CN108635578B - 一种猪瘟活疫苗用免疫增强剂及其制备方法 - Google Patents

一种猪瘟活疫苗用免疫增强剂及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108635578B
CN108635578B CN201810921836.3A CN201810921836A CN108635578B CN 108635578 B CN108635578 B CN 108635578B CN 201810921836 A CN201810921836 A CN 201810921836A CN 108635578 B CN108635578 B CN 108635578B
Authority
CN
China
Prior art keywords
immunopotentiator
swine fever
corynebacterium parvum
content
liquid containing
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201810921836.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108635578A (zh
Inventor
赖�志
马晶晶
韩相敏
高俊锋
吴碧清
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Chuang Hong Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Shanghai Chuang Hong Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Chuang Hong Biotechnology Co ltd filed Critical Shanghai Chuang Hong Biotechnology Co ltd
Priority to CN201810921836.3A priority Critical patent/CN108635578B/zh
Publication of CN108635578A publication Critical patent/CN108635578A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108635578B publication Critical patent/CN108635578B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A61K2039/552—Veterinary vaccine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55561—CpG containing adjuvants; Oligonucleotide containing adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55583—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55588—Adjuvants of undefined constitution
    • A61K2039/55594—Adjuvants of undefined constitution from bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/24011—Flaviviridae
    • C12N2770/24311—Pestivirus, e.g. bovine viral diarrhea virus
    • C12N2770/24334—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本发明公开了一种猪瘟活疫苗用免疫增强剂，包括含短棒状杆菌(CP)免疫粒子的液体和溶剂，所述短棒状杆菌粒子液体主要由Tween‑80、黄芪多糖、聚肌胞苷酸(PolyI:C)、乙二胺四乙酸二钠盐、葡萄糖酸锰、碘化钾、以及短棒状杆菌制剂(CPP)按合适比例配伍组成。与现有技术相比，本发明制备得到的猪瘟活疫苗用免疫增强剂，有效的抑制猪瘟病毒潜伏感染的建立与重新激活，能够诱导产生短期的免疫，提高猪瘟疫苗的免疫效果，免疫持续期延长，有效地避免了猪瘟病毒的潜伏感染，为猪瘟的预防和根除提供了保障，能够广泛的应用于猪场进行猪瘟的防治，提高养猪场的经济效益。

Description

一种猪瘟活疫苗用免疫增强剂及其制备方法
技术领域
本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种猪瘟活疫苗用免疫增强剂及其制备方法。
背景技术
佐剂，又被称作免疫增强剂或免疫调节剂，是指与疫苗共同使用后能促进或提高机体特异性免疫应答的一类物质。其主要作用是增强机体免疫系统(体液免疫和细胞免疫系统)的反应强度和持久性。佐剂被用来增强疫苗免疫作用已有80多年的历史。故佐剂的研究已成为免疫学领域的重要内容。
猪瘟(classical swine fever，CSF)是由猪瘟病毒(classical swine fevervirus，CSFV)引起的一种死亡率极高的急性败血性、接触性传染病，具有流行广泛、发病率高等特点，对养猪业危害极大。预防猪瘟最有效的方法就是接种猪瘟疫苗。尽管猪瘟兔化弱毒苗的广泛应用及其他综合防制措施的实施已控制了猪瘟的大规模流行，但近年来，猪瘟在亚洲、欧洲、南美洲等地区呈现复发的趋势。
目前市场上预防猪瘟的疫苗主要有3种：乳兔苗、细胞苗和淋脾苗，这3种均为活疫苗，在临床使用上有一定的功效，但疫苗的免疫成功率不高，除了疫苗质量、免疫程序、接种部位等因素以外，机体免疫功能低下及免疫刺激不够是重要因素，某些病原感染导致机体的免疫功能低下或免疫抑制。而且部分疫苗，尤其是一些油佐剂疫苗接种后免疫应激反应很大，使用一些低免疫应激反应佐剂是发展趋势。已有研究发现，免疫增强剂在猪瘟疫苗使用中能提高猪免疫力，对猪瘟疫苗的抗体水平有不同程度的影响。
基于此，本试验研究制备一种新型猪瘟活疫苗佐剂稀释剂，旨在通过添加免疫增强剂，使水包油(O/W)型纳米乳疫苗佐剂增强疫苗本身的细胞及体液免疫刺激能力，尤其是该疫苗佐剂还可能同时含有适用于提高猪瘟活疫苗效力的其他水性佐剂成分，进一步提高活疫苗的攻毒保护效力。
发明内容
本发明的目的在于提供一种诱导
Figure BDA0001764423990000021
增生、活化、吞噬功能增强及诱导分泌肿瘤坏死因子(TNF-a)、干扰素(IFN)、白细胞介素(IL)、活性氧(H2O2、NO)等增强NK细胞杀伤活性强烈的Th1、Th2反应，具有增强细胞免疫和体液免疫功能的猪瘟活疫苗用免疫增强剂。能明显增强猪瘟活疫苗免疫效果，CPP能显著刺激机体对猪瘟活疫苗的应答反应，猪瘟抗体阳性率和抗体水平显著提高。
本发明的目的是这样实现的，所述猪瘟活疫苗用免疫增强剂包括含短棒状杆菌(CP)的液体和溶剂，所述短棒状杆菌(CP)液体主要由Tween-80、黄芪多糖、聚肌胞苷酸(PolyI:C)、乙二胺四乙酸二钠盐、葡萄糖酸锰、碘化钾、以及短棒状杆菌制剂(CPP)按合适比例配伍组成。
优选的，所述含短棒状杆菌(CP)的液体中Tween-80的含量为75～85wt％，黄芪多糖的含量为1～5wt％，短棒状杆菌的含量为1～2wt％，聚肌胞苷酸(PolyI:C)的含量为0.1～1wt％，乙二胺四乙酸二钠盐的含量为0.1～1wt％，葡萄糖酸锰的含量为0.1～1wt％，碘化钾的含量为0.1～1wt％。
优选的，所述含短棒状杆菌(CP)的液体中Tween-8含量:乙二胺四乙酸二钠盐及黄芪多糖的含量≥75：1，所述葡萄糖酸锰与碘化钾的质量比为1:0.1～1。
优选的，所述溶剂为生理盐水或PBS缓冲液。
本发明还提供了一种制备所述猪瘟活疫苗用免疫增强剂的方法，包括以下步骤：
a、含短棒状杆菌(CP)的液体制备：取25ml氢氧化铝浓度为100μg/ml的水溶液，缓慢搅拌下加入30～150μg的黄芪多糖，30～60μg的乙二胺四乙酸二钠盐，3～30μg的聚肌胞苷酸(PolyI:C)，3～30μg的葡萄糖酸锰，继续搅拌5～6min后加入3～30μg的碘化钾，以及加入短棒状杆菌(CP)，再继续搅拌20～40min后得到金黄色的含短棒状杆菌制剂(CPP)的液体，将含干粉免疫粒子的液体封装于棕色收集瓶内，充入液氮做无菌保存；
b、免疫增强剂的制备：取合适剂量的含短棒状杆菌(CP)的液体置于装有溶剂的反应容器中，将反应容器中含短棒状杆菌制剂(CPP)的液体的浓度控制为15wt％，低速率搅拌20～40min，将反应容器中的温度控制为2～8℃，静置10～20h，过滤除菌后得到免疫增强剂。
优选的，所述含短棒状杆菌(CP)的液体中Tween-80含量:乙二胺四乙酸二钠盐及聚肌胞苷酸(PolyI:C)的含量≥75：1，所述葡萄糖酸锰与碘化钾的质量比为1:0.1～1。
优选的，所述溶剂为生理盐水或PBS缓冲液。
与现有技术相比，本发明制备得到的猪瘟活疫苗用免疫增强剂，有效的抑制猪瘟病毒潜伏感染的建立与重新激活，能够缩短抗体产生的窗口期，提高猪瘟疫苗的免疫效果，免疫持续期延长，有效的避免了猪瘟病毒的潜伏感染，为猪瘟的预防和根除提供了保障，能够广泛的应用于猪场进行猪瘟的防治，提高养猪场的经济效益。
附图说明
图1为不同日龄采血检测得到的ELISA平均抗体水平示意图；
图2为免疫后仔猪转阳率示意图；
图3为免疫后仔猪抗体水平示意图；
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步的说明，但不得以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变更或改进，均属于本发明的保护范围。同时本发明所用试验材料，如无特别说明，均为市售产品。
猪瘟活疫苗用免疫增强剂的制备
实施例1
a、含短棒状杆菌制剂(CPP)的液体制备：取25ml Tween-80浓度为100μg/ml的水溶液，缓慢搅拌下加入30μg的黄芪多糖，30μg的乙二胺四乙酸二钠盐，3μg的聚肌胞苷酸(PolyI:C)，3μg的葡萄糖酸锰，继续搅拌5min后加入3μg的碘化钾，以及加入短棒状杆菌(CP)，所述含短棒状杆菌制剂(CPP)的液体中Tween-80含量:乙二胺四乙酸二钠盐及聚肌胞苷酸(PolyI:C)的含量＝75，所述Tween-80与碘化钾的质量比为750：1，再继续搅拌20min后得到金黄色的含短棒状杆菌制剂(CPP)的液体，封装于棕色收集瓶内，充入液氮做无菌保存，保质期为2年；
b、免疫增强剂的制备：取合适计量的含短棒状杆菌制剂(CPP)的液体置于装有PBS缓冲液的反应容器中，将反应容器中含干粉免疫粒子的液体的浓度控制为15wt％，开启搅拌装置搅拌20min，搅拌装置的转速以最大不产生气泡为宜，将反应容器中的温度控制为2℃，静置20h过夜，过滤除菌后得到免疫增强剂，将得到的免疫增强剂保存在0℃的环境中，控制PH为6.5。
实施例2
a、含短棒状杆菌的液体制备：取25ml Tween-80浓度为100μg/ml的水溶液，缓慢搅拌下加入150μg的黄芪多糖，60μg的乙二胺四乙酸二钠盐，30μg的聚肌胞苷酸(PolyI:C)，30μg的葡萄糖酸锰，继续搅拌5min后加入30μg的碘化钾，以及加入短棒状杆菌(CPP)，所述含短棒状杆菌制剂(CPP)的液体中Tween-80含量:乙二胺四乙酸二钠盐及聚肌胞苷酸(PolyI:C)的含量＝30，所述Tween-80与碘化钾的质量比为85：1，再继续搅拌40min后得到金黄色的含短棒状杆菌制剂(CPP)的液体，封装于棕色收集瓶内，充入液氮做无菌保存，保质期为2年；
b、免疫增强剂的制备：取合适计量的含短棒状杆菌制剂(CPP)的液体置于装有生理盐水的反应容器中，将反应容器中含短棒状杆菌制剂(CPP)的液体的浓度控制为15wt％，开启搅拌装置搅拌40min，搅拌装置的转速以最大不产生气泡为宜，将反应容器中的温度控制为8℃，静置10h，过滤除菌后得到免疫增强剂，将得到的免疫增强剂保存在4℃的环境中，控制PH为7.5。
实施例3
a、含短棒状杆菌的液体制备：取25ml短棒状杆菌浓度为100μg/ml的水溶液，缓慢搅拌下加入75μg的黄芪多糖，45μg的乙二胺四乙酸二钠盐，15μg的聚肌胞苷酸(PolyI:C)，15μg的葡萄糖酸锰，继续搅拌6min后加入15μg的碘化钾，以及加入短棒状杆菌(CPP)，所述含短棒状杆菌的液体中Tween-80含量:乙二胺四乙酸二钠盐及聚肌胞苷酸(PolyI:C)的含量＝42，所述短棒状杆菌与碘化钾的质量比为150：1，再继续搅拌40min后得到金黄色的含短棒状杆菌的液体，封装于棕色收集瓶内，充入液氮做无菌保存，保质期为2年；
b、免疫增强剂的制备：取合适计量的含短棒状杆菌的液体置于装有生理盐水的反应容器中，将反应容器中含短棒状杆菌的液体的浓度控制为15wt％，开启搅拌装置搅拌40min，搅拌装置的转速以最大不产生气泡为宜，将反应容器中的温度控制为8℃，静置10h，过滤除菌后得到免疫增强剂，将得到的免疫增强剂保存在8℃的环境中，控制PH为7.5。
实施例4
a、含短棒状杆菌的液体制备：取25ml短棒状杆菌浓度为100μg/ml的水溶液，缓慢搅拌下加入120μg的黄芪多糖，48μg的乙二胺四乙酸二钠盐，24μg的聚肌胞苷酸(PolyI:C)，24μg的葡萄糖酸锰，继续搅拌6min后加入24μg的碘化钾，以及加入短棒状杆菌(CPP)，所述含干粉免疫粒子的液体中短棒状杆菌含量:乙二胺四乙酸二钠盐及聚肌胞苷酸(PolyI:C)的含量＝35，所述短棒状杆菌与碘化钾的质量比为85：1，再继续搅拌40min后得到金黄色的含短棒状杆菌的液体，封装于棕色收集瓶内，充入液氮做无菌保存，保质期为2年；
b、免疫增强剂的制备：取合适计量的含短棒状杆菌的液体置于装有生理盐水的反应容器中，将反应容器中含短棒状杆菌的液体的浓度控制为15wt％，开启搅拌装置搅拌40min，搅拌装置的转速以最大不产生气泡为宜，将反应容器中的温度控制为8℃，静置10h，过滤除菌后得到免疫增强剂，将得到的免疫增强剂保存在35℃的环境中，控制PH为7。
对上述四个实施例制备成功的猪瘟活疫苗用免疫增强剂样品进行稳定性试验，得到的数据如表1：
表1免疫增强剂的稳定性试验数据
Figure BDA0001764423990000071
上述试验结果表明，本发明提供的4个实施例制备的猪瘟活疫苗用免疫增强剂样品具有很好的稳定性。
免疫增强剂对猪瘟活疫苗免疫增强作用的效果试验
(1)配制 利用配制好的免疫增强剂，过滤除菌后，与85％的猪瘟抗原混匀，制备成疫苗。
(2)分组 将20头猪瘟抗原抗体双阴性后备母猪随机分为4组，每组5头，详细试验分组情况见表2。
(3)免疫 将配制好的疫苗，在产前6-8周和产前3-4周分别免疫后备母猪1次。
(4)抗体检测 在首次免疫42天后采血检测ELISA抗体和中和抗体，并使用单因素方差分析和双尾配对t检验统计组间差异。
表2试验分组表一
Figure BDA0001764423990000081
试验结果如图1-图2所示，图中A、B组表示添加免疫增强剂组，C、D组表示无添加组，试验结果表明：1、添加免疫增强剂可以显著提高猪瘟的中和抗体水平和ELISA抗体水平；2、添加免疫增强剂后含5μg抗原的猪瘟活疫苗产生的抗体水平高于没有添加免疫增强剂的含20μg抗原的猪瘟活疫苗，故可减少4倍抗原使用量，节约成本。
免疫增强剂在猪瘟活疫苗中的应用试验
(1)配制 利用配制好的免疫增强剂，过滤除菌后，按2mg/头份分别与含20μg/头份猪瘟活疫苗抗原混匀，制备成疫苗。
(2)分组 将20头猪瘟抗原抗体双阴性12周龄仔猪随机分为4组，每组5头，详细分组情况见表3。
(3)免疫 将配制好的疫苗按2ml/头份采用肌肉注射免疫仔猪。
(4)抗体检测 在免疫前和免疫后的7、14、28、60、90和120日采血，检测血液中ELISA抗体水平。
表3试验分组表二
组别 仔猪数量 添加佐剂 抗原浓度
A组 5 免疫增强剂 20μg/ml
B组 5 水包油 20μg/ml
C组 5 油包水 20μg/ml
D组 5 / /
试验结果如图3-图4所示，试验结果表明，免疫增强剂可刺激仔猪快速产生猪瘟抗体，免疫7天可以80％转阳，明显高于其它佐剂组，此外，产生的抗体水平也高于其它佐剂组。
免疫增强剂对猪的安全性试验
取实施例1中制备得到的免疫增强剂，按10ml/头份对猪群进行颈部肌肉注射，注射后1、3、7、14天观察猪群反应，试验结果如表4所示结果表明免疫增强剂具有良好的安全性。
表4大剂量注射免疫增强剂的安全性试验结果
Figure BDA0001764423990000091
利用实施例1制备得到的免疫增强剂配合猪瘟活疫苗对猪瘟阴性猪进行免疫，检测免疫前，免疫后6h、24h的体温，免疫后体温的变化结果如表5。
表5采用不同佐剂和不同疫苗配合后对猪进行免疫后的体温反应试验结果
Figure BDA0001764423990000101
上述试验结果表明，采用本发明制备得到的免疫增强剂配合猪瘟活疫苗对猪进行免疫时，应激反应小，不会影响抗原的识别，也不会影响免疫原性和免疫持续期，同时能够有效的增强疫苗的双重免疫刺激，激发免疫应答，为猪瘟的预防和根除提供了保障，能够广泛的应用于猪场进行猪瘟的防治，提高养猪场的经济效益。
以上是对本发明较佳实施方式的描述，并不理解为限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明做出多种改变或组合，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种猪瘟活疫苗用免疫增强剂，其特征在于：包括含短棒状杆菌的液体和溶剂，所述短棒状杆菌液体主要由Tween-80、黄芪多糖、聚肌胞苷酸(Polyl：C)、乙二胺四乙酸二钠盐、葡萄糖酸锰、碘化钾、以及短棒状杆菌制剂按合适比例配伍组成；
所述含短棒状杆菌的液体中Tween-80的含量为75~85wt%，黄芪多糖的含量为1~5wt%，短棒状杆菌的含量为1~2wt%，聚肌胞苷酸(Polyl：C)的含量为0.1~1wt%，乙二胺四乙酸二钠盐的含量为0.1~1wt%，葡萄糖酸锰的含量为0.1~1wt%，碘化钾的含量为0.1~1wt%；
所述含短棒状杆菌的液体中Tween-80含量：乙二胺四乙酸二钠盐及黄芪多糖的含量≥75，所述葡萄糖酸锰与碘化钾的质量比为1：0.1~1。
2.根据权利要求1所述的猪瘟活疫苗用免疫增强剂，其特征在于：所述溶剂为生理盐水或PBS缓冲液。
3.一种制备如权利要求1~2任一所述的猪瘟活疫苗用免疫增强剂的方法，其特征在于包括以下步骤：
a、含短棒状杆菌的液体制备：取25ml Tween-80浓度为100μg/ml的水溶液，缓慢搅拌下加入30~150μg的黄芪多糖，30~60μg的乙二胺四乙酸二钠盐，3~30μg的聚肌胞苷酸(Polyl：C)，3~30μg的葡萄糖酸锰，继续搅拌5~6min后加入3~30μg的碘化钾，以及加入短棒状杆菌，再继续搅拌20~40min后得到金黄色的含短棒状杆菌制剂的液体，将含短棒状杆菌的液体封装于棕色收集瓶内，充入液氮做无菌保存；
b、免疫增强剂的制备：取合适剂量的含短棒状杆菌的液体置于装有溶剂的反应容器中，将反应容器中含短棒状杆菌制剂的液体的浓度控制为15wt%，低速率搅拌20~40min，将反应容器中的温度控制为2~8℃，静置10~20h，过滤除菌后得到免疫增强剂。
4.根据权利要求3所述的制备猪瘟活疫苗用免疫增强剂的方法，其特征在于：所述含短棒状杆菌的液体中Tween-80含量：乙二胺四乙酸二钠盐及聚肌胞苷酸(Polyl：C)的含量≥75，所述葡萄糖酸锰与碘化钾的质量比为1：0.1~1。
5.根据权利要求4所述的制备猪瘟活疫苗用免疫增强剂的方法，其特征在于：所述溶剂为生理盐水或PBS缓冲液。
6.根据权利要求4所述的制备猪瘟活疫苗用免疫增强剂的方法，其特征在于：所述免疫增强剂的保存温度为0~35℃，保质期为24个月。
7.根据权利要求6所述的制备猪瘟活疫苗用免疫增强剂的方法，其特征在于：所述免疫增强剂的保存温度为2~8℃，保质期为24个月。
CN201810921836.3A 2018-08-14 2018-08-14 一种猪瘟活疫苗用免疫增强剂及其制备方法 Active CN108635578B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810921836.3A CN108635578B (zh) 2018-08-14 2018-08-14 一种猪瘟活疫苗用免疫增强剂及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810921836.3A CN108635578B (zh) 2018-08-14 2018-08-14 一种猪瘟活疫苗用免疫增强剂及其制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108635578A CN108635578A (zh) 2018-10-12
CN108635578B true CN108635578B (zh) 2021-01-08

Family

ID=63761081

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810921836.3A Active CN108635578B (zh) 2018-08-14 2018-08-14 一种猪瘟活疫苗用免疫增强剂及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108635578B (zh)

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1600323A (zh) * 2003-09-22 2005-03-30 中国药品生物制品检定所 一种短棒状杆菌制剂或无细胞短棒状杆菌制剂在制备治疗hiv感染或爱滋病药剂中的应用
CN104069480A (zh) * 2014-06-11 2014-10-01 广州市华南农大生物药品有限公司 一种免疫增强剂及用于鸡新城疫紧急接种的疫苗制剂
CN104096238A (zh) * 2013-04-01 2014-10-15 熊慧 一种恶性肿瘤治疗性疫苗及其组合物
CN105722528A (zh) * 2013-11-12 2016-06-29 化工产品开发公司Seppic 用于卵内禽类接种的佐剂疫苗
CN107096019A (zh) * 2017-05-04 2017-08-29 中国科学院过程工程研究所 一种基于抗原蛋白多聚体的结核分枝杆菌亚单位疫苗及其制备方法
CN107261134A (zh) * 2017-06-21 2017-10-20 上海创宏生物科技有限公司 一种猪萎缩性鼻炎灭活疫苗用免疫增强剂及其制备方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1600323A (zh) * 2003-09-22 2005-03-30 中国药品生物制品检定所 一种短棒状杆菌制剂或无细胞短棒状杆菌制剂在制备治疗hiv感染或爱滋病药剂中的应用
CN104096238A (zh) * 2013-04-01 2014-10-15 熊慧 一种恶性肿瘤治疗性疫苗及其组合物
CN105722528A (zh) * 2013-11-12 2016-06-29 化工产品开发公司Seppic 用于卵内禽类接种的佐剂疫苗
CN104069480A (zh) * 2014-06-11 2014-10-01 广州市华南农大生物药品有限公司 一种免疫增强剂及用于鸡新城疫紧急接种的疫苗制剂
CN107096019A (zh) * 2017-05-04 2017-08-29 中国科学院过程工程研究所 一种基于抗原蛋白多聚体的结核分枝杆菌亚单位疫苗及其制备方法
CN107261134A (zh) * 2017-06-21 2017-10-20 上海创宏生物科技有限公司 一种猪萎缩性鼻炎灭活疫苗用免疫增强剂及其制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
一种新型免疫佐剂对猪瘟疫苗免疫增强效果的研究;钱欢;《中国优秀硕士学位论文全文数据库（电子期刊）农业科技辑》;CNKI;20121115(第11期);第23-24页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN108635578A (zh) 2018-10-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109666609B (zh) 一种赤红球菌发酵方法及其作为佐剂在动物疫苗中的应用
CN1091978A (zh) 粒细胞-巨噬细胞-集落刺激因子作为疫苗佐剂的用途
CN102481371A (zh) 用于治疗家禽的粘性软质凝胶
CN105688202A (zh) 一种乙型脑炎疫苗组合物及其制备方法
CN102406925A (zh) 一种鸡传染性鼻炎、鸡毒支原体二联类脂灭活疫苗的制备方法
CN107261134B (zh) 一种猪萎缩性鼻炎灭活疫苗用免疫增强剂及其制备方法
CN104258389B (zh) 一种疫苗组合物及其制备方法和应用
CN104623654A (zh) 壳寡糖的应用及含壳寡糖的疫苗剂
US4016253A (en) Vaccine for immunization of swine against Bordetella bronchiseptica infection and method of use
CN103083659A (zh) 新型无油佐剂制备方法及用途
CN108635578B (zh) 一种猪瘟活疫苗用免疫增强剂及其制备方法
CN117427155A (zh) 猪鼻支原体p37蛋白在制备动物疫苗佐剂中的应用、一种动物疫苗佐剂及其应用
CN104771754A (zh) 一种猪圆环病毒2型灭活疫苗水性佐剂及应用
CN111420046B (zh) 一种动物疫苗佐剂及其制备方法
Lin et al. Long-Term Protection Elicited by an Inactivated Vaccine Supplemented with a Water-Based Adjuvant against Infectious Hematopoietic Necrosis Virus in Rainbow Trout (Oncorhynchus mykiss)
CN111956798B (zh) 用于猪伪狂犬灭活疫苗的复合免疫增强剂及其应用
CN104208675A (zh) 一种抗鸡病毒性疾病的混合冻干粉及其制备方法
DK2376113T3 (en) PREPARATIONS AND DOSAGE REGIMES WHICH INCLUDES A CLOSTRIDIUM VACCINE AND levamisole
CN104162160B (zh) 饲料添加剂用抗病毒组合物、冻干粉、制备方法及应用
CN102078598A (zh) 一种防治猪病毒性疾病的注射剂及其制备方法
CN105396131A (zh) 一种用于呼肠孤灭活疫苗的佐剂及其制备方法
CN105749278A (zh) 一种抗猪伪狂犬病的组合物、制备方法及应用
CN111467488B (zh) 一种水溶性复合免疫佐剂及其应用
CN106466478A (zh) 一种免疫组合物、含有该组合物疫苗及其应用
CN107261136B (zh) 多聚磷酸钠的应用及含有多聚磷酸钠的疫苗剂

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant