CN108610428B - 一种抗菌融合肽及其制备方法和应用 - Google Patents

一种抗菌融合肽及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种提供了一种抗菌融合肽，其肽链序列为：SISLLYGRKKRRQRRR。本发明还提供了另一种抗菌融合肽，其肽链序列为：YGRKKRRQRRRSISLL。本发明提供了上述抗菌融合肽的制备方法，根据目标抗菌融合肽的序列，从碳端到氮端将相应的氨基酸进行偶合；氮端氨基酸偶合完成后，脱保护基团洗涤吹干；切割后抽滤，使用冰乙醚充分洗涤和离心弃去上清液三次以上；干燥后的固体粉末用去离子水溶解后，分离纯化，收集主峰流出液，冷冻干燥后得目标抗菌融合肽。本发明还公开了抗菌融合肽在药品中的应用。本发明在抗癌肽的基础上得到了具有抗菌效果的融合肽，且抗菌融合肽的抗菌效果接近了强力抗菌药卡那霉素的抗菌作用，为进一步具体研发具有抗癌抗菌双重作用的药物提供了基础。

Description

一种抗菌融合肽及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及抗菌药技术领域，尤其涉及一种抗菌融合肽。
背景技术
现有的抗菌肽的来源有三种，天然物中提取、化学方法合成和生物方法合成。
关于化学方法合成：
氨基酸是两性物质，分子中一般含有氨基(-NH2)和羧基(-COOH)，是抗菌肽化学合成的基本原料。研究者通常将不参加缩合反应的氨基(-NH2)、羧基(-COOH)以及带有活泼基团的侧链保护起来，待到所有氨基酸都按照抗菌肽序列偶合完成之后，再进行脱保护反应。
癌症是由于机体异常细胞的过度繁殖增生，从而损害健康、危及生命的疾病。抗癌药物具有抑制癌细胞增长的作用，但抗癌药物通常不能够抑制细菌增长，即不具备抗菌活性。
癌症患者通常身体比正常人虚弱，更容易受到细菌感染。目前的医疗实践当中，对于受到细菌感染的癌症患者（或者有受到细菌感染可能的患者），在使用抗癌药物的同时，需要另外使用抗菌药物。药物的增多对于患者的健康具有负面的影响，如果能够研发出具有抗菌作用的抗癌药，则有望减少患者的用药量，减少用药对于患者健康的负面影响。
发明内容
本发明的目的在于提供一种基于乳腺癌抑制肽BRCA1(782-786，SISLL)的抗菌融合肽。
为实现上述目的，本发明的抗菌融合肽为TAT（47-57）氮端连接BRCA1(782-786)的SISLL-TAT，其肽链序列为：SISLLYGRKKRRQRRR。
本发明的目的还在于提供另一种基于乳腺癌抑制肽的抗菌融合肽。
为实现上述目的，本发明的抗菌融合肽的肽序为TAT（47-57）碳端连接BRCA1(782-786)的TAT –SISLL，其肽链序列为：YGRKKRRQRRRSISLL。
本发明的目的还在于提供一种上述抗菌融合肽的制备方法，依次按以下步骤进行：
以Wang树脂为载体，Fmoc为氨基酸侧链保护基团，哌啶的DMF溶液为脱保护试剂，HBTU、HOBT和DIEA为氨基酸缩合剂，根据目标抗菌融合肽的序列，从碳（C-）端到氮（N-）端将相应的氨基酸进行偶合；直到氮端氨基酸偶合完成后，脱除氮端氨基酸的Fmoc保护基团，洗涤后吹干；然后加入由三氟乙酸、苯甲硫醚、乙二硫醇、水和苯酚配制而成的切割试剂，切割后抽滤，将滤液收集至冰乙醚中，-20℃下静置20 小时，使沉淀物完全生成；离心弃去上清液；对沉淀物使用冰乙醚充分洗涤和离心弃去上清液三次以上；剩下的沉淀物经干燥，所得固体粉末进一步用去离子水溶解后，通过反相高效液相色谱（即RP-HPLC）分离纯化，收集主峰流出液，并冷冻干燥后获得相应的目标抗菌融合肽。
所述反相高效液相色谱对抗菌融合肽的分离纯化的条件如下：
抗菌融合肽SISLL-TAT：色谱柱Agilent Zorbax 300SB-C18，色谱柱直径9.4 mm，长250 mm，填料粒径5 μm，色谱柱的温度 25℃；检测波长 220 nm；流速 1.0 mL·min-1；流动相A相：0.1% TFA（三氟乙酸）的H2O；流动相B相：0.1% TFA的CH3CN（乙腈）；流动相梯度：10%~30%B相/0~20min（从0至20分钟流动相B的含量由10%增至30%）；收集保留时间为12.323min的流出液，冷冻干燥后得到白色粉末状的SISLL-TAT，产率76%。
抗菌融合肽TAT-SISLL ：色谱柱Agilent Zorbax 300SB-C18，色谱柱直径9.4 mm，长250 mm，填料粒径5 μm，色谱柱的温度 25℃；检测波长 220 nm；流速 1.0 mL·min-1；流动相A相：0.1% TFA（三氟乙酸）的H2O；流动相B相：0.1% TFA的CH3CN（乙腈）；流动相梯度：10%~30%B相/0~20min（从0至20分钟流动相B的含量由10%增至30%）；收集保留时间为12.223min的流出液，冷冻干燥后得到白色粉末状的TAT-SISLL，产率73%。
上述抗菌融合肽在药品中的应用。
本发明具有如下的优点：
将抗癌肽与细胞穿膜肽融合在一起，能够使抗癌肽能够更容易进入细胞内部，从而提升抗癌肽的抗癌效果。但正常情况下，这种融合作用并不能使抗菌融合肽产生抗菌作用。本发明在抗癌肽的基础上得到了具有抗菌效果的融合肽，且抗菌融合肽的抗菌效果则接近了强力抗菌药卡那霉素的抗菌作用，为进一步具体研发具有抗癌抗菌双重作用的药物提供了基础，有利于减少癌症患者的用药量。
附图说明
图1是SISLL-TAT的1H NMR(D2O, 400 MHz)谱图；
图2是SISLL-TAT的13C NMR(D2O, 100 MHz)谱图；
图3是SISLL-TAT的ESI-MS(CH3OH)图；
图4是TAT-SISLL的1H NMR(D2O, 400 MHz)谱图；
图5是TAT-SISLL的13C NMR(D2O, 100 MHz)谱图；
图6是TAT-SISLL的ESI-MS(CH3OH)图。
具体实施方式
实施例一
如图1至图3所示，本发明提供了一种抗菌融合肽，为TAT（47-57）氮端连接BRCA1(782-786)的SISLL-TAT，其肽链序列为：SISLLYGRKKRRQRRR。
实施例二
如图4至图6所示，本发明提供了一种抗菌融合肽，抗菌融合肽的肽序为TAT（47-57）碳端连接BRCA1(782-786)的TAT –SISLL，其肽链序列为：YGRKKRRQRRRSISLL。
本发明还提供了实施例一和实施例二中抗菌融合肽的制备方法，该方法是：
以Wang树脂为载体，Fmoc为氨基酸侧链保护基团，哌啶的DMF溶液为脱保护试剂，HBTU、HOBT和DIEA为氨基酸缩合剂，根据目标抗菌融合肽的序列，从碳（C-）端到氮（N-）端将相应的氨基酸进行偶合；直到氮端氨基酸偶合完成后，脱除氮端氨基酸的Fmoc保护基团，洗涤后吹干；然后加入由三氟乙酸、苯甲硫醚、乙二硫醇、水和苯酚配制而成的切割试剂，切割后抽滤，将滤液收集至冰乙醚中，-20℃下静置20 小时，使沉淀物完全生成；离心弃去上清液；对沉淀物使用冰乙醚充分洗涤和离心弃去上清液三次以上；剩下的沉淀物经干燥，所得固体粉末进一步用去离子水溶解后，通过反相高效液相色谱（即RP-HPLC）分离纯化，收集主峰流出液，并冷冻干燥后获得相应的目标抗菌融合肽。
其中，反相高效液相色谱对抗菌融合肽的分离纯化的条件如下：
抗菌融合肽SISLL-TAT的分离纯化条件：色谱柱Agilent Zorbax 300SB-C18，色谱柱直径9.4 mm，长250 mm，填料粒径5 μm，色谱柱的温度 25℃；检测波长 220 nm；流速 1.0mL·min-1；流动相A相：0.1% TFA（三氟乙酸）的H2O；流动相B相：0.1% TFA的CH3CN（乙腈）；流动相梯度：10%~30%B相/0~20min（从0至20分钟流动相B的含量由10%增至30%）；收集保留时间为12.323min的流出液，冷冻干燥后得到白色粉末状的SISLL-TAT，产率76%；
抗菌融合肽TAT-SISLL的分离纯化条件：色谱柱Agilent Zorbax 300SB-C18，色谱柱直径9.4 mm，长250 mm，填料粒径5 μm，色谱柱的温度 25℃；检测波长 220 nm；流速 1.0mL·min-1；流动相A相：0.1% TFA（三氟乙酸）的H2O；流动相B相：0.1% TFA的CH3CN（乙腈）；流动相梯度：10%~30%B相/0~20min（从0至20分钟流动相B的含量由10%增至30%）；收集保留时间为12.223min的流出液，冷冻干燥后得到白色粉末状的TAT-SISLL，产率73%。
本发明还提供了实施例一和实施例二中抗菌融合肽在药品中的应用，为制备具有抗癌抗菌双重作用的药物提供了基础，有利于减少癌症患者的用药量。
本发明使用的仪器与试剂的具体情况为：
CP224C电子分析天平(0.0001 g) (上海奥豪斯仪器有限公司)；TGL-10B台式高速离心机(上海安亭)；LGJ-10冷冻干燥机(北京四环科学仪器厂)；Agilent1260 高效液相色谱仪(美国Agilent公司)；Bruker Avance 400 型核磁共振仪(德国Bruker公司)，D2O为溶剂；Thermo Scientific LCQ Fleet 离子阱质谱仪(美国Thermo Fisher Scientific公司)；WRX-4显微熔点仪(上海光学仪器厂)。
Fmoc-氨基酸、Wang树脂、1-羟基苯并三氮唑(HOBT)、苯并三氮唑-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)和N，N-二异丙基乙胺(DIEA)购于浙江昂拓生物技术有限公司，哌啶购于国药化学试剂有限公司，N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、乙腈、苯酚、甲醇和乙醚购于天津市科密欧化学试剂有限公司，三氟乙酸(TFA)、苯甲硫醚和乙二硫醇购于阿拉丁试剂上海有限公司，其中，乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
制备出的抗菌融合肽SISLL-TAT的结构表征：m.p. > 210 ℃。1H NMR (400 MHz，D2O，ppm ) δ：6.99 (d，J = 8.0 Hz，2H)，6.70 (d，J = 8.0 Hz，2H)，4.37-4.41 (m，1H)，4.32 (t，J = 8.0 Hz，1H)，4.05-4.21 (m，14H)，3.62-3.89 (m，6H)，3.03-3.08 (m，14H)，2.84 (t，J = 8.0 Hz，5H)，2.78 (s，1H)，2.22 (t，J = 8.0 Hz，2H)，1.45-1.75 (m，35H)，1.32-1.37(m，9H)，0.65-0.79 (m，18H)。13C NMR (100 MHz，D2O，ppm) δ：177.58，175.95，174.44，173.76，173.66，173.38，173.27，173.17，173.10，173.07，172.85，171.86，171.46，167.82，163.39，163.04，162.69，162.33，156.64，154.36，130.37，127.90，120.63，117.73，115.37，114.83，111.93，63.78，60.84，60.18，58.45，55.20，54.23，53.59，53.31，53.10，52.79，52.62，52.53，43.06，40.48，39.49，39.33，39.07，36.28，30.92，30.21，28.16，28.01，27.89，27.05，26.19，24.50，24.38，24.24，24.15，22.17，22.12，21.88，20.64，20.51，14.58，10.22。ESI-MS m/z (%)：Calcd for [C88H161N37O21]：2072.48，Found：729.75(100)[M+3K]3+，692.25 (69)[M+3H]3+，519.42 (14)[M+4H]4+。
制备出的抗菌融合肽TAT-SISLL的结构表征：m.p. > 210 ℃。1H NMR (400 MHz，D2O，ppm) δ：7.04 (d，J = 8.0 Hz，2H)，6.75 (d，J = 8.0 Hz，2H)，4.36 (q，J = 8.0 Hz，2H)，4.09-4.28 (m，14H)，3.66-3.87 (m，6H)，3.02-3.06 (m，14H)，2.84 (t，J = 8.0 Hz，4H)，2.22 (t，J = 8.0 Hz，2H)，1.50-1.69 (m，41H)，1.28-1.32(m，5H)，0.72-0.78 (m，18H)。13C NMR (100 MHz，D2O，ppm)δ：177.58，176.52，174.15，173.66，173.54，173.33，173.27，172.86，171.60，171.34，170.55，169.75，163.37，163.02，162.67，162.32，156.63，155.11，130.77，125.31，121.42，120.64，117.74，115.78，114.84，111.94，63.78，60.88，58.43，55.30，54.40，53.50，53.27，53.11，52.76，52.20，51.60，42.04，40.49，39.53，39.32，39.07，36.20，35.92，30.92，30.40，30.29，28.22，28.06，27.08，26.22，26.17，24.45，24.34，24.18，22.15，22.12，20.55，20.45，14.70，10.29。ESI-MS m/z (%)：Calcdfor [C88H161N37O21]：2072.48，Found：729.67 (43)[M+3K]3+，692.17 (100)[M+3H]3+，519.42(17)[M+4H]4+。
抗菌融合肽的抗菌活性和溶血活性实验
实验所用仪器及试剂：
1.仪器
Spectra MR酶标仪(美国DYNEX公司)；LDZX-50FB型灭菌锅(上海申安医疗器械厂)；SHP-150型生化培养箱(上海精宏科技仪器有限公司)；Biofuge台式高速冷冻离心机(德国Heraeus公司)；THZ-300C恒温培养摇床(上海一恒科技仪器有限公司)；VS-1300L-U洁净工作台(苏净安泰空气技术有限公司)；AY120精密电子天平(日本SHIMADZU公司);BK5000 生物显微镜(OPTEC); Elix系列超纯水系统(法国MILLIPORE公司); HD-3紫外检测仪。
2.细菌获取
实验所用菌种革兰氏阳性菌：枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis KCTC 3068)和金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus ATCC 29213)；革兰氏阴性菌：鼠伤寒沙门氏菌 (Salmonella typhimurium CMCC50013) 和大肠杆菌 (Escherichia coli ATCC25922) 均由河南省疾病预防控制中心提供。
3. 主要试剂
卡那霉素(Kanamycin)、四甲基唑氮蓝（MTT）购于sigma公司；蛋白胨、琼脂粉、Triton-X100购于华美生物工程公司。
4.溶液的配制：
4 mg·mL-1多肽溶液的配制：准确称取0.0200 g多肽，用无菌水定容5 mL，4℃下避光保存，备用。
磷酸盐缓冲溶液 (PBS缓冲溶液, 0.01mol·L-1, pH 7.4)：称取KH2PO4 0.1200g，K2HPO4 0.9000 g，NaCl 3.4500 g和KCl 0.1000 g溶于水中，用HCl溶液调pH值至7.4后定容500 mL。
MTT溶液：准确称取MTT 500 mg溶解于100 mL pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液，无菌微孔滤膜 (0.22 μm) 除菌过滤后，分装，-20 ℃下避光保存。
LB液体培养基：称取蛋白胨5 g，酵母粉2.5 g，NaCl 5 g于500 mL烧杯中，加入蒸馏水450 mL，待溶解后用浓氢氧化钠溶液调节pH至7.2-7.4后定容500 mL。0.1 MPa，115 ℃下，湿热灭菌30 min，密封，常温保存。
（1）MTT法分析抗菌融合肽对细菌的最低抑菌浓度
采用MTT法测定了多肽的最低抑菌浓度(Minimum Inhibitory Concentrations,MIC)，即SISLL-TAT, TAT-SISLL，TAT (47-57)，BRCA1(782-786)和抗菌药物卡那霉素(Kanamycin)对菌株微生物生长情况的影响。在无菌条件下挑选菌株到LB液体培养基中，303K、160 r·min-1下培养至对数期，用新鲜LB液体培养基稀释为2×104 CFU×mL-1的悬浮液。采用二倍系列稀释法在96孔板中分别加入抗菌融合肽无菌水溶液100 μL，再加入菌株悬浮液100 μL，混匀后，310K下孵育20 h。空白对照组为100 μL的PBS溶液和100 μL的LB液体培养基混合液，阴性对照组为100 μL 磷酸缓冲盐溶液(PBS溶液)和100 μL菌株悬浮液混合液。每个实验重复3组。用酶标仪测定A570 nm值来监测细菌的生长情况，通过如下公式计算多肽的抑菌率。完全抑制细菌生长的多肽的最低浓度定义为多肽的最低抑菌浓度。
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE001
（2）分光光度法测定抗菌融合肽TAT-SISLL和SISLL-TAT对人红细胞溶血活性
进行抗菌融合肽TAT-SISLL和SISLL-TAT对人红细胞溶血活性的测定。经郑州大学生命科学伦理委员会批准的议定书同意，健康志愿者签订书面知情同意书后，通过静脉抽取健康志愿者血液20 mL流入含肝素钠的抗凝管内，用磷酸盐缓冲溶液（10 mM, pH 7.4）洗涤、2000 rpm转速下离心10 min (×5)后，将红细胞制备为2%人红细胞悬浮液。采用二倍系列稀释法在1.5 mL离心管中分别加入抗菌融合肽溶液100 μL，再加入2%人红细胞悬浮液100 μL，混匀后，310 K下孵化30 min。阴性对照组为磷酸盐缓冲溶液和2%人红细胞悬浮液各100 μL的混合液，阳性对照组为1% Triton X-100的生理盐水溶液和2%人红血细胞悬浮液各100 μL的混合液。每个实验重复3组。吸取各孔上清液分别移入96孔板中，用酶标仪测定A570 nm值，计算溶血率。引起5%溶血的多肽浓度为最小溶血率浓度(Minimun HemolytiConcentration, MHC)。
Figure DEST_PATH_IMAGE004
结果与讨论
表一：抗菌融合肽的抗菌活性和溶血活性
Figure DEST_PATH_IMAGE006
（1）抗菌融合肽TAT-SISLL和SISLL-TAT的抗菌活性
多肽SISLL–TAT, TAT–SISLL，TAT (47–57)，BRCA1(782-786)和抗菌药物卡那霉素的抗菌活性用最低抑菌浓度(MIC)值进行评价，如表一所示。由MIC值可以看出，BRCA1(782–786) 对实验所用的四种菌株生长的抑制能力很弱。而抗菌融合肽SISLL–TAT和TAT–SISLL对菌株生长的抑制能力较好，MIC值在10-44 µg·mL-1之间。SISLL–TAT抑制革兰氏阳菌枯草杆菌生长的效果最好，MIC值为10.52 µg·mL-1，抑制金黄色葡萄球菌生长的MIC值为17.27 µg·mL-1，抑制大肠杆菌生长的MIC值为21.12 µg·mL-1，抑制鼠伤寒沙门菌生长的MIC值为32.26 µg·mL-1。相比之下，TAT–SISLL的抑菌能力稍微差一点，其抑制枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和鼠伤寒沙门菌生长的MIC值分别为12.23 µg·mL-1，22.78 µg·mL-1，21.42 µg·mL-1和43.12 µg·mL-1。抗菌融合肽BRCA1(782-786)连在TAT (47–57)氮端比连在TAT (47–57)碳端表现出较好的抗菌活性。这可能是由于在细胞穿膜肽TAT (47-57)氮端修饰上小分子BRCA1(782-786)后， TAT (47-57) 穿透细胞膜的能力并不减弱，并可以携带BRCA1(782-786)小肽快速透过细胞膜，进入细胞内部，在短时间内可达到良好的抗菌效果。BRCA1(782-786)连在TAT (47-57) 的碳端，57位的Arg残基连在Ser残基上，Arg可以提高多肽的穿膜能力，因此这可能会减弱TAT (47-57)的穿透细胞膜的能力。
抗菌融合肽SISLL-TAT和TAT-SISLL分子中都有+8净电荷，有利于抗菌融合肽与核酸带负电荷的磷酸骨架静电结合；分子中有Tyr、Leu和Ile残基，可增加抗菌融合肽的疏水性，有利于肽与核酸的碱基对之间结合，从而破坏细菌的遗传物质。
（2）抗菌融合肽TAT-SISLL和SISLL-TAT对人红细胞溶血活性分析
抗菌融合肽TAT-SISLL和SISLL-TAT对人红细胞的溶血性在一定程度上反应了它们对红细胞的毒性。最低溶血浓度(MHC)值用来评价多肽溶血活性的大小，数值越大，溶血活性越弱，表明抗菌融合肽越不易瓦解人红细胞。表一汇总了抗菌融合肽TAT-SISLL和SISLL-TAT对人红细胞的溶血性影响。表中数据显示，与抗菌药物卡那霉素相比，TAT-SISLL和SISLL-TAT没有溶血活性，表现在MHC 值（产生5%溶血的最低肽浓度）均大于250 µg·mL-1；TAT(47-57) 溶血率达到5%时的MHC 值大于62.5 µg·mL-1；BRCA1(782–786)测试的溶血率达到5%的MHC 值大于250 µg·mL-1。结合肽的MIC值，抗菌融合肽TAT-SISLL和SISLL-TAT在发挥抑菌活性时的浓度均未达到最低溶血浓度，说明抗菌融合肽TAT-SISLL和SISLL-TAT安全性比较高，具有成为优异抗菌抗癌肽的潜力。
序列表
<110> 河南工程学院
<120> 一种抗菌融合肽及其制备方法和应用
<141> 2018-05-17
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Ser Ile Ser Leu Leu
1 5
<210> 2
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg
1 5 10
<210> 3
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Ser Ile Ser Leu Leu Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg
1 5 10 15
<210> 4
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Ser Ile Ser Leu Leu
1 5 10 15

Claims (4)

1.一种抗菌融合肽，其特征在于：抗菌融合肽为TAT（47-57）氮端连接BRCA1(782-786)的SISLL-TAT，其肽链序列为序列表中的序列3所示的SISLLYGRKKRRQRRR。
2.一种抗菌融合肽，其特征在于：抗菌融合肽的肽序为TAT（47-57）碳端连接BRCA1(782-786)的TAT –SISLL，其肽链序列为序列表中的序列4所示的YGRKKRRQRRRSISLL。
3.权利要求1或2中的抗菌融合肽的制备方法，其特征在于：
以Wang树脂为载体，Fmoc为氨基酸侧链保护基团，哌啶的DMF溶液为脱保护试剂，HBTU、HOBT和DIEA为氨基酸缩合剂，根据目标抗菌融合肽的序列，从碳端到氮端将相应的氨基酸进行偶合；直到氮端氨基酸偶合完成后，脱除氮端氨基酸的Fmoc保护基团，洗涤后吹干；然后加入由三氟乙酸、苯甲硫醚、乙二硫醇、水和苯酚配制而成的切割试剂，切割后抽滤，将滤液收集至冰乙醚中，-20℃下静置20 小时，使沉淀物完全生成；离心弃去上清液；对沉淀物使用冰乙醚充分洗涤和离心弃去上清液三次以上；剩下的沉淀物经干燥，所得固体粉末进一步用去离子水溶解后，通过反相高效液相色谱分离纯化，收集主峰流出液，并冷冻干燥后获得相应的目标抗菌融合肽。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：
反相高效液相色谱对抗菌融合肽的分离纯化的条件如下：
抗菌融合肽SISLL-TAT的分离纯化条件：色谱柱Agilent Zorbax 300SB-C18，色谱柱直径9.4 mm，长250mm，填料粒径5μm，色谱柱的温度 25℃；检测波长220nm；流速1.0 mL·min-1；流动相A相：0.1% TFA的H2O；流动相B相：0.1% TFA的CH3CN；流动相梯度：10%~30%B相/0~20min；收集保留时间为12.323min的流出液，冷冻干燥后得到白色粉末状的SISLL-TAT，产率76%；
抗菌融合肽TAT-SISLL的分离纯化条件：色谱柱Agilent Zorbax 300SB-C18，色谱柱直径9.4 mm，长250 mm，填料粒径5 μm，色谱柱的温度 25℃；检测波长 220 nm；流速 1.0mL·min-1；流动相A相：0.1% TFA的H2O；流动相B相：0.1% TFA的CH3CN；流动相梯度：10%~30%（体积）B相/0~20min；收集保留时间为12.223min的流出液，冷冻干燥后得到白色粉末状的TAT-SISLL，产率73%。
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