CN108601804A - 用于预防和治疗炎性肠病的组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于预防、治疗或缓解炎性肠病的组合物，所述组合物含有作为活性成分的包含木香、诃子和姜中的两种以上的混合提取物；并涉及其制备方法；更具体而言，涉及木香、诃子和姜的混合提取物的药物组合物，所述药物组合物具有抑制肠上皮细胞中的单核细胞粘附的作用、抑制炎性细胞因子的产生的作用、缓解葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的结肠炎动物模型中的结肠炎的作用以及缓解2,4,6‑三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的克罗恩病动物模型中的克罗恩病的作用。

Description

用于预防和治疗炎性肠病的组合物
技术领域
本发明涉及木香(Aucklandia lappa Decne)、诃子(Terminalia chebulaRetzius)和姜(Zingiber officinale Rosc.)的混合提取物的用途，更具体而言，涉及用于预防、治疗或改善炎性肠病(IBD)的组合物，所述组合物含有作为活性成分的木香、诃子以及姜中的至少两种的混合提取物。
背景技术
炎性肠病(IBD)是一种顽固性疾病，在大肠和小肠的粘膜中引起慢性炎症或溃疡，并长期导致腹泻、黑粪症且反复发作。
炎性肠病是更常见于西方人种的疾病，但是自从20世纪80年代以来，在韩国也快速增长。炎性肠病的发病年龄为15岁至35岁，且在所有年龄段中均报道过这一疾病，其中的15％超过60岁。大约15％的炎性肠病患者在其直系亲属中有家族史。
炎性肠病可由环境因素、遗传因素和免疫因素引起(Kitahora,T.(2012)Familialprevalence of inflammatory bowel disease,Nihon Rinsho,70增刊1,44-47；Lowe,A.M.,Roy,P.O.,M,B.P.,Michel,P.,Bitton,A.,St-Onge,L.,&Brassard,P.(2009)Epidemiology of Crohn's disease in Quebec,Canada.Inflamm Bowel Dis,15(3),429-435)，并且炎性肠病的确切病因还不清楚(Toumi,R.,Abdelouhab,K.,Rafa,H.,Soufli,I.,Raissi-Kerboua,D.,Djeraba,Z.,&Touil-Boukoffa,C.(2013).Beneficial role of theprobiotic mixture Ultrabiotique on maintaining the integrity of intestinalmucosal barrier in DSS-induced experimental colitis.ImmunopharmacolImmunotoxicol,35(3),403-409)。
尽管发展出炎性肠病的原因仍不清楚，但是认为炎症介质和免疫细胞的激活是该病的重要原因(归因于自身免疫疾病等以及环境因素或遗传因素)。
炎性肠病在临床上被分成两种病：溃疡性结肠炎和克罗恩病，这两者在临床上相似但在组织学发现以及内窥镜检查和免疫学方面彼此不同。在这些炎性肠病中，炎症介质的激活和免疫细胞的激活已知是重要的致病原因。
肠道免疫系统的连续或不适当的激活在慢性粘膜炎症的病理生理学中起重要作用，具体而言，通过嗜中性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞和肥大细胞的浸润最终导致粘膜破坏以及溃疡。
在主要于炎性肠病发展过程期间伴随的炎症反应中，炎症反应刺激性细胞因子，如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)起主要作用。
具体而言，TNF-α在患有溃疡性结肠炎的患者的结肠腔和结肠上皮细胞中高表达，而且最近的研究表明TNF-α在溃疡性结肠炎的发病机制中起重要作用。英夫利昔单抗(一种抗TNF-α的抗体)已知不仅在疖子(boil)的治疗中是有效的，而且在先前未经治疗的克罗恩病的治疗中也是有效的。然而，此种疗法费用昂贵，并且在一些患者中引起副作用(比如输液反应和感染性并发症)。
目前，用于炎性肠病的治疗剂是阻断前列腺素的产生的5-氨基水杨酸(5-ASA)类药剂(例如柳氮磺胺吡啶、美沙拉秦等)或者类固醇类免疫抑制剂。还将诸如硫唑嘌呤、6-巯基嘌呤、环孢霉素等的免疫抑制剂用于对类固醇疗法没有反应的患者，但仍然没有治愈炎性肠病的药物。
另外，长期给予这些药物可引起副作用，例如白细胞减少症、皮疹、发热、胰腺炎、肝炎、溶血性贫血和骨髓抑制(由超敏反应引起)以及恶心、呕吐、消化不良、厌食症、头痛。
同时，天然提取物及利用其的制剂已被用来缓解和治疗从咳嗽、感冒到寄生虫感染和炎症的各种疾病。如今，市面上使用的超过60％的抗癌剂以及超过75％的传染病治疗剂是天然来源的。这是因为天然产品非常多样化并且提供高度特异性的生理学活性。
然而，还未开发出用于炎性肠病的可靠的疗法。因此，对这些疾病而言，存在开发有效的治疗剂的需求，并且就此而言，需要用于炎性肠病的天然提取物。
在这种情况下，本发明人努力开发出了来源于天然植物的混合提取物的组合物，该组合物不会引起副作用并且对治疗炎性肠病而言是有效的。结果，本发明人发现了木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物具有以下的优异作用：抑制炎性细胞因子(如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6))的产生、抑制单核细胞的浸润；以及具有以下作用：在葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的结肠炎的动物模型和2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的克罗恩病的动物模型中，恢复结肠的长度和重量减轻、改善腹泻和黑粪症的状况；并且还通过根据木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物的给予剂量的作用确定了有效剂量，从而完成了本发明。
现有技术文件
专利文件
1.韩国注册专利No.10-1337389
2.韩国注册专利No.10-1446396
3.韩国专利申请公开No.10-2004-0018475
4.美国注册专利No.US 9044502B2
非专利文件
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3.Lowe，A.M.，Roy，P.O.，M，B.P.，Michel，P.，Bitton，A.，St-Onge，L.，&Brassard，P.(2009)Epidemiology of Crohn′s disease in Quebec，Canada.Inflamm Bowel Dis，15(3)，429-435
4.Toumi，R.，Abdelouhab，K.，Rafa，H.，Soufli，I.，Raissi-Kerboua，D.，Djeraba，Z.，&Touil-Boukoffa，C.(2013)Beneficial role of the probiotic mixtureUltrabiotique on maintaining the integrity of intestinal mucosal barrier inDSS-induced experimental colitis.Immunopharmacol Immunotoxicol，35(3)，403-409
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发明内容
技术问题
本发明的主要目的是提供包括木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物的各种应用。
本发明的一个目的是提供用于预防或治疗炎性肠病的药物组合物及其制备方法，所述药物组合物含有作为活性成分的木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物。
本发明的另一目的是提供用于预防或改善炎性肠病的健康功能食品，所述健康功能食品含有作为活性成分的木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物。
另外，本发明的又一目的是为药物组合物或健康功能食品提供有效剂量的包括木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物，所述药物组合物或健康功能食品含有该混合提取物作为活性成分用于预防、治疗或改善炎性肠病。
技术方案
为了解决上述问题，
在一个实施方式中，本发明提供了用于预防或治疗炎性肠病的药物组合物，所述药物组合物含有作为活性成分的木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物。
具体而言，例如，当所述混合提取物为木香和诃子的混合物时，混合提取物可含有重量比为1:1的木香和诃子；当所述混合提取物为木香和姜的混合物时，混合提取物可含有重量比为1:1的木香和姜；当所述混合提取物为姜和诃子的混合物时，混合提取物可含有重量比为1:1的姜和诃子；以及当所述混合提取物为木香、诃子和姜的混合物时，混合提取物可含有重量比为2:2:1的木香、诃子和姜。
所述混合提取物可为木香、诃子和姜的粗提物、可溶于极性溶剂的提取物或可溶于非极性溶剂的提取物。所述粗提物可为溶解于选自以下的溶剂中的提取物：水(包括蒸馏水)、甲醇、乙醇、丁醇或它们的混合溶剂；并且所述可溶于极性溶剂的提取物可为溶解于选自以下的溶剂中的提取物：水、乙醇、丁醇或它们的混合溶剂；而所述可溶于非极性溶剂的提取物可为溶解于选自以下的溶剂中的提取物：己烷、氯仿、二氯甲烷或乙酸乙酯。
在优选的实施方式中，本发明的混合提取物可使用水、C1-C4的低级醇或它们的混合物作为溶剂进行提取，具体而言，可使用热水提取物或乙醇提取物，并且最优选地，可使用50％-100％乙醇提取物。
本发明的提取物可为混合提取物，该混合提取物通过将木香和诃子或姜混合然后提取混合物而获得，或者该混合提取物可为其中将从木香提取的木香提取物、从诃子提取的诃子提取物、或从姜提取的姜提取物混合的提取物。
另外，本发明的提取物可为混合提取物，该混合提取物通过将木香和诃子以及姜混合然后提取混合物而获得，或者该混合提取物可为其中将从木香提取的木香提取物、从诃子提取的诃子提取物以及从姜提取的姜提取物混合的提取物。
同时，除了木香、诃子以及姜以外，所述混合物还可进一步含有以下的提取物：芍药(Paeonia lactiflora Pall)、大黄(RHEI RHIZOMA)、芡实(Euryales Semen)、厚朴(Magnoliae Cortex)、桂皮(Cinnamomi Cortex Spissus)、升麻(Cimicifugae Rhizoma)、柴胡(Bupleuri Radix)、砂仁(Amomi Fructus)、白术(Atractylodis Rhizoma Alba)、薏苡仁(Coix lacryma-jobi L.var.ma-yuen Stapf seed)等。
特别地，含有木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物可在20℃至120℃下提取1-15小时，例如在60℃至120℃下提取1-6小时。
所述混合提取物通过抑制至少一种炎症介质(即IL-6和TNFα)的产生可预防和治疗炎性肠病。
所述炎性肠病可包括克罗恩病、溃疡性结肠炎、肠白塞病、肠结核和肠炎、腹泻等。溃疡性结肠炎是在大肠中引起炎症并且形成溃疡的慢性疾病，导致出血性腹泻、腹部剧烈疼痛以及伴有发热的癫痫。溃疡性结肠炎的确切病因尚不清楚，但是推测溃疡性结肠炎由自身免疫性疾病等以及环境因素或遗传因素引起。克罗恩病(也称为局限性肠炎、肉芽肿性回肠炎或回肠结肠炎)是发生在消化道任何部位的壁的慢性炎症。
在本发明中，所述混合提取物可具有以下作用中的至少一种作用：在葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的结肠炎动物模型和2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的克罗恩病动物模型中，恢复结肠的长度和重量减轻、以及改善腹泻和黑粪症的状况。
另外，在另一特定的实施方式中，本发明提供了用于预防或改善炎性肠病的健康功能食品及其应用，所述食品含有木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物。
所述健康功能食品可以以例如粉末、颗粒、片剂、胶囊、糖浆或饮料等形式来制备。
在又一特定的实施方式中，本发明提供了对预防、治疗或改善炎性肠病而言的药物组合物或健康功能食品的有效剂量，所述药物组合物或健康功能食品含有作为活性成分的木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物。
具有优异的抗炎作用的混合提取物的有效量可为：相对于该组合物的总重量而言，提取物占0.1wt％至50wt％。优选地，所述混合提取物可处于50mg/kg至400mg/kg、且最优选200mg/kg至400mg/kg的浓度。
如上所述，本发明包括利用表现出抗炎功能的有效量的木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物的各种应用，更具体而言，包括以下作用：抑制炎性细胞因子(如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6))的产生、抑制单核细胞的浸润；在葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的结肠炎动物模型和2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的克罗恩病动物模型中恢复结肠的长度和重量减轻、改善腹泻和黑粪症的状况；以及优异的抗炎作用。
本发明的有益效果
含有根据本发明的木香、诃子和姜的混合提取物的组合物具有优异的抗炎作用和改善结肠炎的作用，同时几乎不具有毒性，并且因此有望有效地作为活性成分用于药物组合物、加工食品、功能食品、食品添加剂、功能性饮料或饮料添加剂等，以预防或治疗炎性疾病、特别是炎性肠病。
附图说明
图1示出了表明含有木香和姜的混合提取物对肠上皮细胞中的单核细胞粘附的抑制作用的图表。
图2示出了表明含有木香和姜的混合提取物对TNF-α的产生的抑制作用的图表。
图3示出了表明含有木香和姜的混合提取物对IL-6的产生的抑制作用的图表。
图4示出了表明在葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的结肠炎动物模型中的木香和姜的混合提取物恢复结肠长度的作用的图表。
图5示出了表明疾病活动指数(DAI)的图表，疾病活动指数与在DSS诱导的结肠炎动物模型中通过木香和姜的混合提取物改善体重减轻、腹泻和黑粪症的状况有关。
图6示出了表明在DSS诱导的结肠炎动物模型中的含有木香和姜的混合提取物恢复肠粘膜的作用的图像。
图7示出了表明通过含有木香和姜的混合提取物降低髓过氧化物酶(MPO)活性的作用的图表。
图8示出了表明取决于用于该混合提取物的溶剂的乙醇浓度的含有木香和姜的混合提取物的细胞毒性测定(MTT测定)的结果的图表。
图9示出了表明取决于用于该混合提取物的溶剂的乙醇浓度的含有木香和姜的混合提取物对NO的产生的抑制作用的图表。
图10示出了取决于木香和姜的调和(混合)比例的细胞存活力的测量结果。
图11示出了取决于木香和姜的调和(混合)比例的对NO的产生的抑制作用的测量结果。
图12示出了表明取决于木香和姜的调和(混合)比例的对肠上皮细胞中的单核细胞粘附的抑制作用的图表。
图13示出了表明含有木香和诃子的混合提取物对肠上皮细胞中的单核细胞粘附的抑制作用的图表。
图14示出了表明含有木香和诃子的混合提取物对LPS诱导的TNF-α(即炎性细胞因子)的产生的抑制作用的图表。
图15示出了表明含有木香和诃子的混合提取物对LPS诱导的IL-6(即炎性细胞因子)的产生的抑制作用的图表。
图16示出了表明在DSS诱导的结肠炎动物模型中的含有木香和诃子的混合提取物的作用的图表。
图17示出了表明通过含有木香和诃子的混合提取物抑制DSS诱导的结肠炎动物模型中的炎性细胞向肠组织中浸润的髓过氧化物酶(MPO)活性的图表。
图18示出了表明2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的克罗恩病动物模型中的含有木香和诃子的混合提取物的作用的图表。
图19示出了表明含有姜和诃子的混合提取物对肠上皮细胞中的单核细胞粘附的抑制作用的图表。
图20示出了表明含有姜和诃子的混合提取物对LPS诱导的IL-6(即炎性细胞因子)的产生的抑制作用的图表。
图21示出了表明在DSS诱导的结肠炎动物模型中的含有姜和诃子的混合提取物的作用的图表。
图22示出了表明在TNBS诱导的克罗恩病动物模型中的含有姜和诃子的混合提取物的作用的图表。
图23示出了表明含有木香、诃子和姜的混合提取物对肠上皮细胞中的单核细胞粘附的抑制作用的图表。
图24示出了表明含有木香、诃子和姜的混合提取物对LPS诱导的IL-6(即炎性细胞因子)的产生的抑制作用的图表。
图25示出了表明在DSS诱导的结肠炎动物模型中，取决于它们的混合比例的含有木香、诃子和姜的混合提取物的作用的图表。
图26示出了表明在TNBS诱导的克罗恩病动物模型中，取决于它们的混合比例的含有木香、诃子和姜的混合提取物的作用的图表。
图27示出了表明取决于提取溶剂的含有木香、诃子和姜的混合提取物对肠上皮细胞中的单核细胞粘附的抑制作用的图表。
图28示出了表明取决于提取溶剂的含有木香、诃子和姜的混合提取物对IL-6(即炎性细胞因子)的产生的抑制作用的图表。
图29示出了表明在DSS诱导的结肠炎动物模型中，取决于提取溶剂的含有木香、诃子和姜的混合提取物的作用的图表。
图30示出了表明在TNBS诱导的克罗恩病动物模型中，取决于提取溶剂的含有木香、诃子和姜的混合提取物的作用的图表。
图31示出了表明在DSS诱导的结肠炎动物模型中，取决于给予剂量的含有木香、诃子和姜的混合提取物的作用的图表。
图32示出了表明在TNBS诱导的克罗恩病动物模型中，取决于给予剂量的含有木香、诃子和姜的混合提取物的作用的图表。
具体实施方式
对本发明中使用的术语进行了如下定义。
术语“提取物”是指通过用合适的浸提液(leachate)提取草药并且蒸发浸提液以进行浓缩而制备的制剂，并且所述提取物可为通过提取处理获得的提取物、该提取物的稀释液或浓缩液、通过干燥该提取物获得的干燥产物、以及其粗产物或纯化产物，但是所述提取物不限于此。该提取物可使用本领域已知的常用的提取方法、分离和纯化方法来制备。提取方法可包括沸水提取、热水提取、冷浸提取、回流冷却提取或超声提取，但提取方法不限于此。如本文所使用的，馏分也包括在提取物中。
术语“粗提物”是指溶解于选自以下的溶剂中的提取物：水(包括蒸馏水)、C1-C4低级醇(如甲醇、乙醇、丁醇等)或它们的混合溶剂，优选水和乙醇的混合溶剂，更优选50％至100％的乙醇。
术语“可溶于极性溶剂的提取物”包括可溶于选自以下的溶剂中的提取物：水、甲醇、乙醇、丁醇或它们的混合溶剂，并且优选水或乙醇。
术语“可溶于非极性溶剂的提取物”包括可溶于选自以下的溶剂中的提取物：己烷、氯仿、二氯甲烷或乙酸乙酯，优选己烷、二氯甲烷或乙酸乙酯，并且更优选己烷或乙酸乙酯。
术语“载体”被定义为有利于将化合物添加至细胞或组织中的化合物。例如，二甲亚砜(DMSO)是常用的载体，促进多种有机化合物向生物体的细胞或组织中的导入。
术语“稀释剂”被定义为不仅是使目标化合物的生物活性形式稳定的化合物，而且是被稀释在水中以溶解该化合物的化合物。本领域中将盐溶解于缓冲液中作为稀释剂使用。常用的缓冲液是磷酸盐缓冲盐水，因为其模拟盐在人体液中的状态。因为缓冲盐可在低浓度下控制溶液的pH，所以缓冲稀释剂几乎不改变化合物的生物活性。
术语“受试者”或“患者”是指需要治疗的任何单个的个体(包括人、牛、狗、豚鼠、兔、鸡、昆虫等)、以及另外地参与临床试验研究而没有表现出疾病的任何临床发现的任何受试者、或参与流行病学研究的受试者或者作为对照组使用的受试者。
术语“组织或细胞样品”是指从受试者或患者的组织获得的相似细胞的聚集物。组织或细胞样品的供应来源可为：固体组织，所述固体组织来自新鲜的、冷冻的和/或保藏的器官或组织样品、或活检组织或抽吸物；血液或任何血液成分；以及处于受试者的妊娠或发育的任何时间点的细胞。组织样品也可为原代或者经培养的细胞或细胞系。
术语“给予”是指以任何合适的方式向受试者提供组合物。
术语“有效量”是指提供有益的或期望的临床或生物化学结果的适当量。有效量可给予一次或多次。为了本发明的目的，有效量是适用于临时缓解、改善、稳定、逆转、减缓或延缓疾病状态的进展的量。如果受益的动物能够耐受组合物的给予或者向该动物给予该组合物是适合的，则该组合物被认为是“药学上或生理学上可接受的”。在给予量具有生理意义的情况下，可以说制剂是以“治疗有效量”进行给予的。在制剂于受体中引起生理学上可检测的变化的情况下，制剂具有生理意义。
除非另外指出，否则术语“治疗(treating)”是指逆转、缓解、抑制或预防应用该术语的疾病或紊乱或者该疾病或紊乱的一种或多种症状。如本文所使用的，当术语“治疗”如上所定义时，术语“治疗(treatment)”是指所定义的治疗的行为。
术语“健康功能食品”是指通过向普通食品中添加本发明一个特定的实施方式的提取物而具有改善的普通食品功能的食品。功能可分为物理功能和生理功能。当将本发明的提取物添加至普通食品中时，普通食品的物理性质和生理功能将得到改善，并且本发明以全面的方式将具有此种增强功能的食品统一定义为“健康功能食品”。
术语“约”是指相对于参考的量、水平、值、数量、频率、百分比、直径、大小、质量、重量或长度以30％、25％、20％、25％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％的程度进行变化的量、水平、值、数量、频率、百分比、直径、大小、质量、重量或长度。
除非另有定义，否则本文使用的所有技术术语以本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义进行使用。另外，尽管本申请文件描述了优选的方法或样品，但是相似或等同的方法或样品也包括在本发明的范围内。本文引用的所有出版物的内容以引用的方式并入本发明。
在下文中，对本发明进行详细描述。
本发明涉及含有木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物的应用，以及涉及所述含有木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物具备的特定的生理活性和功能。
有效物质
木香是属于菊科(Asteraceae/Compositae)的多年生草本植物，其花期为7月至9月，并且结果期为8月至10月。木香生长在相对较高的山区，并且其起源于印度，且在中国其生长在云南、广东和四川等省。木香还被称为各种名称，如沉香(Aquilaria agallocha)、北马兜铃(Aristolochia contorta)、木香根茎(rhizome of Aucklandia lappa Decne)、南木香(South Aucklandia lappa Decne)、广木香(Broad Aucklandia lappa Decne)、云木香(Saussurea lappa CLARKE)、越西木香(Vladimiria denticulata)、川木香(Dolomiaeasouliei)等。
由于木香药性温热，因此木香对由腹部受冷引起的腹痛、呕吐、腹泻、饱腹错觉的症状等表现出良好的治疗作用；对痢疾而言是有效的；并且还已知木香具有增加大肠功能、促进尿液排泄和止痛的作用。
姜(Zingiber officinale Rosc.)是干燥的姜(ginger)根，是原产于热带亚洲的多年生草本植物，属于姜科姜属。姜科草本植物主要发现于热带地区，并且世界上约有47属1,400种。至于姜属草本植物，约50种分布在东亚、印度和马来西亚，而姜属的姜和蘘荷(Zingiber mioga)生长于韩国。韩国南部岛屿的森林中生长着姜花(Hedychiumcoronarium J Konig)属的野姜以及天然生长着山姜属(Alpinia)的山姜(Alpiniajaponica(Thunb.)Miq.)。姜也被称为干姜、筠姜、白姜和生姜(live ginger)。
姜辛辣、温和且无毒，作用于肺、胃和脾经，并且也作用于心、肝和胆经。姜具有疏散表邪、发散寒气、止吐和化痰的作用，并可治疗感冒、风寒邪气、呕吐、痰饮(retention ofphlegm)、气喘、咳嗽、胃胀感以及腹泻。此外，已知姜有助于活气、促进血液循环、驱寒祛风、解毒，并且发挥抗炎功效、祛除口臭、止痛以及缓解由湿气引起的湿疹。
诃子(Terminalia chebula Retzius)是诃子树的成熟果实。诃子树是原产于印度、缅甸、马来西亚、中国四川省等的热带乔木，并且在其汁液中提取出作为myrovalan的黄色色素，且诃子树也被用作家具木材。诃子还被称为各种名称，如Terminalia chebulaRETZ、Terminalia chebula(Gaertner)RETZ等。
诃子具有轻微的异味，药性苦、略酸、涩、并且温热。诃子具有降气、消除久痰久咳的作用，并且对呼吸困难、久泻、痢疾、白带、脱肛、助消化、改善食欲以及助产而言是有效的。此外，据报道，诃子具有收缩、抗腹泻以及抑制细菌(如铜绿假单胞菌，Pseudomonasaeruginosa)的药理学功效。
在一个方面，本发明利用了其中组合了木香、诃子和姜中的至少两种的提取物或级分。
所述提取物或级分可从木香、诃子、姜的各个部位提取或分级。
木香、诃子、姜的级分可通过将有机溶剂(从极性溶剂到非极性溶剂)中的木香、诃子、姜的各自的提取物的分级过程作为各溶剂的级分而获得。用于分级的合适溶剂可为水、乙醇、甲醇、己烷、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、丁醇或它们的混合溶剂。
本发明的木香、诃子、姜的提取物可通过本领域已知的方法、其修改的方法或通过本发明的方法来制备。
例如，所述提取物可通过冷浸提取、热水提取、超声提取、回流冷却提取或热提取来提取。根据本发明的一个实施方式，本发明的提取物可通过热水提取或回流冷却提取来提取，并且可反复提取1-10次、1-8次或1-6次。
此外，木香、诃子、姜的提取物或级分可通过额外的过程(如减压蒸馏、冷冻干燥或喷雾干燥等)制备成粉末的形式。另外，使用各种色谱法(如硅胶柱色谱法、薄层色谱法、高效液相色谱法等)，所述提取物或级分也可作为进一步纯化的级分而获得。
因此，在本发明中，所述木香、诃子、姜的提取物涉及以下概念：包括提取、分级或纯化的每一步获得的全部的提取物、级分、纯化产物、其稀释物、其浓缩物或其干燥产物。
在一个实施方式中，所述提取物可通过以下方法进行制备：
i)通过独立或同时将提取溶剂添加至木香、诃子和姜中的至少两种的物质来进行提取的步骤；
ii)对步骤i)的提取物进行过滤的步骤；以及
iii)对步骤ii)的滤液进行干燥的步骤。
在步骤i)中，作为提取溶剂，可使用本领域可接受的任何溶剂，并且可使用水或有机溶剂。该提取溶剂优选为水、醇或其混合物。作为醇，优选使用C1-C4的低级醇，并且更优选使用乙醇作为低级醇。
例如，可单独或组合使用各种类型的溶剂，如蒸馏水、具有1-4个碳原子的醇(包括甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇等)、丙酮、醚、苯、氯仿、乙酸乙酯、二氯甲烷、己烷、环己烷等，但所述溶剂不限于此。
可使用处于以下浓度的提取溶剂：50％至100％、50％至95％、50％至90％、50％至85％、50％至80％、50％至75％、50％至70％、50％至65％或50％至60％，并且优选50％至60％。
作为提取方法，优选使用振荡提取、索氏提取或回流提取，但提取方法不限于此。优选通过添加基于木香和诃子、木香和姜、或姜和诃子的量的1-10倍的提取溶剂进行提取。优选在20℃至120℃的温度(但温度不限于此)下进行提取。不受限地，提取可进行1-20小时、优选1-15小时、并且更优选1-6小时。
在上述方法中，步骤iii)的干燥方法可包括减压干燥、真空干燥、沸腾干燥、喷雾干燥或冷冻干燥。
在特定的实施方式中，在其中混合提取物含有木香、诃子和姜中的至少两种(例如，木香和诃子的混合提取物、木香和姜的混合提取物以及姜和诃子的混合提取物)的情况下，优选将木香和诃子、木香和姜、以及姜和诃子以1-3:1-3的重量比进行混合，更优选地，将木香:诃子、木香:姜、或姜:诃子以1:1的重量比进行混合；并且将溶剂、优选水和乙醇的混合溶剂(例如50％至100％乙醇)以相对于混合后重量的约1倍体积至约30倍体积(w/v％)、优选5倍体积至15倍体积(w/v％)的量进行添加，所述溶剂选自水(包括蒸馏水)、C1-C4低级醇(例如甲醇、乙醇、丁醇等)或其混合溶剂；并在约20℃至约120℃、优选60℃至约100℃的温度下提取1-15h、优选1-6h，所述提取通过冷浸提取、热水提取、超声提取、回流提取或热提取等、优选通过回流提取进行；随后进行过滤和干燥，从而得到含有木香:诃子、木香:姜或姜:诃子的组合粗提物。
在另一特定的实施方式中，在其中制备了含有木香、诃子和姜三者的混合提取物的情况下，将木香:诃子:姜的混合物分别以(1-3):(1-3):(1-3)的重量比进行混合。在特定的实施方式中，木香:诃子:姜可以以1:1:1、2:2:1、2:1:1、1:2:1或1:1:2的比例进行混合。在优选的实施方式中，木香:诃子:姜可以以2:2:1或2:1:1的比例进行混合，并且更优选地，木香:诃子:姜可以以2:2:1的比例进行混合。
在另一实施方式中，关于本发明的含有木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物，本发明的含有木香、诃子和姜中的至少两种的混合粗提物可通过以下获得：以相对于它们各自重量的约1倍体积至约30倍体积(w/v％)、优选5倍体积至15倍体积(w/v％)的量添加溶剂、优选水和乙醇的混合溶剂(例如50％至100％的乙醇)，所述溶剂选自水(包括蒸馏水)、C1-C4的低级醇(例如甲醇、乙醇、丁醇等)或其混合溶剂；分别在约20℃至约120℃、优选60℃至约100℃的温度下提取1-15h、优选1-6h，所述提取通过冷浸提取、热水提取、超声提取、回流提取或热提取等，优选回流提取进行；过滤；随后以上述的体积比混合各提取物，然后干燥。
在本发明的一个实施方式中，获得了含有木香和诃子的提取物的混合提取物或者含有木香和姜的提取物的混合提取物；以及含有木香、诃子和姜的提取物的混合提取物。
任选地，本发明的提取物可进一步含有选自于由以下所组成的组中的至少一种物质的提取物：芍药、柴胡、升麻、大黄、芡实、厚朴、桂皮、砂仁、白术、薏苡仁等。
因此，本发明包括用于制备混合提取物的方法，所述混合提取物含有木香、诃子和姜中的至少两种。
以上描述的制备方法仅仅是示例性方法，并且这些方法可通过基于本领域技术的各种方法进行适当地修改和使用。例如，通过对本领域技术人员而言是显而易见的修改可成功地实施根据本发明的非示例性提取方法。
对本领域普通技术人员而言将显而易见的是，通过稍后描述的说明，能够确认用于制备根据本发明的混合提取物的具体反应条件，所述混合提取物含有木香和诃子、木香和姜、或姜和诃子，或者所述混合提取物含有木香、诃子和姜，因此本文将省略对具体条件的详细说明。
[炎性肠病]
本发明涉及上述制备的含有木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物的预防、治疗和/或改善功能。
在本发明中，炎性疾病是指其特征在于由外部生理化学刺激或外部感染源(例如细菌、真菌、病毒、各种过敏原)的感染或其它原因引起的局部或全身性的生物保护反应的任何病症。这些反应可归因于伴随有一系列复杂的生理反应(例如相关酶(如iNOS、COX-2等)的激活、介质的分泌(例如NO、TNF-α、IL-6、IL-1β以及PGE2的分泌)、体液浸润、细胞迁移、组织破坏等)的各种炎症介质和免疫细胞的激活，并且在外部表现为例如红斑、疼痛、肿胀、发热、机体的某些功能恶化或丧失等的症状。
由于这些炎性疾病可具有急性、慢性、溃疡性、变应性或坏死性的性质，因此只要是包含在此类炎性疾病中的任何疾病，是否为急性、慢性、溃疡性、变应性或坏死性的都无关紧要。
另外，在本发明中，炎性疾病可包括炎性肠病。
术语“炎性肠病”(IBD)是指病因未知的侵袭消化道的慢性炎性疾病，其是导致长期的腹泻、黑粪症以及复发的顽固性疾病。
炎性肠病可主要分为通常称呼的溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)。尽管这两种疾病的临床特征不同，但两者都是慢性进展的，并且由于这些疾病的病因和病理生理学尚不清楚，因此被称为炎性肠病。
尽管炎性肠病通常分为溃疡性结肠炎和克罗恩病，但肠白塞病(在韩国相对常见的肠病)可能属于炎性肠病。除口腔溃疡、生殖器溃疡和眼部症状以外，白塞病还可侵袭许多器官，例如皮肤、血管、胃肠道、中枢神经系统、心脏和肺等。
术语“克罗恩病(CD)”和“溃疡性结肠炎(UC)”是病因未知的慢性炎性肠病。
与溃疡性结肠炎不同的是，克罗恩病可影响肠的任何部位。克罗恩病最突出的方面是肠壁上的颗粒状的红紫色水肿的膨大。随着炎症的发展，这些肉芽肿常常失去它们的局部边界而与周围的组织相结合。克罗恩病的主要临床特征是腹泻和肠梗阻。如同对溃疡性结肠炎而言的情况，克罗恩病的病程可为持续的、反复发作的、轻微的或严重的。然而，与溃疡性结肠炎不同的是，克罗恩病不能通过切除患病的肠段来治愈。大多数患有克罗恩病的患者在某些时候需要手术治疗，但是由于随后复发是普遍的，因此随后的药物治疗也是普遍的。
“溃疡性结肠炎(UC)”侵袭结肠。该疾病的进展可为持续的、反复发作的、轻微的或严重的。最早的病变是炎症性浸润，在利贝昆氏腺窝(crypts of Lieberkuhn)底部形成脓肿。这些扩张和破裂的隐窝的粘附往往通过从血液供应处分隔开底层粘膜而引起溃疡。该疾病的症状包括频繁且松散的粪便(主要由血液、脓液和粘液组成)，伴有痉挛、下腹部疼痛、直肠出血和稀疏粪便颗粒。急性的、严重的或慢性的以及持续性的溃疡性结肠炎可能需要切除整个结肠。UC的临床特征可为高度可变的，并且疾病的发作可为隐袭的或突然的，并且可伴有腹泻、里急后重和复发性直肠出血。由于该疾病在整个结肠中的暴发性发作，可能会出现危及生命的中毒性巨结肠症(megacolon)。肠以外的体征可包括关节炎、坏疽性脓皮病、葡萄膜炎以及结节性红斑。
因此，旨在使用含有木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物来治疗、预防和改善的炎性肠病包括：例如选自于由克罗恩病、溃疡性结肠炎、肠白塞病、肠结核以及腹泻所组成的组中的至少一种。
通过本发明的实施方式，观察到含有木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物具有以下作用：抑制肠上皮细胞中的单核细胞的粘附；抑制LPS诱导的炎性细胞因子(即TNF-α和IL-6)的产生；以及在葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的结肠炎动物模型和三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的克罗恩病动物模型中改善结肠长度和重量减轻的恢复以及腹泻和黑粪症的状况，从而确认了如下的特定功能。
(i)本发明的含有木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物具有抑制单核细胞对肠粘膜的浸润的作用。
已知在患有炎性肠病(IBD)的患者的肠粘膜中观察到了许多单核细胞的浸润。单核细胞也被称为单核白细胞，是存在于血液中的一类吞噬细胞，可分化为巨噬细胞或树突状细胞并且在控制组织的炎症反应以及免疫反应和稳态中起作用。这些单核细胞的浸润最终导致粘膜的破坏和溃疡，引起肠粘膜功能障碍和损伤。因此，抑制单核细胞浸润至肠粘膜中可为在预防或治疗粘膜中的炎症和溃疡方面的重要因素。
在本发明的一个实施方式中，证实了含有木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物具有优异的抑制肠上皮细胞中的单核细胞粘附的作用。
(ii)本发明的含有木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物具有抑制炎性细胞因子产生的作用。
单核细胞和淋巴细胞被认为参与炎性肠病(IBD)患者的病变中的粘膜损伤，并且由这些细胞产生的炎性细胞因子TNF-α、IL-6等引起肠炎症或溃疡，从而引起肠功能障碍和损伤。
TNF-α是在炎症反应开始时将嗜中性粒细胞诱导至炎症部位，引起且加重急性炎症反应的因子；而IL-6是由各种因子合成和分泌的代表性的炎性细胞因子，并在急性或慢性炎性疾病的发展和进展中起重要作用。
在本发明的一个实施方式中，证实了含有木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物具有抑制巨噬细胞的LPS诱导的炎性细胞因子(即TNF-α和IL-6)的产生的作用。
(iii)本发明的含有木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物在DSS炎性肠病动物模型和TNBS克罗恩病动物模型中具有改善作用。
在本发明的一个实施方式中，制备了DSS诱导的炎性肠病动物模型和TNBS诱导的克罗恩病动物模型，并使用这些动物观察了含有木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物对结肠炎和克罗恩病的改善作用，结果证实了：动物模型的结肠长度被恢复；以及对通过疾病活动指数(DAI)表示的腹泻、黑粪症和体重减轻的水平也具有优异的改善作用。另外，作为确认免疫疾病中的氧化应激的状态的结果，用混合提取物处理进行的处理显示出抑制了MPO的活性，从而证实了抑制氧化应激的优异作用。
(iv)在一个实施方式中，当含有木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物是通过50％乙醇提取获得的或者是以至少两种物质的特定混合比例获得的提取物时，该混合提取物显示出优异的细胞增殖和抑制一氧化氮(NO)的产生的作用。
对于提取天然物质中的用于治疗炎性肠病的成分而言，提取溶剂可能是重要的，并且由于随着提取溶剂的不同，所提取的活性成分的量和不需要的成分的提取之间有所差异，因此选择合适的提取溶剂可能是重要的技术特征。
在本发明的一个实施方式中，确认改变提取溶剂中的乙醇的浓度而提取的混合提取物的细胞毒性和抑制NO的产生的作用的结果证实了：50％的乙醇提取物未显示出细胞毒性并且促进细胞增殖，而76％的乙醇提取物抑制NO的产生。
另外，在混合提取物的情况下，取决于各种天然物质或草药物质的混合比例，可能在获得的活性成分和获得的作用方面存在多种差异。因此，对可使作用最大化而同时使毒性最小化的混合比例的发现也是技术上的重要特征。
在本发明的一个实施方式中，证实了取决于木香和诃子或姜的混合比例(w/w)的混合提取物具有以下作用：抑制NO(NO是细胞毒性和炎症的主要原因)的产生；以及抑制单核细胞浸润(其导致溃疡)。并且证实了当木香:诃子或姜以约1:1的比例进行混合时，混合提取物表现出优异的作用。
在本发明的另一实施方式中，证实了取决于木香、诃子和姜的混合比例(w/w)的混合提取物具有以下作用：抑制单核细胞浸润(其导致溃疡)；抑制炎性细胞因子的产生；以及在DSS炎性肠病动物模型和TNBS克罗恩病动物模型中改善结肠炎。并且证实了当木香:诃子:姜以约2:2:1的比例进行混合时，混合提取物表现出优异的作用。
(v)在本发明的一个实施方式中，检测了取决于有效的给予剂量的木香和诃子或姜中的至少两种的混合提取物在DSS炎性肠病动物模型以及TNBS克罗恩病动物模型中改善结肠炎的作用。
作为确认取决于给予剂量的混合提取物的作用的结果，随着给予剂量的增加，DSS炎性肠病动物模型和TNBS克罗恩病动物模型两者均显示出每结肠长度的结肠重量、疾病活动指数(DAI)和结肠长度的恢复，并且当将该混合提取物以400mg/kg的浓度进行给予时，观察到了改善结肠炎的最优异的作用。
就此而言，本发明包括含有木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物利用预防、治疗和/或改善炎性肠病的功能的所有各种应用。
[药物组合物]
在特定的实施方式中，本发明涉及用于预防或治疗炎性肠病的药物组合物，所述药物组合物含有作为活性成分的木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物。
本发明中定义的预防和治疗炎性肠病的作用的特征在于，通过如下而发挥所述作用：抑制肠粘膜中的单核细胞的浸润、抑制炎性细胞因子(即TNF-α和IL-6)的产生；恢复由结肠炎引起的结肠长度、重量减轻；减轻腹泻和黑粪症。
另外，本发明提供了用于治疗和预防炎性疾病的方法，所述方法包括向患有炎性肠病的受试者给予所述药物组合物。
用于预防和治疗炎性疾病的药物组合物优选以相对于所述组合物的总重量而言的0.1wt％至50wt％的量含有本发明的混合提取物。更优选地，所述混合提取物以50mg/kg至400mg/kg、并且最优选200mg/kg至400mg/kg的浓度使用。
含有本发明的混合提取物的药物组合物可进一步含有在药物组合物的制备中常规使用的合适的载体、赋形剂和稀释剂。
另外，所述含有混合提取物的组合物可与已经使用的药物(例如甾体类药物、抗组胺剂、抗炎剂以及抗生素等)联合配制或者使用。
根据常规方法可分别将含有混合提取物的药物组合物配制成以下形式：口服制剂，例如粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂、气雾剂等；外用制剂；栓剂；无菌注射溶液。在本发明中，可优选将所述药物组合物配制成用于口服给予的制剂。
作为载体、赋形剂和稀释剂，可包含在含有本发明提取物的组合物中的载体、赋形剂和稀释剂可包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、海藻酸盐/酯、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁以及矿物油。
在制剂的情况下，通常使用诸如填充剂、增量剂(extender)、粘合剂、湿润剂、崩解剂、表面活性剂等的稀释剂或赋形剂。
用于口服给予的固体制剂可包括片剂、丸剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂等，并且此类固体制剂可通过将至少一种赋形剂(例如淀粉、碳酸钙、蔗糖或乳糖、明胶等)混合在上述化合物中来制备。另外，除了单纯的赋形剂之外，还使用润滑剂，如硬脂酸镁和滑石。用于口服给予的液体制剂可包括悬浮剂、内用溶液、乳剂、糖浆剂等。除了通常用作稀释剂的水和液体石蜡之外，可包括各种赋形剂，例如湿润剂、甜味剂、调味剂、防腐剂等。
用于肠胃外给予的制剂可包括无菌水性溶液、非水性溶液、混悬剂、乳剂、冷冻干燥制剂以及栓剂。非水性溶液和混悬剂的实例可包括丙二醇、聚乙二醇、植物油(如橄榄油)、可注射酯(如油酸乙酯)等。可使用Witepsol、聚乙二醇、吐温61、可可脂、laurinium、甘油明胶等作为栓剂的基质。
本发明的组合物可口服或胃肠外给予，并且该组合物优选口服给予，但给予方法不具体限定于此。
待使用的本发明的组合物的量可根据患者的年龄、性别以及体重而变化，但可处于0.0001mg/kg至400mg/kg的范围内。根据给予途径、疾病的严重程度、性别、体重、年龄等，也可增加或减少给予剂量。可每天一次或分成数个剂量给予该组合物。因此，给予剂量不应以任何方式对本发明的范围进行限制。
在本发明的一个实施方式中，确认了取决于含有木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物的有效给予剂量的在DSS炎性肠病动物模型和TNBS克罗恩病动物模型中改善结肠炎的作用。结果证实了DSS炎性肠病动物模型和TNBS克罗恩病动物模型两者均显示出随着给予剂量的增加，结肠长度、疾病活动指数(DAI)和每结肠长度的结肠重量恢复至正常水平，并且当将混合提取物以400mg/kg的浓度给予时，观察到了最佳的改善结肠炎的作用。
可通过各种途径将所述药物组合物给予至哺乳动物(例如大鼠、小鼠、家畜、人等)。可期望所有的给予方法，例如静脉内给予、腹膜内给予、肌内给予、动脉内给予、口服给予、心内给予、髓内给予、鞘内给予、经皮给予、肠内给予、皮下给予、舌下给予或局部给予，但给予方法是不受限制的。
本发明的组合物的药物剂型还可以以药学上可接受的盐的形式使用，并且其还可单独使用或与其它药学上的活性化合物组合使用以及以合适的聚集物(aggregates)使用。另外，为了预防或治疗炎性肠病或相关的并发症，本发明的药物组合物可单独使用或者与使用手术、放射疗法、激素疗法、化学疗法或生物反应调节剂的方法组合使用。
[健康功能食品]
同时，在另一特定的实施方式中，本发明涉及含有混合提取物作为活性成分的用于预防或改善炎性肠病的健康功能食品，所述混合提取物含有木香、诃子和姜中的至少两种。
功能可分为物理功能和生理功能，并且当向普通食品中添加含有木香、诃子和姜中的至少两种的本发明的混合提取物时，普通食品的物理性质和生理功能将得到改善。例如，可制备用于预防或改善以下疾病的含有木香和诃子、木香和姜或木香和姜的混合提取物的健康功能食品：克罗恩病、溃疡性结肠炎、肠白塞病、肠结核和肠炎、腹泻等。此外，功能食品等可使用其进行制备。
换言之，在各种功能食品或健康功能食品的制备中，可将包括木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物的化合物或其药学上可接受的盐用作食品成分或者用作添加剂和佐剂。
在本发明中，所述食品的种类并不受具体的限制。其中可添加木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物的食品的实例可包括各种食品、粉末、颗粒、片剂、胶囊、糖浆、饮品、胶、巧克力、糖果、点心、茶、维生素复合物等，并且可包括常规意义上所有的健康功能食品。
本发明的健康饮品组合物除了以指定的比例含有所述混合提取物作为必要成分之外，对液体成分没有具体的限制，并且可如常规饮品一样含有各种调味剂或天然糖类等作为额外成分。天然糖类的实例为：单糖，比如葡萄糖、果糖等；二糖，比如麦芽糖、蔗糖等；以及多糖，比如糊精、环糊精等；以及糖醇，比如木糖醇、山梨糖醇、赤藓糖醇等。作为调味剂，除了上述之外，可有利地使用天然甜味剂(索马甜(thaumatin)、甜叶菊提取物(例如莱苞迪甙A、甘草甜素等))和合成甜味剂(糖精、阿斯巴甜等)。每100mL本发明的组合物的天然糖类的比例通常为约1g至20g、优选约5g至12g。
除上述之外，本发明的组合物可含有各种营养素、维生素、矿物质(电解质)、调味剂(如合成调味剂和天然调味剂)、着色剂和增稠剂(奶酪、巧克力等)、果胶酸及其盐、海藻酸及其盐、有机酸、保护性胶体型增稠剂、pH调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、醇、碳酸饮品中使用的碳酸化剂等。此外，本发明的组合物可含有用于生产天然果汁、果汁饮料和蔬菜饮料的果肉。这些成分可独立使用或组合使用。此类添加剂的比例不是很关键，但该比例通常在每100重量份本发明的组合物的约0重量份至约20重量份的范围内进行选择。
另外，由于本发明的混合提取物具有含有木香、诃子和姜中的至少两种的草药成分，因此即使长期用于疾病的治疗、改善和预防，该混合提取物也可安全使用。
如上所述，本发明包括利用有效量的木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物的所有各种应用，所述混合提取物表现出以下作用：抑制单核细胞对肠上皮细胞的粘附能力、抑制LPS诱导的炎性细胞因子(即TNF-α和IL-6)的产生；在葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的结肠炎动物模型和2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的克罗恩病动物模型中恢复结肠长度，改善重量减轻、腹泻、以及黑粪症的状况；以及表现出优异的抗炎作用。
实施例
在下文中，将参考实施例对本发明进行更详细地描述。对本领域技术人员而言显而易见的是，这些实施方式仅用于说明的目的，并不能将本发明的范围解释为受这些实施例的限制。
实验材料
1.材料和样品提取
分别将木香(5g)、姜(5g)和诃子(5g)中的至少两种混合，然后向其中加入样品重量的10倍量的50％乙醇水溶液(100mL)，使其经受95℃下的回流提取2小时，并将所得的提取物过滤，冷冻干燥，并以粉末状储存在冰箱中，且用作实验的样品。制备如下来进行实验：木香和姜的混合提取物、木香和诃子的混合提取物、姜和诃子的混合提取物；以及木香、姜和诃子的混合提取物。
2.试剂和仪器
(1)用于测量对肠上皮细胞中的单核细胞粘附的抑制作用的试剂和仪器
使用人肠上皮细胞系HT-29细胞(美国典型培养物保藏中心(American TypeCulture Collections)，Rockville，MA，USA)、人单核细胞系U937细胞(ATCC，Rockville，MA，USA)、胎牛血清(FBS)、青霉素/链霉素、2',7'-双(2-羧基乙基)-5(6)-羧基荧光素乙酰氧基甲基酯(BCECF/AM)、5-氨基水杨酸(5-ASA)以及用于测量的酶标仪(TECAN，Gr，Austria)。
(2)用于抗炎测量的试剂和仪器
使用巨噬细胞(美国典型培养物保藏中心，Rockville，MA，USA)、5-氨基水杨酸(5-ASA)、地塞米松、TNF-αELISA试剂盒(R&D Systems，USA)、IL-6ELISA试剂盒(R&D Systems，USA)以及用于测量的酶标仪(TECAN，Gr，Austria)。
(3)用于制备DSS动物模型的试剂
使用C57BL/6雌性小鼠(17g至19g，6周龄，DBL公司(Eumseong，韩国))、5-氨基水杨酸(5-ASA)、羧甲基纤维素(CMC)以及葡聚糖硫酸钠(DSS)。
(4)用于制备TNBS动物模型的试剂
使用ICR雌性小鼠(17g至19g，6周龄，DBL公司(Eumseong，韩国))、5-氨基水杨酸(5-ASA)和2,4,6-三硝基-苯磺酸(TNBS)。
实验方法
1.细胞活力测试(细胞毒性测试)
根据测试的目的，将细胞以一定的数量铺板。24小时后，用不含FBS的培养基更换培养基，培养24小时，然后用准备好的待测试提取物处理细胞。用所述物质处理24小时后，移除培养基，然后将细胞用3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物(MTT)试剂(5mg/mL)以40μL/孔的量进行处理，并进一步培养4小时。4小时后，移除培养基，并且各加入1mL二甲亚砜(DMSO，Amresco，0231-500ML)，振荡10分钟，并从96孔中收集200μL，且于540nm处测定吸光度。关于细胞毒性水平，将在其中溶解所述物质的溶剂表示成基于对照组的吸光度强度的百分比。
2.抑制NO的产生的作用
在37℃、5％CO2条件下，在处于100mm/60.1cm2培养皿中的连同10％胎牛血清(FBS)、1％抗生素-抗真菌剂(GIBCO，货号：15240-062)一起的Dulbecco改良的Eagle培养基(DMEM)中培养人肠上皮细胞系HT-29细胞(美国典型培养物保藏中心，Rockville，MA，USA)。当HT-29细胞生长至80％以上汇合时，将细胞以105个细胞/孔的浓度分到6孔板中，培养至80％以上汇合，并且将培养基移除并用含有提取物(已制备成适当的浓度)的新鲜培养基进行更换，并进一步培养48小时。将细胞上清液收集并用作待测样品。根据制造商的指南使用总的NO/亚硝酸盐/硝酸盐ELISA试剂盒(R&D systems，货号KGE001)进行测试分析。简而言之，该测试按以下顺序进行：将用样品处理后生长的细胞培养物以50μL/孔的量分到96孔板中，用Griess试剂进行处理，在室温下反应10分钟，并在540nm处测定吸光度。
3.抑制肠上皮细胞中的单核细胞粘附能力的作用
在含有胎牛血清(FBS)和1％青霉素/链霉素的RPMI 1640中培养人肠上皮细胞系HT-29细胞(美国典型培养物保藏中心，Rockville，MA，USA)和人单核细胞系U937细胞(ATCC，Rockville，MA，USA)，并且将细胞系维持在37℃、95％空气和5％CO2的环境下。
单核细胞-肠上皮细胞的粘附使用U937细胞进行测量，该U937细胞已用2',7'-双(2-羧基乙基)-5(6)-羧基荧光素乙酰氧基甲基酯(BCECF/AM，10μg/mL)在37℃下标记30分钟。将已在48孔板中培养24小时的HT-29细胞(2×106个细胞/孔)用提取物(100μg/mL)处理，同时用TNF-α(100ng/mL)处理，并培养24小时。
特别地，使用20mM 5-氨基水杨酸(5-ASA)作为阳性对照。然后，将HT-29细胞与U937细胞(已用BCECF/AM在37℃下标记了30分钟)(5×105个细胞/孔)一起共培养。移除未附着的U937细胞，并用PBS洗两次。使用0.1％的Triton X-100(溶解在0.1mol/L Tris中)分解U937细胞所附着的HT-29细胞。使用酶标仪(TECAN，Gr，Austria)利用485nm和520nm处的发光测量这些裂解产物的荧光。
4.抑制TNF-α的产生的作用
将在24孔板中培养的巨噬细胞(美国典型培养物保藏中心，Rockville，MA，USA)用LPS(1μg/mL)预处理1小时，用提取物(100μg/mL)、20mM 5-ASA(100μg/mL)和20μM地塞米松处理，并培养24小时，并且将细胞的上清液用于该实验。首先，向96孔ELISA板中加入TNF-α的捕获抗体，并使其反应过夜。将板用含有0.05％Tween-20的1×PBS(PBS-T)洗涤6次，并用含有2％BSA的1×测定稀释液在室温下封闭1小时。将板用1×PBS-T洗涤6次，且向其中加入上清液或TNF-α标准蛋白，并使其在室温下反应2小时。将板再次用1×PBS-T洗涤6次，向其中加入检测抗体，并使其在室温下反应2小时。将板再次用1×PBS-T洗涤6次，向其中加入抗生物素蛋白-HRP溶液，并使其在室温下反应30分钟。将板再次用1×PBS-T洗涤6次，向其中加入TMB底物溶液，并使其在室温下反应最后30分钟，并且向其中加入反应停止溶液(1MH3PO4)以停止反应。关于板的反应的水平，使用酶标仪(TECAN，Gr，Austria)在450nm处测量吸光度。
5.抑制IL-6的产生的作用
将在24孔板中培养的巨噬细胞(美国典型培养物保藏中心，Rockville，MA，USA)用LPS(1μg/mL)预处理1小时，用提取物(50μg/mL)、20mM 5-ASA和20μM地塞米松处理，并培养24小时，并将上清液用于该实验。首先，向96孔ELISA板中加入IL-6的捕获抗体，并使其反应过夜。将板用含有0.05％Tween-20的1×PBS(PBS-T)洗涤6次，并用含有2％BSA的1×测定稀释液在室温下封闭1小时。
将板用1×PBS-T洗涤6次，并向其中加入上清液或IL-6标准蛋白，并使其在室温下反应2小时。
将板再次用1×PBS-T洗涤6次，向其中加入检测抗体，并使其在室温下反应2小时。将板再次用1×PBS-T洗涤6次，向其中加入抗生物素蛋白-HRP溶液，并使其在室温下反应30分钟。将板再次用1×PBS-T洗涤6次，向其中加入TMB底物溶液，并使其在室温下反应最后30分钟，并向其中加入反应停止溶液(1M H3PO4)以停止反应。关于板的反应的水平，使用酶标仪(TECAN，Gr，Austria)在450nm处测量吸光度。
6.通过测量髓过氧化物酶(MPO)活性的抑制氧化应激的作用
将200μL裂解缓冲液加入100mg尸体解剖时收集的结肠组织中并进行均质，并且使用通过在10,000rpm下离心20分钟获得的上清液。首先，向96孔ELISA板中加入MPO的捕获抗体，并使其反应过夜。将板用含有0.05％Tween-20的1×PBS(PBS-T)洗涤6次，并用含有2％BSA的1×测定稀释液在室温下封闭1小时。将板用1×PBS-T洗涤6次，并向其中加入所制备的上清液或MPO标准蛋白，并且使其在室温下反应2小时。将板再次用1×PBS-T洗涤6次，向其中加入检测抗体，并使其在室温下反应2小时。将板再次用1×PBS-T洗涤6次，向其中加入链霉亲和素-HRP溶液，并使其在室温下反应30分钟。将板再次用1×PBS-T洗涤6次，向其中加入TMB底物溶液，并使其在室温下反应最后30分钟，并且向其中加入反应停止溶液(1MH3PO4)停止反应。关于板的反应的水平，使用酶标仪(TECAN，Gr，Austria)在450nm处测量吸光度。
7.在DSS动物模型中改善结肠炎的作用
为了构建炎性肠病的实验模型，从DBL公司(Eumseong，韩国)购买了6周龄的C57BL/6雌性小鼠(17g至19g)，并使这些小鼠随意地获取固体饲料和水，并且使其适应受控的环境(具有恒定的湿度(50％)、恒定的温度(22℃)和12小时光照-黑暗循环)1周。适应1周后，将小鼠分为正常对照组、结肠炎诱导组、对照药物治疗组(5-ASA 200mg/kg)和提取物治疗组。将对照药物(5-ASA)和提取物溶解于0.5％的羧甲基纤维素(CMC)中，然后随着3％的葡聚糖硫酸钠(DSS)每天口服给予一次，共7天；而正常对照组和结肠炎诱导组口服给予0.5％CMC。使结肠炎诱导组、对照药物治疗组和提取物治疗组随意地获取3％DSS，共1周；而正常对照组随意地获取水。然后，在第8天处死小鼠，从盲肠到紧接在肛门前的区域将它们各自的结肠切下，并且检查切下的结肠的长度和外观，从而确定腹泻、黑粪症和重量减轻的程度，并且根据标准对结果进行评分。
8.在TNBS动物模型中改善克罗恩病的作用
为了构建炎性肠病的实验模型，从DBL公司(Eumseong，韩国)购买了7周龄的ICR雌性小鼠(25g至27g)，并使这些小鼠随意地获取固体饲料和水，并且使其适应受控的环境(具有恒定湿度(50±10％)、恒定温度(22±2℃)和12小时光照-黑暗循环)1周。适应1周后，将动物分为正常对照组、结肠炎诱导组、对照药物治疗组(5-ASA 200mg/kg)和提取物治疗组(200mg/kg)。在注射TNBS之前使小鼠禁食24小时。将结肠炎诱导组、对照药物治疗组和提取物治疗组中的小鼠用醚轻微麻醉，并使用PE探子以2cm-3cm的深度将溶于50％乙醇中的TNBS(0.5mg)注射到肛门中。注射后，将其头部朝下、并将尾部抬起约1min，使得被注射的溶液不从肛门流出，从而使尽可能多的药物被肠吸收。将对照药物(5-ASA)和提取物溶解于0.5％的羧甲基纤维素(CMC)中，并每天口服给予一次，共5天。正常对照组和结肠炎诱导组口服给予0.5％CMC。口服给予5天后，使小鼠禁食至第二天并处死。从盲肠到紧接在肛门前的区域将它们各自的结肠切下，并检查切下的结肠的长度和外观，从而确定便秘、肠水肿和重量减轻的程度，并根据标准对结果进行评分。
实施例1：木香和姜的混合提取物的作用的确认
1-1：抑制单核细胞的浸润的作用
确认含有木香和姜的本发明的混合提取物抑制单核细胞的浸润的作用。
结果是，粘附至HT-29肠上皮细胞的经荧光标记的U937细胞通过TNF-α的刺激显著增加，而其被对照药物(5-ASA)抑制了18.93％。在木香的单一提取物(蒸馏水)和姜的单一提取物的情况下，抑制作用分别显示为25.21％和12.36％。但是，在本发明的混合提取物的情况下，抑制率为44.15％，因此证实了本发明的混合提取物具有与对照药物相比等同或更高的作用(表1，图1)。另外，本发明的混合提取物显示出比姜的单一提取物和木香的单一提取物(蒸馏水)更高的作用。通过这些结果证实了所述提取物比对照药物更有效地抑制了单核细胞的浸润。
表1
类别 浓度 抑制粘附的作用(％)
5-ASA(阳性对照) 20mM 18.93
木香(蒸馏水) 100μg/mL 25.21
姜 100μg/mL 12.36
木香+姜 100μg/mL 44.15
1-2：抑制炎性细胞因子的产生的作用
尝试确认含有木香和姜的本发明的混合提取物抑制炎性细胞因子的产生的作用。
(1)抑制TNF-α的产生的作用
作为检测TNF-α浓度的结果证实了，与用单独的LPS处理的组相比，样品组和对照组中的TNF-α表达水平明显较低。在将5-ASA用作对照组的情况下，显示出对TNF-α的产生抑制了11.09％，而地塞米松对TNF-α的产生抑制了38.46％。
在木香的单一提取物(蒸馏水)和姜的单一提取物的情况下，抑制作用分别显示为8.76％和18.87％，而本发明的提取物显示出对TNF-α的产生抑制了65.9％(表2，图2)。
表2
类别 浓度 抑制TNF-α的作用(％)
5ASA 20mM 11.09
地塞米松 20μM 38.46
木香(蒸馏水) 100μg/mL 8.76
姜 100μg/mL 18.87
木香+姜 100μg/mL 65.90
(2)抑制IL-6的产生的作用
另外，作为检测IL-6浓度的结果证实了，与用单独的LPS处理的组相比，样品组和对照组中的IL-6表达水平明显较低。在将5-ASA用作对照组的情况下，显示出对IL-6的产生抑制了52.78％，而地塞米松显示出对IL-6的产生抑制了49.89％。
在木香的单一提取物(蒸馏水)和姜的单一提取物的情况下，抑制作用分别显示为5.40％和19.53％，而本发明的提取物显示出对IL-6的产生抑制了94.05％(表3，图3)。
表3
类别 浓度 抑制IL-6的作用(％)
5ASA 20mM 52.78
地塞米松 20μM 49.89
木香(蒸馏水) 100μg/mL 5.40
姜 100μg/mL 19.53
木香+姜 100μg/mL 94.05
由这些结果证实了本发明的提取物对炎性细胞因子的抑制作用大于对照组。另外，显示出本发明的混合提取物的抑制作用高于姜的单一提取物和木香的单一提取物(蒸馏水)的抑制作用。作为抑制IBD相关的细胞因子的产生的体外实验的结果，由这些结果证实了本发明的混合提取物显示出具有优异的抗炎作用。
1-3：在DSS动物模型中的改善结肠炎的作用
含有木香和姜的本发明的混合提取物在DSS炎性肠病动物模型中显示出具有治疗和改善结肠炎的作用。
由结肠长度的检查结果证实了，结肠炎诱导组中的结肠长度显示出比正常组短约1.7cm。在对照药物治疗组中，结肠长度相比于结肠炎诱导组增加了3.6％。相比于结肠炎诱导组，木香的单一提取物显示出结肠长度增加了8.22％；而相比于结肠炎诱导组，用本发明的混合提取物治疗的组显示出结肠长度增加了12.8％(表5，图4)。
另外，作为通过观察外观而表示的疾病活动指数的结果(表4)，在结肠炎诱导组中发现腹泻和黑粪症，因此显示出8.25的较高分数；而相比于结肠炎诱导组，对照药物治疗组显示出改善了45％的作用。在木香的单一提取物的情况下，与结肠炎诱导组相比，作用约为57.57％；而与结肠炎诱导组相比，用本发明的混合提取物治疗的组具有78％的作用，显示出与对照药物治疗组和单一提取物治疗组等同或更高的改善作用(表5，图5)。
表4
分数 重量减轻(％) 粪便浓度 出血程度
0 无 中度 无
1 1-5
2 5-10 稀释的 潜在出血
3 10-20
4 >20 腹泻 重度出血
表5
类别 结肠长度 DAI
正常对照组 6.9 0.83
结肠炎诱导组 5.23 8.25
对照药物治疗组 5.42 4.50
木香(蒸馏水) 5.42 4.50
木香 5.66 3.50
木香+姜 5.90 1.75
此外，作为通过免疫染色检查并获得的肠粘膜组织的结果证实了：由于肠粘膜坏死，与正常动物的肠粘膜相比，DSS动物显示出更多的空白空间。
当向对照组给予时，证实肠粘膜部分地恢复，然而当与正常组相比时，仍然有一部分肠粘膜没有恢复。相比之下，当给予本发明的混合提取物时，证实了肠粘膜恢复到与正常组的肠粘膜类似的程度，因此发现本发明的混合提取物具有恢复受损的肠粘膜的优异作用(图6)。
另外，作为髓过氧化物酶(MPO)活性测定的结果，从而确定了免疫疾病中的氧化应激状态，在结肠炎诱导组中，MPO活性水平为约0.85，而对照药物治疗组和用木香的单一提取物治疗的组中的MPO活性分别降低了17.6％和23.5％。
与结肠炎诱导组相比，本发明的混合提取物显示出将MPO活性降低约52.9％的作用，证实了比起对照药物治疗组和用木香的单一提取物治疗的组，本发明的混合提取物具有抑制氧化应激的更优异作用(图7)。
通过这些结果，证实了含有木香和姜的本发明的混合提取物表现出优异的抗炎作用和改善结肠炎的作用，并因此可有效地用于预防和治疗炎性肠病。
进一步，为了鉴定显示出更佳作用的混合提取物的条件，通过改变溶剂浓度和混合比例来检测该作用。
1-4：取决于溶剂浓度的木香和姜的混合提取物的细胞毒性试验
(1)MTT测定
取决于溶剂中含有的乙醇的浓度，对含有木香和姜的本发明的混合提取物的细胞毒性进行比较。
结果证实了30％、50％和95％的乙醇提取物未显示出细胞毒性。特别地，与对照相比，50％的乙醇提取物显示出细胞活力增加约330％，并且促进细胞增殖(图8)。
证实了取决于乙醇的浓度，细胞毒性没有显著差异。其中，50％的乙醇提取物促进细胞增殖，并因此证实了在例如归因于炎症的细胞死亡的缺陷的情况下，50％的乙醇提取物对细胞增殖而言是有效的。
(2)抑制NO的产生的作用
进一步，取决于溶剂中含有的乙醇的浓度，对含有木香和姜的本发明的混合提取物抑制NO的产生的作用进行比较。
结果证实了30％的乙醇提取物对NO的产生显示出48％的抑制作用，而且50％的乙醇提取物和95％的乙醇提取物分别对NO的产生显示出76％和68％的抑制作用。这些结果证实了，相比于对照组(5-ASA)的37％的抑制作用，本发明的混合提取物对NO的产生具有更优异的抑制作用(图9)。
通过这些结果证实了，比起阳性对照组，取决于乙醇浓度的对NO的产生的抑制作用更优异。特别地，50％的乙醇提取物对NO的产生显示出最优异的抑制作用。
根据实施例1-4的结果，证实了使用50％乙醇溶剂的木香和姜的混合提取物促进细胞增殖而无细胞毒性，并且对NO的产生显示出最优异的抑制作用，将该混合提取物用于随后的实施例中，以便确认其作用。
1-5：取决于木香和姜的混合比例的细胞毒性测试
为了检测产生含有木香和姜的本发明的混合提取物的最优异作用的混合比例，通过改变木香和姜的混合比例来确认各混合提取物的细胞毒性。
结果证实了细胞毒性随着姜的比例增加而增加(图10)。特别地，当木香:姜的比率处于3:7至1:9的范围内时，细胞活力显示为仅60％，而当木香:姜的比率处于9:1至4:6的范围内时，细胞活力显示为70％以上。
另外，通过改变木香与姜的混合比例来检测各混合提取物对NO的产生的作用。
在混合提取物中，对NO的产生的抑制作用随着姜的比例增加而增加。其中，当木香:姜的比例在6:4至1:9的范围内时，对NO的产生的抑制作用被证实为70％以上(图11)。具体而言，优选地，当木香:姜的比率是6:4或5:5时，证实了在炎症中重要的NO的产生受到抑制。
1-6：取决于木香与姜的混合比例的对肠上皮细胞中的单核细胞粘附的抑制作用。
为了检测产生含有木香和姜的本发明的混合提取物的最优异作用的混合比例，通过改变木香和姜的混合比例来确认各混合提取物抑制单核细胞浸润的作用。
如图12所示，在其中的木香和姜的混合比例发生变化的混合提取物的情况下，证实了单核细胞的浸润随着姜的比例的增加而被抑制。还证实了当木香:姜的比例为5:5时，抑制作用为25.06％，而当木香:姜的比率为6:4时，抑制作用为32.5％。
当木香:姜的混合比率为6:4或5:5(即1:1)时，未显示出细胞毒性，但是显示出最优异的抑制NO的产生和抑制单核细胞浸润的作用。
实施例2：确认木香和诃子的混合提取物的作用
同时，本发明人使用木香和诃子的混合提取物进行了以下实验。
2-1：对肠上皮细胞中的单核细胞粘附的抑制作用
在本发明中，证实了木香和诃子的混合提取物对单核细胞浸润的作用。
通过TNF-α的刺激，粘附至HT-29肠上皮细胞的经荧光标记的U937细胞显著增加，而该细胞粘附被对照药物(5-ASA)抑制了19.94％。在木香的单一提取物(蒸馏水)的情况下，抑制作用显示为15.21％。但是，在本发明的混合提取物的情况下，抑制率为21.18％。因此证实了与对照药物相比，本发明的混合提取物具有等同或更高的作用(表6，图13)。
另外，与木香的单一提取物(蒸馏水)相比，本发明的混合提取物显示出具有更优异的作用。通过这些结果证实了：与对照药物相当，混合提取物有效地抑制单核细胞浸润。
表6
类别 浓度 抑制粘附的作用(％)
5-ASA(阳性对照) 20mM 18.93
木香(蒸馏水) 100μg/mL 25.21
木香+诃子 100μg/mL 49.36
2-2：抑制炎性细胞因子的产生的作用
(1)抑制TNF-α的产生的作用
作为检查本发明的木香和诃子的混合提取物对TNF-α的产生的抑制作用的结果证实了，与用单独的LPS处理的组相比，在样品组和对照药物治疗组中的TNF-α的表达水平显著降低。在用作对照药物的5-ASA的情况下，5-ASA将TNF-α的产生抑制了11.09％，而地塞米松将TNF-α的产生抑制了38.46％。
木香的单一提取物(蒸馏水)显示出8.76％的抑制作用，而本发明的混合提取物显示出对TNF-α的产生的抑制作用为62.71％(表7，图14)。
表7
类别 浓度 抑制TNF-α的作用(％)
5-ASA(阳性对照) 20mM 11.09
地塞米松(阳性对照) 20μM 38.46
木香(蒸馏水) 100μg/mL 8.76
木香+诃子 100μg/mL 62.71
(2)抑制IL-6的产生的作用
作为进一步检测IL-6浓度的结果证实了，与用单独的LPS处理的组相比，样品组和对照药物组中的IL-6的表达水平显著降低。在用作对照药物的5-ASA的情况下，5-ASA将IL-6的产生抑制了67.68％，而地塞米松将IL-6的产生抑制了49.89％。
木香的单一提取物(蒸馏水)显示出7.48％的抑制作用，而本发明的混合提取物显示出对IL-6的产生的抑制作用为95.19％(表8，图15)。
表8
类别 浓度 抑制IL-6的作用(％)
5-ASA(阳性对照) 20mM 52.78
地塞米松(阳性对照) 20μM 49.89
木香(蒸馏水) 100μg/mL 5.40
木香+诃子 100μg/mL 95.08
2-3：在DSS动物模型中的改善结肠炎的作用
尝试在DSS炎性肠病动物模型中检测本发明的木香和诃子的混合提取物治疗和改善结肠炎的作用。
由检测结肠长度的结果证实了，结肠炎诱导组中的结肠长度显示出比正常组的结肠长度短约1.7cm。在对照药物治疗组中，与结肠炎诱导组相比，结肠长度增加了3.6％。与结肠炎诱导组相比，木香的单一提取物显示出结肠长度增加了8.22％；而与结肠炎诱导组相比，用本发明的混合提取物治疗的组显示出结肠长度增加了10.5％(表9，图16A)。
表9
类别 结肠长度(cm) DAI
正常对照组 6.9 67.68
结肠炎诱导组 5.23 49.89
对照药物治疗组 5.42 7.48
木香(蒸馏水) 5.42 95.19
木香+诃子 5.78 4.5
另外，作为通过观察外观而表示的疾病活动指数的结果，在结肠炎诱导组中发现腹泻和黑粪症，因此显示出8.25的较高分数。而与结肠炎诱导组相比，对照药物治疗组显示出45％的改善作用。与结肠炎诱导组相比，本发明的混合提取物显示出45％的改善作用，因此显示出与对照药物治疗组等同的改善作用(表9，图16B)。
作为用于确定免疫疾病中的氧化应激状态的髓过氧化物酶(MPO)活性测定的结果，在结肠炎诱导组中，MPO活性水平为约0.9，而对照药物处理组中的MPO活性降低了22％。用本发明的混合提取物治疗的组显示出使MPO活性降低约50％的作用，因此显示出抑制氧化应激的更优异的作用(图17)。
2-4：在TNBS动物模型中改善克罗恩病的作用
使用ICR雌性小鼠(17g至19g，6周龄，DBL公司(Eumseong，韩国)、5-氨基水杨酸(5-ASA)和2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)。
检测了本发明的木香和诃子的混合提取物在TNBS克罗恩动物模型中治疗和改善克罗恩病的作用。
作为检测每结肠长度的结肠重量的结果证实了，克罗恩病诱导组具有约37mg/cm，因此与正常组相比，显示出约4mg/cm-5mg/cm的增加。与克罗恩病诱导组相比，对照药物治疗组显示出几乎没有差异，且这个结果证实了对照药物在降低增厚的肠壁方面是没有效果的。
相比之下，在本发明的木香和诃子的混合提取物的情况下，证实了与克罗恩病诱导组相比，每结肠长度的结肠重量减少约16％，并且该结果证实了本发明的混合提取物在降低由克罗恩病引起的增厚的肠壁方面是有效的(图18A)。
另外，作为通过观察外观而表示的疾病活动指数的结果，在克罗恩病诱导组中发现腹泻和黑粪症，因此显示出7的较高的分数；而与克罗恩病诱导组相比，对照药物治疗组显示出7％的轻微的改善作用。然而，与克罗恩病诱导组相比，本发明的混合提取物显示出45％的改善作用，因此显示出比对照药物治疗组更优异的改善作用(图18B)。
作为用于确定免疫疾病中的氧化应激状态的髓过氧化物酶(MPO)活性测定的结果，在克罗恩病诱导组中，MPO活性水平为约0.38，而对照药物组中MPO活性减少了15％。与克罗恩病诱导组相比，经本发明的混合提取物治疗的组显示出使MPO活性降低约21％的作用，因此显示出与对照药物治疗组等同或更高的抑制氧化应激的作用(图18C)。
通过这些结果证实了，本发明的木香和诃子的混合提取物显示出优异的抗炎作用和改善克罗恩病的作用，并因此可将该混合提取物有效地用于预防或治疗炎性肠病。
实施例3：确认姜和诃子的混合提取物的作用
同时，本发明人使用姜和诃子的混合提取物进行了以下实验。
3-1：对肠上皮细胞中的单核细胞粘附的抑制作用
在本发明中，确认了姜和诃子的混合提取物抑制单核细胞浸润的作用。
通过TNF-α的刺激，粘附至HT-29肠上皮细胞的经荧光标记的U937细胞显著增加，而该粘附被对照药物(5-ASA)抑制了18.93％。在姜或诃子的单一提取物的情况下，抑制作用分别显示为12.35％和14.55％。但是，在本发明的混合提取物的情况下，抑制率为31.76％。因此证实了与对照药物相比，本发明的混合提取物具有等同或更高的作用(表10，图19)。
另外，与单独的姜或诃子的单一提取物相比，本发明的混合提取物显示出优异的作用。通过这些结果证实了：与对照药物相当，所述混合提取物可有效地抑制单核细胞浸润。
表10
类别 浓度 抑制粘附的作用(％)
5-ASA(阳性对照) 20mM 18.93
姜 100μg/mL 12.35
诃子 100μg/mL 14.55
姜+诃子 100μg/mL 31.76
3-2：抑制炎性细胞因子的产生的作用
作为检测本发明的姜和诃子的混合提取物对IL-6的浓度的影响的结果证实了，与用单独的LPS处理的组相比，在样品组和对照药物治疗组中，IL-6的表达水平显著降低。作为对照药物使用的5-ASA显示出将IL-6的产生抑制了50.98％。
尽管姜或诃子的单一提取物分别显示出18.87％和19.88％的抑制作用，但是本发明的提取物将IL-6的产生抑制了76.55％(表11，图20)。
表11
类别 浓度 抑制IL-6的作用(％)
5-ASA(阳性对照) 20mM 50.98
姜 100μg/mL 18.87
诃子 100μg/mL 19.88
姜+诃子 100μg/mL 76.55
3-3：在DSS动物模型中改善结肠炎的作用
尝试在DSS炎性肠病动物模型中确认姜和诃子的混合提取物治疗和改善结肠炎的作用。
由检查结肠长度的结果证实了，结肠炎诱导组中的结肠长度显示出与正常组相比减少约2cm。而当给予本发明的混合提取物时，结肠长度与结肠炎诱导组相比增加了约9.2％(表12，图21A)。
另外，作为通过观察外观而表示的疾病活动指数的结果，在结肠炎诱导组中发现腹泻和黑粪症，因此显示出7.25的较高的分数。用本发明的混合提取物治疗的组的分数为4.75，因此显示出改善作用(表12，图21B)。
另外，作为检测每结肠长度的结肠重量的结果证实了结肠炎诱导组为约32mg/cm，因此与正常组相比，显示出约9mg/cm的增加。在用本发明的混合提取物治疗的组中，证实了与结肠炎诱导组相比，每结肠长度的结肠重量略微降低，并且这个结果证实了本发明的混合提取物在改善降低增厚的肠壁方面是有效的(表12，图12C)。
表12
类别 结肠长度(cm) DAI 每面积的重量
正常对照组 7.42±0.1 0 22.25±0.81
结肠炎诱导组 5.44±0.12 7.25±0.25 31.51±1.2
对照药物治疗组 5.31±0.16 6.88±0.44 30.66±0.76
姜+诃子 5.93±0.4 4.75±0.25 29.12±0.55
3-4：在TNBS动物模型中改善克罗恩病的作用
使用ICR雌性小鼠(17g至19g，6周龄，DBL公司(Eumseong，韩国)、5-氨基水杨酸(5-ASA)和2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)。
在TNBS克罗恩病动物模型中确认了本发明的姜和诃子的混合提取物治疗和改善克罗恩病的作用。
作为检测结肠长度的结果证实了，在用本发明的混合提取物治疗的组中，相比于克罗恩病诱导组，结肠长度增加(表13，图22A)。
另外，作为检测每结肠长度的结肠重量的结果证实了，克罗恩病诱导组中的每结肠长度的结肠重量为约74mg/cm，因此与正常组相比，显示出约49mg/cm的增加。与克罗恩病诱导组相比，对照药物治疗组显示出约6.5mg/cm的差异，这说明了对照药物在降低增厚的肠壁方面是略微有效的。
相比之下，与克罗恩病诱导组相比，用本发明的姜和诃子的混合提取物治疗的组显示出约23％的减少，这证实了本发明的混合提取物在改善由克罗恩病引起的增厚的肠壁方面是有效的(表13，图22B)。
另外，作为通过观察外观而表示的疾病活动指数的结果，在克罗恩病诱导组中发现腹泻和黑粪症，因此显示出约11的较高的分数；而与克罗恩病诱导组相比，对照药物治疗组显示出与克罗恩病诱导组相比9％的微小水平的改善作用。相比之下，用本发明的混合提取物处理的组显示出约27％的改善作用，因此显示出比对照药物治疗组明显更高的作用(表13，图22C)。
表13
类别 结肠长度(cm) DAI 每面积的重量
正常对照组 9.64±0.54 0 25.75±1.51
结肠炎诱导组 7.92±0.56 11.20±0.89 74.12±7.71
对照药物治疗组 8.33±0.22 10.56±1.40 67.67±9.30
姜+诃子 8.75±0.25 8.33±0.97 57.49±4.46
通过这些结果证实了，本发明的姜和诃子的混合提取物显示出优异的抗炎作用和改善克罗恩病的作用，并因此可有效地用于预防或治疗炎性肠病。
实施例4：确认木香、诃子和姜的混合提取物的作用
进一步，本发明人根据表14中的编号1-5的混合比例混合了3者(即，木香、诃子和姜)，加入相对于样品重量的7倍量的50％乙醇水溶液，并在80℃下回流提取3小时，并且过滤和冷冻干燥由此得到的提取物，且以粉末的形式储存于冰箱中并用作实验的样品。
表14
编号 木香:诃子:姜 50％乙醇水溶液的量
1 100g:100g:100g 2,100mL
2 200g:200g:100g 3,500mL
3 200g:100g:100g 2,800mL
4 100g:200g:100g 2,800mL
5 100g:100g:200g 2,800mL
4-1：对肠上皮细胞中的单核细胞粘附的抑制作用
通过TNF-α的刺激，粘附至HT-29肠上皮细胞的经荧光标记的U937细胞显著增加，而该粘附被对照药物(5-ASA)抑制了约25％。
在编号1-5的木香、诃子和姜的混合样品的情况下，显示出与对照组相比约60％-70％的优异的抑制作用，尤其是，在木香:诃子:姜以2:2:1的比例混合的混合样品的情况下，提取物显示出最优异的粘附抑制作用(表15，图23)。
表15
类别 浓度 抑制粘附的作用(％)
对照 -
TNF-α(阴性对照组) 100ng/ml -
5ASA(阳性对照组) 20mM 24.48
木香:诃子:姜＝1:1:1 100μg/mL 59.66
木香:诃子:姜＝2:2:1 100μg/mL 73.27
木香:诃子:姜＝2:1:1 100μg/mL 64.97
木香:诃子:姜＝1:2:1 100μg/mL 66.82
木香:诃子:姜＝1:1:2 100μg/mL 58.13
4-2：抑制IL-6(炎性细胞因子)产生的作用
作为检测编号1-5的木香、诃子和姜的混合样品中的IL-6的浓度的结果，证实了IL-6的表达水平显著降低，并且特别地，当木香:诃子:姜的混合样品的混合比例为2:2:1或2:1:1时，抑制IL-6的作用是最优异的(表16，图24)。
表16
类别 浓度 抑制IL-6的产生的作用(％)
5ASA 20mM 49.89
木香:诃子:姜＝1:1:1 50μg/mL 54.30
木香:诃子:姜＝2:2:1 50μg/mL 94.92
木香:诃子:姜＝2:1:1 50μg/mL 91.15
木香:诃子:姜＝1:2:1 50μg/mL 42.94
木香:诃子:姜＝1:1:2 50μg/mL 53.56
4-3：改善DSS动物模型中的结肠炎的作用
尝试在DSS炎性肠病动物模型中确认本发明的木香、诃子和姜的混合提取物治疗和改善结肠炎的作用。
作为检测结肠长度的结果证实了与结肠炎诱导组相比，用本发明的混合提取物治疗的组中的结肠长度增加。特别地，当木香:诃子:姜的混合比例为2:2:1时，结肠长度显示为最长(表17，图25A)。
此外，作为通过观察外观而表示的疾病活动指数的结果，在结肠炎诱导组中发现腹泻和黑粪症，因此显示出6.75的较高分数，而用本发明的混合提取物治疗的组中，所有的DAI为5.13以下，显示出改善作用。特别地，当木香:诃子:姜的混合比例为2:2:1时，DAI为2.25，从而显示出最突出的改善作用(表17，图25B)。
另外，作为检测每结肠长度的结肠重量的结果证实了，结肠炎诱导组中的每结肠长度的结肠重量为约32mg/cm，因此与正常组相比，显示出增加约9mg/cm。与结肠炎诱导组相比，用本发明的混合提取物处理的组显示出略微降低，这说明本发明的混合提取物在降低增厚的肠壁方面是有效的。特别地，当木香:诃子:姜的混合比例为2:2:1时，显示出降低肠壁厚度的作用是最显著的(表17，图25C)。
表17
类别 结肠长度 DAI 每面积的重量
正常对照组 7.8 0 23.87
结肠炎诱导组 5.44 6.75 32.36
对照药物治疗组 5.77 5.75 32.52
木香:诃子:姜＝1:1:1 5.91 5.00 32.07
木香:诃子:姜＝2:2:1 6.48 2.25 28.27
木香:诃子:姜＝2:1:1 5.88 4.00 28.91
木香:诃子:姜＝1:2:1 5.88 3.75 32.41
木香:诃子:姜＝1:1:2 5.55 5.13 30.35
4-4：在TNBS动物模型中改善克罗恩病的作用
与上述结肠炎模型类似，在TNBS克罗恩病动物模型中确认了本发明的木香、诃子和姜的混合提取物治疗和改善克罗恩病的作用。
由检测结肠长度的结果证实了与克罗恩病诱导组相比，用本发明的混合提取物治疗的组显示出结肠长度增加。特别地，当木香:诃子:姜的混合比例为2:2:1时，结肠长度显示为最长(表18，图26A)。
另外，当通过观察外观来检测疾病活动指数时，用本发明的混合提取物治疗的组均显示出改善作用，并且特别地，当木香:诃子:姜的混合比例为2:2:1时，DAI为3，显示出具有显著的改善作用(表18，图26B)。
另外，作为检测每结肠长度的结肠重量的结果证实了用本发明的混合提取物处理的组在改善增厚的肠壁方面是有效的，特别地，当木香:诃子:姜的混合比例为2:2:1时，产生最显著的降低厚度的作用(表18，图26C)。
表18
类别 结肠长度 DAI 每面积的重量
正常对照组 9.38 0 26.48
克罗恩病诱导组 8.28 6.60 50.70
对照药物治疗组 8.27 6.30 48.66
木香:诃子:姜＝1:1:1 8.26 5.43 39.66
木香:诃子:姜＝2:2:1 9.13 3.00 33.32
木香:诃子:姜＝2:1:1 9.11 6.00 48.56
木香:诃子:姜＝1:2:1 8.40 6.29 41.51
木香:诃子:姜＝1:1:2 8.13 6.67 55.64
由这些结果证实了由于木香、诃子和姜的混合提取物具有优异的抗炎作用、改善结肠炎的作用以及改善克罗恩病的作用，因此可有效地用于预防或治疗炎性肠病。
实施例5：取决于提取溶剂的木香、诃子和姜的混合提取物的作用的确认
进一步，本发明人以木香:诃子:姜＝200g:200g:100g的混合比例混合了3者(即木香、诃子和姜)，分别加入相对于样品重量的7倍体积的表19中的编号1-3的提取溶剂，并在80℃回流提取3小时，并且过滤和冷冻干燥由此获得的提取物，且以粉末的形式储存在冰箱中并用作为实验的样品。
表19
编号 提取溶剂 提取溶剂的量
1 30％乙醇 3,500mL
2 50％乙醇 3,500mL
3 70％乙醇 3,500mL
5-1：对肠上皮细胞中的单核细胞粘附的抑制作用
通过TNF-α的刺激，粘附至HT-29肠上皮细胞的经荧光标记的U937细胞显著增加，而该粘附被对照药物(5-ASA)抑制了25％。
在用30％乙醇、50％乙醇和70％乙醇提取的混合样品的情况下，与对照组相比，它们全部显示出约60％-约80％的优异的抑制作用，并且特别地，50％乙醇的提取物显示出针对粘附的最优异的抑制作用(表20，图27)。
表20
类别 浓度 抑制粘附的作用(％)
5ASA(阳性对照组) 20mM 24.48
30％乙醇 100μg/mL 55.22
50％乙醇 100μg/mL 79.24
70％乙醇 100μg/mL 59.19
5-2：抑制IL-6(炎性细胞因子)产生的作用
在用30％乙醇、50％乙醇和70％乙醇提取的木香、诃子和姜的混合样品的情况下，作为检测IL-6的浓度的结果，IL-6的表达水平显著降低，并且特别地，用50％乙醇作为提取溶剂的提取物最有效地抑制了IL-6的产生(表21，图28)。
表21
类别 浓度 抑制IL-6产生的作用(％)
5ASA 20mM 49.35
30％乙醇 50μg/mL 89.96
50％乙醇 50μg/mL 95.93
70％乙醇 50μg/mL 88.65
5-3：在DSS动物模型中改善结肠炎的作用
尝试在DSS炎性肠病动物模型中确认本发明木香、诃子和姜的混合提取物治疗和改善结肠炎的作用。
由检查结肠长度的结果证实了与结肠炎诱导组相比，用本发明的混合提取物治疗的组显示出结肠长度的增加。特别地，当使用50％乙醇进行提取时，结肠长度显示为最长(表22，图29A)。
另外，作为通过观察外观而表示的疾病活动指数的结果，在结肠炎诱导组中发现腹泻和黑粪症，因此显示出6.67的较高分数，而在用本发明的提取物(使用乙醇水溶液作为提取溶剂而获得)治疗的组中，DAI为4.5以下，全部显示出改善。特别地，在用50％乙醇获得的提取物的情况下，DAI为3.3，显示出改善作用是最显著的(表22，图29B)。
另外，作为检测每结肠长度的结肠重量的结果证实了结肠炎诱导组具有的每结肠长度的结肠重量为约32mg/cm，与正常组相比显示出约9mg/cm的增加。在用本发明的混合提取物治疗的组的情况下，证实了与结肠炎诱导组相比，结肠重量略微下降(约27mg/cm)，因此显示出本发明的混合提取物有效地改善增厚的肠壁(表22，图29C)。
表22
类别 结肠长度 DAI 每面积的重量
正常对照组 7.45 0 23.80
结肠炎诱导组 5.31 6.67 32.10
对照药物治疗组 5.45 5.33 31.42
30％乙醇 5.51 4.50 32.35
50％乙醇 6.30 3.33 27.15
70％乙醇 5.60 4.33 32.69
5-4：在TNBS动物模型中改善克罗恩病的作用
与上述结肠炎模型类似，在TNBS克罗恩病动物模型中确认了本发明的木香、诃子和姜的混合提取物治疗和改善克罗恩病的作用。
由检查结肠长度的结果证实了与克罗恩病诱导组相比，用本发明的混合提取物治疗的组显示出结肠长度增加。特别地，当使用50％乙醇进行提取时，结肠长度显示为最长(表23，图30A)。
另外，当通过观察外观而检测疾病活动指数时，用本发明的混合提取物治疗的组均显示出改善作用，并且特别地，当使用50％乙醇作为溶剂进行提取时，DAI为3，改善是最显著的(表23，图30B)。
另外，作为检测每结肠长度的结肠重量的结果证实了克罗恩病诱导组具有的每结肠长度的结肠重量为约60mg/kg，因此与正常组相比，显示出约34mg/kg的增加；而相比于克罗恩病诱导组，用本发明的混合提取物治疗的组显示出显著降低，并且特别地，当使用50％乙醇作为溶剂进行提取时，每结肠长度的结肠重量显著地降低至约34mg/kg。由这些结果证实了本发明的混合提取物在改善增厚的肠壁方面有效(表23，图30C)。
表23
类别 结肠长度 DAI 每面积的重量
正常对照组 9.50 0 26.48
克罗恩病诱导组 7.63 12.00 60.58
对照药物治疗组 8.28 8.20 46.55
30％乙醇 9.22 7.63 45.41
50％乙醇 9.44 3.88 34.68
70％乙醇 8.93 8.13 46.49
通过这些结果证实了本发明的含有木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物显示出优异的抗炎作用和改善克罗恩病的作用，并且特别地，当用50％乙醇进行提取时，这些提取物显示出具有最优异的抗炎作用、改善结肠炎的作用以及改善克罗恩病的作用，并因此本发明的混合提取物可有效地用于预防或治疗炎性肠病。
实施例6：取决于给予剂量的木香、诃子和姜的混合提取物的作用的确认
进一步，本发明人以木香:诃子:姜＝200g:200g:100g的混合比例混合了3者(即，木香、诃子和姜)，加入相对于样品重量的7倍量的50％乙醇，并在80℃回流提取3小时，并且过滤和冷冻干燥由此得到的提取物，且以粉末的形式储存在冰箱中并用作实验的样品。
6-1：在DSS动物模型中改善结肠炎的作用
尝试在DSS炎性肠病动物模型中确认取决于给予剂量的本发明的木香、诃子和姜的混合提取物治疗和改善结肠炎的作用。
分别以50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg的浓度给予混合提取物，并证实了治疗和改善结肠炎的作用。
由检测结肠长度的结果证实了与结肠炎诱导组相比，用本发明的混合提取物治疗的组显示出结肠长度增加。特别地，当以400mg/kg的剂量给予本发明的混合提取物时，结肠长度显示为最长(表24，图31A)。
另外，作为通过观察外观而表示的疾病活动指数的结果，在结肠炎诱导组中发现腹泻和黑粪症，从而显示出7.25的较高分数，而用本发明的混合提取物治疗的组中，DAI为5.5以下，全部显示出改善。特别地，当以400mg/kg的剂量给予本发明的混合提取物时，DAI为2.88，改善显示为最显著的(表24，图31B)。
另外，作为检测每结肠长度的结肠重量的结果证实了结肠炎诱导组具有的每结肠长度的结肠重量为约31mg/cm，因此与正常组相比，显示出约9mg/cm的增加；而与结肠炎诱导组相比，用本发明的混合提取物治疗的组显示出略微降低，并且特别地，当本发明的混合提取物以400mg/kg的剂量进行给予时，每结肠长度的结肠重量显著地降低至约26mg/cm。由这些结果证实了本发明的混合提取物在改善增厚的肠壁方面有效(表24，图31C)。
表24
类别 结肠长度 DAI 每面积的重量
正常对照组 7.42±0.1 0 22.25±0.81
结肠炎诱导组 5.44±0.12 7.25±0.25 31.51±1.2
对照药物治疗组 5.31±0.16 6.88±0.44 30.66±0.76
50mg/kg 5.63±0.2 5.5±0.57 28.56±0.88
100mg/kg 5.89±0.15 5±0.27 29.42±1.25
200mg/kg 6.2±0.08 3.38±0.6 27.82±0.43
400mg/kg 6.46±0.28 2.88±0.48 26.52±0.94
6-2：在TNBS动物模型中改善克罗恩病的作用
与上述结肠炎模型类似，在TNBS克罗恩病动物模型中确认取决于给予剂量的本发明的木香、诃子和姜的混合提取物治疗和改善克罗恩病的作用。
分别以50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg的浓度给予混合提取物，并证实了治疗和改善结肠炎的作用。
由检测结肠长度的结果证实了与克罗恩病诱导组相比，用本发明的混合提取物治疗的组显示出结肠长度增加。特别地，当以400mg/kg的浓度给予本发明的混合提取物时，结肠长度显示为最长(表25，图32A)。
另外，当通过观察外观而检测疾病活动指数时，与克罗恩病诱导组(DAI 11)相比，用本发明的混合提取物治疗的组均表现出改善作用。并且特别地，当以400mg/kg的浓度给予混合提取物时，DAI为6.5，改善显示为最显著的(表25，图32B)。
另外，作为检测每结肠长度的结肠重量的结果证实了克罗恩病诱导组具有的每结肠长度的结肠重量为约74mg/cm，因此与正常组相比，增加了约49mg/cm；而与克罗恩病诱导组相比，用本发明的混合提取物治疗的组显示出略微降低。特别地，当本发明的混合提取物以400mg/kg的剂量进行给予时，每结肠长度的结肠重量显著地降低至50mg/cm，由此证实了本发明的混合提取物在改善增厚的肠壁方面有效(表25，图32C)。
表25
类别 结肠长度 DAI 每面积的重量
正常对照组 9.64±0.54 0 25.75±1.51
克罗恩病诱导组 7.92±0.56 11.20±0.89 74.12±7.71
对照药物治疗组 8.33±0.22 10.56±1.40 67.67±9.30
50mg/kg 8.76±0.42 10.1±1.69 71.05±10.20
100mg/kg 8.97±0.37 8.38±1.48 58.08±8.04
200mg/kg 9.1±0.26 7±1.73 52.06±9.66
400mg/kg 9.34±0.15 6.5±0.9 50.24±4.95
通过这些结果证实了在大多数的给予剂量下，本发明的含有木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物显示出优异的抗炎作用以及改善结肠炎和克罗恩病的作用，并且特别地，当混合提取物以400mg/kg的剂量进行给予时，该提取物显示出具有最优异的抗炎作用、改善结肠炎的作用以及改善克罗恩病的作用，并且因此本发明的混合提取物可有效地用于预防或治疗炎性肠病。
[工业实用性]
根据本发明的含有木香、诃子和姜的混合提取物的组合物具有优异的抗炎作用和改善结肠炎的作用，而几乎没有细胞毒性，并因此表现出预防和治疗炎性疾病、特别是炎性肠病的作用，并因此有望被用作药物组合物、加工食品、功能食品、食品添加剂、功能饮饮品或饮品添加剂等的活性成分，用于预防和治疗炎性肠病。

Claims (22)

1.一种用于预防或治疗炎性肠病(IBD)的药物组合物，所述药物组合物包含木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述混合提取物来自木香和诃子，其中，所述组合物包含重量比为1-3:1-3的木香和诃子。
3.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述混合提取物来自木香和姜，其中，所述组合物包含重量比为1-3:1-3的木香和姜。
4.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述混合提取物来自姜和诃子，其中，所述组合物包含重量比为1-3:1-3的姜和诃子。
5.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述混合提取物来自木香、诃子和姜，其中，所述组合物包含重量比为1-3:1-3:1-3的木香、诃子和姜。
6.根据权利要求2所述的药物组合物，其中，所述组合物包含重量比为1:1的木香和诃子。
7.根据权利要求3所述的药物组合物，所述组合物包含重量比为1:1的木香和姜。
8.根据权利要求4所述的药物组合物，所述组合物包含重量比为1:1的姜和诃子。
9.根据权利要求5所述的药物组合物，其中，所述组合物包含重量比为2:2:1的木香、诃子和姜。
10.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述混合提取物为木香、诃子和姜的粗提物、可溶于极性溶剂的提取物或可溶于非极性溶剂的提取物。
11.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述混合提取物使用水、C1-C4低级醇或其混合物作为溶剂进行提取。
12.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述混合提取物为热水提取物或乙醇提取物。
13.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述混合提取物为50％乙醇提取物。
14.根据权利要求5所述的药物组合物，其中，所述组合物中包含的所述混合提取物的含量为100mg/kg-400mg/kg。
15.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述组合物为口服组合物。
16.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述混合提取物抑制IL-6和TNF-α中的一种或多种的产生。
17.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述炎性肠病为选自于由克罗恩病、溃疡性结肠炎、肠白塞病、肠结核以及腹泻所组成的组中的一种或多种。
18.一种用于预防或改善炎性肠病(IBD)的健康功能食品，所述健康功能食品包含木香、诃子和姜中的至少两种的混合提取物。
19.根据权利要求18所述的健康功能食品，其中，所述混合提取物包含重量比为2:2:1的木香、诃子和姜。
20.根据权利要求18所述的健康功能食品，其中，所述混合提取物为热水提取物或乙醇提取物。
21.根据权利要求18所述的健康功能食品，其中，所述健康功能食品为粉末、颗粒、片剂、胶囊、糖浆或饮品。
22.根据权利要求18所述的健康功能食品，其中，所述炎性肠病为选自于由克罗恩病、溃疡性结肠炎、肠白塞病、肠结核以及腹泻所组成的组中的一种或多种。
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