远的象限放入，允许小鼠自由游泳60s。记录小鼠在平台象限游泳的时间。实验结果如图8-9所示，其中图8为水迷宫实验中训练期第四天各组小鼠的潜伏期的统计图，图9为水迷宫实验中测试期各组小鼠在目标象限的时间的统计图。
(八)样品采集
行为学实验完成后，小鼠摘眼球取血，脱颈处死。取小鼠大脑并分离海马，一部分浸泡于1mL trizol中冻于-80℃用于提取RNA，另一部分直接冻于-80℃备用。取结肠、空肠和派伊尔结一部分浸泡于1mL trizol 中冻于-80℃用于提取RNA。
(九)海马中乙酰胆碱(ACh)和乙酰胆碱酯酶(AChE)
海马中的乙酰胆碱(ACh)和乙酰胆碱酯酶(AChE)用ELISA试剂盒测定。取0.1g冻于-80℃的海马，加入1mL PBS(pH 7.4)，涡旋混匀5 min，随后4000×g4℃离心5min，取上清液，严格按试剂盒说明书指示进行测定。海马样品中的总蛋白含量以牛血清白蛋白(BSA)为标准品，采用Bradford等人建立的考马斯亮蓝比色法测定海马中的蛋白含量，乙酰胆碱(ACh)和乙酰胆碱酯酶(AChE)的含量以每mg总蛋白中含量(μ g/mg prot)表示。结果如图10-11所示，其中图10为样品采集的各组小鼠海马中乙酰胆碱的含量的统计图，图11为样品采集的各组小鼠海马中乙酰胆碱酯酶的含量的统计图。
(十)RNA提取及cDNA
将浸于Trizol的海马、结肠、派伊尔结和空肠匀浆后，室温静置5 min；12000×g，4℃离心10min，将上清吸至新离心管中；加入200μ L氯仿，用力颠倒混匀，室温放置3～5min分层，12000×g，4℃离心15min；吸取上层水相至新离心管中，加入等体积的异丙醇(4℃预冷)，混匀后室温放置过夜；12000×g，4℃离心15min，弃上清，向沉淀中加入1mL 75％乙醇，温和震荡使沉淀悬浮，7500×g，4℃离心15min，弃上清；室温放置晾干沉淀，加入DEPC水，NanoDrop测定OD 260/280和浓度，调节RNA浓度至1000ng/μL，OD 260/280在1.8～2.0范围内，纯度符合要求。整个过程中用到的管子，枪头均需要灭酶。
RNA的反转录体系如表1所示，反转录过程分两步，第一步，体系混匀后70℃反应5min，冰浴上迅速冷却；随后加入第二步体系混匀后，37℃水浴1h，95℃反应3min，冰浴迅速冷却，反转录后的cDNA保存于-20℃。
表1反转录反应体系
Figure RE-GDA0001734616840000081
(十一)荧光定量PCR(RT-PCR)分析
海马和结肠中反转录的cDNA稀释10倍作为RT-PCR的模板，反应体系如表2所示，扩增条件为：95℃，8min；95℃，20s，60℃，30s，72℃， 20s；72℃，2min。以β-actin为内参，采用2-△△Ct法对数据进行分析。
表2 RT-PCR反应体系
试剂 体积(μL) 浓度
2×SYBR Green Master Mix 5
上游引物 0.4 10μM
下游引物 0.4 10μM
cDNA 0.3
DEPC水 3.7
结果如图12所示，图12为样品采集的各组小鼠海马中与记忆相关的基因表达的RT-PCR结果。
(十二)血清和脑中抗氧化指标测定
严格按试剂盒说明书指示测定血清和脑中的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和总抗氧化能力(T-AOC)。脑样品中的总蛋白含量以牛血清白蛋白(BSA)为标准品，采用Bradford等人建立的考马斯亮蓝比色法测定海马中的蛋白含量，脑中的抗氧化酶的活性以每 mg总蛋白中活性(U/mg prot)表示。结果如图13-20所示，其中图13为样品采集的各组小鼠血清中丙二醛的含量的测定结果，图14为样品采集的各组小鼠血清中过氧化氢酶的含量的测定结果，图15为样品采集的各组小鼠血清中的总抗氧化能力的测定结果，图16为样品采集的各组小鼠血清中超氧化物歧化酶活力的测定结果，图17为样品采集的各组小鼠脑中丙二醛的含量的测定结果，图18为样品采集的各组小鼠脑中过氧化氢酶的含量的测定结果，图19为样品采集的各组小鼠脑总抗氧化能力的测定结果，图20 为样品采集的各组小鼠脑中超氧化物歧化酶活力的测定结果。
(十三)结果
1)对自主活动的影响
旷场实验主要是研究AEAS对小鼠是否会造成不利影响，比如焦虑和抑郁。动物由于对陌生环境的恐惧，在中央区域活动较少，表现出焦虑行为。同时，动物对陌生环境的好奇，又产生在中央区域活动的动机，显示其探究特性。实验结果如图1-3所示，与CT组比较，灌胃AEAS的各组小鼠从总路程、速率和中心区域时间等指标均无显著性差异(P>0.05)，说明AEAS对小鼠自主活动并没有影响，更没有产生抑郁或焦虑等不利影响。
2)对认知能力的影响
如图4-5所示，在测试期，各组小鼠对物体的总探索时间没有显著性差异(P>0.05)。而由单因素方差分析得出，组间辨别指数有显著性差异 (P<0.05)。SC组的辨别指数远低于CT组(P<0.05)，说明东茛菪碱对小鼠的辨别能力影响显著。也能观察到MS组与SC相比，有显著的差异 (P<0.05)，而LS组和HS组的辨别指数均比SC组有提高，但无显著差别(P>0.05)。这个结果表明，AEAS能改善东茛菪碱造成的小鼠的记忆损伤。
3)对工作记忆的影响
Y迷宫主要应用于动物的辨别性学习，工作记忆及参考记忆的测试。以自发交替(spontaneous alternation)作为小鼠学习记忆能力的指标。Y- 迷宫实验结果如图7所示，SC组小鼠的自发交替显著低于CT组(P<0.05)，而LS组的自发交替与SC组接近，说明LS组对记忆损伤小鼠的自发交替无影响。MS组和HS组与SC相比较，有显著差异(P<0.05)。说明AEAS能提高东茛菪碱导致的小鼠的自发交替降低现象。
4)对空间记忆的影响
通过观察记录小鼠在水池中找到藏在水下的平台所需的时间和它们的游泳轨迹，来分析小鼠的学习、记忆和空间认知等方面的能力。它能比较客观地衡量动物空间记忆。随着训练天数的增加，各组小鼠找到平台的潜伏期有明显的缩短的趋势，但SC组变化的幅度最小，通过单因素方差分析得知，在前3天，各组之间的差异不显著。而通过图8，可以看出在第四天， SC组与CT组有显著的差异(P<0.05)。而MS组与SC组比较，明显地缩短了潜伏期(P<0.05)。而在随后一天的测试期中，MS组或DON组小鼠在目标平台象限内游泳时间的时间显著多于SC组(P<0.05)。
而通过观察小鼠在水池中的真实情况，可以明显的看出SC组小鼠沿着池壁持续转圈，而DON组和MS组的小鼠的路线集中于原平台所在象限，说明小鼠对原来平台的位置仍然有一些记忆，与其他组比较，记忆有所改善。
5)海马中ACh含量和AChE的活性
ACh的含量主要由胆碱能系统中的AChE调节，它能将突触缝隙中的 ACh降解成乙酸和胆碱，从而实现对ACh负调节。过高的AChE活性会导致 ACh缺乏和认知障碍。我们测定了小鼠海马中的ACh和AChE的含量。如图10所示，SC组的ACh含量显著低于CT组(P<0.05)。而与SC组相比较， MS组和DON组显著提高了ACh的含量(P<0.05)。
而在图11中，SC组显著提高了海马中AChE的含量(P<0.05)，这与很多使用东茛菪碱致小鼠记忆损伤的研究结果相一致：东茛菪碱能提高 AChE的含量从而影响记忆。而灌胃AEAS(LS组、MS组和HS组)均能显著降低海马中AChE的含量(P<0.05)。
6)海马中相关基因表达
海马中与记忆相关的基因表达的RT-PCR结果如图12所示。SC组的 BDNF和CREB的表达量均显著低于CT组(P<0.05)，而对NGF的表达则无显著影响。而DON组的BDNF和CREB的表达量均显著高于CT组 (P<0.05)，而对NGF的表达则无显著影响。MS组与SC组相比较，BDNF、 CREB和NGF均有显著的提高(P<0.05)。HS组较之SC组显著地提高了 BDNF、CREB的表达(P<0.05)。
有许多研究表明海马中的BDNF与学习记忆有很大的关联，尤其是小鼠在水迷宫实验中的表现。东莨菪碱致小鼠记忆损伤模型被证明可以减少水迷宫实验中的学习记忆力和BNDF在海马中的表达。这与本实验中SC组结果相一致。CREB是学习记忆的分子标志物，在学习记忆过程中起一定作用。有研究证明CREB表达提高，可以提高长时记忆。神经生长因子(NGF)在记忆和突触可塑性中起重要作用。具体来说，NGF与记忆巩固和长时程增效(LTP)有直接联系，注射NGF能改善认知障碍和正常大鼠的海马LTP。
7)血清和脑中的抗氧化能力
氧化应激是自由基(free radicals)过多，造成机体抗氧化能力降低，由此损害细胞内大分子和细胞功能，最终造成急性或潜在的病理损伤。有研究表明，氧化应激与轻度认知障碍(MCI)有关系。目前氧化应激相关因子有很多：丙二醛(MDA)，过氧化物歧化酶(SOD)，过氧化氢酶(CAT) 和总抗氧化能力(T-AOC)等。这些指标直接或者间接反映了机体能抗氧化能力的大小。
我们测定了血清和脑中的氧化应激相关因子，结果分别如图13-16和图17-20。在血清中，SC组的丙二醛含量有增加，但与其他组比无显著变化。与SC组相比，MS组和HS组的小鼠血清中CAT活性显著提高 (P<0.05)。HS组与SC组比，T-AOC活性显著提高。而相较于其他指标，灌胃AEAS明显的降低SOD的活性(P<0.05)。而在脑中，东茛菪碱显著降低了MDA的含量(P<0.05)，除MS组外，其余各组的SOD和T-AOC 活性均显著低于CT组。只有MS组的CAT和T-AOC活性与SC组相比，显著提高(P<0.05)。这些结果表明：AEAS能通过提高脑中的CAT和T-AOC 活性途径来应对氧化应激，而对SOD活性无影响。因为氧化应激能影响轻度认知障碍，所以提高相应的抗氧化酶活性是一种应对轻度认知障碍的方法。
实施例2与实施例1基本相同，不同之处在于，该组合物按重量百分比计，包括以下组分：芦笋提取物93.3％，磷脂酰丝氨酸0.9％、真菌提取物2.4％、茶氨酸1.6％、γ-氨基丁酸1.8％。
其中芦笋提取物的制备方法为：将芦笋下脚料干燥粉碎后浸泡，采用水为溶剂，采用常温浸提和超高压提取依次交替提取方法，超高压提取次数为3次，每次超高压提取时间为1min，提取压力为300MPa，料液比为1:20，总浸提时间为30min，得到芦笋提取液，将芦笋提取液经活性炭吸附，活性炭加入量是提取液重量的4％，所述活性炭吸附的接触时间为30min，然后采用厚度为0.5mm的电极膜过滤提纯后，浓缩至比重1.05，得到液体芦笋提取物；将液体芦笋提取物喷雾干燥后，得到固体芦笋提取物；
所述的固体芦笋提取物的芦笋皂苷含量为1.5g/100g；
真菌提取物为由水为溶剂从灵芝、姬菇、杏鲍菇提取得到。
实施例3与实施例1基本相同，不同之处在于：该组合物按重量百分比计，包括以下组分：芦笋提取物97％，磷脂酰丝氨酸2.2％、真菌提取物 0.3％、茶氨酸0.29％、γ-氨基丁酸0.21％。
其中芦笋提取物的制备方法为：将芦笋下脚料干燥粉碎后浸泡，采用水为溶剂，采用常温浸提和超高压提取依次交替提取方法，超高压提取次数为4次，每次超高压提取时间为1min，提取压力为500MPa，料液比为1:30，总浸提时间为60min，得到芦笋提取液，将芦笋提取液经活性炭吸附，活性炭加入量是提取液重量的6％，所述活性炭吸附的接触时间为15min，然后采用厚度为0.8mm的电极膜过滤提纯后，浓缩至比重1.07，得到液体芦笋提取物；将液体芦笋提取物喷雾干燥后，得到固体芦笋提取物；
所述的固体芦笋提取物的芦笋皂苷含量为2.3g/100g；；
真菌提取物为由乙醇与水的混合物为溶剂从香菇提取得到。
对比例1与实施例1基本相同，不同之处在于：保证各组分总重量相同，去除磷脂酰丝氨酸。
对比例2与实施例1基本相同，不同之处在于：保证各组分总重量相同，去除真菌提取物。
对比例3与实施例1基本相同，不同之处在于：保证各组分总重量相同，去除磷脂酰丝氨酸、真菌提取物。
对比例4与实施例1基本相同，不同之处在于：保证各组分总重量相同，用常规芦笋提取物(活性成分不确定)代替实施例1中芦笋提取物。
对比例5与对比例4基本相同，不同之处在于：保证各组分总重量相同，去除磷脂酰丝氨酸、真菌提取物。
对比例6与实施例1基本相同，不同之处在于：保证各组分总重量相同，芦笋提取物的重量百分比为89％。
对比例7与实施例1基本相同，不同之处在于：保证各组分总重量相同，茶氨酸的重量百分比为0.08％。
对比例8与实施例1基本相同，不同之处在于：保证各组分总重量相同，γ-氨基丁酸的重量百分比为0.08％。
对比例9与实施例1基本相同，不同之处在于：其中芦笋提取物的制备方法采用单独常温浸提，浸提溶剂、总浸提时间、料液比与实施例1相同，所得液体芦笋提取物的芦笋皂苷含量为0.11g/100g。
对比例10与实施例1基本相同，不同之处在于：其中芦笋提取物的制备方法采用常温超高压浸提，超高压浸提时间为4min,浸提溶剂、浸提压力、料液比与实施例1相同，所得液体芦笋提取物的芦笋皂苷含量为 0.26g/100g。
对比例11与实施例1基本相同，不同之处在于：其中芦笋提取物超高压提取次数为2次，每次超高压提取时间为2min，提取压力为100MPa，料液比为1:15，总浸提时间为80min，得到芦笋提取液，将芦笋提取液经活性炭吸附，活性炭加入量是提取液重量的1％，所述活性炭吸附的接触时间为10min，然后采用厚度为0.1mm的电极膜过滤提纯后，浓缩至比重1.0，得到液体芦笋提取物，所得液体芦笋提取物的芦笋皂苷含量为0.24g/100g。
本发明采用的常温浸提与超高压浸提依次交替的方法使得提取效率、提取得率均有所提高。
将对比例1-11按照实施例1相同方法制成产品，按照与实施例1产品 MS组相同动物试验方法进行相同处理，观察对比例1-11各组样品对小鼠海马中乙酰胆碱含量、BDNF、NGF的影响，与实施例1效果做对比，结果见表 3。
表3实施例和对比例对小鼠脑神经营养功能影响作用对比
项目 乙酰胆碱含量提高作用 BDNF NGF
实施例1 显著 显著 显著
对比例1 不显著 显著 不显著
对比例2 显著 不显著 不显著
对比例3 不显著 不显著 不显著
对比例4 不显著 不显著 不显著
对比例5 不显著 不显著 不显著
对比例6 不显著 不显著 不显著
对比例7 显著 不显著 不显著
对比例8 不显著 不显著 不显著
对比例9 不显著 不显著 不显著
对比例10 不显著 不显著 不显著
对比例11 不显著 显著 不显著
从表3的结果可看出，本发明各组分相互协同发挥作用，相对于现有技术有明显改进，对小鼠脑神经营养功能具有显著地改善作用。
大量研究表明，大脑神经营养功能的发挥与脑内乙酰胆碱(ACh)含量、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)基因表达等因素存在紧密且错综复杂的联系。乙酰胆碱(ACh)是存在于脑内的一种重要神经递质，主要分布于大脑皮层和海马等区域，目前认为，当大脑内的ACh含量高时，神经传导功能就会增强，脑神经之间信息传递的速度也会加快。脑内的ACh是由胆碱能神经末梢所释放，所以ACh的水平与胆碱能神经元的活动相一致。脑内主要的胆碱能系统是基底前脑至皮层和海马的胆碱能纤维投射。Fadda发现在连续12天的放射状迷宫任务的学习过程中动物成绩的提高与海马的ACh增加程度成正比。反之，
Figure RE-GDA0001734616840000131
等的研究指出轻度认知损伤(Mild cognitiveimpairment，MCI)者认知活动能力的低下是由于其海马胆碱能神经元的功能被抑制所致，增加海马的胆碱能神经传递后，MCI 者的注意、认知灵活性、口头和空间工作记忆能力均得到改善。Bartusl982 年提出了胆碱能假说，认为正常老年人出现的记忆力减退和痴呆患者出现认知功能障碍是由于中枢神经系统内胆碱能神经元减少，致使其中枢神经系统内胆碱能神经系统功能低下而发生学习记忆减退及认知障碍。脑源性神经营养因子(BDNF)是一种具有神经营养作用的碱性蛋白质。BDNF对周围和中枢神经系统有广泛的生物学作用：维持神经系统的发育；保护神经元的存活,提高神经元的生物活性；减少损伤后神经元的自然死亡；提高突触的可塑性,参与长时程效应和学习的可塑性机制,是突触可塑性和记忆的重要调节因子；其表达异常以及基因多态性在神经精神系统疾病如阿尔兹海默症(AD)、帕金森病(PD)、亨廷顿病(HD)以及抑郁症等中起到重要作用。神经生长因子(NGF)是一种蛋白类多肽,一种神经细胞生长调节因子,具有神经元营养和促进神经元突起生长双重生物学功能。在胚胎发育期NGF可以诱导神经纤维定向生长,刺激胞体和树突的发育,增加神经纤维支配区的密度,促进神经元的分化发育,使感觉神经、交感神经节数目增加, 体积增大,纤维延长。在正常成熟的神经细胞起到营养作用,对损伤的神经起保护和修复作用。
芦笋是世界十大名菜之一，因质地鲜嫩，风味鲜美，在国际上享有“蔬菜之王”的美称。我国《神农本草经》中，将芦笋列为“上品之上”，其品质功效仅次于人参。芦笋中还含有多糖、多酚、皂苷等生物活性成分。而对于芦笋的功效，国内外已经有很多的研究。KIM等研究发现芦笋汁具有细胞保护作用，能增强HepG2细胞(癌症细胞)的抗氧化能力，并且发现其能促进肝脏细胞中的乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶的活性，这对于保护肝脏是有利的。Zhao等用芦笋水提物进行降血脂实验研究，发现芦笋汁能降低血糖和甘油三酯血症，可用于辅助治疗糖尿病并发症。Sakurai等通过研究发现芦笋酶解产物能保护神经元细胞和改善衰老小鼠的认知功能和恐惧记忆。而我们的前期研究发现芦笋提取物可有效改善睡眠障碍。
磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine，PS)，是磷脂家族中的一员，是唯一能够调控细胞膜关键蛋白功能状态的磷脂，在临床上主要用于治疗脑衰老，近几年更以“脑专一性营养物质”引起大家的广泛关注。PS对中枢神经系统的主要功能包括：刺激多巴胺的释放，增加神经递质乙酰胆碱的产生，增强脑葡萄糖代谢，降低氢化可的松的水平，增强神经生长因子的活性等。Benton在研究中发现：未成年人每天补充PS 300mg能降低氢化可的松的释放，并能改善未成年人的情绪。另有研究表明，补充PS能减缓甚至逆转痴呆或者与衰老相关的学习、情绪、记忆、注意力等的下降。
食用真菌在当前被广泛誉为“植物性食品的顶峰”、“素中之荤”、“上帝食品”、“健康食品”。食药用真菌所含的真菌多糖、生物碱、多肽类、鞘脂以及其他极为丰富的生物活性成分。其中真菌多糖具有神经细胞保护作用,其机制可能与拮抗谷氨酸诱导的氧化应激有关。鞘脂广泛存在于各类真菌中,是真核生物细胞质膜的成分。鞘脂与神经生长因子的作用相似，具体表现在2个方面，一是细胞数目的增加，二是神经突数目和神经突总长度的增加，证明鞘脂对神经元细胞的形态发生和生化分化有促进作用。
香菇堪称食用菌的上品,营养丰富，食药兼用，香菇多糖(LNT)是香菇中的重要药用成分,具有较强的抗肿瘤活性，在临床上作为免疫增强剂广泛用于肿瘤的治疗。近年来有关LNT改善中枢神经系统功能的研究报道增多，日本学者研究发现LNT可增强大鼠齿状回神经元的长时程增强。逯爱梅等研究LNT促进D-gal损伤小鼠学习记忆作用，其机制与其提高小鼠脑组织内SOD和GSH-Px活性，降低MDA含量，从而拈抗脑内氧化应激损伤作用有一定的关系。
灵芝是从担子菌纲多孔菌科真菌赤芝或紫芝的干燥子实体，其中灵芝多糖是灵芝主要活性成分之一。对灵芝多糖研究最早、最为深入的是其免疫调节及抗肿瘤作用。另有报道灵芝多糖具有神经细胞保护作用。谈震等研究发现灵芝多糖可通过调控bcl-2/bax的比值，降低caspase-3基因 mRNA的表达来阻断β淀粉样蛋白诱导的海马神经元凋亡，显示其神经保护作用。张跃平等研究发现,灵芝多糖能明显改善大鼠脑组织海马CAI区神经元的退行性变化,对老年性痴呆大鼠学习记忆能力有增强和提高的作用。
猴头菇是一种珍贵食用菌,有“素中荤”之称,长期以来人们把它同“熊掌,海参,鱼翅”共同列为四大名菜,或把它与燕窝相提并论,民间谚语有“多食猴头,返老还童”之说。研究发现，猴头菇具有一定程度的神经保护作用。在Mori等进行的临床研究中，将具有轻度认知功能障碍的日本男子及女子 (50至80岁)进行了一项双盲试验，分为平行对照组和安慰剂对照组。研究结果发现，口服猴头菇组的患者，其认知功能表评分有显著提高，并且无不良反应。Kolotushkina等在考察猴头菇提取物对体外神经髓鞘形成的作用中发现，猴头菇提取物能够促进小脑细胞的正常发育，还能刺激髓鞘发生且没有任何病理或毒性作用，因而证实了其对神经元网络的形成和受损神经元的恢复所发挥的调控作用。
姬菇是侧耳属中一种食用菌，其含有硒、多糖等物质，对肿瘤细胞有很强的抑制作用，且具有免疫特性；含有多种维生素及矿物质可改善新陈代谢、增强体质、调节植物神经功能等作用。姬菇研究在国内外文献报道中都还比较欠缺，国内大多数的报道是关于姬菇栽培方面，在遗传育种、精深加工等许多方面研究都还较少。
杏鲍菇蛋白质、灰分含量较高，甘露醇、游离氨基酸含量也丰富，而脂肪含量和总糖含量却较低，营养结构较优，所含的真菌多糖具有较强的抗氧化性能，能增强肌体免疫功能。
自然界存在的茶氨酸为L型，可通过小肠壁吸收，人体摄入茶氨酸 30min后就可通过血脑屏障，5h后脑部茶氨酸含量达到峰值，可以通过多种机制影响中枢系统功能。谷氨酸是一种神经递质，通过激活离子型受体介导快速兴奋性突触传递，在记忆和学习中起重要作用，在神经元细胞内含量保持在1～10mmol·L-1，当存在冲动信号时，谷氨酸从细胞内被释放，通过与相邻细胞膜上的N-甲基-D天冬氨酸(NMDA谷氨酸离子型受体的一种) 和非NMDA受体结合后激活它们，打开离子通道进入细胞，进而传递冲动信号。然而过量释放谷氨酸会产生神经毒性。医学上体内谷氨酸浓度升高可加重帕金森病、阿尔茨海默病和亨廷顿病的症状，阻断谷氨酸的作用可以缓解这些疾病的症状。作为谷氨酸的类似物，体外和动物实验都证明茶氨酸可竞争性地与NMDA和非NMDA受体结合，这种结合不激活下游反应，进而抑制谷氨酸的毒性，起到保护神经元的作用。
γ-氨基丁酸(GABA)是中枢神经系统的抑制性传递物质，是脑组织中最重要的神经递质之一。摄入GABA可以提高葡萄糖磷酸酯酶的活性，使脑细胞活动旺盛，可促进脑组织的新陈代谢和恢复脑细胞功能，改善神经机能。医学上，GABA对脑血管障碍引起的症状，如偏瘫、记忆障碍、儿童智力发育迟缓及精神幼稚症等有很好的疗效。
在本发明中使用的术语“提取物”具有本发明所属技术领域中通用为粗提物的意思，但是广义上还包括将提取物追加分馏的分馏物。即，本发明的提取物不仅利用提取溶剂而得，而且还包含在此追加使用提纯过程而得的提取物。例如，使相应提取物通过具有规定分子量截至值的超滤膜而得的分馏，通过基于多种层析法(为了根据大小、电荷、疏水性或者亲水性地分离而制备)的分离等，追加实施的多种提纯方法而得的分馏也包含于本发明的提取物。
在本发明中利用的提取物可以借助如减压蒸馏、冷冻干燥或喷雾干燥等追加的过程来制备成粉末状态。
在本发明的组合物制备成食品组合物的情况下，不仅包含上述公开的组分，还可包含制备食品时通常添加的成分，例如，包含蛋白质、碳水化合物、脂肪、营养素、调味剂及香味剂。作为上述碳水化合物的例子，可列举单糖，例如葡萄糖、果糖等；二糖，例如麦芽糖、蔗糖、低聚糖等；多糖，例如糊精、环糊精等的一般的糖及木糖醇、山梨醇、赤藻糖醇等糖醇。作为香味剂可以使用天然香味剂(索马甜、甜叶菊提取物、甘草甜素等)以及合成香味剂(糖精、阿斯巴甜等)。例如，在本发明的食品组合物制备成口服液的情况下，除了本发明公开的组分外，还可以包含柠檬酸、液体果糖、葡萄糖、苹果酸等。
在本发明的组合物制备成药品组合物的情况下，不仅包含上述公开的组分，还可以包含药剂学上许可的载体，即在制剂时通常利用的载体，包含乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯橡胶、磷酸钙、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯、丙基羟基苯甲酸丙酯、滑石粉、硬脂酸镁等，但并不局限于此。本发明的药剂学组合物除了上述成分以外还可以包含润滑剂、湿润剂、甜味剂、香味剂、乳化剂、悬浮剂、防腐剂等。
本发明的药剂学组合物适合投用量根据如制剂学方法、投用方式、患者的年龄、体重、性别、病态、食物、投用时间、排泄速度及反应灵敏度的因素而可以进行多种处方。本发明的药剂学组合物的一般投用量，以成人为基准在0.001mg/kg-2000mg/kg范围内。
本发明的药剂学组合物根据本发明所属技术领域的普通技术人员可以容易实施的方法，利用药剂学上许可的载体和/或赋形剂进行制剂，从而能够以单位用量形态制备或内装在多容量容器内来制备。此时，剂型是油性或者水性介质中的溶液、悬浮液、制浆剂或乳化液形态，或者也可以是浸膏剂、散剂、粉末剂、颗粒剂、片剂或者胶囊剂形态，还可以包括分散剂或者稳定剂。

Claims (8)

1.用于改善大脑神经营养功能的组合物，其特征在于：按重量百分比计，包括以下组分，芦笋提取物91.9-99.8％，磷脂酰丝氨酸0.3-2.4％、真菌提取物0.3-2.4％、茶氨酸0.09-1.6％、γ-氨基丁酸0.09-2.0％，所述改善大脑神经营养功能是指提高海马乙酰胆碱含量或促进脑源性神经营养因子生长或促进神经生长因子基因表达作用；
其中，芦笋提取物的制备方法为：将芦笋茎、叶、下脚料中的一种或多种干燥粉碎后浸泡，以水或乙醇水溶液为溶剂，采用常温浸提和超高压提取依次交替提取方法，得到芦笋提取液，将芦笋提取液经活性炭吸附、电极膜过滤提纯后，浓缩至比重1.02-1.08，得到液体芦笋提取物；然后，将液体芦笋提取物浓缩干燥后，得到固体芦笋提取物；
其中，真菌提取物为香菇、灵芝、猴头菇、姬菇、杏鲍菇中一种或多种中的提取物。
2.根据权利要求1所述的用于改善大脑神经营养功能的组合物，其特征在于：按重量百分比计，包括以下组分，芦笋提取物94-97％，磷脂酰丝氨酸1-2％、真菌提取物1-2％、茶氨酸0.5-1.2％、γ-氨基丁酸0.5-1.5％。
3.根据权利要求1所述的用于改善大脑神经营养功能的组合物，其特征在于：所述依次交替提取方法超高压提取次数为2-4次，每次超高压提取时间为1-2min,提取压力为200-500MPa,料液比为1:10-1:30，总浸提时间为30-60min。
4.根据权利要求1所述的用于改善大脑神经营养功能的组合物，其特征在于：所述活性炭吸附的活性炭加入量是提取液重量的3-8％，所述活性炭吸附的接触时间为15-120min。
5.根据权利要求1所述的用于改善大脑神经营养功能的组合物，其特征在于：所述电极膜的厚度为0.15～1.0mm。
6.根据权利要求1所述的用于改善大脑神经营养功能的组合物，其特征在于：所述的液体芦笋提取物是 芦笋皂苷含量≥0.35g/100g的提取物，固体芦笋提取物是 芦笋皂苷含量≥1.4g/100g的提取物。
7.根据权利要求1所述的用于改善大脑神经营养功能的组合物，其特征在于：所述的真菌提取物的提取溶剂为水或乙醇与水的混合物。
8.一种用权利要求1所述的用于改善大脑神经营养功能的组合物在制备调理学习和/或记忆能力、失认症、健忘症、失语症、脑神经组织损伤、脑中风后遗症、脑瘫、脑萎缩或痴呆症的食品、保健食品或药品中的应用。
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