CN108624690A - 一种左右半结肠腺癌早期筛查检测试剂盒及检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了EDN2基因可以作为左右半结肠腺癌诊断的生物标志物。本发明的实验证明,与癌旁正常组织相比,结肠腺癌组织中EDN2基因表达显著升高;与左半结肠腺癌组织相比,右半结肠腺癌组织中的EDN2基因表达显著升高。根据本发明的研究成果,可以研发用于诊断左右半结肠腺癌的试剂盒。
Description
技术领域
本发明属于生物医学领域,涉及一种左右半结肠腺癌的早期筛查检测试剂盒及检测方法。
背景技术
结肠癌是常见的消化道肿瘤,是美国发病率及致死率排名第三的恶性肿瘤。据统计,2013年美国结肠癌的发病人数约14.3万人,约5.1万人死于结肠癌,仅次于胃癌;相比我国,结肠癌在我国发病率相对较低,是发病率和死亡率排名第五的恶性肿瘤。近年来,随着人民生活水平的改善、饮食结构的调整以及生活方式的转变,结肠癌的发病率呈现逐年提高的趋势;虽然在我国结肠癌的发病率较低,但是基于中国人口的庞大基数,每年我国结肠癌的发病和死亡总例数却超过了美国。据统计,2015年分别有37.6万人发病,约19.1万人死于结肠癌。
结肠腺癌(colon adenocarcinoma,COAD)是结肠癌中类型最常见的一种。根据不同的胚胎学起源及生物学差异,以脾曲为界,可以将结肠腺癌分为左半结肠腺癌(Left-sided colon adenocarcinoma,LSCOAD)和右半结肠腺癌(Right-sided colonadenocarcinoma,RSCOAD)。正因为不同的结肠癌发病部位有着不同的胚胎起源、生理学功能、形态学特点及代谢特点,导致不同部位的肿瘤可能在发病危险因素、临床表现、病理学特征及预后等生物学特性方面存在一定的差异。因此,对不同部位结肠腺癌的生物学特性的研究是很有必要的,对指导结肠腺癌的预防及治疗能起到一定作用。
研究显示,左、右半结肠癌中APC,c-myc,Kras,Braf等与肿瘤发生发展相关的基因均存在差异表达,也有研究提示同一结肠癌的诊断标志物在左、右半结肠癌中可能出现不同的预测作用。为了寻找到更多的用于早期诊断左右半结肠腺癌的生物标志物,而开展了本项研究。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种左右半结肠腺癌早期筛查检测试剂盒。
本发明的目的之二在于提供一种通过检测EDN2基因或蛋白的表达差异来诊断左右半结肠腺癌的方法。
为了实现上述目的,本发明采用了如下技术方案:
本发明提供了检测EDN2基因表达水平的产品在制备左右半结肠腺癌早期筛查检测工具中的应用。
进一步,所述检测EDN2基因表达水平的产品包括:通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交、芯片或高通量测序平台检测EDN2基因表达水平的产品。
更进一步,所述用RT-PCR检测EDN2基因表达水平的产品至少包括一对特异扩增EDN2基因的引物;所述用实时定量PCR检测EDN2基因表达水平的产品至少包括一对特异扩增EDN2基因的引物;所述用免疫检测以检测EDN2基因表达水平的产品包括:与EDN2蛋白特异性结合的抗体;所述用原位杂交检测EDN2基因表达水平的产品包括:与EDN2基因的核酸序列杂交的探针;所述用芯片检测EDN2基因表达水平的产品包括:蛋白芯片和基因芯片;其中,蛋白芯片包括与EDN2蛋白特异性结合的抗体,基因芯片包括与EDN2基因的核酸序列杂交的探针。
优选地,所述用实时定量PCR检测EDN2基因表达水平的产品至少包括的一对特异扩增EDN2基因的引物如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
本发明还提供了一种左右半结肠腺癌的早期筛查检测工具,所述工具包括能够检测样本中EDN2基因表达量的工具。
进一步,所述工具包括包括能够定量EDN2基因mRNA的试剂,和/或能够定量EDN2蛋白的试剂。
更进一步,所述能够定量EDN2基因mRNA的试剂包括扩增EDN2基因的引物,所述引物序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
更进一步,所述能够定量EDN2蛋白的试剂包括特异性结合EDN2蛋白的抗体。
进一步,所述左右半结肠腺癌的早期筛查检测工具包括但不限于芯片、试剂盒、试纸、或高通量测序平台。
高通量测序平台是一种特殊的诊断左右半结肠腺癌的工具,随着高通量测序技术的发展,对一个人的基因表达谱的构建将成为十分便捷的工作。通过对比左半结肠腺癌和右半结肠腺癌的基因表达谱,容易分析出哪个基因的异常与左半结肠腺癌和右半结肠腺癌相关。因此,在高通量测序中获知EDN2基因的异常与左右半结肠腺癌相关也属于EDN2的用途,同样在本发明的保护范围之内。
所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯片;所述基因芯片包括固相载体以及固定在固相载体的寡核苷酸探针,所述寡核苷酸探针包括用于检测EDN2基因转录水平的针对EDN2基因的寡核苷酸探针;所述蛋白质芯片包括固相载体以及固定在固相载体的EDN2蛋白的特异性抗体。
所述试剂盒包括基因检测试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒;所述基因检测试剂盒包括用于检测EDN2基因转录水平的试剂;所述蛋白免疫检测试剂盒包括EDN2蛋白的特异性抗体。
与EDN2基因的核酸序列杂交的探针可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其它衍生物。所述探针的长度没有限制,只要完成特异性杂交、与目的核苷酸序列特异性结合,任何长度都可以。所述探针的长度可短至25、20、15、13或10个碱基长度。同样,所述探针的长度可长至60、80、100、150、300个碱基对或更长,甚至整个基因。由于不同的探针长度对杂交效率、信号特异性有不同的影响,所述探针的长度通常至少是14个碱基对,最长一般不超过30个碱基对,与目的核苷酸序列互补的长度以15-25个碱基对最佳。所述探针自身互补序列最好少于4个碱基对,以免影响杂交效率。
所述高通量测序平台包括检测EDN2基因表达水平的试剂。
所述试纸包括试纸载体和固定在试纸载体上的寡核苷酸,所述寡核苷酸能够检测EDN2基因的转录水平。
本发明的引物可以通过化学合成来制备,通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来适当地设计,并通过化学合成来制备。
本发明的探针可以通过化学合成来制备,通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来恰当设计,并通过化学合成来制备,或者可以通过从生物材料制备含有期望核酸序列的基因,并使用设计用于扩增期望核酸序列的引物扩增它来制备。
本发明的定量EDN2蛋白的产品可基于使用抗体的已知方法来发挥其功能:例如,可以包括ELISA、放射免疫测定法、免疫组织化学法、Western印迹等。
本发明的定量EDN2蛋白的产品包括特异性结合EDN2蛋白的抗体或其片段。可以使用任何结构、尺寸、免疫球蛋白类别、起源等的抗体或其片段,只要它结合靶蛋白质即可。本发明的检测产品中包括的抗体或其片段可以是单克隆的或多克隆的。抗体片段指保留抗体对抗原的结合活性的抗体一部分(部分片段)或含有抗体一部分的肽。抗体片段可以包括F(ab′)2、Fab′、Fab、单链Fv(scFv)、二硫化物键合的Fv(dsFv)或其聚合物、二聚化V区(双抗体)、或含有CDR的肽。本发明的定量EDN2蛋白的产品可以包括编码抗体或编码抗体片段的氨基酸序列的分离的核酸,包含该核酸的载体,和携带该载体的细胞。
抗体可以通过本领域技术人员公知的方法来获得。例如,制备保留整个或部分靶蛋白质的多肽或整合编码它们的多核苷酸的哺乳动物细胞表达载体作为抗原。使用抗原免疫动物后,从经过免疫的动物获得免疫细胞并融合骨髓瘤细胞以获得杂交瘤。然后从杂交瘤培养物收集抗体。最后可以通过使用被用作抗原的EDN2蛋白或其部分对获得的抗体实施抗原特异性纯化来获得针对EDN2蛋白的单克隆抗体。可以如下制备多克隆抗体:用与上文相同的抗原免疫动物,从经过免疫的动物收集血液样品,从血液中分离出血清,然后使用上述抗原对血清实施抗原特异性纯化。可以通过用酶处理获得的抗体或通过使用获得的抗体的序列信息来获得抗体片段。
标记物与抗体或其片段的结合可以通过本领域普遍知道的方法来实施。例如,可以如下荧光标记蛋白质或肽:用磷酸盐缓冲液清洗蛋白质或肽,添加用DMSO、缓冲剂、等准备的染料,然后混合溶液,再于室温放置10分钟。另外,标记可使用商品化的标记试剂盒,诸如生物素标记试剂盒,如生物素标记试剂盒-NH2、生物素标记试剂盒-SH(DojindoLaboratories);碱性磷酸酶标记试剂盒诸如碱性磷酸酶标记试剂盒-NH2、碱性磷酸酶标记试剂盒-SH(Dojindo Laboratories);过氧化物酶标记试剂盒诸如过氧化物酶标记试剂盒-NH2、过氧化物酶标记试剂盒-NH2(Dojindo Laboratories);藻胆蛋白标记试剂盒诸如藻胆蛋白标记试剂盒-NH2、藻胆蛋白标记试剂盒-SH、B-藻红蛋白标记试剂盒-NH2,B-藻红蛋白标记试剂盒-SH、R-藻红蛋白标记试剂盒-NH2、R-藻红蛋白标记试剂盒SH(DojindoLaboratories);荧光标记试剂盒诸如荧光素标记试剂盒-NH2、HiLyte Fluor(TM)555标记试剂盒-NH2、HiLyte Fluor(TM)647标记试剂盒-NH2(Dojindo Laboratories);及DyLight 547和DyLight647(Techno Chemical Corp.)、Zenon(TM)、Alexa Fluor(TM)抗体标记试剂盒、Qdot(TM)抗体标记试剂盒(Invitrogen Corporation)和EZ-标记物蛋白质标记试剂盒(Funakoshi Corporation)。为了正确标记,可以使用适宜的仪器来检测经过标记的抗体或其片段。
作为依照本发明的检测产品的样本,可以使用例如自活检受试者获得的组织样品或流体。样品不受特别限制,只要它适于本发明的测定;例如,它可以包括组织、血液、血浆、血清、淋巴液、尿液、浆膜腔液、脊髓液、滑液、房水、泪液、唾液、或其级分或经过处理的材料。根据本发明的具体实施方案,本发明的样品来自受试者的组织。
本发明还提供了一种结肠腺癌的早期筛查方法,所述方法包括如下步骤:
(1)获取受试者的样品;
(2)检测样品中EDN2基因或蛋白的表达水平;
(4)与正常人相比,EDN2基因或蛋白的表达水平升高,则该受试者被判断患有结肠腺癌,或者患有结肠腺癌的风险高。
本发明还提供了一种区分左右半结肠腺癌的早期筛查方法,所述方法包括如下步骤:
(1)获取结肠腺癌患者的样品;
(2)检测结肠腺癌样品中EDN2基因或蛋白的表达水平;
(4)与左半结肠腺癌的表达基准相比,EDN2基因或蛋白的表达水平升高,则该结肠腺癌患者被判断患有右半结肠腺癌或者患有右半结肠腺癌的风险高。
在本发明的上下文中,“EDN2基因”包括EDN2基因以及EDN2基因的任何功能等同物的多核苷酸。EDN2基因(NC_000001.11(41478775..41484699,complement))序列可在国际公共核酸序列数据库GeneBank中查询的到。
在本发明的上下文中,EDN2基因表达产物包括EDN2蛋白以及EDN2蛋白的部分肽。
“EDN2蛋白”包括EDN2蛋白以及EDN2蛋白的任何功能等同物。所述功能等同物包括EDN2蛋白保守性变异蛋白质、或其活性片段,或其活性衍生物,等位变异体、天然突变体、诱导突变体、在高或低的严紧条件下能与EDN2的DNA杂交的DNA所编码的蛋白质。
通常,已知的是,一个蛋白质中一个或多个氨基酸的修饰不会影响蛋白质的功能。本领域技术人员会认可改变单个氨基酸或小百分比的氨基酸或对氨基酸序列的个别添加、缺失、插入、替换是保守修饰,其中蛋白质的改变产生具有相似功能的蛋白质。提供功能相似的氨基酸的保守替换表是本领域公知的。
通过添加一个氨基酸或多个氨基酸残基修饰的蛋白质的例子是EDN2蛋白的融合蛋白。对于与EDN2蛋白融合的肽或者蛋白质没有限制,只要所得的融合蛋白保留EDN2蛋白的生物学活性即可。
本发明的EDN2蛋白也包括氨基酸序列的非保守修饰,只要经过修饰的蛋白质仍然能够保留EDN2蛋白的生物学活性即可。在此类修饰蛋白质中突变的氨基酸数目通常是10个或者更少,例如6个或者更少,例如3个或者更少。
在本发明的上下文中,“诊断”包括判断是否患有某种疾病、或者判断患有某种疾病的风险高。
本发明的优点和有益效果:
本发明发现了一种可以早期诊断结肠腺癌的分子标志物,使用该分子标志物可以在结肠腺癌发生的早期即可作为判断。
本发明发现了的上述分子标志物不仅能区分结肠腺癌患者与正常人,还能区分左半结肠腺癌患者和右半结肠腺癌患者。
本发明的诊断方法准确,有效。
附图说明
图1显示利用QPCR检测EDN2基因在左半结肠腺癌组织与癌旁正常组织中的差异表达;
图2显示利用QPCR检测EDN2基因在右半结肠腺癌组织与癌旁正常组织中的差异表达;
图3显示利用QPCR检测EDN2基因在左右半结肠腺癌组织之间的差异表达。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件,例如Sambrook等人,分子克隆:实验室手册(New York:Cold Spring HarborLaboratoryPress,1989)中所述的条件,或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1筛选左右半结肠腺癌组织中差异表达基因
1、样本收集
选择行根治性切除的结肠腺癌患者10例为研究对象,以结肠脾曲为界,分成RSCC组和LSCC组。除外家族遗传性结肠癌、曾行任何形式的新辅助治疗、行姑息性手术、病理为非腺癌和或切缘不净以及临床信息不完整者。RSCC中,男3例,女2例;肿瘤部位:盲肠2例,升结肠3例。LSCC中,男3例,女2例;肿瘤部位:降结肠3例,乙状结肠2例。手术切除后马上切取癌组织及距癌灶边缘5cm以上的自身正常结肠黏膜,置入液氮后存于-80℃冰箱。本研究均经患者书而知情同意和医院伦理委员会批准。
2、样本总RNA提取
采用购自北京全式金生物技术有限公司的RNA提取试剂盒(Trans Zol TM Up PlusRNA Kit)提取组织样本RNA。具体步骤如下:
(1)将超低温冷冻的样品称量后,迅速转移至用液氮预冷的研钵中,用研杵充分研磨直至研磨成粉末状,将研磨成粉末状的样品转移至离心管中,每50-100mg样品加入1mlTrans Zol TM Up用匀浆仪进行匀浆处理,或用枪反复吹吸混匀,室温静置5分钟。
(2)每使用1ml Trans Zol TM Up,加0.2ml氯仿,剧烈振荡30秒,室温孵育3分钟。
(3)10000×g 4℃离心15分钟。此时样品分成三层,无色水相(上层),中间层,粉红色有机相(下层)。RNA在无色水相中,吸取无色水相层500μl液体。
(4)转移吸取的500μl无色的水相于新的离心管中,加入500μl的无水乙醇,轻轻颠倒混匀。
(5)将700μl得到的溶液和沉淀一起加入离心柱中,12000×g室温离心30秒,弃掉流出液。
(6)加入500μl CB9,室温12000×g室温离心30秒,弃掉流出液。
(7)重复步骤(6)一次。
(8)加入500μl WB9(使用前请先检查是否加入无水乙醇),室温12000×g室温离心30秒,弃掉流出液
(9)重复步骤(8)一次。
(10)室温12000×g室温离心2分钟,彻底去除残留的乙醇,在室温静置数分钟彻底晾干离心柱。
(11)将离心柱放入RNase-free Tube(试剂盒已配)中,加30μl RNase-free Water在离心柱的中央,室温静置1分钟。
(12)室温12000×g室温离心1分钟,洗脱RNA。
(13)将RNA置于-80℃冰箱保存。
3、RNA质量和纯度检测
RNA质量:通过RNA完整性来表示,可用普通琼脂糖凝胶电泳(电泳条件:1.2%胶;0.5×TBE电泳缓冲液;150v,15分钟)检测完整性。
RNA纯度:OD260/OD280比值是衡量RNA样品中蛋白质污染程度的指标。
高质量的RNA样品,OD260/OD280值(10mM Tris,pH7.5)在2.0左右。
4、测序
将提取的各样品总RNA送交上海伯豪生物技术有限公司采用Solexa测序技术对样品进行测序。
5、数据分析
5.1原始数据处理
测序仪产生的原始图像数据经Base Calling转化为序列数据,我们称之为原始序列数据,结果以FASTQ文件格式存储。由于原始序列数据可能包含低质量序列、接头序列等杂质序列数据,不能直接用于生物信息分析,所以原始序列数据必需经过数据处理转换为高质量序列数据,利用Tophat(version:2.0.6)软件的spliced mapping算法对高质量序列数据进行基因组比对,采用基因组版本为Sscrofa10.2。
5.2差异基因的筛选
基因表达量的计算使FPKM法。根据基因的表达量(FPKM值)计算该基因在不同样本间的差异表达倍数。差异表达基因定义为FDR≤0.01且倍数差异在2倍及以上的基因。
6、结果
测序结果显示,右半结肠腺癌患者与左半结肠腺癌患者之间存在的差异表达基因共有2789个,其中,右半结肠腺癌患者中上调表达基因共有1786个,下调表达基因共有1003,差异表达均具有统计学意义(P<0.05)。
实施例2差异表达基因在大样本中的验证
选择测序提示在右半结肠腺癌患者和左半结肠腺癌患者之间差异表达的EDN2基因为研究目标进行大样本验证。
1、组织获取和处理:按照实施例1的方法收集左半结肠腺癌患者30例,右半结肠腺癌患者30例。
2、RNA提取
按照实施例1的方法进行RNA提取和鉴定。
3、反转录PCR(Reverse Transcription,RT-PCR)
3.1逆转录
cDNA第一链的合成(Reverse Transcription):使用GIBICOL公司提供的SuperScriptTM Preamplification System for First Strand cDNA Synthesis试剂盒完成:
a、在0.5ml微量离心管中,加入总RNA 1-5μg,补充适量的DEPC H2O使总体积达11μl。在管中加10μM Oligo(dT)12-18 1μl,轻轻混匀、离心。
b、70℃加热10min,立即将微量离心管插入冰浴中至少1min。
然后加入下列试剂的混合物:
10×PCR buffer 2μl
25mM MgCl2 2μl
10mM dNTP mix 1μl
0.1M DTT 2μl
轻轻混匀,离心。42℃孵育2-5min。
c、加入SuperscriptⅡ1μl,在42℃水浴中孵育50min。
d、于70℃加热15min以终止反应。
e、将管插入冰中,加入RNase H 1μl,37℃孵育20min,降解残留的RNA。-20℃保存备用。
3.2PCR
(1)取0.5ml PCR管,依次加入下列试剂:
第一链cDNA 2μl
上游引物(10pM) 2μl
下游引物(10pM) 2μl
dNTP(2mM) 4μl
10×PCR buffer 5μl
Taq酶(2u/μl) 1μl
(2)加入适量的ddH2O,使总体积达50μl。轻轻混匀,离心。
(3)设定PCR程序:
95℃5min预变性
94℃30s变性
57.6℃40s退火
72℃30s延伸
72℃7min终末延伸
30个循环,4℃保温。
为了保证实验结果的可靠与准确,可在PCR扩增目的基因时,加入一对内参(如GAPDH)的特异性引物,同时扩增内参DNA,作为对照。
(4)电泳鉴定:行琼脂糖凝胶电泳,紫外灯下观察结果。
(5)密度扫描、结果分析:采用凝胶图像分析系统,对电泳条带进行密度扫描,电泳条带的密度值大小代表基因mRNA表达水平高低。
引物设计
根据Genbank中EDN2基因和GAPDH基因的编码序列设计RT-PCR扩增引物,由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。具体引物序列如下:
EDN2基因:
上游引物为5’-GACCCTCCCAGTGAGAAG-3’(SEQ ID NO.1);
下游引物为5’-AACACAAGTTCGCAGGTAA-3’(SEQ ID NO.2),
GAPDH基因:
上游引物为5’-TCAAGATCATCAGCAATG-3’(SEQ ID NO.3);
下游引物为5’-CGATACCAAAGTTGTCAT-3’(SEQ ID NO.4)。
为避免左、右半正常结肠组织中EDN2表达可能存在的差异,故以EDN2mRNA在癌组织和正常组织中表达的比值,即表达指数(F)来表示癌组织中EDN2mRNA的相对表达量。
5、统计学方法
结果数据都是以平均值±标准差的方式来表示,采用SPSS13.0统计软件来进行统计分析的,两者之间的差异采用t检验,认为当P<0.05时具有统计学意义。
6、结果
经检测,30例左半结肠腺癌组织中有28例的EDN2mRNA水平均高于癌旁正常组织,差异具有统计学意义(P<0.05)(见图1),其他2例差异没有统计学意义;30例右半结肠腺癌组织中有27例EDN2mRNA水平均高于癌旁正常组织,差异具有统计学意义(P<0.05)(见图2),其他2例差异没有统计学意义,1例趋势相反;27例右半结肠腺癌组织(EDN2mRNA水平均高于癌旁正常组织)中EDN2mRNA水平均高于28例左半结肠腺癌组织(EDN2mRNA水平均高于癌旁正常组织),差异具有统计学意义(P<0.05)(见图3)。
上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以对本发明进行若干改进和修饰,这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。
序列表
<110> 山东省疾病预防控制中心
<120> 一种左右半结肠腺癌早期筛查检测试剂盒及检测方法
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
gaccctccca gtgagaag 18
<210> 2
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
aacacaagtt cgcaggtaa 19
<210> 3
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
tcaagatcat cagcaatg 18
<210> 4
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
cgataccaaa gttgtcat 18
Claims (10)
1.检测EDN2基因表达水平的产品在制备左右半结肠腺癌早期筛查检测工具中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述检测EDN2基因表达水平的产品包括:通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交、芯片或高通量测序平台检测EDN2基因表达水平的产品。
3.根据权利要求1或2所述的应用,其特征在于,所述用RT-PCR检测EDN2基因表达水平的产品至少包括一对特异扩增EDN2基因的引物;所述用实时定量PCR检测EDN2基因表达水平的产品至少包括一对特异扩增EDN2基因的引物;所述用免疫检测以检测EDN2基因表达水平的产品包括:与EDN2蛋白特异性结合的抗体;所述用原位杂交检测EDN2基因表达水平的产品包括:与EDN2基因的核酸序列杂交的探针;所述用芯片检测EDN2基因表达水平的产品包括:蛋白芯片和基因芯片;其中,蛋白芯片包括与EDN2蛋白特异性结合的抗体,基因芯片包括与EDN2基因的核酸序列杂交的探针。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述用实时定量PCR检测EDN2基因表达水平的产品至少包括的一对特异扩增EDN2基因的引物如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
5.一种左右半结肠腺癌的早期筛查检测工具,其特征在于,所述工具包括检测样本中EDN2基因表达量的工具。
6.根据权利要求5所述的工具,其特征在于,所述工具包括包括能够定量EDN2基因mRNA的试剂,和/或能够定量EDN2蛋白的试剂。
7.根据权利要求6所述的工具,其特征在于,所述能够定量EDN2基因mRNA的试剂包括扩增EDN2基因的引物。
8.根据权利要求7所述的工具,其特征在于,所述引物序列如SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2所示。
9.根据权利要求6所述的工具,其特征在于,所述能够定量EDN2蛋白的试剂包括特异性结合EDN2蛋白的抗体。
10.根据权利要求5-9中任一项所述的工具,其特征在于,所述样本来源是组织。
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CN109777876A (zh) * | 2019-02-22 | 2019-05-21 | 天津市中西医结合医院(天津市南开医院) | miRNA-6761-5p及其新用途 |
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