CN106676191A

CN106676191A - 一种用于结肠腺癌的分子标志物

Info

Publication number: CN106676191A
Application number: CN201710122933.1A
Authority: CN
Inventors: 刘继喜; 刘芳; 谭煌英
Original assignee: China Japan Friendship Hospital
Current assignee: China Japan Friendship Hospital
Priority date: 2017-03-03
Filing date: 2017-03-03
Publication date: 2017-05-17
Anticipated expiration: 2037-03-03
Also published as: CN106676191B

Abstract

本发明公开了一种用于结肠腺癌的分子标志物，所述分子标志物为LOC105377352，其中LOC105377352在结肠腺癌患者中表达上调。本发明所提供的lncRNA标志物，可以用于结肠腺癌的早期诊断，具有较高的灵敏度和特异性。

Description

一种用于结肠腺癌的分子标志物

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种用于结肠腺癌的分子标志物，具体的涉及一种用于早期结肠腺癌的分子标志物LOC105377352。

背景技术

结结肠癌是我国最常见的消化道恶性肿瘤之一，其发病率在我国居第三位，仅次于肺癌和胃癌，严重危害着人民健康。近年来，随着人民生活水平的不断提高，饮食习惯和饮食结构的改变以及人口老龄化，我国结肠癌的发病率和病死率均保持上升趋势。结肠癌的发生受到遗传和内外环境因素的作用，其发病是涉及到多个因素、多个步骤、多个阶段的综合复杂的病理过程，包括肠上皮细胞增殖、分化、凋亡和存活机制的紊乱。基因水平及表观遗传学改变是结肠癌发病的重要原因。在结肠癌的临床治疗中发现，相同病理类型、分期不同的患者，相同方案治疗其疗效、预后存在明显不同。因此积极探索结肠癌形成的分子机制，寻找预测其生物学行为的标志物对结肠癌的诊断和治疗具有重要意义。

随着人类对肿瘤在基因和分子水平的深入认识，以及分子生物学的发展，人们逐渐发现lncRNA在肿瘤中的作用贯穿肿瘤的整个发生和发展的过程中。长链非编码RNA(longnoncoding RNA,lncRNA)是一类能在多种生物学过程中发挥调控作用的大分子ncRNA。其分布广泛，长度一般多于200个碱基，由于缺少有效开放阅读框(ORF)而无或很少有编码蛋白的能力。作为分子生物学中的一个全新领域，lncRNA是以RNA的形式在多个层面上发挥调控基因表达的作用，主要是在表观遗传调控、转录调控以及转录后调控三个层面进行调控。lncRNA既可对癌细胞的周期、凋亡、转移等产生影响，也可在表观遗传的层面上宏观调控肿瘤细胞的很多特征。由于lncRNA与肿瘤的发生和发展有重要关系，人们看到了它在肿瘤的诊治中可能具有的重大潜力。诊断方面，在肿瘤组织中往往有lncRNA的异常表达，其可能成为重要的肿瘤标志物，尤其在一些肿瘤的早期，由于肿瘤组织很小，传统的影像学方法很难发现。而通过检测样本中的某种lncRNA水平，却可以方便快速了解病人患某种肿瘤的可能性。

目前，lncRNA的研究还处于起步阶段，对其机制和功能的认识也还在探索之中。lncRNA不仅在生物体中发挥各种重要的生物学功能，同时也参与多种疾病的发生和发展。在肿瘤研究领域，lncRNA仍是一个相对未知的领域，我们需要通过对lncRNA的不断研究来为肿瘤的诊治提供新的契机。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，本发明的目的之一，提供一种早期结肠腺癌的诊断产品，使患者在早期就得以预防，进而提高生存率和生活质量。

本发明的目的之二，提供一种分子标志物，作为临床应用的检测指标。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明提供了长链非编码RNA LOC105377352在制备诊断早期结肠腺癌的产品中的应用。

本发明中，LOC105377352指基因或从该基因转录的mRNA，在人类中，位于4号染色体长臂2区4带。该基因具有7个注释转录本(或剪接变体)：长5110bp的LOC105377352-001(转录本ID为XR001741411.1.1)、长4634bp的LOC105377352-002(转录本ID为XR_001741410.1.1)、长4531bp的LOC105377352-003(转录本ID为XR_939038.2.1)、长3540bp的转录本LOC105377352-004(转录本ID为XR_001741412.1.1)、长3463bp的转录本LOC105377352-005(转录本ID为XR_001741414.1.1)、长3401的转录本LOC105377352-006(转录本ID为XR_939040.2.1)和长1785bp的转录本LOC105377352-007(转录本ID为XR_001741413.1.1)。

进一步，所述LOC105377352基因产物为长转录物，其序列如SEQ ID NO.1所示。

进一步，所述LOC105377352在结肠腺癌患者中表达上调。

进一步，所述诊断早期结肠腺癌的产品包括：通过测序技术、核酸杂交技术、核酸扩增技术或免疫测定的方法检测LOC105377352基因的表达水平。

进一步，所述核酸扩增技术选自聚合酶链式反应、逆转录聚合酶链式反应、转录介导的扩增、连接酶链式反应、链置换扩增和基于核酸序列的扩增。

本发明提供了一种体外检测样品中lncRNA LOC105377352表达水平的产品，其特征在于所述产品包括制剂、芯片、或试剂盒。

进一步，所述制剂、芯片或试剂盒包括针对LOC105377352的特异性引物对或探针。其中，所述芯片包括：固相载体；以及有序固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针特异性地对应于上面所述的lncRNA的部分或全部序列。固相载体包括(但不限于)玻璃片、硅片、聚丙烯膜、硝酸纤维素膜、尼龙膜或聚苯乙烯膜。

进一步，所述特异性引物对的序列如SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示。

进一步，所述特异性引物对用于SYBR Green、Taqman探针、分子信标、双杂交探针、复合探针的检测。

本发明提供了上面所述的产品在制备诊断早期结肠腺癌的工具中的应用。

本发明的优点和有益效果：

本发明首次发现了与早期结肠腺癌发生发展相关的lncRNA，通过检测该lncRNA的表达水平即可对早期结肠腺癌进行检测，从而对早期结肠腺癌患者进行治疗，提高患者的生存质量。

本发明提供了一种诊断早期结肠腺癌的产品，有利于结肠腺癌的早发现，进而实现早治疗，提供患者的生活质量，降低治疗成本。

附图说明

图1是利用高通量测序检测结肠腺癌患者中的基因LOC105377352差异表达图；

图2是利用QPCR检测LOC105377352在结肠腺癌患者中的表达情况图。

具体的实施方式

本发明经过广泛而深入的研究，通过高通量方法，采用目前覆盖数据库最广的芯片，检测基因在早期结肠腺癌患者中的表达情况，发现其中具有明显表达差异的lncRNA片段，探讨其与结肠腺癌的发生发展之间的关系，从而为结肠腺癌的早期检测寻找更好的途径和方法。通过筛选，本发明首次发现了结肠腺癌中的LOC105377352表达显著性上调，通过QPCR进行大样本的验证，进一步证实，该基因为早期结肠腺癌的特异性基因。

分子标志物

“分子标志物”是其在组织或细胞中的表达水平与正常或健康细胞或组织的表达水平相比发生改变的任何基因。

本领域技术人员将认识到，本发明的实用性并不局限于对本发明的标志物基因的任何特定变体的基因表达进行定量。作为非限制性的实例，标志物基因可具有SEQ ID NO.1指定的核苷酸序列。在一些实施方案中，其具有与所列的序列至少85％相同或相似的cDNA序列诸如上述所列的序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％相同或相似的cDNA序列。

本发明可以利用本领域内已知的任何方法测定基因表达。本领域技术人员应当理解，测定基因表达的手段不是本发明的重要方面。可以在转录水平上检测生物标志物的表达水平。

LOC105377352基因

本发明中，LOC105377352指基因或从该基因转录的mRNA，在人类中，位于4号染色体长臂2区4带。该基因具有7个注释转录本(或剪接变体)。在具体的实施方案中，LOC105377352基因产物指长转录物。本发明中的LOC101926969包括野生型、突变型或其片段。

本领域技术人员将认识到，本发明的实用性并不局限于对本发明的靶标基因的任何特定变体的基因表达进行定量。如果当核酸或其片段与其它核酸(或其互补链)最佳比对时(具有适当的核苷酸插入或缺失)，在至少大约60％的核苷酸碱基、通常至少大约70％、更通常至少大约80％、优选至少大约90％、及更优选至少大约95-98％核苷酸碱基中存在核苷酸序列相同性，则这两个序列是“基本同源的”(或者基本相似的)。

或者，当核酸或其片段与另一核酸(或其互补链)、一条链或其互补序列在选择性杂交条件下杂交时，则其间存在基本同源或(相同性)。当杂交比特异性整体丧失发生更具选择性时，存在杂交选择性。典型地，当在至少大约14个核苷酸的一段序列存在至少大约55％相同性、优选至少大约65％、更优选至少大约75％及最优选至少大约90％相同性时，发生选择性杂交。如本文所述，同源对比的长度可以是较长的序列节段，在某些实施方案中通常为至少大约20个核苷酸，更通常为至少大约24个核苷酸，典型为至少大约28个核苷酸，更典型为至少大约32个核苷酸，及优选至少大约36或更多个核苷酸。

因此，本发明的多核苷酸与SEQ ID NO.1优选具有至少75％、更优选至少85％、更优选至少90％同源性。更优选地，存在至少95％、更优选至少98％同源性。

检测技术

本发明的lncRNA使用本领域普通技术人员已知的多种核酸技术进行检测，这些技术包括但不限于：核酸测序、核酸杂交和核酸扩增技术。

核酸测序技术的示例性非限制性实例包括但不限于链终止子(Sanger)测序和染料终止子测序。本领域的普通技术人员将认识到，由于RNA在细胞中不太稳定并且在实验中更易受到核酸酶攻击，因此在测序前通常将RNA逆转录成DNA。

本发明可在检测前或与检测同时地对核酸(例如，ncRNA)进行扩增。核酸扩增技术的示例性非限制性实例包括但不限于：聚合酶链式反应(PCR)、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、转录介导的扩增(TMA)、连接酶链式反应(LCR)、链置换扩增(SDA)和基于核酸序列的扩增(NASBA)。本领域的普通技术人员将认识到，某些扩增技术(例如，PCR)需要在扩增前将RNA逆转录成DNA(例如，RT-PCR)，而其他扩增技术则直接扩增RNA(例如，TMA和NASBA)。

通常称为PCR的聚合酶链式反应使用变性、引物对与相反链的退火以及引物延伸的多个循环，以指数方式增加靶核酸序列的拷贝数；TMA的转录介导的扩增(在基本上恒定的温度、离子强度和pH的条件下自身催化地合成靶核酸序列的多个拷贝，其中靶序列的多个RNA拷贝自身催化地生成另外的拷贝；LCR的连接酶链式反应使用与靶核酸的相邻区域杂交的两组互补DNA寡核苷酸；其他扩增方法包括例如：通常称为NASBA的基于核酸序列的扩增；使用RNA复制酶(通常称为Qβ复制酶)扩增探针分子本身的扩增；基于转录的扩增方法；以及自我维持的序列扩增。

本发明中非扩增或扩增的核酸可通过任何常规的手段检测。

芯片、试剂盒

本发明提供了检测中LOC105377352基因的表达水平的产品，所述产品包括(但不限于)制剂、芯片或试剂盒。其中芯片包括：固相载体；以及有序固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述的寡核苷酸探针特异性地对应于LOC101926969所示的部分或全部序列。

术语“探针”指能与另一分子的特定序列或亚序列或其它部分结合的分子。除非另有指出，术语“探针”通常指能通过互补碱基配对与另一多核苷酸(往往称为“靶多核苷酸”)结合的多核苷酸探针。根据杂交条件的严格性，探针能和与该探针缺乏完全序列互补性的靶多核苷酸结合。探针可作直接或间接的标记，其范围包括引物。杂交方式，包括，但不限于：溶液相、固相、混合相或原位杂交测定法。

本发明提供了一种试剂盒，所述试剂盒可用于检测LOC101926969的表达。优选的，所述试剂盒还可包括dNTP、随机引物、还原剂、RNase抑制剂、反转录酶、MgCl₂和PCR缓冲液等中的一种或多种的组合，此外，所述试剂盒还可以含有标准品和/或对照品；在本发明的一个优选例中，选用了GAPDH作为内参。

优选的，试剂盒还包含其它一些辅助试剂，所述的辅助试剂是定量PCR扩增试剂盒中常规使用的一些试剂，这些试剂的特性以及它们的配制方法均是本领域技术人员所熟知的；所述的试剂例如(但不限于)：阴性对照品、阳性对照品；还可以包括荧光定量PCR反应板、PCR反应板封口膜等。

本发明中基因检测试剂盒或基因芯片可用于检测包括LOC105377352在内的多个基因(例如，与结肠腺癌相关的多个基因)的表达水平，将结肠腺癌的多个标志物同时进行检测，可大大提高结肠腺癌诊断的准确率。

本发明中提及的LOC105377352基因产物表达上调，指比正常存在的更高的水平。通常，这可通过与对照比较来估计。根据特定的实施方案，lncRNA增加的水平是比对照高10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、150％、200％或甚至更高的水平。根据另一个特定的实施方案，意指LOC105377352基因产物表达或存在，而其在正常情况下(或在对照中)缺失。换句话说，在这些实施方案中，测定LOC105377352基因产物增加的表达相当于检测LOC105377352基因产物的存在。通常，这种情况下，将包括对照以确保检测反应正确进行。

本发明中，术语“样本”以其最广泛的含义使用。在一种含义中，意在包括从任何来源获得的标本或培养物，以及生物和环境样本。生物样本可获自动物(包括人)并涵盖液体、固体、组织和气体。生物样本包括血液制品，诸如血浆、血清等。然而，此类样本不应解释为限制适用于本发明的样本类型。

下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring HarborLaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1筛选与结肠腺癌相关的基因标志物

1、样品的收集

收集8例结肠腺癌组织和结肠腺癌癌旁粘膜组织样本，所有患者手术前未接受过放疗、化疗，患者均知情同意，上述所有标本的取得均通过组织伦理委员会的同意。

2、RNA样品的制备(利用QIAGEN的组织RNA提取试剂盒进行操作)

1)制冰，取组织放入研钵，将其研为碎末，研磨过程要保持组织冷冻。

2)将组织转入1.5ml EP管中，加入1ml Trizol试剂，用研磨棒细研磨，漩涡混合器充分匀浆，冰浴10min。

3)4℃，12000rpm离心10min。

4)吸取上层水相至另一新1.5ml EP管中，加入与上清等体积的异丙醇，反复吹打，冰浴10min。

5)4℃，12000rpm离心10min。

6)吸取上清至另一新1.5ml EP管中，加入与上清等体积的异丙醇，反复吹打，冰浴10min。

7)4℃，12000rpm离心10min，弃上清。

8)加入75％乙醇1ml摇振充分混匀，4℃，7500rpm离心10min，弃上清。

9)重复步骤8)。

10)倒尽上清，自然干燥。DEPC水完全溶解RNA，取1μl RNA加入99μl蒸馏水，蛋白核酸分析仪测OD260及OD280。

3、高通量转录组测序

1)RNA-seq读段定位

首先将低质量的读段去除得到清洁读段，然后利用TopHat v1.3.1将清洁片段与UCSC H.sapiens参考基因组(hg19)进行匹配，H.sapiens UCSC hg19版的预先构建的索引从TopHat主页下载，并作为参考基因组，利用TopHat与基因组匹配时，允许每个读段(默认到20)有多个匹配位点，最多2次错配。TopHat根据外显子区域和GT-AG剪切信号建立可能的剪切位点库，根据这些剪切位点库将没有定位到基因组的读段定位到基因组上。我们使用TopHat方法的系统默认参数。

2)转录丰度评估

匹配上的读段文件通过Cufflinks v1.0.3处理，Cufflinks v1.0.3将RNA-seq片段数目进行标准化计算转录本的相对丰度。FPKM值指的是每一百万测序片段中匹配到特定基因1kb长的外显子区域的片段数目。通过贝叶斯推理方法计算FPKM估计值的置信区间。Cufflinks使用的参考的GTF注释文件从Ensembl数据库下载(Homo_sapiens.GRCh37.63.gtf)。

3)差异表达基因的检测

将下载的Ensembl GTF文件和通过TopHat匹配的原始文件传输到Cuffdiff，Cuffdiff使用原始的匹配文件重新估算GTF文件中列出的转录本的表达丰度，检测差异表达。在Cuffidff输出中只有q值＜0.01，测试显示成功的比较才被认为是差异表达。

4、结果

RNA-seq结果如图1所示，LOC105377352基因在结肠腺癌组织中的表达量显著高于癌旁正常组织。

实施例2 QPCR测序验证LOC105377352基因的差异表达

1、根据高通量测序的检测结果选择LOC105377352基因进行大样本QPCR验证。按照实施例1中的样本收集方式选择结肠腺癌组织和结肠腺癌癌旁粘膜组织各60例。

2、RNA提取步骤同实施例1。

3、逆转录：

1)反应体系：

试剂	体积
		MgCl₂	2μl
10×RT Buffer	1μl
		无Rnase水	3.75μl
dNTP混合液	1μl
		Rnase抑制剂	0.25μl
AMV反转录酶	0.5μl
		寡聚dT适配子引物	0.5μl
实验样品	1μl

2)逆转录反应条件

按照RNA PCR Kit(AMV)Ver.3.0中逆转录反应条件进行。

42℃～55℃60min，99℃2min，5℃5min。

3)聚合酶链反应

1)引物设计

根据Genebank中LOC105377352基因和GAPDH基因的编码序列设计QPCR扩增引物，由博迈德生物公司合成。具体引物序列如下：

LOC105377352基因：

正向引物为5’-AGGATGAGATGCTGAAGATAA-3’(SEQ ID NO.2)；

反向引物为5’-TCTGTGGTGTTGGCTATT-3’(SEQ ID NO.3)。

GAPDH基因：

正向引物为5’-CTCTGGTAAAGTGGATATTGT-3’(SEQ ID NO.4)；

反向引物为5’-GGTGGAATCATATTGGAACA-3’(SEQ ID NO.5)。

2)按照表1配制PCR反应体系：

表1 PCR反应体系

试剂	体积
		正向引物	0.5μl
反向引物	0.5μl
		Takara Ex Taq HS	12.5μl
模板	10μl
		去离子水	补足25μl

3)PCR反应条件：95℃10min，(95℃30s，60℃40s)×40个循环。以SYBR Green作为荧光标记物，在Light Cycler荧光定量PCR仪上进行PCR反应，通过融解曲线分析和电泳确定目的条带，ΔΔCT法进行相对定量。

5、统计学方法

实验都是按照重复3次来完成的，结果数据都是以平均值±标准差的方式来表示，采用SPSS18.0统计软件来进行统计分析的，两者之间的差异采用t检验，认为当P<0.05时具有统计学意义。

6、结果

结果如图2所示，与结肠腺癌癌旁粘膜组织相比，LOC105377352基因在结肠腺癌组织中的表达上调，差异具有统计学意义(P<0.05)，同RNA-sep结果一致。

实施例3早期结肠腺癌诊断试剂盒的制备

根据LOC105377352基因与结肠腺癌的相关性，可以通过检测LOC105377352基因的表达情况来诊断结肠腺癌，据此本发明提供了一种基于检测LOC105377352基因表达来诊断结肠腺癌的试剂盒，该诊断试剂盒中的组分如下：SYBR Green聚合酶链式反应体系；扩增LOC105377352基因和GAPDH基因的引物对。扩增LOC105377352基因的引物对序列如SEQ IDNO.2和SEQ ID NO.3所示；扩增GAPDH的引物对序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示。

SYBR Green聚合酶链式反应体系包含PCR缓冲液、dNTPs、SYBR Green荧光染料。PCR缓冲液成分为：25mM KCl，2.5mM MgCl₂、200mM(NH4)₂SO₄。

上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。

SEQUENCE LISTING

<110> 中日友好医院

<120> 一种用于结肠腺癌的分子标志物

<160> 5

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 5110

<212> DNA

<213> 人源

<400> 1

tatatatatc tcctattagt tctgtccctc tagagaaccc tgattaatac actcacatag 60

tcattacata ccatgtattc tattttcttt ggggattgat tttgtttaag ctgtttatta 120

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gtgcagccta ccaatgtatg gggagaggct tagatgcaag ctgctaattt tttttcccct 480

ctctatgatc agtaccctct ctcctggaaa gaaaaaatat agatttggaa gcaaagagaa 540

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aagccagctt tgagagctct ctattcaact ataaattgtt catactggcc ctgctatctt 660

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caaatctaga actaaacatc tttttctttt gctacaaaat gttgtaaata ctgaaaacaa 1140

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tgctgggaaa aggagctgga tataaaaaaa aggaatcttg acccctctgt gaccaaagtt 1740

taagaaagaa acatttagcg tattattagg gtgagatata tgactgtgtg tgtcttgagt 1800

gcagagaaag gaggcaggga tactcaaggg ttgacagaaa aatgggtgta gcaacacgtg 1860

tgatgggata gaaaaagtca caggaaagcc atatgcgatt gcaactttga gataaggtga 1920

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cagtttcaag aaatcattta agtccttttt tctctgaagg taaatcaaag tgaaagaagt 2040

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aaatgacctc aagtagtgaa gatatagtgg aataatctgt atttctgctg accttgatga 2220

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attttaaaca actgggatca agatcctgta gcatttctca aagaatagta acaagagatg 2760

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agtgttttgg gatgcccaag gcactttgtt tgctgacttg ctggaaggcc aaaaaacgat 2940

cacatctgct tattatgaga gtgttctgag aaagttagcc agagctttag tagaaaaatg 3000

cctgggaaag ctccaccaaa gagtccttct ctaccatgac aatgctcctg ctcattcatc 3060

tcatcaaaca agaggaaatt tgtgacagtt tcaatgggaa atcaataggc atccacctta 3120

tagtcctgat ttggctcctt ttaacctgtt tttgtttctt agtctttttt taaaaaaatc 3180

tttaaagggc aatcattttt cttcggtaaa taatgtagag tgcattgaca tggttaaaaa 3240

gactgcattg acatggttaa attaccagaa ctctcagtac attaggtatg gattaaatgg 3300

ctgatatatc actttctcat caatttcaag acatttttgt tttctcatat gatgcatcat 3360

gaagcaaaga tgactgaagt gcctctttgt acctgatagt ttcccaatgt gtttttataa 3420

ttttaggttc taagcttatt tttaatatgt atgtgtttct cctgtagaaa atcttggttg 3480

ataatttgtc cttttgctac ttctaggctt cccaggatat cccaatttca gagcactttt 3540

tatgttaatt tctcacttag aggttggcaa acctcacata tattacctat ttcaattata 3600

agcccccaaa tttatgtgag gggaggcatg gttacaaact catagggaag acattttcct 3660

ctttacttag agcccaaacc aagacattca tttatgcaat aaaagcttac taagttactg 3720

tgctaaagac tagggatgtc ataagaaaca ggcaaaatct ctgctctcat gaaagttata 3780

ttttggaaga atatccttgt gctgatgggg aaattttcta gtcctccagc aggaatctca 3840

gttttcactc cctgactcca ttaggctcat ggcctcattt catattcttt tatggttatt 3900

ataacccatt tccatgatta ccaaggctgg caatattctt tcctccacca tcttcaaatt 3960

gaccttacca ttttattttg ccttcttcat ttttggcaag taggagcttg gcttacttta 4020

ttgtaagctc agctatacat ttaaaagtaa atatacaatt tcttttcatc atttctatgg 4080

gtttggtggc acagggagtt acaatatctg gtctaccaca ttgcaggaac tagatttccc 4140

cagatgacta actcttcagt caaaagtctt cttttttccc cgcctcaaac actttagatt 4200

tacttatgcc actgtggaaa attatttcca ctgtccttga agtccccttt cccaggtttt 4260

ccctctgctg tttttttcta atctttcacg gtgtgctcaa atgttacctc ttcaaagagg 4320

ctttcctgga aaacctcacc ttgagcactc tatctcactc actaatttct ttgttttttt 4380

tcttatttat aactttatca gtattttgaa ttattatact tatttattta cttacttgtt 4440

gatcatgcct ctattccact gtaatgcaac ttccatgaca gcatgatctt ttttgtcttg 4500

tttatcatta tttctctagg gtcagtctac cactactttt attgtcttgg cagaattagg 4560

tgtctcctga ggtgatgcaa aaagaaaaga cattatcagt gatggcttct aaccaaggat 4620

tcaaggcttc tgatttaaat tctatattat agccatcaca ggggtgaagg cacaaagtaa 4680

atgacaccag aaagaggatt taacacaaaa tccgaaactt gggatatttc acaggataaa 4740

ttgctgagcc tcttcagcaa ataagtgtct agcaaatcct gtattagtat ctttagtgat 4800

catacctgaa tttgctctcc aaaggcacca tatctataca ttcttagtat cctatctgtt 4860

ttaagcagat aataaagtca gctaaacctt cccttactgt tacacactga gtaagtgcaa 4920

tttggatggt ttgaagatat taaatctttc agcccagatt taagaatacc tgtttgagag 4980

aaattacaag agcttttaat gcttgctaca gaaaggtaat gtcttatctt ttctgtttag 5040

tattttgcat tccaaaaaat gagaaaagtt attccataag ttgataattg aataaaagaa 5100

tcaaaacatg 5110

<210> 2

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

aggatgagat gctgaagata a 21

<210> 3

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

tctgtggtgt tggctatt 18

<210> 4

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

ctctggtaaa gtggatattg t 21

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

ggtggaatca tattggaaca 20

Claims

1.长链非编码RNA LOC105377352在制备诊断早期结肠腺癌的产品中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述LOC105377352的序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述LOC105377352在结肠腺癌患者中表达上调。

4.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述产品包括：通过测序技术、核酸杂交技术、核酸扩增技术或免疫测定的方法检测LOC105377352基因的表达水平。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述核酸扩增技术选自聚合酶链式反应、逆转录聚合酶链式反应、转录介导的扩增、连接酶链式反应、链置换扩增和基于核酸序列的扩增。

6.一种体外检测样品中的权利要求1或2所述的lncRNA LOC105377352表达水平的产品，其特征在于所述产品包括制剂、芯片、或试剂盒。

7.根据权利要求6所述的产品，其特征在于，其特征在于，所述制剂、芯片或试剂盒包括针对LOC105377352的特异性引物对或探针。

8.根据权利要求7所述的产品，其特征在于，所述特异性引物对的序列如SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示。

9.根据权利要求7或8所述的产品，其特征在于，所述特异性引物对用于SYBR Green、Taqman探针、分子信标、双杂交探针、复合探针的检测。

10.权利要求6-9任一项所述的产品在制备诊断早期结肠腺癌的工具中的应用。