CN108680682A - 可同时测定三高人群用保健食品中45种违禁药品的液质联用法 - Google Patents

可同时测定三高人群用保健食品中45种违禁药品的液质联用法 Download PDF

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Abstract

本发明具体涉及一种可同时测定三高人群用保健食品中45种违禁药品的液质联用法，属于保健品中违法添加的化学药品的测定技术领域。该方法采用5mmol·L‑1乙酸铵溶液和乙腈在Agilent Eclipse Plus C18柱上进行梯度洗脱，流速为0.2mL·min‑1；质谱采用电喷雾离子源正负离子模式将样品离子化，并用多反应监测模式对45种化学药物进行测定。300批样品中共检出3批阳性样品，检出物分别是苯乙双胍、格列本脲、氢氯噻嗪和氨氯地平。本发明的方法检出容量较大，可以在一定程度上避免违禁药物的漏检，适用范围更广，具有较好的应用前景。

Description

可同时测定三高人群用保健食品中45种违禁药品的液质联 用法
技术领域
本发明属于保健品中违法添加的化学药品的测定技术领域，具体涉及一种可同时测定三高人群用保健食品中45种违禁药品的液质联用法。
背景技术
高血糖、高血脂、高血压俗称“三高”，这三者构成代谢综合征的主体，同时随着年龄的增长，代谢综合征的发病率会越来越高。另一方面，高血压、高血脂和高血糖三者可能单独存在，也可能相互关联。如高血糖患者很容易同时患上高血脂，而高血脂又是动脉硬化形成和发展的主要因素，动脉硬化又导致血管弹性差引起高血压。所以，为了降低患这些慢性疾病的概率，人们日益关注声称具有辅助降血压、降血脂以及降血糖的一些三高人群用保健食品。不法分子为了吸引顾客、获得更大的经济利益，铤而走险，在保健食品中违法添加化学药品的现象屡禁不止；目前，我国颁布的打击相应保健食品违法添加化学药品的国家标准都是按单一类别制定。部分熟悉药理药效的高智商不法分子，为了规避相关法规限制，存在跨适应症违法添加化学药品的情况。如主要适用于降血糖的二甲双胍、格列本脲等临床一线降血糖用处方药，被监管部门作为辅助降血糖类保健食品中易违法添加的化学药品而严格监控，但是未收入辅助降血脂类保健食品的易违法添加化学药品目录。二甲双胍、格列本脲等也可以间接缓解血脂浓度，将其违法加入到辅助降血脂类保健食品中，既可以提升功效，又可以规避监管。鉴于上述目的，本申请将易添加至辅助降血糖、辅助降血脂、辅助降血压类保健食品中化学药品放在同一方法中同时测定，避免漏检，可以一定程度上扩大对违法添加化学药品的打击面。
目前国家针对辅助降血糖类保健食品中的违法添加有3个标准(含13种化学药物)、辅助降血脂类保健食品有1个标准(3种化学药物)、辅助降血压类保健食品有2个标准(含12种化学药物)，6个标准共涵盖28种违法添加化学药物。本申请将上述6个国家标准中的28种化学药品纳入同一标准进行研究；另根据文献报道，杜彦山等报道曾检出违法添加的那格列奈，朱青霞等报道曾检出违法添加的盐酸普萘洛尔等，故本文另选取文献报道有检出或者根据药品疗效及可获得性、添加可能性较大的化学药品，总计45种，进行同时测定研究。目前针对违法添加的检测方法主要有薄层色谱法、液相色谱法、液质联用法，由于液质联用法具有较好的定性定量能力，故本申请拟建立一个能同时检测高血糖、高血脂、高血压类违法添加化学药品的、大容量液质联用方法。并采用该法对300批辅助降血糖、辅助降血脂、辅助降血压类保健食品进行了测定。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足而提供一种可同时测定三高人群用保健食品中45种违禁药品的液质联用法，该方法可同时测定三高人群用保健食品中违法添加的45种化学药品，并涵盖28种现有国家标准规定检测的目标化合物。
本发明技术方案如下：
可同时测定三高人群用保健食品中45种违禁药品的液质联用法，包括如下步骤：
步骤一，建立色谱条件与质谱条件；
步骤二，S21：制备对照品溶液，将各对照品精密称定，分别用甲醇或乙腈配制成单标储备溶液，备用；将各单标储备溶液混合后，用乙腈溶液稀释成一系列不同浓度的混合标准溶液；
S22：制备供试品溶液：称取依次服用量的样品，混匀，加入甲醇溶液，超声后冷却，定容，过有机滤膜后待测若为软胶囊样品则离心后取上清液过滤；若初试为阳性结果样品，则再取样品最小剂量单位五份，混匀，精密称取，加入甲醇溶液，超声后冷却，定容，若为软胶囊样品则后续离心，再取上清液用乙腈溶液稀释后过有机滤膜后待测；
步骤三，S31：取混合对照品溶液在步骤一种建立的色谱和质谱条件下进样，分析得到总离子流图；
S32：取步骤S21项下混合标准溶液，并在步骤一建立的色谱和质谱条件下进样分析，以各目标物的峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线；取软胶囊阴性样品作为空白基质，加入适量混合标准溶液，按步骤S22制备溶液，以一定的信噪比计算方法检出限；
S33：取软胶囊空白基质分别添加低浓度、中浓度和高浓度的混合标准溶液，并在步骤一建立的色谱和质谱条件下进样分析，重复测定数次，RSD为0.5％～9.7％；
S34：取软胶囊空白基质分别添加低浓度、中浓度和高浓度的混合标准溶液，并在步骤一建立的色谱和质谱条件下24h内连续进样分析，RSD为1.0％～9.9％；
S35：取软胶囊、片剂、硬胶囊、茶剂空白基质，分别添加低浓度、中浓度、高浓度水平的标准溶液，平行测定数次，回收率为63.8％～129.5％；
S36：按步骤S22所述方法对收集到的样品进行前处理，并在步骤一建立的色谱和质谱条件下进样分析。
更进一步地，所述色谱条件为：色谱柱：Agilent Eclipse Plus C18柱(100mm×2.1mm，1.8μm)；流速：0.2mL·min-1；柱温：35℃；进样量：1μL；流动相A：5mmol·L-1乙酸铵溶液(用甲酸调节pH至3.0)；流动相B：乙腈；梯度洗脱程序：0～10min，5％B→40％B；10～15min，40％B→40％B；15～25min，40％B→65％B；25～30min，65％B→95％B；30～31min，95％B→5％B；31～35min，5％B→5％B。
更进一步地，所述质谱条件为：采用ESI源正负离子同时扫描的多反应监测模式，干燥气温度250℃，干燥气流量6L·min-1，鞘气温度350℃，鞘气流量11L·min-1；毛细管电压：正3500V，负4000V；喷嘴电压：正1500V，负1500V。
更进一步地，步骤S21中，所述对照品为格列本脲、盐酸二甲双胍、马来酸罗格列酮、盐酸苯乙双胍、格列齐特、甲苯磺丁脲、格列美脲、格列喹酮、瑞格列奈、格列波脲、盐酸吡格列酮、盐酸丁二胍、洛伐他汀、烟酸、辛伐他汀、美伐他汀、盐酸哌唑嗪、氢氯噻嗪、硝苯地平、卡托普利、盐酸可乐定、尼索地平、马来酸氨氯地平、尼莫地平、那格列奈、氯磺丙脲、氟伐他汀钠、苯扎贝特、非诺贝特、盐酸普萘洛尔、盐酸维拉帕米、米诺地尔、酒石酸美托洛尔、厄贝沙坦、布美他尼、盐酸尼卡地平、盐酸特拉唑嗪、富马酸比索洛尔、替米沙坦、格列吡嗪、阿替洛尔、利血平、非洛地平、尼群地平或去羟基洛伐他汀。
更进一步地，步骤S21中，将各对照品精密称定，分别用甲醇配制成1.0mg·mL-1或0.3mg·mL-1的单标储备溶液，或分别用乙腈配制成1.0mg·mL-1的单标储备溶液。
更进一步地，步骤S21中，将对照品格列本脲、盐酸二甲双胍、马来酸罗格列酮、盐酸苯乙双胍、格列齐特、甲苯磺丁脲、格列美脲、格列喹酮、瑞格列奈、格列波脲、盐酸吡格列酮、盐酸丁二胍、洛伐他汀、烟酸、辛伐他汀、美伐他汀、盐酸哌唑嗪、氢氯噻嗪、硝苯地平、卡托普利、盐酸可乐定、尼索地平、马来酸氨氯地平、尼莫地平、那格列奈、氯磺丙脲、氟伐他汀钠、苯扎贝特、非诺贝特、盐酸普萘洛尔、盐酸维拉帕米、米诺地尔、酒石酸美托洛尔、厄贝沙坦、布美他尼、盐酸尼卡地平、盐酸特拉唑嗪、富马酸比索洛尔和替米沙坦用甲醇配制成1.0mg·mL-1的单标储备溶液，将格列吡嗪、阿替洛尔、利血平、非洛地平、尼群地平用甲醇配制成0.3mg·mL-1的单标储备溶液；将去羟基洛伐他汀用乙腈配制成1.0mg·mL-1的单标储备溶液。
更进一步地，步骤S22中，精密称取一次服用量的样品，必要时研细，混匀，置于20mL容量瓶中，加入90％甲醇溶液约15mL，超声10min后冷却，定容至刻度，过0.22μm有机滤膜后待测若为软胶囊样品则用10000r·min-1离心10min后取上清液过滤；若初试为阳性结果样品，则再取样品最小剂量单位五份，必要时研细，混匀，精密称取0.5g，置于20mL容量瓶中，加入90％甲醇溶液约15mL，超声10min后冷却，定容至刻度，若为软胶囊样品则后续用10000r·min-1离心10min，再取1mL上清液用20％乙腈溶液稀释后过0.22μm有机滤膜后待测。
更进一步地，步骤S21和步骤S22中所述乙腈溶液为体积浓度为20％的乙腈溶液，步骤S22中所述甲醇溶液为体积浓度为90％的甲醇溶液。
与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
本申请建立的方法可同时测定三高人群用保健食品中违法添加的45种化学药品，并涵盖28种现有国家标准规定检测的目标化合物。本发明的方法检出容量较大，可以在一定程度上避免违禁药物的漏检，适用范围更广，具有较好的应用前景。
附图说明
图1为45种目标物混标线性最高点的总离子流图；
图2为盐酸二甲双胍的提取离子流图；
图3为盐酸二甲双胍的质谱图；
图4为烟酸的提取离子流图；
图5为烟酸的质谱图；
图6为盐酸丁二胍的提取离子流图；
图7为盐酸丁二胍的质谱图；
图8为阿替洛尔的提取离子流图；
图9为阿替洛尔的质谱图；
图10为盐酸可乐定的提取离子流图；
图11为盐酸可乐定的质谱图；
图12为氢氯噻嗪的提取离子流图；
图13为氢氯噻嗪的质谱图
图14为盐酸苯乙双胍的提取离子流图；
图15为盐酸苯乙双胍的质谱图；
图16为米诺地尔的提取离子流图；
图17为米诺地尔的质谱图；
图18为卡托普利的提取离子流图；
图19为卡托普利的质谱图；
图20为盐酸特拉唑嗪的提取离子流图；
图21为盐酸特拉唑嗪的质谱图；
图22为酒石酸美托洛尔的提取离子流图；
图23为酒石酸美托洛尔的质谱图；
图24为盐酸哌唑嗪的提取离子流图；
图25为盐酸哌唑嗪的质谱图；
图26为马来酸罗格列酮的提取离子流图；
图27为马来酸罗格列酮的质谱图；
图28为富马酸比索洛尔的提取离子流图；
图29为富马酸比索洛尔的质谱图；
图30为盐酸普萘洛尔的提取离子流图；
图31为盐酸普萘洛尔的质谱图；
图32为盐酸吡格列酮的提取离子流图；
图33为盐酸吡格列酮的质谱图；
图34为马来酸氨氯地平的提取离子流图；
图35为马来酸氨氯地平的质谱图；
图36为盐酸尼卡地平的提取离子流图；
图37为盐酸尼卡地平的质谱图；
图38为盐酸维拉帕米的提取离子流图；
图39为盐酸维拉帕米的质谱图；
图40为氯磺丙脲的提取离子流图；
图41为氯磺丙脲的质谱图；
图42为利血平的提取离子流图；
图43为利血平的质谱图；
图44为格列吡嗪的提取离子流图；
图45为格列吡嗪的质谱图；
图46为甲苯磺丁脲的提取离子流图；
图47为甲苯磺丁脲的质谱图；
图48为厄贝沙坦的提取离子流图；
图49为厄贝沙坦的质谱图；
图50为替米沙坦的提取离子流图；
图51为替米沙坦的质谱图；
图52为苯扎贝特的提取离子流图；
图53为苯扎贝特的质谱图；
图54为硝苯地平的提取离子流图；
图55为硝苯地平的质谱图；
图56为布美他尼的提取离子流图；
图57为布美他尼的质谱图；
图58为格列齐特的提取离子流图；
图59为格列齐特的质谱图；
图60为格列波脲的提取离子流图；
图61为格列波脲的质谱图；
图62为氟伐他汀钠的提取离子流图；
图63为氟伐他汀钠的质谱图；
图64为尼群地平的提取离子流图；
图65为尼群地平的质谱图；
图66为那格列奈的提取离子流图；
图67为那格列奈的质谱图；
图68为格列本脲的提取离子流图；
图69为格列本脲的质谱图；
图70为瑞格列奈的提取离子流图；
图71为瑞格列奈的质谱图；
图72为尼莫地平的提取离子流图；
图73为尼莫地平的质谱图；
图74为格列美脲的提取离子流图；
图75为格列美脲的质谱图；
图76为尼索地平的提取离子流图；
图77为尼索地平的质谱图；
图78为非洛地平的提取离子流图；
图79为非洛地平的质谱图；
图80为美伐他汀的提取离子流图；
图81为美伐他汀的质谱图；
图82为格列喹酮的提取离子流图；
图83为格列喹酮的质谱图；
图84为洛伐他汀的提取离子流图；
图85为洛伐他汀的质谱图；
图86为辛伐他汀的提取离子流图；
图87为辛伐他汀的质谱图；
图88为非诺贝特的提取离子流图；
图89为非诺贝特的质谱图；
图90为去羟基洛伐他汀的提取离子流图；
图91为去羟基洛伐他汀的质谱图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细描述。本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。
实施例
本发明中用到的仪器与试药如下：
仪器：
1290型超高效液相色谱仪(安捷伦公司)，G6460三重四级杆质谱检测器(安捷伦公司)，Agilent Eclipse Plus C18柱(100mm×2.1mm，5μm；填料：十八烷基硅烷键合硅胶；安捷伦公司)，Elmasonic P300H超声波清洗器(埃尔玛公司)，Delta 320pH计(梅特勒-托利多公司)，XPE 205分析天平(梅特勒-托利多公司)，Genpure UV/UF超纯水仪(赛默飞科技公司)，Multifuge X1高速离心机(赛默飞科技公司)。
试药：
格列本脲(批号100135-200404,100％)，盐酸二甲双胍(批号100664-201203,100.0％)，马来酸罗格列酮(批号100952-200701,99.5％)，盐酸苯乙双胍(100922-201001,99.7％)，格列齐特(100269-200603,99.9％)，格列吡嗪(100281-200602,99.4％)，甲苯磺丁脲(100500-200801,100.0％)，格列美脲(100674-201102,99.1％)，格列喹酮(100280-201002,99.3％)，瑞格列奈(100753-201102,99.7％)，格列波脲(520026-201401,99.9％)，盐酸吡格列酮(100634-201202,100.0％)，洛伐他汀(100600-200502,100％)，辛伐他汀(100601-201003,99.0％)，阿替洛尔(100117-200504,100％)，利血平(100041-201012,99.0％)，盐酸哌唑嗪(100164-201003,99.0％)，氢氯噻嗪(100309-201103,99.8％)，硝苯地平(100338-201404,99.9％)，卡托普利(100318-201103,99.5％)，盐酸可乐定(100071-201106,99.9％)，尼索地平(100574-200401,100％)，马来酸氨氯地平(100712-200401,99.2％)，非洛地平(100717-201403,99.6％)，尼莫地平(100270-201403,99.7％)，尼群地平(100585-201104,99.0％)，那格列奈(100619-200501,100％)，氟伐他汀钠(100800-201302,95.5％)，苯扎贝特(100732-200501,100％)，非诺贝特(100733-200401,100％)，盐酸普萘洛尔(100783-201202,100％)，盐酸维拉帕米(100223-200102,100％)，米诺地尔(100238-199701,100％)，酒石酸美托洛尔(100084-201403,99.9％)，厄贝沙坦(100607-201202,99.8％)，布美他尼(100173-2010002,99.3％)，盐酸尼卡地平(100586-200401,99.4％)，盐酸特拉唑嗪(100375-200401,99.3％)，富马酸比索洛尔(100711-200401,100％)，替米沙坦(100629-201202,99.9％)均购于中国食品药品检定研究院；盐酸丁二胍(1-RLJ-70-1,100％)，去羟基洛伐他汀(5-VKU-11-1,100％)均购于百灵威科技有限公司；烟酸(0001292168,99.5％)购于西格玛公司，美伐他汀(EBKHK-FE,98.0％)购于东京化成工业株式会社；氯磺丙脲(30911,99.9％)购于Dr.E公司。色谱纯甲醇、乙腈购于默克公司，色谱纯乙酸铵、甲酸购于西格玛公司，分析纯甲醇、乙腈购于国药集团化学试剂有限公司。水为超纯水。300批辅助降血糖、辅助降血脂、辅助降血压类保健食品(含软胶囊、硬胶囊、片剂及颗粒剂等剂型)来源于浙江省内市场抽检样品。
步骤一，建立色谱-质谱条件
色谱条件：
色谱柱：Agilent Eclipse Plus C18柱(100mm×2.1mm，1.8μm)；流速：0.2mL·min-1；柱温：35℃；进样量：1μL；流动相A：5mmol·L-1乙酸铵溶液(用甲酸调节pH至3.0)；流动相B：乙腈；梯度洗脱程序：0～10min，5％B→40％B；10～15min，40％B→40％B；15～25min，40％B→65％B；25～30min，65％B→95％B；30～31min，95％B→5％B；31～35min，5％B→5％B。
质谱条件：
采用ESI源正负离子同时扫描的多反应监测模式，干燥气温度250℃，干燥气流量6L·min-1，鞘气温度350℃，鞘气流量11L·min-1；毛细管电压：正3500V，负4000V；喷嘴电压：正1500V，负1500V。
步骤二：溶液的制备
S21：对照品溶液的制备：取格列本脲、盐酸二甲双胍、马来酸罗格列酮、盐酸苯乙双胍、格列齐特、甲苯磺丁脲、格列美脲、格列喹酮、瑞格列奈、格列波脲、盐酸吡格列酮、盐酸丁二胍、洛伐他汀、烟酸、辛伐他汀、美伐他汀、盐酸哌唑嗪、氢氯噻嗪、硝苯地平、卡托普利、盐酸可乐定、尼索地平、马来酸氨氯地平、尼莫地平、那格列奈、氯磺丙脲、氟伐他汀钠、苯扎贝特、非诺贝特、盐酸普萘洛尔、盐酸维拉帕米、米诺地尔、酒石酸美托洛尔、厄贝沙坦、布美他尼、盐酸尼卡地平、盐酸特拉唑嗪、富马酸比索洛尔、替米沙坦对照品适量，精密称定，用甲醇配制成1.0mg·mL-1的单标储备溶液，取格列吡嗪、阿替洛尔、利血平、非洛地平、尼群地平对照品适量，精密称定，用甲醇配制成0.3mg·mL-1的单标储备溶液，取去羟基洛伐他汀对照品适量，精密称定，用乙腈配制成1.0mg·mL-1的单标储备溶液。各单标溶液置于-4℃冰箱中保存备用。精密吸取各单标储备溶液适量混合，用20％乙腈溶液稀释成一系列不同浓度的混合标准溶液。
S22：供试品溶液的制备：精密称取一次服用量的样品，必要时研细，混匀，置于20mL容量瓶中，加入90％甲醇溶液约15mL，超声10min后冷却，定容至刻度，过0.22μm有机滤膜后待测若为软胶囊样品则用10000r·min-1离心10min后取上清液过滤。若初试为阳性结果样品，则再取样品最小剂量单位五份(必要时研细)，混匀，精密称取0.5g，置于20mL容量瓶中，加入90％甲醇溶液约15mL，超声10min后冷却，定容至刻度，若为软胶囊样品则后续用10000r·min-1离心10min，再取1mL上清液用20％乙腈溶液稀释后过0.22μm有机滤膜后待测。
步骤三：方法学考察
S31：质谱测定方法：取混合对照品溶液在步骤一的色谱和质谱条件下进样分析得到总离子流图，各目标物之间分离良好，见图1。45种目标物的监测离子对及质谱参数见表1。
表1 45种目标物的质谱测定条件
Tab.1 MS parameters for 45 components
S32：线性关系及检出限：
取步骤S21项下混合标准溶液，并按步骤一建立的色谱和质谱条件下进样分析，以各目标物的峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，各目标物的线性回归曲线、线性范围、线性相关系数见表2。取软胶囊阴性样品作为空白基质约1.0g，加入适量混合标准溶液，按步骤S22制备溶液，以信噪比为3(S/N＝3)计算方法检出限，各目标物的检出限见表2。
表2 45种目标物的回归方程、线性范围、检出限及保留时间
Tab.2 Regression equations，linear range，LOD and retention time for 45analytes
S33：精密度试验：取软胶囊空白基质分别添加低浓度、中浓度和高浓度的混合标准溶液，在步骤一建立的色谱和质谱条件下进样分析，重复测定6次，RSD为0.5％～9.7％。
S34：稳定性试验：取软胶囊空白基质分别添加低浓度、中浓度和高浓度的混合标准溶液，在步骤一建立的色谱和质谱条件下24h内连续进样分析，RSD为1.0％～9.9％。
S35：回收率试验：取软胶囊、片剂、硬胶囊、茶剂空白基质，分别添加低浓度、中浓度、高浓度水平的标准溶液，平行测定三次，回收率为63.8％～129.5％(RSD：0.2％～9.7％)，详见表3。
表3 45种目标物的回收率
Tab.3 Recoveries of 45 analytes
S36：样品测定：按步骤S22所述方法对收集到的300批样品进行前处理，并在步骤一建立的色谱和质谱条件下进样分析，阳性样品结果见表4。
表4阳性样品测定结果
Tab.4 Results of positive samples
注：“/”指未检出。
Note:"/"Means not detected.
在上述步骤中，上述目标化合物通常采用反相色谱柱(C18柱)进行分离分析。故本文采用A柱：Agilent Eclipse Plus C18(100mm×2.1mm,1.8μm)，B柱：Dikma EndeavorsilC18(100mm×2.1mm,1.8μm)进行比较，结果表明：相同浓度的利血平在A柱出峰且响应较好，但在B柱上不出峰，同时使用A柱分离效果良好，故选择A柱。
综合研究结果，本申请采用乙腈作为有机相时的信号响应比甲醇灵敏，故选用乙腈作为有机相；本实验分析的目标化合物较多，且化合物结构复杂。以纯水作为水相时，目标化合物色谱峰多有拖尾，故通过调节水相中的离子强度来改善峰形。经考察5mmol·L-1、10mmol·L-1、20mmol·L-1乙酸铵溶液为流动相时的峰形与灵敏度，当5mmol·L-1乙酸铵溶液做水相时，目标化合物整体峰形与灵敏度能基本满足测定要求。
水相添加乙酸铵后峰形得到较好的改善，但碱性化合物如盐酸哌唑嗪、盐酸特拉唑嗪、盐酸普萘洛尔等仍拖尾，故调节水相的pH，进一步考察pH为3.0、4.0、5.0的5mmol·L-1乙酸铵溶液的色谱行为，pH为3.0时峰形尖锐，信号整体较强。故选择乙腈-5mmol·L-1乙酸铵溶液(用甲酸调节pH至3.0)作为流动相。
烟酸和盐酸丁二胍出峰时间较早，有机相含量较低，容易出现二次分配：以甲醇做溶剂时，烟酸峰形分叉；以乙腈做溶剂时，盐酸丁二胍峰形分叉。比较以20％的甲醇溶液与20％乙腈溶液为溶剂混标的色谱行为，发现20％的甲醇溶液中的烟酸依旧分叉，而在20％的乙腈溶液中的色谱峰峰形良好，故混合标准溶液用20％的乙腈溶液定容。
本实验所采用的电喷雾离子源可适用于极性小分子化合物的分析。氢氯噻嗪在负离子模式下易失去氢形成带负电荷的[M-H]-离子，其余目标物均选择正离子。为了提高实验的灵敏度和准确性，先用全扫模式确定母离子，其中洛伐他汀和辛伐他汀的加钠峰的强度强于加氢峰，这与酯键官能团易与钠离子形成加和离子有关，但是加钠峰和加氢峰的裂解方式相同，所产生的碎片离子种类与强度基本一致，故选择加氢峰，接着在SIM模式下对碎裂电压进行优化，最后在PI模式下对碰撞能进行优化，选择两个响应较高且分子量相差大于2(本文实际相差3)的二级离子碎片，其中响应较高的离子作为定量离子。
本申请涉及的化合物多数易溶于有机溶剂如甲醇、乙腈等，少数易溶于水但也能溶于有机溶剂。考察50％的甲醇溶液和50％乙腈溶液的提取效率，发现50％的甲醇溶液提取效果较好，接着考察10％、30％、50％、70％、90％的甲醇溶液，整体上90％的甲醇溶液提取效果较好，最后对超声时间进行优化，超声10min(37kHz)时提取效果较好。同时，由于软胶囊中的油脂不溶于90％的甲醇溶液，超声处理后会形成乳浊液，且能通过0.22μm滤膜，但经10000r·min-1离心后油脂能沉淀在底部，故对于软胶囊样品定容后需要用10000r·min-1离心10min。由于软胶囊样品与其他样品的前处理方式不同，故选用软胶囊空白基质来做检出限。若初试为阳性结果样品，考虑到其可能是由于上个样品的残留，此外样品个体之间也有差异，为了更好的定量，则取样品最小剂量单位五份，必要时研细，混匀后进行下一步处理。
300批样品测定的结果显示共有3批阳性样品，其中1批违法添加氢氯噻嗪和氨氯地平，1批违法添加格列本脲，1批添加格列本脲和苯乙双胍。
本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (8)

1.可同时测定三高人群用保健食品中45种违禁药品的液质联用法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一，建立色谱条件与质谱条件；
步骤二，S21：制备对照品溶液，将各对照品精密称定，分别用甲醇或乙腈配制成单标储备溶液，备用；将各单标储备溶液混合后，用乙腈溶液稀释成一系列不同浓度的混合标准溶液；
S22：制备供试品溶液：称取依次服用量的样品，混匀，加入甲醇溶液，超声后冷却，定容，过有机滤膜后待测若为软胶囊样品则离心后取上清液过滤；若初试为阳性结果样品，则再取样品最小剂量单位五份，混匀，精密称取，加入甲醇溶液，超声后冷却，定容，若为软胶囊样品则后续离心，再取上清液用乙腈溶液稀释后过有机滤膜后待测；
步骤三，S31：取混合对照品溶液在步骤一种建立的色谱和质谱条件下进样，分析得到总离子流图；
S32：取步骤S21项下混合标准溶液，并在步骤一建立的色谱和质谱条件下进样分析，以各目标物的峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线；取软胶囊阴性样品作为空白基质，加入适量混合标准溶液，按步骤S22项制备溶液，以一定的信噪比计算方法检出限；
S33：取软胶囊空白基质分别添加低浓度、中浓度和高浓度的混合标准溶液，并在步骤一建立的色谱和质谱条件下进样分析，重复测定数次，RSD为0.5％～9.7％；
S34：取软胶囊空白基质分别添加低浓度、中浓度和高浓度的混合标准溶液，并在步骤一建立的色谱和质谱条件下24h内连续进样分析，RSD为1.0％～9.9％；
S35：取软胶囊、片剂、硬胶囊、茶剂空白基质，分别添加低浓度、中浓度、高浓度水平的标准溶液，平行测定数次，回收率为63.8％～129.5％；
S36：按步骤S22所述方法对收集到的样品进行前处理，并在步骤一建立的色谱和质谱条件下进样分析。
2.根据权利要求1所述的可同时测定三高人群用保健食品中45种违禁药品的液质联用法，其特征在于，所述色谱条件为：色谱柱：C18柱；流速：0.2mL·min-1；柱温：35℃；进样量：1μL；流动相A：5mmol·L-1乙酸铵溶液，用甲酸调节pH至3.0；流动相B：乙腈；梯度洗脱程序：0～10min，5％B→40％B；10～15min，40％B→40％B；15～25min，40％B→65％B；25～30min，65％B→95％B；30～31min，95％B→5％B；31～35min，5％B→5％B。
3.根据权利要求1所述的可同时测定三高人群用保健食品中45种违禁药品的液质联用法，其特征在于，所述质谱条件为：采用ESI源正负离子同时扫描的多反应监测模式，干燥气温度250℃，干燥气流量6L·min-1，鞘气温度350℃，鞘气流量11L·min-1；毛细管电压：正3500V，负4000V；喷嘴电压：正1500V，负1500V。
4.根据权利要求1所述的可同时测定三高人群用保健食品中45种违禁药品的液质联用法，其特征在于，步骤S21中，所述对照品为格列本脲、盐酸二甲双胍、马来酸罗格列酮、盐酸苯乙双胍、格列齐特、甲苯磺丁脲、格列美脲、格列喹酮、瑞格列奈、格列波脲、盐酸吡格列酮、盐酸丁二胍、洛伐他汀、烟酸、辛伐他汀、美伐他汀、盐酸哌唑嗪、氢氯噻嗪、硝苯地平、卡托普利、盐酸可乐定、尼索地平、马来酸氨氯地平、尼莫地平、那格列奈、氯磺丙脲、氟伐他汀钠、苯扎贝特、非诺贝特、盐酸普萘洛尔、盐酸维拉帕米、米诺地尔、酒石酸美托洛尔、厄贝沙坦、布美他尼、盐酸尼卡地平、盐酸特拉唑嗪、富马酸比索洛尔、替米沙坦、格列吡嗪、阿替洛尔、利血平、非洛地平、尼群地平或去羟基洛伐他汀。
5.根据权利要求4所述的可同时测定三高人群用保健食品中45种违禁药品的液质联用法，其特征在于，步骤S21中，将各对照品精密称定，分别用甲醇配制成1.0mg·mL-1或0.3mg·mL-1的单标储备溶液，或分别用乙腈配制成1.0mg·mL-1的单标储备溶液。
6.根据权利要求5所述的可同时测定三高人群用保健食品中45种违禁药品的液质联用法，其特征在于，步骤S21中，将对照品格列本脲、盐酸二甲双胍、马来酸罗格列酮、盐酸苯乙双胍、格列齐特、甲苯磺丁脲、格列美脲、格列喹酮、瑞格列奈、格列波脲、盐酸吡格列酮、盐酸丁二胍、洛伐他汀、烟酸、辛伐他汀、美伐他汀、盐酸哌唑嗪、氢氯噻嗪、硝苯地平、卡托普利、盐酸可乐定、尼索地平、马来酸氨氯地平、尼莫地平、那格列奈、氯磺丙脲、氟伐他汀钠、苯扎贝特、非诺贝特、盐酸普萘洛尔、盐酸维拉帕米、米诺地尔、酒石酸美托洛尔、厄贝沙坦、布美他尼、盐酸尼卡地平、盐酸特拉唑嗪、富马酸比索洛尔和替米沙坦用甲醇配制成1.0mg·mL-1的单标储备溶液，将格列吡嗪、阿替洛尔、利血平、非洛地平、尼群地平用甲醇配制成0.3mg·mL-1的单标储备溶液；将去羟基洛伐他汀用乙腈配制成1.0mg·mL-1的单标储备溶液。
7.根据权利要求1所述的可同时测定三高人群用保健食品中45种违禁药品的液质联用法，其特征在于，步骤S22中，精密称取一次服用量的样品，必要时研细，混匀，置于20mL容量瓶中，加入90％甲醇溶液约15mL，超声10min后冷却，定容至刻度，过0.22μm有机滤膜后待测若为软胶囊样品则用10000r·min-1离心10min后取上清液过滤；若初试为阳性结果样品，则再取样品最小剂量单位五份，必要时研细，混匀，精密称取0.5g，置于20mL容量瓶中，加入90％甲醇溶液约15mL，超声10min后冷却，定容至刻度，若为软胶囊样品则后续用10000r·min-1离心10min，再取1mL上清液用20％乙腈溶液稀释后过0.22μm有机滤膜后待测。
8.根据权利要求1所述的可同时测定三高人群用保健食品中45种违禁药品的液质联用法，其特征在于，步骤S21和步骤S22中所述乙腈溶液为体积浓度为20％的乙腈溶液，步骤S22中所述甲醇溶液为体积浓度为90％的甲醇溶液。
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