CN108578681A - 艾塞那肽在制备治疗肝纤维化药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种艾塞那肽在制备治疗肝纤维化药物中的应用。本发明提供了艾塞那肽的新用途——治疗肝纤维化疾病，进一步拓宽了人们对艾塞那肽的认识。由于艾塞那肽是治疗II型糖尿病的药物，而治疗纤维化疾病的药大多昂贵、且副作用严重，因此艾塞那肽在动物实验上的效果表明能够完全代替现有治疗纤维化疾病的各种药物，从而大大拓宽了其临床上的用处，减少了药物的毒副作用。加入高脂饮食后，可以缓解艾塞那肽强烈的减脂效果，对于肥胖人群可以起到减重与治疗肝纤维化的双重效果，对于体重正常的人群则起到平衡体脂与治肝纤维化的作用。

Description

艾塞那肽在制备治疗肝纤维化药物中的应用

技术领域

本发明涉及艾塞那肽的新用途技术领域，具体涉及一种艾塞那肽在制备治疗肝纤维化药物中的应用。

背景技术

艾塞那肽是由美国Lilly公司与Amylin公司共同研发的第一个胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1，GLP-1)类似物，是人工合成的由39个氨基酸组成的多肽，与内源性肠降血糖素如胰高血糖素样肽-1(GLP-1)作用相似，具有促进葡萄糖依赖的胰岛素分泌，恢复第一时相胰岛素分泌，抑制胰高血糖素的分泌，减慢胃内容物的排空，改善胰腺β细胞的功能等作用。目前上市的制剂为皮下注射针剂(艾塞那肽注射液，商品名Byetta，百泌达)，每日用药2次，注射后迅速吸收，2h就可达到血药浓度峰值，主要经肾脏代谢。应用艾塞那肽改善高脂诱导人类及肥胖大鼠糖、脂代谢紊乱及脂肪肝，改善胰岛素抵抗及脂肪细胞因子的紊乱分泌，比磺脲类药物及双胍类药物减重、减脂效果好，而且艾塞那肽在改善肝脏病理方面可能优于罗格列酮二甲双胍合剂，因此，GLP-1受体激动剂除治疗2型糖尿病外，在减重及治疗脂肪肝上最有效，这一点已被证实。目前，关于艾塞那肽的作用机制主要归结为三点：一是抑制食欲，减少患者食物摄取，抑制肝脏脂质合成关键基因固醇调节元件结合蛋白一c(SREBP-lc)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、硬脂酰CoA去饱和酶-1(SCD-1)基因表达，减少肠道来源脂肪酸的从头合成，减少肝脏脂质沉积；二是升高肝脏过氧化物酶体增殖物激活受体a(PPARα)表达，促进了FFA(脂肪酸)的β氧化，减少肝内FFA合成TG；三是减少皮下和内脏脂肪含量，使脂肪来源的FFA向肝脏输送减少，降低肝脏脂质的异位沉积能通过刺激GLP-1受体诱导腺苷酸环化酶的生成，还可作用于胰岛B细胞，以葡萄糖浓度依赖性地抑制胰升糖素的分泌，减少餐后胰升糖素分泌，进而减少肝糖原的分解，降低血糖，缓解糖尿病周围神经病变。另外，又有人提出了利用GLP-1治疗老年痴呆的设想。艾塞那肽产生的生物效应与天然GLP-1几乎相同。

肝纤维化疾病虽然临床上常规用于脂肪肝及保肝药物有许多种，但迄今为止，对于NAFLD肝纤维化仍然没有有效的治疗药物。我们在五年的动物实验研究中发现，艾塞那肽能显著改善CCL4诱导的大鼠肝纤维化及长爪沙鼠脂肪性肝纤维化(自行开发的模型，已获国家级奖励，见研究基础)及感染血吸虫所致急性期的小鼠肝纤维化的病理。

发明内容

本发明提供了一种艾塞那肽在制备治疗肝纤维化药物中的应用。

艾塞那肽属于现有的化合物，CAS号：133514-43-9。

本发明发现了艾塞那肽(Exenatide)的一种新的用途为：治疗肝纤维化；其具体用法为：将艾塞那肽按人的通用剂量换算为相应的动物使用剂量，皮下注射方式给长爪沙鼠肝纤维化动物模型、大鼠CCL4诱发的肝纤维化动物模型、小鼠血吸虫肝纤维化动物模型，每天一次，4周至12周后将动物处死，检查模型动物的肝脏，发现1/3的动物肝纤维化疾病痊愈，2/3的动物肝纤维化疾病明显改善，有效率100％。本发明提供了艾塞那肽的新用途——治疗肝纤维化疾病，进一步拓宽了人们对艾塞那肽的认识。由于艾塞那肽是治疗II型糖尿病的药物，而治疗纤维化疾病的药大多昂贵、且副作用严重，因此艾塞那肽在动物实验上的效果表明能够完全代替现有治疗纤维化疾病的各种药物，从而大大拓宽了其临床上的用处，减少了药物的毒副作用。

艾塞那肽在制备治疗肝纤维化药物中的应用，所述的用于治疗肝纤维化的药物为艾塞那肽注射液。

艾塞那肽在制备治疗肝纤维化药物中的应用，所述的用于治疗肝纤维化的药物为艾塞那肽注射液以及配合使用的高脂饲料。

所述的高脂饲料由以下重量含量的组分构成：

所述的基础饲料由以下重量含量的组分构成：

进一步优选，所述的高脂饲料由以下重量含量的组分构成：

所述的基础饲料由以下重量含量的组分构成：

最优选的，所述的高脂饲料由以下重量含量的组分构成：

所述的基础饲料由以下重量含量的组分构成：

加入高脂饮食后，可以缓解艾塞那肽强烈的减脂效果，对于肥胖人群可以起到减重与治疗肝纤维化的双重效果，对于体重正常的人群则起到平衡体脂与治肝纤维化的作用。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

对本发明所进行的临床前试验(动物实验)研究表明，艾塞那肽加高脂饮食对三类肝纤维化治疗效果显著，全部实验动物肝外观显著改善。这种效果优于以往的各类抗纤维化药物效果报导。加入高脂饮食后，可以缓解艾塞那肽强烈的减脂效果，对于肥胖人群可以起到减重与治疗肝纤维化的双重效果，对于体重正常的人群则起到平衡体脂与治肝纤维化的作用。

附图说明

图1为长爪沙鼠脂肪性肝纤维化及艾塞那肽治疗组的肝形态学图，其中，A-MU5为正常组，B-MU1为模型组，C-MU4为槲皮素治疗组，D-MU6为艾塞那肽治疗组，E-MU5、F-MU1、G-MU4、H-MU6为肝脏外观离体观察，E-MU1vs MU6为艾塞那肽治疗前后肝脏、脾和胆囊的对比，I-MU5、J-MU1、K-MU4、L-MU6为相应组的肝脏HE染色图片(20×)，M-MU5为正常组肝脏MASSON染色(40×)，N-MU1、P-MU4、Q-MU6分别是模型组、槲皮素治疗组、艾塞那肽治疗组的MASSON染色(均为20×)；

图2为脂肪性肝硬化和艾塞那肽治疗高脂饮食造成的肝纤维化照片，其中，图2中a为脂肪性肝硬化造模12-16周，图2中b为艾塞那肽治疗2周(高脂料)，图2中c为艾塞那肽治疗4周(高脂料)，图2中d为正常对照组，图2中e为造模12-16周自行逆转组(取消高脂饮食后肝纤维化自行逆转的情况)，图2中f为艾塞那肽治疗2周组(普通料)，图2中g为艾塞那肽治疗4周组(普通料)，图2中h、i、j为a、b、c相应三组的肝脏离体观察照片，图2中l、m、n为e、f、g相应三组的肝脏离体观察照片，图2中k为正常对照组；

图3为沙鼠血液生化指标，肝功、肾功、甲功、肝脏胶原纤维指标的检测结果作柱状图；

图4为艾塞那肽+高脂饮食的结果是高脂饮食试验在艾塞那肽干预4周时即从S4期恢复到S1期照片；其中，图4中a和e为：橄榄油+生理盐水(前8周橄榄油，第9-12周生理盐水)，纤维化S0期；图4中b和f为：橄榄油+艾塞那肽(前8周橄榄油，第9-12周艾塞那肽)，S0期；图4中c和g为：CCL4+艾塞那肽(前8周四氯化碳，第9-12周艾塞那肽，S1期)；图4中d和h为：前8周四氯化碳，第9-12周生理盐水，S2－S4期；

图5为普通饮食+艾塞那肽治疗12周的肝脏照片图，其中，图5中a为艾塞那肽治疗12周后大鼠肝脏恢复情况的在体观察图；图5中b为艾塞那肽治疗12周后大鼠肝脏恢复情况的离体观察图；图5中c为肝大叶中观察肝窦恢复情况图。

图6为艾塞那肽+普通饮食治疗12周与艾塞那肽+高脂饮食治疗4周相比较的肝脏照片图；其中，图6中a为橄榄油+生理盐水(前8周橄榄油，第9-12周生理盐水)，纤维化S0期，图6中b为橄榄油+艾塞那肽(前8周橄榄油，第9-12周艾塞那肽)，S0期，图6中c为CCL4+艾塞那肽(前8周四氯化碳，第9-12周艾塞那肽，S1期)，图6中d为艾塞那肽治疗12周后大鼠肝脏恢复情况的在体观察图，图6中e为艾塞那肽治疗12周后大鼠肝脏恢复情况的离体观察图，图6中f为肝大叶中观察肝窦恢复情况图；

图7为血吸虫肝纤维化小鼠模型(吡喹酮杀虫75mg/kg)肝纤维化转归的实验(艾塞那肽治疗二周0.25mg/kg)照片，其中，图7中a，图7中b为血吸虫肝纤维模型的肝纤维化转归的实验照片，图7中c为注射艾塞那肽2周时的肝脏外观图，图7中d为注射艾塞那肽4周时的肝脏外观图；

图8为肝脏组织的HE染色及MASSON染色显示图，图8中a为S4期，图8中b为S3-S4期之间，图8中c为S0期。

具体实施方式

市售艾塞那肽注射液(商品名百泌达BYETTA)，英文名Exenatide injection，汉语拼音：Aisainatai Zhusheye,分子量4186.6,辅料：甘露醇、醋酸纳三水合物，间甲酚(2.00-2.40mg/ml)，冰醋酸，注射用水。

1.脂肪性肝纤维化长爪沙鼠模型的治疗

(1)配合造模高脂饲料，高脂饲料商品化生产，重量百分含量配方组成如下：基础饲料(重量百分含量配方：次粉34.0％，玉米22.0％，豆粕16.0％，麸皮14.5％，鱼粉6.5％，大豆油1.0％)70.5％、猪油7％、胆固醇2％、胆盐0.5％、蛋黄粉20％。

(2)造模与治疗

1)实验一，艾塞那肽逆转脂肪性肝纤维化的试验，以槲皮素为阳性药，治疗4周；

肝纤维化评分标准配合高脂饲料，选取90日龄长爪沙鼠(雌、雄性鼠兼用)40只，体重50～70g，分为正常组(n＝10，标记为MU5)、模型组(n＝10,标记为MU1)、阳性组(槲皮素0.5mg/kg，n＝10，标记为MU4)，艾塞那肽治疗四周组(艾塞那肽剂量2.5μg/kg，n＝10，标记为MU6)，实验开始时，全部动物给予商品化饲料，按每笼5只饲养，自由饮水，温度20-26℃，12小时明暗交替的环境，适应性饲养1周。第二周起，除正常对照组继续给予商品化饲料外，其余4组喂食高脂饲料。

2)实验二，艾塞那肽治疗不同时间长爪沙鼠肝纤维化/肝硬化逆转试验；

雄性长爪沙鼠70只，用于建立8周肝纤维化模型及12周的肝硬化模型，体重50～70g，分组情况如下：随机分为空白组(即正常对照组5只)、模型组(高脂饲料造模5只，模型对照组，不做任何干预)，自行逆转组5只(造模时间到后去除高脂饲料的后动物不干预而动物自行逆转)，治疗二周组10只(其中普通饮食组5只，高脂饮食组5只)，治疗四周组10只(其中普通饮食组5只，高脂饮食组5只)。商品化饲料(参照GB14923-2010生产)适应性喂养1周后，模型组与治疗组动物改用高脂饲料喂，正常对照组动物仍用商品化饲料喂养，饲养8周即为肝纤维化模型(共35只)，饲养12周即为肝硬化模型(共35只)。造模时间到后用艾塞那肽(2.5ug/KG)治疗(皮下注射)4周(治疗二周组是皮下注射2周)，然后采样前一天晚上禁食,禁饮，第二天用CO2麻醉，然后腹主动脉采血，后取肝脏，进行观察、拍照，后将肝脏大叶取样，用中性福尔马林固定液固定，用于做病理与Masson染色。

(3)肝纤维化病理分期

S0：无肝纤维化；S1：无汇管区扩大纤维化及局限窦周纤维化；S2：汇管区周围纤维化或纤维间隔形成，小叶结构保留；S3：大量纤维间隔形成伴小叶结构紊乱，无肝硬化；S4：可能的或肯定伴有肝硬化形成。

(4)结果观察与方法

1)长爪沙鼠肝脏一般情况

长爪沙鼠脂肪性肝纤维化及艾塞那肽治疗组的肝形态学如图1所示，A-MU5为正常组，B-MU1为模型组，C-MU4为槲皮素治疗组，D-MU6为艾塞那肽治疗组。E-MU5、F-MU1、G-MU4、H-MU6为肝脏外观离体观察。E-MU1vs MU6为艾塞那肽治疗前后肝脏、脾和胆囊的对比。I-MU5、J-MU1、K-MU4、L-MU6为相应组的肝脏HE染色图片(20×)，M-MU5为正常组肝脏MASSON染色(40×)，N-MU1、P-MU4、Q-MU6分别是模型组、槲皮素治疗组、艾塞那肽治疗组的MASSON染色(均为20×)，A-MU5为S0期，B-MU1为S4期，C-MU4为S2-S3期，D-MU6为S0期。

如图1所示，I.肝小叶界限清晰，细胞结构完整J.肝细胞变性、坏死、脱落，细胞核固缩K.部分肝细胞结构恢复，仍有部大量肝细胞变性、坏死、脱落L.部分肝组织结构恢复正常，部分肝细胞呈现中度脂肪变性Masson染色：M.肝小叶界限清晰，肝细胞结构正常，汇管区结构正常N.大量肝细胞变性、坏死、脱落，邻近变性坏死区域逐渐联结成片P.呈现汇管区与小叶间纤维的桥接，在小叶部形成较完整的纤维间隔Q.小叶内的肝组织和结构逐渐正常。

正常对照组沙鼠肝脏外观暗红，表面光滑，模型组灰白色，且触之油腻，表面显粗糙，至第8周时肝纤维化明显，假小叶逐渐形成，到12周时肝硬化形成，肝脏明显变硬，伴随明显的脾肿大，胆汁充盈的巨大胆囊，深绿色；治疗2周组和治疗四周(高脂饮食)组肝脏外观介于二者之间，而普通饮食则明显向正常逆转，其中8周的普通饮食组干预四周时肝大叶部分组织贮脂量明显减少，颜色也向正常的暗红色恢复。HE染色显示，模型组肝细胞大量变性、坏死、脱落，染色较浅，治疗二周组可见部分肝组织和细胞结构染色加深，结构正常肝细胞明显增多，治疗四周肝细胞染色明显改善，变性坏落脱落细胞明显减少。治疗组动物100％逆转。

脂肪性肝硬化和艾塞那肽治疗高脂饮食造成的肝纤维化照片图2所示，其中，图2中a为脂肪性肝硬化造模12-16周，图2中b为艾塞那肽治疗2周(高脂料)，图2中c为艾塞那肽治疗4周(高脂料)，图2中d为正常对照组，图2中e为造模12-16周自行逆转组(取消高脂饮食后肝纤维化自行逆转的情况)，图2中f为艾塞那肽治疗2周组(普通料)，图2中g为艾塞那肽治疗4周组(普通料)

图2中h、i、j为a、b、c相应三组的肝脏离体观察照片(高脂饮食处理的模型、艾塞那肽治疗二周组、艾塞那肽治疗四周组)，图2中h为S4期(S4具体是指可能的或肯定伴有肝硬化形成)，图2中i为S2-S4期(S3具体是指大量纤维间隔形成伴小叶结构紊乱，无肝硬化)，图2中j为S0-S2期(S0具体是指无肝纤维化；S1具体是指无汇管区扩大纤维化及局限窦周纤维化；S2：汇管区周围纤维化或纤维间隔形成，小叶结构保留)；图2中l、m、n为e、f、g相应三组的肝脏离体观察照片，(普通饮食处理的模型自行逆转、艾塞那肽治疗二周组、艾塞那肽治疗四周组)，图2中n为S0期(S0具体是指无肝纤维化)，图2中m为S0-S1期(S0具体是指无肝纤维化；S1具体指无汇管区扩大纤维化及局限窦周纤维化；)，图2中l为S2-S3期(S2具体是指汇管区周围纤维化或纤维间隔形成，小叶结构保留，S3具体是指大量纤维间隔形成伴小叶结构紊乱，无肝硬化)，图2中k为正常对照组，为S0期(S0具体是指无肝纤维化)。

2)血液指标的恢复

图3为沙鼠血液生化指标，肝功、肾功、甲功、肝脏胶原纤维指标的检测结果作柱状图，具体数据如表1和表2所示，分析结果描述如下：

表1

group

AST

ALT

TC

TG

LDL-C

HDL-C

(U/L)

(U/L)

(mmol/L)

(mmol/L)

(mmol/L)

(mmol/L)

MU5

210±30B

151±98B

2.56±0.72D

0.80±0.14B

7.67±6.18B

1.50±0.36C

MU1

460±245A

292±16A

27.72±9.33B

1.89±0.17A

20.91±9.27A

5.87±1.48B

MU4

330±228AB

168±87B

31.39±12.80A

1.93±2.04A

24.65±12.38A

8.35±4.60A

MU6

293±27B

175±20B

8.52±0.02C

0.69±0.01BC

6.00±0.01B

1.96±0.02C

表2

group	FT4	FT3	TSH	ColⅢ	ColⅣ
							(pmol/L)	(pmol/L)	uIU/mL	(ng/ml)	(ng/ml)
MU5	50.46±6.79A	5.06±0.05AB	6.34±0.50	0.44±0.08C	43.54±0.26A
						MU1	25.29±6.78B	7.19±0.66A	5.91±0.95	8.89±0.24A	19.47±0.54C
MU4	23.88±8.12B	2.59±1.19B	6.31±1.36	4.57±3.05B	31.04±18.57B
						MU6	28.49±0.61B	3.37±0.01B	6.02±1.49	5.06±2.26B	38.70±8.18B

A，B，C字母不同表示有显著性差异，字母相同表示没有差异。

A)对沙鼠肝功能的影响：经高脂饲料连续饲养8周后，模型组沙鼠血清ALT(谷丙转氨酶)、AST(谷草转氨酶)与正常对照组相比较，显著升高(AST P<0.01)。经艾塞那肽、槲皮素治疗4周后，AST与ALT水平均明显降低(P<0.05)，而且艾塞那肽降低幅度更大，与正常组相比，艾塞那肽治疗组AST、ALT已没有显著性差异(P>0.05)，可见艾塞那肽对于改善肝功能的作用明显优于槲皮素，从动物胆汁液的浑浊程度来看，艾塞那肽组明显改善了胆汁淤积。

B)对肝纤维化沙鼠血脂代谢的影响：经高脂饲料连续饲养8周后，模型组沙鼠血清TC(总胆固醇)、TG(甘油三酯)、HDL-C(高密度脂蛋白胆固醇)、LDL-C(低密度脂蛋白胆固醇)水平与正常对照组相比，均显著升高(P<0.01)；经艾塞那肽治疗后，与模型组相比，艾塞那肽四周组血清TC、TG、HDL-C、LDL-C显著降低(P<0.01)。阳性对照槲此素组的血清TC、TG、HDL-C、LDL-C水平与模型组无显著差异(P>0.05)。可见艾塞那肽对于调整肝纤维化沙鼠的血脂水平优于槲皮素，而槲皮素组在调整血脂上没有明显效果。

C)对模型沙鼠肝纤维化甲功(FT4，FT3，TSH)、ColⅢ(胶原三型)、ColⅣ(胶原四型)相关指标的影响：经高脂饲料连续饲养8周后，模型组沙鼠血清FT4(血清游离甲状腺素)明显降低(P〈0.05)，FT3(血清游离三碘甲腺原氨酸)明显上升(P〈0.05)，TSH(促甲状腺激素)有下降的趋势，但未达显著水平(P〉0.05)，ColⅢ明显上升(P〈0.05)、ColⅣ明显下降(P〈0.05)。经槲皮素、艾塞那肽治疗后，FT3、ColⅢ下降显明(P〈0.05)，ColⅣ明显上升(P〈0.05)。

2.CCL4诱发的大鼠肝硬化及肝纤维化模型

(1)造模、治疗与取样

艾塞那肽干预CCL4诱导的大鼠肝纤维化的研究(给药剂量10ug/Kg)

30只SD大鼠，180-220g，雄，按体重随机分组，CCL4(50％的橄榄油，50％的CCL4乳化后)，每周注射2次，剂量0.1ml/100g，造模8周(这时肝纤维化为第四期，即肝硬化形成)，同时设置以CCL4的助溶剂橄榄油为对照组，造模结束后开始进行艾塞那肽干预，干预剂量10ug/Kg，同时辅以高脂饮食干预4周，如果采用普通饮食，则治疗12周，治疗时间结束后动物提前一天禁食禁饮，第二天CO2麻醉后腹主动脉采血，后取肝脏，进行观察、拍照，将一部分肝脏用中性福尔马林固定液固定，做HE和MASSON染色观察。

(2)病理观察

1)高脂饮食+艾塞那肽治疗4周

艾塞那肽+高脂饮食的结果是高脂饮食试验在艾塞那肽干预4周时即从S4期恢复到S1期照片如图4所示。

其中，图4中a(即左1)为：橄榄油+生理盐水(前8周橄榄油，第9-12周生理盐水)，纤维化S0期；

图4中b(即左2)为：橄榄油+艾塞那肽(前8周橄榄油，第9-12周艾塞那肽)，S0期；

图4中c(右2)为：CCL4+艾塞那肽(前8周四氯化碳，第9-12周艾塞那肽，S1期)；

图4中d(右1)为：前8周四氯化碳，第9-12周生理盐水，S2－S4期。

2)普通饮食+艾塞那肽治疗12周

图5为普通饮食+艾塞那肽治疗12周的肝脏照片图，其中，图5中a为艾塞那肽治疗12周后大鼠肝脏恢复情况的在体观察，可见肝脏周围无脂包裹，肝脏颜色趋于正常；图5中b为艾塞那肽治疗12周后大鼠肝脏恢复情况的离体观察，肝脏颜色趋于正常，边缘趋于锐利，且假小叶明显减少，肝脏变软；图5中c为肝大叶中观察肝窦恢复情况，肝窦中有血液流出。

普通饮食组治疗12周时，肝脏小叶部分无假小叶，肝脏大叶假小叶明显减少，肝窦部分恢复，肝脏整体看已变软，触之有弹性，颜色也趋向正常。

3)艾塞那肽+普通饮食治疗12周与艾塞那肽+高脂饮食治疗4周相比较

图6为艾塞那肽+普通饮食治疗12周与艾塞那肽+高脂饮食治疗4周相比较的肝脏照片图；其中，图6中a为橄榄油+生理盐水(前8周橄榄油，第9-12周生理盐水)，纤维化S0期，图6中b为橄榄油+艾塞那肽(前8周橄榄油，第9-12周艾塞那肽)，S0期，图6中c为CCL4+艾塞那肽(前8周四氯化碳，第9-12周艾塞那肽，S1期)，图6中d为艾塞那肽治疗12周后大鼠肝脏恢复情况的在体观察，可见肝脏周围无脂包裹，肝脏颜色趋于正常，图6中e为艾塞那肽治疗12周后大鼠肝脏恢复情况的离体观察，肝脏颜色趋于正常，边缘趋于锐利，且假小叶明显减少，肝脏变软，图6中f为肝大叶中观察肝窦恢复情况，肝窦中有血液流出。

从肝脏外观来看，艾塞那肽+高脂饮食4周组具有肝脏病理恢复迅速，大鼠精神由萎靡到活泼改善较多、毛色明显润泽的特点。因此推荐艾塞那肽+高脂饮食治疗，不但肝脏纤维化恢复快，而且动物整体健康改善显著。

与模型及模型治疗组相比，艾塞那肽治疗CCL4诱发的肝纤维有着显著的逆转效果，表现为模型组肝组织间大量胶原纤维增生，形成完成间隔把肝组织分割成大小不等的假小叶，治疗2周组肝组织内有少量胶原纤维分布，可见部分肝细胞呈脂肪变性，少量细胞变性、坏死、脱落。治疗4周组变化与2周组相似，肝组织内少见胶原纤维，变性坏死的细胞减少。

3.小鼠血吸虫肝纤维化模及治疗效果：

(1)6～8周龄BALB/c小鼠(雌雄各半)为上海斯莱克公司提供，体重1 8～22g，共20只，。其中3只为正常对照组，余17只均感染日本血吸虫尾蚴40±2条。日本血吸虫尾蚴由中国农科院上海寄生虫病研究所提供。饲养6周后进行艾塞那肽干预治疗(剂量0.25ug/kg)二周，提前一天禁食禁饮，第二天CO2麻醉后，眼眶静脉丛毛细管取血后脱颈椎处死。后取肝脏，进行观察、拍照，一部分肝脏用中性福尔马林固定液固定，做HE和MASSON染色观察。

血吸虫肝纤维化小鼠模型(吡喹酮杀虫75mg/kg)肝纤维化转归的实验(艾塞那肽治疗二周0.25mg/kg)照片如图7所示。

图7中a(左一)，图7中b左二为血吸虫肝纤维模型的肝纤维化转归的实验照片，纤维化分期为S4，肝脏呈黑色，有白色的坏死灶。动物精神萎靡。毛凌乱。图7中c(右二)为注射艾塞那肽2周时的肝脏外观，肝脏从黑色转为褐色，分期为S0，肝脏上仍有白色坏死灶，图7中d(右一)为注射艾塞那肽4周时的肝脏外观，肝脏转为正常肝脏颜色，坏死灶大大减少，分期为S0。

HE染色及MASSON染色显示如图8所示，图8中a(左图)显示随着肝炎症的发展，有较多肝细胞变性坏死、原有的肝细胞和组织结构消失，肝细胞间有大量(或没有)胶原纤维出现,残存的肝细胞变少，分为S4。图8中b(中图)显示的是血吸虫性肝纤维化的假小叶，血吸虫卵内毛蚴死亡、分解、变性、坏死的嗜酸性粒细胞被清除、吸收，形成由钙化的虫卵、上皮样细胞、多核巨细胞、淋巴细胞和纤维母细胞构成的类似结核结节的慢性虫卵肉芽肿，分为S3-4之间。图8中c(右图)显示用艾塞那肽治疗4周后，肝脏组织结构有所好转，变性坏死的细胞数量有所减少，分为S0。

大体观察如下：造模6周时，处于小鼠肝纤维化急性期，皮下注射2周艾塞那肽，麻醉后眼眶静脉从采血后脱颈椎处死，观察大体及肝脏，拍照，发现小鼠肝脏颜色由黑变(肝窦内皮细胞毛细血管化)成褐红色或鲜红色(正常肝脏颜色)，表明肝窦内皮细胞去毛细血管化，进而转归为正常细胞。

以上三种动物模型显示，皮下注射艾塞那肽辅以高脂饮食，三种类型的肝纤维(硬化)得以明显逆转，因此，艾塞那肽今后用于治疗肝纤维化，肝硬化疾病具有明显的疗效。

Claims (7)

1.艾塞那肽在制备治疗肝纤维化药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的用于治疗肝纤维化的药物为艾塞那肽注射液。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的用于治疗肝纤维化的药物为艾塞那肽注射液以及配合使用的高脂饲料。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的高脂饲料由以下重量含量的组分构成：

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的基础饲料由以下重量含量的组分构成：

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的高脂饲料由以下重量含量的组分构成：

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的基础饲料由以下重量含量的组分构成：