CN108653078B - 一种白桦树皮提取物及其提取方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及化妆品技术领域，公开了一种白桦树皮提取物及其提取方法和应用。本发明所述提取方法将白桦树皮加醇溶剂提取，所得粗提液脱除醇溶剂获得醇提物，部分醇提物上样大孔树脂，依次用去离子水、30％乙醇溶液、70％乙醇溶液、95％乙醇溶液进行梯度洗脱，分别收集洗脱液A‑D，分别浓缩获得洗脱提取物A‑D，将剩余白桦树皮醇提物、洗脱提取物A‑D中的一种或两种以上用醇溶液复溶，获得所述白桦树皮提取物。本发明以白桦树皮为提取对象，通过醇试剂的提取和梯度洗脱程序获得了一种能够显著抑制皮脂腺细胞增殖和脂质合成的白桦树皮提取物，有效实现控油目的，扩展白桦在化妆品中的应用范围。

Description

一种白桦树皮提取物及其提取方法和应用

技术领域

本发明涉及化妆品技术领域，特别涉及一种白桦树皮提取物及其提取方法和应用。

背景技术

皮肤表面的脂质主要是角化细胞的崩解和皮脂腺分泌的皮脂，皮脂的成分主要为甘油三酯、蜡酯、角鲨烯、胆固醇酯及胆固醇等，其中角鲨烯是其特有的。正常的脂质可以起到屏障作用，滋润皮肤，抗感染和维持人体皮肤表面常驻菌的生态平衡。但分泌异常的脂质会产生一系列的“面子”问题，如油光满面、毛孔粗大、皮肤暗黄、面部易感染、痤疮和脂溢性皮炎等，有研究通过对国内多个地区如沈阳，哈尔滨，北京，成都和苏州大规模流调女性油性皮肤的发病率，发现中国女性皮肤油性率高达百分之二十多，男性油性率比女性更高，这样高的发病率严重影响了患者的生活质量。

皮肤表面的脂质中角化细胞崩解的脂质只是占很小的一部分，皮肤油腻的主要原因是皮脂腺分泌的皮脂过多引起的。皮脂腺分泌的脂质主要包括鲨烯、蜡酯/固醇酯、甘油三酯、胆固醇、游离脂肪酸(free fatty acid，FFA)、甘油二酯等。皮脂腺是一种多腺泡全浆分泌组织，分布于除手掌、足底以外的全身皮肤，以头皮、颜面部密度最高。皮脂腺功能受多个方面的影响，其中雄激素是影响皮脂分泌的首要因素，它调节皮脂腺的分化、增殖及皮脂的合成与分泌。此外，皮脂腺功能也会受到酶系如过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)、神经肽、抗菌肽、炎性细胞因子等调控，总之，多种因素共同体调节皮脂腺引起脂质分泌过多。

白桦(Betula platyphylla)是桦木科落叶乔木，白桦树皮中含有丰富的三萜类物质和软木脂，二者之和占绝干外皮的60％以上，此外还含有多酚、黄酮类、三萜皂苷类和酚酸类等物质。三萜类物质及其衍生物具有良好的抗癌、抗肿瘤、抗真菌、镇痛、抗炎的功效。研究发现白桦树皮在体外具有抗微生物的活性，它具有抑制枯草杆菌、大肠杆菌、微球菌、金黄色葡萄球菌等的作用。同时白桦树皮具有抗炎作用，对血管缓激肽引起的小鼠足趾肿胀能达到54％的抑制作用。

目前，白桦在化妆品方面的专利，主要集中在美白、祛斑、改善肌肤眼部肌肤暗沉等方面，在控油方面尚未发现报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种白桦树皮提取物及其提取方法，使得所述提取物能够抑制皮脂腺细胞的增殖，实现控油的目的；

本发明的另外一个目的在于提供一种白桦树皮提取物及其提取方法，使得所述提取物能够抑制脂质的合成，实现控油的目的；

本发明的另外一个目的在于提供上述提取物在控油以及制备控油产品中的应用。

为实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：

一种白桦树皮提取物的提取方法，包括：

步骤1、白桦树皮加醇溶剂提取，获得白桦树皮粗提液；

步骤2、所述粗提液脱除醇溶剂获得白桦树皮醇提物，部分白桦树皮醇提物上样大孔树脂，依次用去离子水、30％乙醇溶液、70％乙醇溶液、95％乙醇溶液进行梯度洗脱，分别收集洗脱液A、洗脱液B、洗脱液C、洗脱液D；

步骤3、将洗脱液A、洗脱液B、洗脱液C和洗脱液D分别浓缩获得洗脱提取物A、洗脱提取物B、洗脱提取物C、洗脱提取物D，将剩余白桦树皮醇提物、洗脱提取物A、洗脱提取物B、洗脱提取物C、洗脱提取物D中的一种或两种以上用醇溶液复溶，获得所述白桦树皮提取物。

作为优选，所述白桦树皮提取物中包含洗脱提取物B、洗脱提取物C和洗脱提取物D；或者包含洗脱提取物C和洗脱提取物D。所述部分白桦树皮醇提物为其总重的五分之四。

针对目前白桦在化妆品领域尚无控油方面的应用报道，本发明以白桦树皮为提取对象，通过醇溶剂提取和特定的洗脱程序，获得了一种能够抑制皮脂腺细胞的增殖以及抑制脂质的合成，从而实现有效控油的白桦树皮提取物，扩展了白桦在化妆品中的应用范围。

在本发明具体实施方式中，步骤1具体为：

白桦树皮加醇溶剂热回流提取2小时，获得白桦树皮粗提液。其中，所述白桦树皮与醇溶剂的质量体积比是1g:10ml；所述醇溶剂为70％乙醇。

在本发明具体实施方式中，所述大孔树脂为AB-8树脂。

在本发明具体实施方式中，所述梯度洗脱具体为：以2.5BV/h的洗脱速度依次用去离子水、30％乙醇溶液、70％乙醇溶液、95％乙醇溶液分别各自洗脱1h。在本发明具体实施方式中，所述醇溶液为70％丁二醇溶液。

此外，在本发明提取方法基础上，本发明还包括将前述白桦树皮提取物低温陈化，纯化，灭菌。其中，低温陈化为在4℃时静止4天，用以沉淀杂质和蛋白；所述纯化优选通过硅藻土进行过滤纯化。

按照本发明提供的提取方法，将所获得的白桦树皮提取物进行对皮脂腺细胞增殖和脂质合成的抑制试验，结果显示，白桦树皮的水提物与空白对照组相比，没有显著差异，表明其水提物不能有效抑制皮脂腺细胞增殖和脂质合成(P＞0.05)，无法有效控油；而经过本发明提取方法提取的白桦树皮提取物能够显著抑制皮脂腺细胞增殖和脂质合成(P＜0.01)，可以有效实现控油目的。

因此，本发明提供了由本发明所述提取方法提取的白桦树皮提取物；同时，提出了所述白桦树皮提取物在抑制皮脂腺细胞增殖、抑制脂质合成、制备皮脂腺细胞增殖抑制剂和/或脂质合成抑制剂中的应用；以及在控油和/或制备控油产品中的应用。

由以上技术方案可知，本发明以白桦树皮为提取对象，通过醇试剂的提取和梯度洗脱程序获得了一种能够显著抑制皮脂腺细胞增殖和脂质合成的白桦树皮提取物，有效实现控油目的，扩展白桦在化妆品中的应用范围。

具体实施方式

本发明公开了一种白桦树皮提取物及其提取方法和应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明所述提取物及其提取方法和应用已经通过实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述提取物及其提取方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

在本发明具体实施例中，涉及到对比试验，各试验组除了应有的区别外，其余试验环境和原材料等均保持一致。

以下就本发明所提供的一种白桦树皮提取物及其提取方法和应用做进一步说明。

实施例1：本发明所述提取方法

白桦树皮加70％乙醇(1g:10ml比例)回流提取2小时，固液分离得白桦树皮粗提液；

白桦树皮粗提液进行减压浓缩脱除溶剂，获得白桦树皮醇提取物；

取五分之四重量的白桦树皮醇提取物用去离子水分散后(2mg/mL)，上样到AB-8树脂大孔树脂柱，依次用去离子水、30％乙醇溶液、70％乙醇溶液、95％乙醇溶液进行梯度洗脱(洗脱速度为2.5BV/h，各自的洗脱时间均为1h)，分别收集洗脱液A(去离子水洗脱)、洗脱液B(30％乙醇洗脱)、洗脱液C(70％乙醇洗脱)、洗脱液D(95％乙醇洗脱)。

各洗脱液分别进行减压浓缩得洗脱提取物A、洗脱提取物B、洗脱提取物C、洗脱提取物D。

将剩余白桦树皮醇提取物、洗脱提取物A、洗脱提取物B、洗脱提取物C、洗脱提取物D中的一种或两种以上用70％丁二醇溶液进行复溶。

其中较优的，复溶液中包含洗脱提取物B+洗脱提取物C+洗脱提取物D；复溶液由洗脱提取物B+洗脱提取物C+洗脱提取物D组成；复溶液中包含洗脱提取物C+洗脱提取物D；或复溶液由洗脱提取物C+洗脱提取物D组成；

然后4℃静置4天低温陈化白桦树皮复溶液，硅藻土过滤纯化，灭菌，得白桦树皮提取物。

实施例2：不同白桦树皮提取物对皮脂腺细胞增殖作用的影响

1、对照工艺

参照实施例1工艺，将提取溶剂更换为水，其余保持一致，获得白桦树皮水提取物、洗脱提取物E、洗脱提取物F、洗脱提取物G和洗脱提取物H。

2、试验方法

培养SZ95细胞，待细胞生长至80％融合程度时，用胰蛋白酶消化SZ95细胞，制备单细胞悬液，接种于96孔培养板，3×10³/孔，培养2天后，弃上清液，PBS洗2次，加入含有白桦树皮醇提取物，洗脱提取物A、洗脱提取物B、洗脱提取物C、洗脱提取物D、白桦树皮水提取物，洗脱提取物E、洗脱提取物F、洗脱提取物G或洗脱提取物H的白桦树皮提取物(各组剂量一致)，继续培养48后，加入5mg/ml的MTT20ul，培养4h后，弃去培养液，每孔加入150ulDMSO，震荡10min，在酶联免疫上测定吸光度值(A)，波长为490nm，每个作用浓度设3个平行孔，以0.2％DMSO不加药物的培养基作为对照组，同时以不加SZ95细胞，仅加培养基的作为空白对照组(仅在计算增殖率时使用)。

细胞增殖率＝(实验组OD-空白对照OD)/(对照组OD-空白对照OD)

结果见表1。

表1

**P＜0.01,VS对照组。

由表1可知，醇提工艺组(即本发明工艺组)比水提工艺组对皮脂腺细胞增殖的抑制作用明显，特别是用不同浓度乙醇进行洗脱的洗脱提取物B、洗脱提取物C和洗脱提取物D，增殖作用均被显著抑制(P＜0.01)；而白桦树皮水提取物和不同浓度乙醇洗脱的洗脱提取物E-H增殖作用有降低，但降低作用较弱，没有统计学意义(P＞0.05)。

实施例3：不同白桦树皮提取物对脂质合成作用的影响

1、对照工艺

参照实施例1工艺，将提取溶剂更换为水，其余保持一致，获得白桦树皮水提取物、洗脱提取物E、洗脱提取物F、洗脱提取物G和洗脱提取物H。

2、试验方法

将对数生长期的SZ95细胞接种于6孔板中，每孔2×10⁵，培养48h后，加入含有白桦树皮醇提取物，洗脱提取物A、洗脱提取物B、洗脱提取物C、洗脱提取物D、白桦树皮水提取物，洗脱提取物E、洗脱提取物F、洗脱提取物G或洗脱提取物H的白桦树皮提取物(各组剂量一致)，继续培养48h后，加入含0.02％EDTA的0.25％胰蛋白酶消化细胞后，用含10％小牛血清的培养基终止消化，PBS洗2次，制备单细胞悬液，加入4℃避光保存的尼罗河红荧光染液(贮存浓度为10ug/ml)，使终浓度为100ng/ml，室温孵育15min，300目尼龙滤膜过滤，流式细胞仪上检测每个标本中的10000个细胞，计算每个细胞的平均荧光强度，激发波长485nm，发射波长565nm。每种药物设3个平行孔，含0.2％DMSO不加药物的培养基作为对照组。结果见表2。

表2

**P＜0.01,VS对照组。

由表2可知，醇提工艺组(即本发明工艺组)比水提工艺组合成的脂质均降低。与对照组比较，70％乙醇和95％乙醇进行洗脱的洗脱提取物C和洗脱提取物D脂质合成均显著降低，并有显著统计学意义(P＜0.01)；与对照组比较，白桦树皮水提取物和不同浓度乙醇洗脱的洗脱提取物E-H的脂质合成变化不明显，没有统计学意义(P＞0.05)。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种白桦树皮提取物的提取方法，其特征在于，包括：

步骤1、白桦树皮加醇溶剂提取，获得白桦树皮粗提液；

步骤2、所述粗提液脱除醇溶剂获得白桦树皮醇提物，部分白桦树皮醇提物上样大孔树脂，依次用去离子水、30％乙醇溶液、70％乙醇溶液、95％乙醇溶液进行梯度洗脱，收集95％乙醇溶液洗脱的洗脱液D；

步骤3、将洗脱液D浓缩获得洗脱提取物D，洗脱提取物D用70％丁二醇溶液复溶，获得所述白桦树皮提取物。

2.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，步骤1为：

白桦树皮加醇溶剂热回流提取2小时，获得白桦树皮粗提液。

3.根据权利要求1或2所述提取方法，其特征在于，所述醇溶剂为70％乙醇。

4.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，所述大孔树脂为AB-8树脂。

5.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，所述梯度洗脱具体为：以2.5BV/h的洗脱速度依次用去离子水、30％乙醇溶液、70％乙醇溶液、95％乙醇溶液分别各自洗脱1h。

6.根据权利要求1-5任意一项所述提取方法，其特征在于，还包括：

将所述白桦树皮提取物低温陈化，纯化，灭菌。

7.权利要求1-6任意一项所述提取方法提取的白桦树皮提取物。

8.权利要求7所述白桦树皮提取物在抑制皮脂腺细胞增殖、抑制脂质合成、制备皮脂腺细胞增殖抑制剂和/或脂质合成抑制剂中的应用。

9.权利要求7所述白桦树皮提取物在控油和/或制备控油产品中的应用。